يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التقنيات الجزيئية والمناعية في نموذج فأر مهندس وراثيا لورم الجهاز الهضمي اللثوي

2.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/63853

⸱

مايو 2, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, Hospital of the University of Pennsylvania

في هذه المقالة

ملخص

الهدف من هذه المخطوطة هو وصف نموذج الماوس KitV558Δ/+ وتقنيات التشريح والمعالجة الناجحة لعينات الماوس.

الملخص

الورم اللحمي المعدي المعوي (GIST) هو الساركوما البشرية الأكثر شيوعا وعادة ما يكون مدفوعا بطفرة واحدة في مستقبلات KIT. عبر أنواع الأورام ، تم تطوير العديد من نماذج الفئران من أجل التحقيق في الجيل التالي من علاجات السرطان. ومع ذلك ، في GIST ، تستخدم معظم الدراسات في الجسم الحي نماذج فأر xenograft التي لها قيود متأصلة. هنا ، نصف نموذجا للفأر المختص بالمناعة والمعدل وراثيا لورم لحمية الجهاز الهضمي يؤوي طفرة KitV558Δ / +. في هذا النموذج ، يتم دفع KIT المتحور ، وهو الجين الورمي المسؤول عن معظم GISTs ، بواسطة مروجه الداخلي مما يؤدي إلى GIST الذي يحاكي المظهر النسيجي والتسلل المناعي الذي شوهد في GISTs البشرية. علاوة على ذلك ، تم استخدام هذا النموذج بنجاح للتحقيق في كل من العلاجات الجزيئية والمناعية المستهدفة. هنا ، نصف تربية وصيانة مستعمرة الفأر KitV558Δ / +. بالإضافة إلى ذلك ، تفصل هذه الورقة علاج وشراء GIST ، وتصريف العقدة الليمفاوية المساريقية ، والأعور المجاور في الفئران KitV558Δ / + ، بالإضافة إلى إعداد العينات للتحليلات الجزيئية والمناعية.

المقدمة

GIST هو الساركوما الأكثر شيوعا في البشر مع حدوث حوالي 6000 حالة في الولايات المتحدة الأمريكية1. يبدو أن GIST ينشأ من خلايا تنظيم ضربات القلب المعدية المعوية المسماة الخلايا الخلالية في Cajal ، وعادة ما يكون مدفوعا بطفرة واحدة في مجموعة التيروزين كيناز أو PDGFRA2. الجراحة هي الدعامة الأساسية لعلاج GIST ويمكن أن تكون علاجية ، ولكن يمكن علاج المرضى الذين يعانون من مرض متقدم باستخدام مثبط التيروزين كيناز (TKI) ، إيماتينيب. منذ تقديمه منذ أكثر من 20 عاما ، قام imatinib بتحويل نموذج العلاج في GIST ، مما أدى إلى تحسين البقاء على قيد الحياة في الأمراض المتقدمة من 1 إلى أكثر من 5 سنوات 3,4,5. لسوء الحظ ، نادرا ما يكون إيماتينيب علاجيا بسبب طفرات KIT المكتسبة ، لذلك هناك حاجة إلى علاجات جديدة لهذا الورم.

نماذج الفئران هي أداة بحثية مهمة في التحقيق في العلاجات الجديدة في السرطان. تم تطوير العديد من نماذج xenograft تحت الجلد و xenograft المشتقة من المريض والتحقيق فيها في GIST 6,7. ومع ذلك ، فإن الفئران التي تعاني من نقص المناعة لا تمثل GIST البشري بشكل كامل لأن GISTs تؤوي ملفات تعريف مناعية تفاضلية اعتمادا على طفرتها الورمية ، وتغيير البيئة الدقيقة لورم الجهاز الهضمي يحسن من آثار العلاج TKI 8,9. يحتوي الماوس Kit V558Δ/+ على حذف خط جرثومي غير متجانس في Kit exon 11 ، والذي يشفر مجال juxtamembrane ، وهو الموقع الأكثر تحورا شيوعا في GIST10 البشري. تقوم الفئرانV558Δ / + بتطوير GIST سيكال واحد مع اختراق 100٪ ، والأورام لها أنسجة مماثلة ، وإشارات جزيئية ، وتسلل مناعي ، واستجابة للعلاج مثل GIST البشري 8,11,12,13. هنا ، نصف تربية وعلاج وعزل العينات ومعالجتها في الفئران KitV558Δ / + لاستخدامها في البحوث الجزيئية والمناعية في GIST.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم إيواء جميع الفئران في ظروف خالية من مسببات الأمراض في جامعة بنسلفانيا وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية للصحة وبموافقة جامعة بنسلفانيا IACUC. تم تنفيذ القتل الرحيم وفقا لإجراءات التشغيل القياسية للموارد الحيوانية في مختبر جامعة بنسلفانيا.

1. كيتV558Δ / + تربية الماوس

  1. قم بإرجاع الفئرانV558Δ/+ أكثر من 10 مرات على خلفية C57BL/6J باستخدام الفئران C57BL/6J. للقيام بذلك ، قم بتربية الفئران الذكور V558Δ / + مع الفئران C57BL / 6J الإناث بنسبة 1: 2.
    ملاحظة: النمط الوراثي لمجموعة متماثلة الزيجوت V558 Δ/V558Δ قاتل في الرحم. من الممكن تربية إناث كيتV558Δ / + الفئران مع الفئران C57BL / 6J الذكور ، ولكن حجم القمامة حوالي نصف ما شوهد من الفئران البرية C57BL / 6J. علاوة على ذلك ، تنتج الفئران الإناث V558Δ / + كميات محدودة من الفضلات بعد 4 أشهر من العمر.
  2. النمط الوراثي للجراء في عمر 7-14 يوما عن طريق قص إصبع القدم لتأكيد وجود النمط الوراثي KitV558Δ / +. استخدم التمهيدي الأمامي: TCTCCTCCAGAAACCCATGTATGAA; مراسل 1: CCTCGACAACCTTCCA ؛ عكس التمهيدي: TTGCGTCGGGTCTATGTAAACAT; والمراسل 2: TCTCCTCGACCTTCCA للتنميط الجيني.

2. كيتV558Δ / + علاج الماوس

  1. يتطابق العمر والجنس مع مجموعةV558Δ/+ الفئران قبل العلاج. استخدم الفئران المتطابقة مع العمر والجنس في الأتراب لأن الأورام من الفئران الإناث V558Δ / + أكبر من تلك الموجودة في الفئران الذكور. علاج الفئران في عمر 8-12 أسبوعا ، وفي ذلك الوقت يتم إنشاء الأورام (الشكل 1).
  2. إعطاء مثبطات التيروزين كيناز عن طريق الفم أو عن طريق الحقن داخل الصفاق (i.p) ؛ مجموعةV558Δ / + الأورام حساسة لمثبطات التيروزين كيناز. توفير إيماتينيب بجرعة 600 ملغم/لتر في مياه الشرب أو حقن 45 مغ/كغ مرتين يوميا. قم بقياس انخفاض وزن الورم باستخدام المقاييس الرقمية بعد تشريح الورم كما هو موضح في الخطوة 3 ، والتي تبلغ حوالي 50٪ في أسبوع واحد و 80٪ في 4 أسابيع بعد العلاج باستخدام إيماتينيب (الشكل 2).

3. كيتV558Δ / + حصاد جهاز الماوس

  1. القتل الرحيم للفئران بواسطة مخدر CO2 بمعدل تدفق 60٪ من حجم الغرفة في الدقيقة. اترك الفئران في الغرفة لمدة 2 دقيقة على الأقل بعد توقف التنفس ، ثم قم بإجراء خلع عنق الرحم لتأكيد الوفاة.
  2. تعقيم جميع الأدوات ، وارتداء القفازات طوال العملية ، والحفاظ على حقل معقم. تحضير الجلد مع 70 ٪ من الإيثانول. قم بعمل شق عمودي في خط الوسط 2 سم باستخدام مقص وأدخل تجويف البطن. قم بتحليل أي التصاقات داخل البطن بشكل حاد.
  3. لإزالة العقدة الليمفاوية المساريقية المستنزفة، اتبع الخطوات الموضحة أدناه.
    1. تحديد الأعور ورفع مساريقه بشكل متفوق. في منتصف الطريق تقريبا إلى قاعدة المساريق القولون ، حدد العقدة الليمفاوية المساريقية وتشريحها بحدة. العقدة الليمفاوية بيضاء اللون ويبلغ حجمها حوالي 0.5 سم × 0.5 سم.
    2. قسم أنسجة العقدة الليمفاوية إلى أثلاثين لعزل البروتين والأنسجة وتعليق الخلية الواحدة ، حسب الحاجة. بالنسبة لمعلقات الخلايا المفردة ، ضع أنسجة العقدة الليمفاوية في 20 مل من الوسائط الخالية من المصل (RPMI) واحتفظ بها على الجليد.
  4. لعزل GIST والأعور ، اتبع الخطوات الموضحة أدناه.
    1. يتم استبدال الأعور في كيتV558Δ / + الفئران في الغالب ب GIST. تقسيم بعناية تقاطع اللفائفي من قاعدة الورم. لجمع الأعور ، قسم القولون مرة أخرى ، 2 سم بالقرب من قاعدة الورم.
    2. في 50٪ -60٪ من الفئران KitV558Δ / + ، يحتوي رأس الورم على غطاء من الأنسجة السيكالية ، والتي تحتوي عادة على سائل مصلي ولكن نادرا ما تحتوي على القيح (الشكل 3). تشريح أنسجة الغطاء بشكل حاد بعيدا عن أنسجة الورم.
    3. قسم أنسجة الورم و / أو الأعور إلى أثلاثين لعزل البروتين والأنسجة وتعليق الخلية الواحدة ، حسب الحاجة. بالنسبة لتعليق الخلية الواحدة ، ضع أنسجة الورم أو الأعور في HBSS مع 2٪ FCS ، وهو ما يكفي لتغطية العينة والحفاظ على الجليد.

4. تحليل اللطخة الغربية لأنسجة GIST

  1. تحضير المخزن المؤقت لتحلل الأنسجة الذي يحتوي على 50 ملليمتر TrisHCl (الرقم الهيدروجيني 7.5) ، 150 mM NaCl ، 5 mM EDTA ، 1٪ منظف غير محدد ، 2 mM Na3VO4 ، 1 mM PMSF ، 10 mM NaF ، و 20 ميكرولتر / مل خليط مثبطات البروتيناز.
  2. قم بإعداد محلول ملحي مخزن مؤقتا 1x Tris مع 1٪ Tween 20 (TBST) من خلال الجمع بين 1800 مل من الماء منزوع الأيونات ، و 2 مل من Tween 20 ، و 200 مل من محلول ملحي مخزن مؤقتا 10x Tris (TBS).
  3. أعد تعليق الأنسجة من الخطوة 3.4.3 في أنبوب FACS في 5mL / g من المخزن المؤقت لتحلل الأنسجة وتجانس مرتين باستخدام مجانس ميكانيكي عند 15000 دورة في الدقيقة لمدة 15 ثانية على الجليد. احتضان الليزات لمدة 30 دقيقة على الجليد.
  4. نقل الليزات إلى أنبوب جهاز طرد مركزي دقيق 1.5 مل. جهاز طرد مركزي بسرعة قصوى لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية. نقل supernatant إلى أنبوب جديد للطرد المركزي الدقيق.
  5. قم بتشغيل lysates على هلام متدرج بنسبة 4٪ إلى 15٪ ، ثم انقله إلى غشاء نيتروسليلوز ، كما هو موضح في14.
  6. اغسل الغشاء مرة واحدة في 1x TBS لمدة 5 دقائق ثم احجب الغشاء في 5٪ من الحليب لمدة 1 ساعة. مرة أخرى ، اغسل الغشاء مرة واحدة في 1x TBS لمدة 10 دقائق.
  7. الغشاء الحاضن في الأجسام المضادة الأولية المخفف 1: 1000 في 5٪ BSA عند 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها. اغسل الغشاء 3x في 1x TBST لمدة 10 دقائق لكل منهما. لطخة الحضانة مع الأجسام المضادة الثانوية المخففة 1: 2500 في الحليب 2.5 ٪ لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  8. اغسل الغشاء مرة واحدة في 1x TBS لمدة 5 دقائق. أضف ما يكفي من ركيزة HRP لتغطية الغشاء ، عادة 200-500 ميكرولتر ، واستخدم جهاز تصوير رقمي للكشف عن التلألؤ الكيميائي وقياسه كميا.

5. الكيمياء النسيجية المناعية لأنسجة GIST

  1. إصلاح الأنسجة من الخطوة 3.3.2 أو 3.4.3 في 4٪ بارافورمالديهايد عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها. تخزين الأنسجة في 70٪ EtOH حتى تصبح جاهزة للمعالجة. قم بتضمين كتل وتقسيمها بسماكة 5 ميكرومتر على شرائح زجاجية ، كما هو موضحفي 15,16.
  2. الكشف الكامل عن الكيمياء المناعية باستخدام مجموعة أساسية للكشف عن المناعة ، كما هو موضح سابقا17.

6. تعليق خلية واحدة من العقدة الليمفاوية المساريقية

  1. صب وسائط RPMI مع عينة العقدة الليمفاوية من الخطوة 3.3.2 على مرشح 100 ميكرومتر. انقل الفلتر إلى عقدة ليمفاوية مخروطية وهرسية جديدة سعة 50 مل مع الطرف الناعم لمحقنة بلاستيكية سعة 3 مل. فلتر الغسيل مع 20 مل من وسائط RPMI.
  2. الطرد المركزي للترشيح عند 450 × g عند 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. شفط السوبرناتانت.
  3. أعد تعليق الكريات في 20 مل من FBS بنسبة 1٪ في PBS (المخزن المؤقت للخرزة) واسكبها على مرشح 40 ميكرومتر. جمع ترشيح الخلية. عد الخلايا باستخدام مقياس الدم.
  4. الطرد المركزي للترشيح عند 450 × g عند 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. شفط السوبرناتانت. أعد التعليق في المخزن المؤقت للخرزة عند 6 × 107 خلايا/مل لقياس التدفق الخلوي.

7. تعليق خلية واحدة من GIST

  1. تحضير الكولاجيناز المخزن المؤقت عن طريق إضافة 250 ملغ من الكولاجيناز الرابع ، قرص واحد من مثبط الأنزيم البروتيني الخالي من EDTA و 100 ميكرولتر من DNase I إلى 50 مل من HBSS. تدور لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة حتى تذوب.
  2. ضع GIST في طبق معقم وأضف 2.5 مل من الكولاجيناز العازل. افرم الورم باستخدام مشرط معقم ومقص حتى يصبح الورم في شظايا دقيقة. استخدم ماصة كبيرة التجويف لشفط الورم والكولاجيناز في أنبوب سعة 50 مل.
  3. احتضن في حاضنة تهتز عند 100 دورة في الدقيقة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. قم بإخماد التفاعل باستخدام 2 مل من FBS.
  4. صب الكولاجيناز مع عينة GIST على مرشح 100 ميكرومتر وهرس الورم مع نهاية ناعمة من حقنة بلاستيكية 3 مل وجمعها في أنبوب 50 مل. اغسل الفلتر ب 20 مل من HBSS. جهاز الطرد المركزي للترشيح عند 450 × جم ، 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. شفط السوبرناتانت.
  5. أعد تعليق الكريات في 20 مل من المخزن المؤقت للخرز واسكبها على مرشح 40 ميكرومتر. جمع الخلايا المرشحة وعد الخلايا باستخدام مقياس الدم. جهاز الطرد المركزي للترشيح عند 450 × جم ، 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. شفط السوبرناتانت. أعد التعليق في المخزن المؤقت للخرزة عند 6 × 107 خلايا/مل لقياس التدفق الخلوي.

8. تعليق خلية واحدة من الأعور

  1. تحضير الكولاجيناز المخزن المؤقت كما في الخطوة 7.1. باستخدام المقص ، قم بتقسيم الأعور طوليا لفضح الغشاء المخاطي الداخلي. تقطع إلى أقسام 0.5 سم وتوضع في أنبوب 50 مل مع 5 مل من HBSS مع 2٪ FBS. رج بقوة لمدة 30 ثانية ، وأجهزة الطرد المركزي في 450 × غرام لمدة 20 ثانية ، ثم استنشق السوبرناتان.
  2. أضف 5 مل من HBSS مع 2 mM EDTA. احتضان في حاضنة تهتز عند 37 درجة مئوية عند 100 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة. جهاز طرد مركزي عند 450 × جم لمدة 20 ثانية. شفط السوبرناتانت.
  3. أضف 5 مل من HBSS. رج بقوة لمدة 30 ثانية ، وأجهزة الطرد المركزي في 450 × غرام لمدة 20 ثانية ، ثم استنشق السوبرناتان. كرر مرة أخرى.
  4. أضف 5 مل من الكولاجيناز العازل. احتضن في حاضنة تهتز عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة عند 100 دورة في الدقيقة. رجه بقوة كل 10 دقائق. قم بإخماد التفاعل باستخدام 2 مل من FBS.
  5. صب الكولاجيناز مع عينة الأعور على مرشح 100 ميكرومتر وهرس مع نهاية ناعمة من حقنة بلاستيكية 3 مل. اغسل الفلتر ب 20 مل من HBSS. جمع الترشيح.
  6. الطرد المركزي للترشيح عند 450 × g لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. شفط السوبرناتانت. أعد تعليق الكريات في 20 مل من المخزن المؤقت للخرز واسكبها على مرشح 40 ميكرومتر. جمع الخلايا المرشحة وعدها باستخدام مقياس الدم.
  7. الطرد المركزي للترشيح عند 450 × g لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. شفط السوبرناتانت. أعد التعليق في المخزن المؤقت للخرزة عند 6 × 107 خلايا/مل لقياس التدفق الخلوي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يسمح نموذج الماوس KitV558Δ/+ بالتحقيق في العلاجات في نموذج الماوس المناعي. يبلغ متوسط عمر الفئران V558Δ/+ 8 أشهر بسبب انسداد الأمعاء التدريجي (الشكل 4). الأورام من KitV558Δ / + الفئران تعبر عن العلامات القانونية ل GIST بما في ذلك مجموعة التيروزين كيناز والقناة عبر الغشاء DOG1 (الشكل 5) ، وكذلك عامل النسخ ETV1 (غير معروض). يمكن دراسة الأ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يعد نموذج الماوس KitV558Δ/+ أداة بحث قوية في التحليل الجزيئي والمناعي ل GIST. على الرغم من أن استراتيجية التربية تتطلب صليبا واحدا ، إلا أن استخدام مجموعات الفئران Kit V558Δ / + في التجارب التي تحلل استجابة الورم يتطلب تربية واسعة النطاق. يجب أن تكون الفئران متطابقة مع العمر والجنس لضمان أوزان الورم المماثلة ، وتموت 10٪ من الفئران قبل 8 أسابيع من العمر عند إنشاء الأورام. استراتيجيات تربية أقل شمولا ممكنة إذا استخدمت تقنيات تصوير متقدمة مثل التصوير المقطعي المحوسب أو التصوير بالرنين...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

شكر وتقدير

تم هندسة مجموعةV558Δ / + الفئران وراثيا ومشاركتها من قبل الدكتور بيتر بيسمر10. تم دعم هذا العمل من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة R01 CA102613 و T32 CA251063.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مرشح 100 ميكرونEMSCO1194-2360
1x مخزن مؤقت تحلل كرات الدم الحمراءLife Technologies00-4333-57
حقنة 3 ملThermo Fisher Scientific / BD Biosciences14823435
4 & ndash ؛ 15٪ جل بروتين صغير PROTEAN TGX مسبقة الصب ، 10 بئر ، 30 وميكرو ؛ لBio-Rad4561083
4٪ محلول بارافورمالدهايدThermo Fisher ScientificAAJ19943K2
40 ميكرون مرشحEMSCO1194-2340
5M NaClSigma AldrichS6546
مرشح 70 ميكرونEMSCO1194-2350
AKT الأجسام المضادة (C67E7)إشارات الخلية4691
C57BL / 6J الفئرانThe Jackson Laboratory
Collagenase IVSigma AldrichC5138
مثبط البروتياز المصغر الكامل الخاليمن EDTA توماس ScientificC852A34
الكونتيسة الثانية عداد الخلايا الآليThermo Fisher Scientific
Thermal Fisher Thermal Fisher Scientific Thermal Fisher Scientific / Exel International14-840-00
Dnase IThomas ScientificC756V81
Dog1 الجسم المضادabcamab64085
EDTASigma AldrichE9884
ERK الجسم المضاد (p44 / 42)إشارات الخلية9102
FBSتوماس ScientificC788U23
برنامج FIJIhttps://imagej.net/software/fiji
فيشربراند 850 الخالطالحراري فيشر العلمي15-340-169
HBSSمركز
إيماتينيب ميسيلاتسيليك للكيماوياتS1026
KIT الجسم المضاد (D13A2)إشارات الخلية3074
KitV558 & دلتا ؛ /+ التنميط الجينيTransnetyx
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة (1.5 مل)Thermo Fisher Scientific05-408-129
Mouse on Mouse Immunodetection Kit ،مختبرات النواقلاتBMK-2202
غشاء النيتروسليلوز ، Precut ، 0.45 & micro ؛ mRio-Rad1620145
الحليب الجاف الخالي من الدسمThermo Fisher ScientificNC9121673
Nonidet P 40 بديلسيجما ألدريتش74385
الجسم المضاد p-AKT (S473)الخلية4060
الجسم المضاد p-ERK (p44 / 42)إشارات الخلية9101
الجسم المضاد p-KIT (Y719)الخلية3391
PMSF مثبط البروتيازالحراري فيشر العلمي36978
Proeinase KThermo Fisher ScientificBP170050
اختبار البوليسترين المستدير القاع (FACS) أنابيبFalcon / Thermo Fisher Scientific14-959-2A
RPMIمركز
فلوريد الصوديوم (NaF)سيجما ألدريتش201154
أورثوفاناديت الصوديوم (Na3VO4)Sigma AldrichS6508
SuperSignal West Dura Extended Duration SubstrateThermo Fisher Scientific34076
TBS buffer (10x)طبق زراعة الأنسجة بجامعة بنسلفانيا
100 مم 2)ثيرمو فيشر ساینتينفيك / فالكون08-772E
TrisHCLThermo Fisher ScientificBP1757500
Tween 20Rio-Rad1706531
  منصة vivaCT 80Scanco الطبية
الخلية بجامعة بنسلفانيا الأساسية إشارات إشارات خلايا جامعة بنسلفانيا (

المراجع

  1. Mastrangelo, G., et al. Incidence of soft tissue sarcoma and beyond: a population-based prospective study in 3 European regions. Cancer. 118 (21), 5339-5348 (2012).
  2. Joensuu, H., DeMatteo, R. P. The management of gastrointestinal stromal tumors: a model for targeted and multidisciplinary therapy of malignancy. Annual Review of Medicine. 63, 247-258 (2012).
  3. Blanke, C. D., et al. Long-term results from a randomized phase II trial of standard- versus higher-dose imatinib mesylate for patients with unresectable or metastatic gastrointestinal stromal tumors expressing KIT. Journal of Clinical Oncology. 26 (4), 620-625 (2008).
  4. Demetri, G. D., et al. Efficacy and safety of regorafenib for advanced gastrointestinal stromal tumours after failure of imatinib and sunitinib (GRID): an international, multicentre, randomised, placebo-controlled, phase 3 trial. Lancet. 381 (9863), 295-302 (2013).
  5. Gold, J. S. Outcome of metastatic GIST in the era before tyrosine kinase inhibitors. Annals of Surgical Oncology. 14 (1), 134-142 (2007).
  6. Huynh, H., et al. Sorafenib induces growth suppression in mouse models of gastrointestinal stromal tumor. Molecular Cancer Therapeutics. 8 (1), 152-159 (2009).
  7. Na, Y. S., et al. Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success. Scientific Reports. 10 (1), 7996(2020).
  8. Balachandran, V. P., et al. Imatinib potentiates antitumor T cell responses in gastrointestinal stromal tumor through the inhibition of Ido. Nature Medicine. 17 (9), 1094-1100 (2011).
  9. Vitiello, G. A., et al. Differential immune profiles distinguish the mutational subtypes of gastrointestinal stromal tumor. Journal of Clinical Investigation. 129 (5), 1863-1877 (2019).
  10. Sommer, G., et al. Gastrointestinal stromal tumors in a mouse model by targeted mutation of the Kit receptor tyrosine kinase. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (11), 6706-6711 (2003).
  11. Cavnar, M. J., et al. KIT oncogene inhibition drives intratumoral macrophage M2 polarization. Journal of Experimental Medicine. 210 (13), 2873-2886 (2013).
  12. Medina, B. D., et al. Oncogenic kinase inhibition limits Batf3-dependent dendritic cell development and antitumor immunity. Journal of Experimental Medicine. 216 (6), 1359-1376 (2019).
  13. Zhang, J. Q., et al. Macrophages and CD8(+) T cells mediate the antitumor efficacy of combined CD40 ligation and imatinib therapy in gastrointestinal stromal tumors. Cancer Immunology Research. 6 (4), 434-447 (2018).
  14. General Protocol for Western Blotting. , Available from: https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Buttetin_6376.pdf (2022).
  15. Sadeghipour, A., Babaheidarian, P. Making formalin-fixed, paraffin embedded blocks. Biobanking: Methods and Protocols. , Springer. New York. 253-268 (2019).
  16. Sy, J., Ang, L. -C. Microtomy: Cutting formalin-fixed, paraffin-embedded sections. Biobanking: Methods and Protocols. , Springer. New York. 269-278 (2019).
  17. Seifert, A. M., et al. PD-1/PD-L1 blockade enhances T-cell activity and antitumor efficacy of imatinib in gastrointestinal stromal tumors. Clinical Cancer Research. 23 (2), 454-465 (2017).
  18. Liu, M., et al. Oncogenic KIT modulates Type I IFN-mediated antitumor immunity in GIST. Cancer Immunology Research. 9 (5), 542-553 (2021).
  19. Rossi, F., et al. Oncogenic Kit signaling and therapeutic intervention in a mouse model of gastrointestinal stromal tumor. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (34), 12843-12848 (2006).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

الفئران المعدلة وراثياًنموذج فأر ذو كفاءة مناعيةطفرة kitالبيئة المجهرية للورمقياس التدفق الخلويمعلق الخلايا المفردةعزل البروتينمثبطات تيروزين كينازتشريح الورم
التقنيات الجزيئية والمناعية في نموذج فأر مهندس وراثيا لورم الجهاز الهضمي اللثوي
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.