مقالة منهجية

تحريض التهاب سطح العين وجمع الأنسجة المصابة

DOI:

10.3791/63890

⸱

أغسطس 4, 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine 3-Rheumatology and Immunology, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen, 2Deutsches Zentrum für Immuntherapie, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التهاب سطح العين يضر بأنسجة سطح العين ويضر بالوظائف الحيوية للعين. يصف البروتوكول الحالي طريقة للحث على التهاب العين وجمع الأنسجة المعرضة للخطر في نموذج فأر لخلل في غدة ميبوميان (MGD).

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تشمل أمراض سطح العين مجموعة من الاضطرابات التي تزعج وظائف وهياكل القرنية والملتحمة وشبكة الغدد السطحية للعين المرتبطة بها. تفرز غدد ميبوميان (MG) الدهون التي تخلق طبقة تغطية تمنع تبخر الجزء المائي من الفيلم المسيل للدموع. تملأ العدلات ومصائد الحمض النووي خارج الخلية MG وسطح العين في نموذج فأر لمرض حساسية العين. تقوم مصائد العدلات المجمعة خارج الخلية (aggNETs) بصياغة مصفوفة تشبه الشبكة تتكون من كروماتين خارج الخلية يسد منافذ MG ويعالج خلل MG. هنا ، يتم تقديم طريقة للحث على التهاب سطح العين وضعف MG. يتم وصف إجراءات جمع الأعضاء المتعلقة بسطح العين ، مثل القرنية والملتحمة والجفون ، بالتفصيل. باستخدام التقنيات المعمول بها لمعالجة كل عضو ، يتم أيضا عرض السمات المورفولوجية والنسيجية الرئيسية لخلل MG. توفر الإفرازات العينية الفرصة لتقييم الحالة الالتهابية لسطح العين. تتيح هذه الإجراءات التحقيق في التدخلات الموضعية والجهازية المضادة للالتهابات على المستوى قبل السريري.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كل غمضة عين تغذي الغشاء المسيل للدموع الناعم المنتشر فوق القرنية. تسهل ظهارة سطح العين التوزيع والاتجاه الصحيح للفيلم المسيل للدموع على سطح العين. يتم توفير الميوسين بواسطة الخلايا الظهارية للقرنية والملتحمة للمساعدة في وضع الجزء المائي من الفيلم المسيل للدموع القادم من الغدد الدمعية على سطح العينين. أخيرا ، يفرز MG الدهون التي تخلق طبقة تغطية تمنع تبخر الجزء المائي من الفيلم المسيل للدموع1،2،3. بهذه الطريقة ، تحمي الوظائف المنسقة لجميع أعضاء العين سطح العين من غزو مسببات الأمراض أو الإصابة وتدعم الرؤية الواضحة تماما دون أي ألم أو إزعاج.

في سطح العين الصحي ، يزيل التفريغ المتدفق للعين أو رووم العين الغبار والخلايا الظهارية الميتة والبكتيريا والمخاط والخلايا المناعية. تقوم مصائد العدلات المجمعة خارج الخلية (aggNETs) بصياغة مصفوفة تشبه الشبكة تتكون من الكروماتين خارج الخلية ودمج هذه المكونات في رويم العين. تعمل AggNETs على حل الالتهاب عن طريق التحلل البروتيني للسيتوكينات والكيموكيناتالمؤيدة للالتهابات 4. ومع ذلك ، عندما تصبح مختلة وظيفيا ، فإن هذه الشبكات الشاذة تدفع التسبب في أمراض مثل انسداد الأوعية الدموية في COVID-195 ، وحصى المرارة6 ، و sialolithiasis7. وبالمثل ، تلعب aggNETs على سطح العين دورا وقائيا وتساهم في حل التهاب السطح شديد التعرض8. يمكن أن يؤدي التكوين المبالغ فيه أو نقص aggNETs في سطح العين إلى إضعاف استقرار الغشاء المسيل للدموع و / أو التسبب في جروح القرنية والتهاب الملتحمة ومرض جفاف العين. على سبيل المثال ، انسداد MG هو السبب الرئيسي لمرض جفاف العين9. من المعروف أيضا أن AggNETs تسد تدفق إفراز الدهون من قنوات MG وتسبب خلل في غدة Meibomian (MGD). يؤدي احتقان فتحات MG بواسطة aggNETs إلى نقص السوائل الدهنية التي تغلف سطح العين والسوائل المعبأة في زجاجات إلى الوراء ، مما يؤدي إلى خلل في وظيفة الغدة وتلف العنيب. يمكن أن يؤدي هذا الخلل الوظيفي إلى تبخر الفيلم المسيل للدموع ، وتليف الهوامش على الجفون ، والتهاب العين ، والأضرار الضارة ل MG10,11.

تم تطوير العديد من النماذج الحيوانية على مر السنين لتقليد العملية المرضية ل MGD في البشر. على سبيل المثال ، ساعدت الفئران C57BL / 6 التي تتراوح أعمارها بين عام واحد في دراسة التأثيرات المرتبطة بالعمر على مرض جفاف العين (DED) و MGD ، مما يعكس أمراض العين في المرضى الذين تتراوح أعمارهم بين 50 عاما وما فوق12،13،14. علاوة على ذلك ، الأرانب هي نماذج مناسبة للتحقيق في آثار التدخلات الدوائية. لذلك ، تم الإبلاغ عن تحفيز MGD في الأرانب إما عن طريق الإدارة الموضعية للإبينفرين أو الإدخال الجهازي لحمض الريتينويك 13-cis-retinoic (isotretinoin)15،16،17،18،19.

على الرغم من أن هذه النماذج الحيوانية كانت كافية لتحديد العوامل المختلفة التي تساهم في الفيزيولوجيا المرضية ل MGD ، إلا أنها كانت مقيدة في استخدامها. على سبيل المثال ، كان نموذج الفئران ل MGD المرتبط بالعمر مثاليا لفك رموز العناصر لدى كبار السن فقط ، وبالتالي ، يبدو أن الأرانب هي النموذج الحيواني الأنسب لدراسة أمراض سطح العين ، لأنها تمكن من التحقيق في آليات فسيولوجية مرضية متعددة. ومع ذلك ، نظرا لعدم وجود أدوات تحليلية شاملة للكشف عن البروتينات على سطح العين ولأن أجزاء كثيرة من جينوم الأرانب غير مشروحة ، فهي محدودة للتحقيقات20,21.

بالإضافة إلى ذلك ، لم تقدم هذه النماذج الحيوانية المستخدمة للتحقيق في التسبب في مرض جفاف العين تفاصيل كافية لتحليل الذراع المناعي للاضطراب الذي يحرض على التهاب سطح العين. وفقا لذلك ، أظهر نموذج الفئران من MGD الذي طوره Reyes et al. وجود ارتباط بين مرض حساسية العين في الفئران و MGD في البشر وسلط الضوء على المسببات المناعية المسؤولة عن MGD21 الانسدادي. يربط هذا النموذج مرض العين التحسسي باستجابة TH17 التي تجند العدلات إلى الملتحمة والجفن ، مما يسبب MGD والتهاب العين المزمن21. يعد تحريض MGD والتهاب العين في نموذج الفئران هذا أداة قيمة للتحقيق في أحداث المنبع أثناء تطور الالتهاب الموضعي المدفوع باستجابة مناعية مستمرة21. يصف البروتوكول الحالي التهاب سطح العين المصحوب ب MGD الانسدادي. في هذه الطريقة ، يتم تحصين الفئران ، وبعد 2 أسابيع ، يتم تحديها على سطح العين مع المناعة لمدة 7 أيام. علاوة على ذلك ، يتم وصف خطوات عزل إفرازات العين وأعضاء العين المرتبطة بها أثناء الالتهاب الحاد وتشريح القرنية والملتحمة والجفون.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم إجراء جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية بشأن رعاية الحيوان ووافقت عليها لجنة رعاية الحيوان بجامعة فريدريش ألكسندر إرلانغن نورمبرغ (FAU) (رقم التصريح: 55.2.2-2532-2-1217). تم استخدام إناث C57Bl / 6 الفئران ، الذين تتراوح أعمارهم بين 7-9 أسابيع للدراسة الحالية. تم الحصول على الفئران من مصادر تجارية (انظر جدول المواد) والاحتفاظ بها في ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض مع دورات 12 ساعة ليلا ونهارا.

1. تحريض التهاب سطح العين الفئران

  1. أداء إعداد المناعي للتحصين.
    1. تحضير المستمناع طازجا في يوم التحصين ، وخلط البومين البيضاوي (OVA ، 50 مجم / مل) وسم السعال الديكي (100 ميكروغرام / مل) في محلول ملحي وهيدروكسيد الألومنيوم المساعد (40 مجم / مل) (انظر جدول المواد) بنسبة 1: 1.
      تنبيه: قم بإجراء الفتح وإعادة التكوين وإعداد المناعة لسم السعال الديكي في خزانة أمان رقائقي. ارتداء ملابس واقية وتجنب أي اتصال مع الجلد.
    2. احتضان الخليط المناعي والمساعد في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة وقم بتحميل 100 ميكرولتر في حقنة سعة 1 مل.
    3. إجراء الحقن داخل الصفاق من محلول immunogen في الماوس غير مخدر.
      1. أمسك الماوس بهدوء من الذيل أثناء الإمساك بشبكة القفص. أمسك جلد الظهر ومنطقة الرقبة بإحكام بين الإبهام والسبابة وثبت الذيل والأطراف السفلية بين الخاتم والإصبع الصغير على راحة اليد.
      2. حافظ على الماوس الثابت ورأسه لأسفل.
      3. حقن 100 ميكرولتر من محلول المناعة المحضر في الربع الأيمن أو الأيسر من تجويف البطن السفلي.
  2. أداء تحدي سطح العين 2 أسابيع بعد التحصين.
    1. تخدير الماوس باستخدام إيزوفلوران (2.5٪).
    2. ضع 5 ميكرولتر من OVA (50 مجم / مل) أو محلول ملحي (0.9٪ كلوريد الصوديوم) لكل عين على كلتا العينين وانتظر حتى تمتص العين القطرة. هذا يستغرق ~ 5 دقيقة.
    3. كرر الإجراء 1x يوميا لمدة 7 أيام.
      ملاحظة: يمكن أن يتم الإعطاء الموضعي للأدوية بنفس الطريقة.

2. جمع إفرازات العين

  1. استرجع الإفرازات العينية التي تشكلت خلال مرحلة التحدي عن طريق وضع 50 ميكرولتر من المحلول الملحي المعقم على العين مباشرة بعد التحدي.
  2. للحصول على معلق أحادي الخلية ، عالج تفريغ العين المجمع باستخدام MNase المؤتلف (2 × 106 هلام U / مل ، انظر جدول المواد) الذي يحتوي على العامل المساعد الكالسيوم (5 مليمول) عند 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
  3. جهاز طرد مركزي عند 400 × جم لمدة 7 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  4. عزل المادة الطافية وقياس السيتوكينات والكيموكينات باستخدام ELISA المتعدد وفقا لتعليمات الشركة المصنعة (انظر جدول المواد).
    ملاحظة: يمكن استخدام المادة الطافية التي تم الحصول عليها لتحليل البروتين والحبيبات للمقايسات الوظيفية مثل التنميط المناعي ، البلعمة ، التحلل ، والتعبير الجيني.

3. استئصال أنسجة سطح العين

  1. قم بتشريح الجفون وكرة العين باتباع الخطوات أدناه.
    1. القتل الرحيم للفأر عن طريق اختناق CO2 وخلع عنق الرحم.
    2. ضع الماوس على سطح مستو.
    3. تطهير المنطقة المدارية حول العين بمسحة مشربة بنسبة 70 ٪ من الإيثانول.
    4. قم بعمل شق بين الأذن والجيب الحجاجي الخلفي وعلى طول السطح فوق العظم الحرشفية عموديا ، مع تمديد الشق أفقيا أسفل الجفن السفلي على طول عظم الفك العلوي وفوق الجفن العلوي على طول العظم الجبهي. هذا يشكل شقا حول العين (الشكل 1).
    5. أمسك الأنسجة المشرحة بعناية حول العين باستخدام ملقط منحني واسحب المنديل ومقلة العين للخارج.
    6. ضع الأعضاء المستأصلة في PBS معقمة.
    7. قم بقص أنسجة عضلات الوجه الزائدة حول الجفون العلوية المستأصلة باستخدام مشرط وتحت المجهر المجسم.
  2. اجمع الملتحمة باتباع الخطوات أدناه.
    1. ضع الجفن العلوي على طبق بتري جاف تحت المجهر المجسم.
    2. باستخدام ملاقط دقيقة ومشرط ، قشر الطبقة المخاطية البيضاء بلطف شديد من السطح الداخلي للجفن.
  3. بعد ذلك ، قم بتشريح القرنية باتباع الخطوات أدناه.
    1. ضع كرة العين على طبق بتري جاف جديد فوق الثلج الجاف لمدة 3 دقائق.
    2. خذ طبق بتري على سطح المقعد في وضع ثابت.
    3. قم بعمل شق صغير على حدود القرنية بجوار الحافة باستخدام مقص حاد ناعم.
    4. إطالة الشق بالمشرط حول كرة العين ، وفصل الصلبة عن القرنية.
    5. قم بإزالة بقايا القزحية والعدسة من مؤخرة القرنية عن طريق التنظيف بسخاء بمحلول ملحي.

4. توثيق انسداد غدة ميبوميان (MG)

  1. لتقييم MG وفتحاته ، ضع الجفون المستأصلة في وضع رأسي تحت المجهر المجسم (الشكل 2).
  2. التقط الصور باستخدام الإضاءة الفائقة للضوء الأبيض وفقا لوقت تعريض الكاميرا وإعدادات ISO.
    ملاحظة: يوفر التحليل المورفومتري لهذه الصور قياسا كميا موثوقا لحجم السدادة عند مخرج الغدد. يمكن إجراء القياس الكمي عن طريق تحديد سدادات العين باستخدام أداة العصا وتنفيذ أمر "تحليل الجسيمات" لبرنامج Image J (انظر جدول المواد).

5. تضيء الجفون (مورفولوجيا غدة ميبوميان)

  1. لتقييم منطقة MG ، ضع الجفون المستأصلة في وضع أفقي وقم بتشغيل الإضاءة الخلفية للمجهر المجسم المجهز بكاميرا الأشعة تحت الحمراء (الشكل 3).
  2. التقط الصور عن طريق ضبط وقت التعريض الضوئي وفقا لمعيار ISO الخاص بالكاميرا (انظر جدول المواد).
    ملاحظة: يمكن أن يساعد التصوير بالأشعة تحت الحمراء لهذه الجفون المضيئة تحت المجهر المجسم في قياس شكل وحجم كل أسيني. يوفر التحليل المورفومتري لهذه الصور قياسا كميا موثوقا لحجم وعدد MG. يمكن إجراء القياس الكمي عن طريق تحديد MG باستخدام أداة العصا وتنفيذ أمر "تحليل الجسيمات" لبرنامج Image J.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف البروتوكول الحالي الخطوات المتسلسلة لإنشاء نموذج الفئران لالتهاب سطح العين. تهدف البروتوكولات إلى إظهار كيفية تطبيق العلاجات محليا ، والحصول على إفرازات العين ، واستئصال الأعضاء الملحقة المرتبطة بها مثل الجفون السليمة والملتهبة (الشكل 2) ، والقرنية ، والملتحمة. يجب الانتباه عند تشريح الجفون العلوية لعزل الملتحمة ، ويجب تخزينها في 1x PBS أثناء تشريح القرنية. هذا سيمنع تجفيف الملتحمة ، والتي يمكن استخدامها للدراسات النسيجية والحركية الدوائية والتعبير الجيني.

تم ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإفراز الدهني لغدد ميبوميان له أهمية كبيرة للعين السليمة22. ومع ذلك ، فإن انسداد هذه الغدد الدهنية بواسطة مصائد العدلات المجمعة خارج الخلية (aggNETs) التي تصطف كخيوط متوازية تقع على الصفائح الرصغية لكلا الجفنين يمكن أن يعطل الفيلم المسيل للدموع23. يؤدي هذا الاضطراب إلى خلل في غدة ميبوميان (MGD)1 وتبخر مسيلة للدموع وظروف تلف سطح العين2. يصف هذا البروتوكول إنشاء التهاب سطح العين بوساطة المناعة الذي يؤدي إلى انسداد MG.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للكشف عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل مؤسسة الأبحاث الألمانية (DFG) 2886 PANDORA Project-No.B3 ؛ SCHA 2040 / 1-1 ؛ MU 4240 / 2-1 ؛ CRC1181 (C03) ؛ TRR241 (B04) ، H2020-FETOPEN-2018-2020 Project 861878 ، وبواسطة Volkswagen-Stiftung (Grant 97744) إلى MH.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1x PBSجيبكو
هيدروكسيد الألومنيومإمزيت الشب7716140 مجم / مل
<قوي>التركيز النهائي< / قوي>: in vivo < / em>: 1 مجم / 100 & micro ؛ L
C57Bl / 6 فئران ، تتراوح أعمارهم بين 7 سنوات ؛ 9 أسابيعمختبرات نهر تشارلز  
الكالسيومكارل روثCN93.11 M
التركيز النهائي< / قوي>: 5 ملقط
منحنيFST بواسطة Dumont سويسرا5/45 11251-35
مقص حاد ناعمFST الفولاذ المقاوم للصدأ ، ألمانيا15001-08
خزانة أمان رقائقيةكاميرا Herasafe
MacrophotographyEOS6Dمن Canon
(بدون مرشح الأشعة تحت الحمراء)نيكونD5300
MnaseNew England biolabsM0247S2 × 106< / sup> مجموعة فحص تدفق جل U / مل
متعددة التحليلات (لوحة مخصصة للماوس 13 بلكس)BiolegendCLPX-200421AM-UERLAN
كلوريد الصوديوم 0,9٪ (محلول ملحي)B.Braun
Ovalbumin (OVA)Endofit ، Invivogen9006-59-110 مجم / 200 & micro ؛ L في
السعال الديكي الملحي ThermoFisher Scientific PHZ117450 & micro; جم / 500 ميكرو ؛ L في محلول ملحي
<قوي > التركيز النهائي < / قوي >: < م > في الجسم الحي < / م >: 100 وميكرو ؛ جم / 100 وميكرو ؛ L
PetridishGreiner bio-one628160
مشرطريشة مشرط يمكن التخلص منهرقم 21   ؛<قوي >التركيز النهائي < / قوي >: < م > في الجسم الحي < م > :   ؛ 300 نانوغرام / 100 & ميكرو ؛ L
مجهر مجهريZeissStemi508
حقنة (غسيل القرنية / القزحية)BD Microlane27 جم × 3/4 - Nr.20 0,4 × 19 مم
حقنة (تحصين IP)BD Microlane24 G1 "-Nr 17 ، 055 * 25 مم
المساعد كاميرا التصوير الماكرو السم

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gilbard, J. P., Rossi, S. R., Heyda, K. G. Tear film and ocular surface changes after closure of the meibomian gland orifices in the rabbit. Ophthalmology. 96 (8), 1180-1186 (1989).
  2. Mishima, S., Maurice, D. M. The oily layer of the tear film and evaporation from the corneal surface. Experimental Eye Research. 1, 39-45 (1961).
  3. Gipson, I. K. The ocular surface: The challenge to enable and protect vision: The Friedenwald lecture. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (10), 4391-4398 (2007).
  4. Hahn, J., et al. Aggregated neutrophil extracellular traps resolve inflammation by proteolysis of cytokines and chemokines and protection from antiproteases. The FASEB Journal. 33 (1), 1401-1414 (2019).
  5. Leppkes, M., et al. Vascular occlusion by neutrophil extracellular traps in COVID-19. EBioMedicine. 58, 102925(2020).
  6. Munoz, L. E., et al. Neutrophil extracellular traps initiate gallstone formation. Immunity. 51 (3), 443-450 (2019).
  7. Schapher, M., et al. Neutrophil extracellular traps promote the development and growth of human salivary stones. Cells. 9 (9), 2139(2020).
  8. Mahajan, A., et al. Frontline science: Aggregated neutrophil extracellular traps prevent inflammation on the neutrophil-rich ocular surface. Journal of Leukocyte Biology. 105 (6), 1087-1098 (2019).
  9. DEWS Definition and Classification Subcommittee. The definition and classification of dry eye disease: Report of the Definition and Classification Subcommittee of the International Dry Eye Workshop. The Ocular Surface. 5 (2), 75-92 (2007).
  10. Nichols, K. K., et al. The international workshop on meibomian gland dysfunction: Executive summary. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1922-1929 (2011).
  11. Mahajan, A., et al. Aggregated neutrophil extracellular traps occlude Meibomian glands during ocular surface inflammation. The Ocular Surface. 20, 1-12 (2021).
  12. Jester, B. E., Nien, C. J., Winkler, M., Brown, D. J., Jester, J. V. Volumetric reconstruction of the mouse meibomian gland using high-resolution nonlinear optical imaging. The Anatomical Record. 294 (2), 185-192 (2011).
  13. Nien, C. J., et al. Age-related changes in the meibomian gland. Experimental Eye Research. 89 (6), 1021-1027 (2009).
  14. Parfitt, G. J., Xie, Y., Geyfman, M., Brown, D. J., Jester, J. V. Absence of ductal hyper-keratinization in mouse age-related meibomian gland dysfunction (ARMGD). Aging. 5 (11), 825-834 (2013).
  15. Lambert, R. W., Smith, R. E. Pathogenesis of blepharoconjunctivitis complicating 13-cis-retinoic acid (isotretinoin) therapy in a laboratory model. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 29 (10), 1559-1564 (1988).
  16. Jester, J. V., Nicolaides, N., Kiss-Palvolgyi, I., Smith, R. E. Meibomian gland dysfunction. II. The role of keratinization in a rabbit model of MGD. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 30 (5), 936-945 (1989).
  17. Jester, J. V., et al. In vivo biomicroscopy and photography of meibomian glands in a rabbit model of meibomian gland dysfunction. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 22 (5), 660-667 (1982).
  18. Lambert, R., Smith, R. E. Hyperkeratinization in a rabbit model of meibomian gland dysfunction. American Journal of Ophthalmology. 105 (6), 703-705 (1988).
  19. Knop, E., Knop, N., Millar, T., Obata, H., Sullivan, D. A. The international workshop on meibomian gland dysfunction: Report of the subcommittee on anatomy, physiology, and pathophysiology of the meibomian gland. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1938-1978 (2011).
  20. Huang, W., Tourmouzis, K., Perry, H., Honkanen, R. A., Rigas, B. Animal models of dry eye disease: Useful, varied and evolving (Review). Experimental and Therapeutic Medicine. 22 (6), 1394(2021).
  21. Reyes, N. J., et al. Neutrophils cause obstruction of eyelid sebaceous glands in inflammatory eye disease in mice. Science Translational Medicine. 10 (451), (2018).
  22. Knop, E., Korb, D. R., Blackie, C. A., Knop, N. The lid margin is an underestimated structure for preservation of ocular surface health and development of dry eye disease. Developments in Ophthalmology. 45, 108-122 (2010).
  23. Knop, N., Knop, E. Meibomian glands. Part I: anatomy, embryology and histology of the Meibomian glands. Ophthalmologe. 106 (10), 872-883 (2009).
  24. Nien, C. J., et al. Effects of age and dysfunction on human meibomian glands. Archives of Ophthalmology. 129 (4), 462-469 (2011).
  25. Lio, C. T., Dhanda, S. K., Bose, T. Cluster analysis of dry eye disease models based on immune cell parameters - New insight into therapeutic perspective. Frontiers in Immunology. 11, 1930(2020).
  26. Nguyen, D. D., Luo, L. J., Lai, J. Y. Thermogels containing sulfated hyaluronan as novel topical therapeutics for treatment of ocular surface inflammation. Materials Today Bio. 13, 100183(2022).
  27. Lin, P. H., et al. Alleviation of dry eye syndrome with one dose of antioxidant, anti-inflammatory, and mucoadhesive lysine-carbonized nanogels. Acta Biomaterialia. 141, 140-150 (2022).
  28. Yu, D., et al. Loss of beta epithelial sodium channel function in meibomian glands produces pseudohypoaldosteronism 1-like ocular disease in mice. American Journal of Pathology. 188 (1), 95-110 (2018).
  29. Mauris, J., et al. Loss of CD147 results in impaired epithelial cell differentiation and malformation of the meibomian gland. Cell Death & Disease. 6 (4), 1726(2015).
  30. Ibrahim, O. M., et al. Oxidative stress induced age dependent meibomian gland dysfunction in Cu, Zn-superoxide dismutase-1 (Sod1) knockout mice. PloS One. 9 (7), 99328(2014).
  31. McMahon, A., Lu, H., Butovich, I. A. A role for ELOVL4 in the mouse meibomian gland and sebocyte cell biology. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 55 (5), 2832-2840 (2014).
  32. Miyake, H., Oda, T., Katsuta, O., Seno, M., Nakamura, M. Meibomian gland dysfunction model in hairless mice fed a special diet with limited lipid content. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 57 (7), 3268-3275 (2016).
  33. Schaumberg, D. A., et al. The international workshop on meibomian gland dysfunction: Report of the subcommittee on the epidemiology of, and associated risk factors for, MGD. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (4), 1994-2005 (2011).
  34. Lee, S. Y., et al. Analysis of tear cytokines and clinical correlations in Sjogren syndrome dry eye patients and non-Sjogren syndrome dry eye patients. American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 247-253 (2013).
  35. Nakae, S., et al. Antigen-specific T cell sensitization is impaired in IL-17-deficient mice, causing suppression of allergic cellular and humoral responses. Immunity. 17 (3), 375-387 (2002).
  36. von Vietinghoff, S., Ley, K. IL-17A controls IL-17F production and maintains blood neutrophil counts in mice. Journal of Immunology. 183 (2), 865-873 (2009).
  37. Langrish, C. L., et al. IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation. Journal of Experimental Medicine. 201 (2), 233-240 (2005).
  38. Chen, Y., et al. Anti-IL-23 therapy inhibits multiple inflammatory pathways and ameliorates autoimmune encephalomyelitis. Journal of Clinical Investigation. 116 (5), 1317-1326 (2006).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Meibomian Gland DysfunctionNeutrophil Extracellular TrapsOcular Exudate CollectionCornea DissectionConjunctiva IsolationEyelid ExcisionInfrared ImagingHistological AnalysisSingle Cell Sequencing

مقالات ذات صلة