مقالة منهجية

بروتوكول ما قبل التحليل المسبق للخزعة السائلة الموحدة لتطبيقات الحمض النووي الخالية من التداول في المراحل النهائية

DOI:

10.3791/64123

⸱

سبتمبر 16, 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Liquid Biopsy and Biomarker Working Module, the Biomedical Research Network in Cancer (CIBERONC)

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لقد أحدثت الخزعة السائلة ثورة في نهجنا في الدراسات الانتقالية لعلم الأورام ، حيث يعد جمع العينات وجودتها وتخزينها خطوات حاسمة لتطبيقها السريري الناجح. هنا نصف بروتوكولا موحدا ومعتمدا لتطبيقات الحمض النووي الخالية من التداول في المراحل النهائية والتي يمكن تطبيقها في معظم مختبرات الأبحاث الانتقالية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشير مصطلح الخزعة السائلة (LB) إلى جزيئات مثل البروتينات أو الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي أو الخلايا أو الحويصلات خارج الخلية في الدم وسوائل الجسم الأخرى التي تنشأ من الورم الأساسي و / أو النقيلي. برز LB كدعامة أساسية في البحوث الانتقالية وبدأ يصبح جزءا من ممارسة الأورام السريرية ، مما يوفر بديلا طفيف التوغل للخزعة الصلبة. يسمح LB بمراقبة الورم في الوقت الفعلي عن طريق استخراج عينة طفيفة التوغل ، مثل الدم. وتشمل التطبيقات الكشف المبكر عن السرطان، ومتابعة المرضى للكشف عن تطور المرض، وتقييم الحد الأدنى من الأمراض المتبقية، والتحديد المحتمل للتطور الجزيئي وآلية المقاومة. من أجل تحقيق تحليل موثوق به لهذه العينات التي يمكن الإبلاغ عنها في العيادة ، يجب النظر بعناية في إجراءات ما قبل التحليل واتباعها بدقة. يعد جمع العينات وجودتها وتخزينها خطوات حاسمة تحدد فائدتها في التطبيقات النهائية. هنا ، نقدم بروتوكولات موحدة من وحدة عمل الخزعة السائلة الخاصة بنا لجمع ومعالجة وتخزين عينات البلازما والمصل لتحليل الخزعة السائلة في المصب بناء على الحمض النووي الخالي من التداول. تتطلب البروتوكولات المعروضة هنا معدات قياسية ومرنة بما يكفي لتطبيقها في معظم المختبرات التي تركز على الإجراءات البيولوجية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تعريف مصطلح "الخزعة السائلة" في عام 20101 على أنه وجود جزيئات (مثل البروتين أو الحمض النووي الريبي النووي (DNA) أو الحمض النووي الريبي (RNA)) أو الخلايا أو الحويصلات خارج الخلية (على سبيل المثال ، الإكسوسومات) في الدم وسوائل الجسم الأخرى التي تنشأ من الورم الأساسي. أحدث استخدام عينات الخزعة السائلة ثورة في أبحاث الأورام الانتقالية حيث أن خزعات الأنسجة ، التي تقتصر على منطقة معينة في لحظة معينة ، قد تفوت النسخ المستنسخة ذات الصلة بسبب عدم تجانس الورم. بالإضافة إلى ذلك ، تلعب الخزعة السائلة دورا ذا صلة في أنواع الأورام حيث تكون الأنسجة الأولية نادرة أو لا يمكن الوصول إليها ، لأنها قد تتجنب الخزعة الغازية ، مما يقلل من التكاليف والمخاطر على المرضى. علاوة على ذلك ، تتطور الخصائص الجزيئية للورم باستمرار ويرجع ذلك أساسا إلى ضغط العلاج ، ويمكن لعينات الخزعة السائلة التقاط الديناميكيات النسيلية للورم حيث يمكن أخذها طوليا ، في أوقات سريرية وعلاجية مختلفة من المرض مثل خط الأساس ، على العلاج ، أفضل استجابة ، وعند تطور المرض أو حتى قبل ذلك. مفهوم "الخزعة السائلة في الوقت الحقيقي" يعني أنه يمكن مراقبة التغيرات الديناميكية في الورم في الوقت الفعلي ، مما يسمح بالطب الدقيق في هذا المرض. الخزعة السائلة لها العديد من التطبيقات المحتملة في العيادة ، بما في ذلك الفحص والكشف المبكر عن السرطان ، والمراقبة في الوقت الفعلي للمرض ، والكشف عن الحد الأدنى من الأمراض المتبقية ، ودراسة آليات مقاومة العلاج ، والتقسيم الطبقي للمرضى على المستوى العلاجي1. يعد الكشف المبكر عن تكرار المرض وتطوره حاجة سريرية غير ملباة في العديد من أنواع الأورام وهو عامل رئيسي في زيادة بقاء مرضى السرطان على قيد الحياة ونوعية حياتهم. قد تفتقر طرق التصوير الروتينية وعلامات الورم القابلة للذوبان إلى الحساسية و / أو الخصوصية المطلوبة لهذه المهمة. وبالتالي ، هناك حاجة ماسة إلى علامات تنبؤية جديدة في العيادة ، مثل تلك القائمة على تعميم الأحماض النووية الحرة.

تشمل أنواع العينات المستخدمة في دراسات الخزعة السائلة على سبيل المثال لا الحصر عينات الدم والبول واللعاب والبراز. يمكن أن تكون العينات الأخرى الخاصة بالورم عبارة عن شفطات الخلايا والسائل الدماغي الشوكي والسائل الجنبي والكيس وسائل الاستسقاء والبلغم وعصير البنكرياس2. قد تحتوي السوائل السابقة على أنواع مختلفة من المواد المشتقة من السرطان ، أو الخلايا السرطانية المتداولة (CTC) ، أو شظايا مثل الإكسوسومات والحمض النووي للورم المتداول الخالي من الخلايا (ctDNA). قد يتم تغليف الأحماض النووية في حويصلات خارج الخلية (EVs) أو إطلاقها في سوائل الجسم بسبب موت الخلايا وتلفها. يتم إطلاق الحمض النووي الحر المنتشر (cfDNA) بشكل رئيسي في مجرى الدم من الخلايا الماصة أو الميتة وهو موجود في جميع الأفراد ، مما يدل على زيادة المستويات في الأمراض الالتهابية أو الأورام3. Exosomes هي حويصلات صغيرة خارج الخلية (~ 30-150 نانومتر) تفرزها الخلايا التي تحتوي على الأحماض النووية والبروتينات والدهون. تشكل هذه الحويصلات جزءا من شبكة الاتصالات بين الخلايا وتوجد عادة في العديد من أنواع سوائل الجسم2. الأحماض النووية المغلقة داخل المركبات الكهربائية محمية من البيئة القاسية داخل سوائل الجسم، وبالتالي توفير طريقة أكثر قوة لدراسة هذه الجزيئات في إعداد الخزعة السائلة.

وعموما، فإن مستويات الأحماض النووية المتداولة في عينات الخزعة السائلة منخفضة جدا، وبالتالي هناك حاجة إلى طرق حساسة للكشف، مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل الرقمي أو تسلسل الجيل التالي (NGS). تعد الإدارة قبل التحليلية للعينة أمرا بالغ الأهمية لمنع تحلل خلايا الدم وإطلاق الحمض النووي السليم ، مما يتسبب في تلوث cfDNA بالحمض النووي الجينومي. علاوة على ذلك ، يجب توخي الحذر عند استخراج العينات لتجنب وجود مثبطات لطرق التحليل القائمة على الإنزيم.

نقدم هنا طريقة موحدة لجمع وتخزين عينات البلازما والمصل ، وهي خطوة أولى حاسمة للتطبيقات النهائية القائمة على الخزعة السائلة ، بما في ذلك تحليلات الحمض النووي المتداولة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم الحصول على موافقة أخلاقية مسبقة من المراكز المشاركة قبل استخراج عينات الدم. تم تنفيذ البروتوكولات التالية لعزل المصل والبلازما وفقا للمبادئ الأخلاقية للبحوث الطبية الحيوية.

ملاحظة: يتم توفير الاعتبارات السابقة قبل بدء البروتوكول هنا. مطلوب موافقة أخلاقية مسبقة لاستخدام العينات البشرية في البحوث الطبية الحيوية ، مع الموافقة المستنيرة المقابلة. مطلوب خزانة السلامة الأحيائية من الفئة الثانية للتعامل مع عينات الدم. يجب ارتداء معطف المختبر والقفازات الواقية والنظارات طوال العملية لتجنب العدوى بمسببات الأمراض المنقولة بالدم. مطلوب ما لا يقل عن 30 دقيقة لمعالجة عينات المصل. بعد استخراج الدم في أنابيب بدون مضادات التخثر ، حافظ على درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة 30-45 دقيقة للسماح بتكوين الجلطة. مطلوب ما لا يقل عن 40 دقيقة لإعداد البلازما ، ويجب معالجة العينات في غضون 4 ساعات من وقت الاستخراج عند استخدام أنابيب حمض الإيثيلين ديامين رباعي حمض الخليك (EDTA) أو في غضون 24-48 ساعة إذا كنت تستخدم أنابيب تجميع تثبيت الخلايا أو أنابيب محددة لجمع الحمض النووي خالية من الخلايا. ومع ذلك ، وفقا لبعض الشركات المصنعة ، فإن العينات مستقرة لمدة تصل إلى 2 أسابيع في هذه الأنابيب المتخصصة. من المهم التحقق من انحلال الدم ، مما سيعطي البلازما أو جزء المصل مظهرا محمرا. راجع قسم استكشاف الأخطاء وإصلاحها للحصول على عينات انحلال في المناقشة.

1. إعداد المصل لدراسات الخزعة السائلة

ملاحظة: إجمالي الوقت المطلوب لتنفيذ هذه الخطوة هو 30 دقيقة (الشكل 1).

  1. استخراج 4-10 مل من الدم في أنابيب لا تحتوي على مضادات التخثر (غطاء أحمر أو أحمر / رمادي أسود) والحفاظ عليها في RT لمدة 30-45 دقيقة. معالجة هذه العينات في غضون 4 ساعات من وقت الاستخراج.
  2. سجل وقت وتاريخ استخراج العينة وتحديد الموضوع (ID) في قاعدة بيانات عينة مصممة بشكل مناسب.
  3. ارتداء معطف المختبر والقفازات الواقية والنظارات، وجهاز الطرد المركزي للأنبوب الذي يحتوي على دم جديد في RT (15 درجة مئوية -25 درجة مئوية) لمدة 10 دقائق عند 1600 (± 150) × غرام، مع تطبيق الحد الأقصى للكسر.
  4. بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة الأنبوب بعناية من جهاز الطرد المركزي ؛ ستظهر المرحلة العليا من supernatant المصل واضحة وصفراء (الشكل 2). تحقق مما إذا كانت العينة تظهر علامات انحلال الدم (الشكل 3) وسجل وجود انحلال الدم عند الاقتضاء.
  5. في خزانة السلامة الأحيائية من الفئة الثانية ، انقل المصل إلى أنابيب التجميع على شكل 250 ميكرولتر أليكوتس.
    ملاحظة: يجب تعديل حجم الأليكوتس وفقا لمتطلبات الدراسة.
  6. قم بتجميد المصل على الفور في وضع مستقيم في صندوق تخزين عند -80 درجة مئوية وسجل وقت تخزين العينة.
  7. تحقق من معالجة العينات خلال الإطار الزمني المطلوب البالغ 4 ساعات.

2. تحضير البلازما لدراسات الخزعة السائلة

ملاحظة: إجمالي الوقت المطلوب لتنفيذ هذه الخطوة هو 40 دقيقة (الشكل 4).

  1. استخراج 4-10 مل من الدم في أنابيب تحتوي على الإيثيلين ديامين رباعي حمض الخليك (EDTA). معالجة العيناتفي غضون 4 ساعات من وقت الاستخراج.
  2. سجل وقت وتاريخ استخراج العينة ومعرف الموضوع في قاعدة بيانات نموذجية مصممة بشكل مناسب.
  3. يرتدي معطف المختبر والقفازات الواقية والنظارات ، جهاز الطرد المركزي لأنبوب EDTA في RT (15 درجة مئوية - 25 درجة مئوية) لمدة 10 دقائق عند 1600 (± 150) × g ، مع تطبيق الحد الأقصى للكسر.
    ملاحظة: ارجع إلى إرشادات الشركة المصنعة عند استخدام أنابيب تجميع أخرى.
  4. بعد الطرد المركزي ، سيظهر السوبرنات البلازما واضحا ومصفرا. تحقق مما إذا كانت العينة تظهر علامات انحلال الدم (الشكل 3) ونقل البلازما (supernatant) إلى أنبوب طرد مركزي 15 مل دون إزعاج الطبقة الخلوية باستخدام ماصة مصلية يمكن التخلص منها (أو ماصة لمبة يمكن التخلص منها أو ماصات p1000 مع طرف مرشح). اترك كمية صغيرة متبقية من البلازما فوق طبقة الخلية (حوالي 5 مم).
  5. إذا لوحظ انحلال الدم، تخلص من العينة لإجراء مزيد من التحليلات. (الشكل 5). راجع قسم استكشاف الأخطاء وإصلاحها في المناقشة لتقييم انحلال الدم.
  6. قم بطرد البلازما في أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل في RT (15 درجة مئوية -25 درجة مئوية) لمدة 10-20 دقيقة عند 3000 (±150) × جم. قم بتنفيذ هذه الخطوة لإزالة أي خلايا دم سليمة متبقية تم نقلها من خطوة الطرد المركزي الأولى.
  7. بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة الأنبوب بعناية من جهاز الطرد المركزي ونقل 1-4 مل من البلازما إلى 1-4 مل من قوارير البولي بروبيلين المبردة باستخدام ماصة مصلية يمكن التخلص منها (أو ماصة لمبة يمكن التخلص منها أو ماصات p1000 مع طرف مرشح). يجب ترك الحجم المتبقي من البلازما (حوالي 0.3 مل أو 7 مم) في الجزء السفلي من الأنبوب لتجنب تلويث البلازما بخلايا الدم (الشكل 5).
  8. قم بتجميد البلازما على الفور في وضع مستقيم في صندوق التخزين عند -80 درجة مئوية وسجل وقت تخزين العينة. تحقق من معالجة العينات خلال الإطار الزمني المطلوب البالغ 4 ساعات.
  9. جمع الطبقة الخلوية (معطف بافي) باستخدام P1000 وطرف مصفى ونقلها إلى أنبوب 2 مل. تجمد على الفور وتخزينها في -80 درجة مئوية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بعد الطرد المركزي لأنابيب الدم بدون مضادات التخثر ، تظهر المرحلة العليا باللون الأصفر الباهت وتتوافق مع جزء المصل (الشكل 2). تتم إزالة هذا الكسر بعناية واقتباسه للتحليل اللاحق.

قد يكون انحلال الدم موجودا إما في جزء البلازما أو المصل ، وسيكون للمرحلة العليا مظهر ضارب إلى الحمرة ، مما يشير إلى وجود ودرجة انحلال الدم (الشكل 3).

بعد الطرد المركزي لأنابيب EDTA ، ستكون عدة مراحل أو طبقات واضحة ؛ المرحلة العليا (ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخزعة السائلة لها العديد من التطبيقات المحتملة في أوقات مختلفة أثناء إدارة السرطان. أولا ، عند التشخيص لتحديد العلامات الجزيئية للورم التي من شأنها أن تشير إلى وجود آفة ورم محتملة يمكن التحقيق فيها سريريا. ثانيا ، أثناء العلاج للمراقبة في الوقت الفعلي للمرض ، وتقييم الاستجابة الجزيئية للعلاج ، والتطور النسيلي ، والكشف المبكر عن انتكاسات المرض أو مقاومة العلاج. أخيرا ، بعد العلاج الجراحي ، كأداة للكشف عن الحد الأدنى من الأمراض المتبقية. نشرت الجمعية الأوروبية لعلم الأورام الطبي (ESMO) مؤخرا مبادئ توجيهية لتنفيذ اختبار طف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بياتريس بيلوسيلو (BB): حصلت BB على جائزة أتعاب لمتحدثة أو استشارية أو دور استشاري من Amgen و Astra-Zeneca و Biocartis و Janssen و Merck-Serono و Novartis و Qiagen و Roche Diagnostics و Roche Pharma و ThermoFisher و Pfizer و BMS. سارة لوبيز-تارويلا (SL): حصلت SL على جائزة أتعاب لمتحدثة أو استشارية أو دور استشاري من Astra-Zeneca / Daiichi-Sankyo و MSD و Novartis و Pfizer و Roche Pharma و Gilead و Lilly و Pierre Fabre و Seagen و GlaxoSmithKline و Veracyte. نويليا تارازونا (NT): حصلت NT على أتعاب للمتحدث أو الاستشارات أو الدور الاستشاري من Amgen و Pfizer و Merck-Serono و Servier و SEOM و ESMO. خافيير هرنانديز-لوسا (JHL): حصل على جائزة أتعاب لمتحدث أو استشاري أو دور استشاري من Astra-Zeneca و Janssen و Novartis و Roche Diagnostics و Roche Pharma و ThermoFisher و Lilly و Diaceutics. أفاد رودريغو توليدو (RT) بتلقي منح بحثية تتعلق بهذه الدراسة من نوفارتيس ومنح بحثية لا علاقة لها بهذه الدراسة من AstraZeneca و Beigene. أما المؤلفون المتبقون فليس لديهم أي إفصاحات فيما يتعلق بالمخطوطة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر شبكة البحوث الطبية الحيوية في السرطان (CIBERONC) على دعمها ومنحة المشروع التالية: LB CIBERONC PLATFORM: CIBERONC PLATFORM لتوحيد وتعزيز الخزعة السائلة. PI رودريغو توليدو ، (CIBERONC) ، 2019-2021.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1.5 مل أنابيب EppendorfEppendorf0030 120.086يمكن استخدام أي أنابيب / معدات قياسية
10 مل ماصات مصلية يمكن التخلصBIOFILGSP010010يمكن استخدام أي أنابيب / معدات قياسية
10 مل أنبوب Vacutainer K2 EDTABecton Dickinson367525يمكن استخدام هذه الأنابيب لجمع البلازما
15 مل أنابيب الطرد المركزي من مادة البولي بروبيلينBIOFILCFT411150يمكن استخدام أي أنابيب / معدات قياسية
3.5 مل BD Vacutainer أنبوب بدون مضاد للتخثرBecton Dickinson368965استخدام أنابيب 8.5 أو 3.5 مل لجمع المصل 4
مل قارورة بولي بروبيلين مبردة ، قاع دائري ، قائم بذاتهCorning430662يمكن استخدام أي أنابيب / معدات قياسية
4 مل أنبوب Vacutainer K2 EDTABecton Dickinson367864يمكن استخدام هذه الأنابيب لجمع البلازما
4200 نظام TapeStationAgilentG2991BAتتوفر العديد من طرق القياس الكمي مع تطبيق محدد ل cfDNA
5 مل الماصات المصلية التي تستخدم لمرة واحدةBIOFILGSP010005يمكن استخدام أي أنابيب / معدات قياسية
8.5 مل BD Vacutainer بدون مضاد للتخثرBectonDickinson 366468يمكن استخدام أنابيب 8.5 أو 3.5 مل لأجهزة الطرد المركزي لجمع المصل
، قادرة على ~ 3000 × <م > جم < / م > مع دوار دلو متأرجحThermo Fisher ScientificSorvall ST 16   ؛ 10688725يمكن استخدام أي أنابيب / معدات قياسية
صناديق تخزين الفريزر ل 1 & ndash ؛ 4 مل قوارير مبردة المبردةCorning431120هذه الصناديق مطلوبة عند استخدام قوارير 4 مل للتخزين
أطراف ماصة p1000CORNING4809يمكن استخدام أي أنابيب / معدات قياسية
QIAamp مجموعة الحمض النووي المتداولةQiagen55114يمكن استخدام أي مجموعة متوفرة تجاريا خاصة بعزل cfDNA مع بروتوكول مراقبة الدم هذا.
Streck  أنابيب الحمض النووي الخالية من الخلايا BCT CE 10 ملStreck218997يمكن استخدام هذه الأنابيب لجمع البلازما
فريزر درجة الحرارة (-80 درجة ؛ ج)ESCO2180104يمكن استخدام أي أنابيب / معدات قياسية
منها يمكن

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Alix-Panabières, C., Pantel, K. Clinical applications of circulating tumor cells and circulating tumor DNA as liquid biopsy. Cancer Discovery. 6 (5), 479-491 (2016).
  2. Zhou, B., et al. Application of exosomes as liquid biopsy in clinical diagnosis. Signal Transduction and Targeted Therapy. 5 (1), 144(2020).
  3. Bettegowda, C., et al. Liquid biopsies: Genotyping circulating tumor DNA. Nature Medicine. 4 (6), (2014).
  4. Heitzer, E., et al. Recommendations for a practical implementation of circulating tumor DNA mutation testing in metastatic non-small-cell lung cancer. ESMO Open. 7 (2), 100399(2022).
  5. Gennari, A., et al. ESMO Clinical Practice Guideline for the diagnosis, staging and treatment of patients with metastatic breast cancer. Annals of Oncology: Official Journal of the European Society for Medical Oncology. 32 (12), 1475-1495 (2021).
  6. Van Buren, T., Arwatz, G., Smits, A. J. A simple method to monitor hemolysis in real time. Scientific Reports. 10 (1), 5101(2020).
  7. Ignatiadis, M., Sledge, G. W., Jeffrey, S. S. Liquid biopsy enters the clinic - implementation issues and future challenges. Nature Reviews. Clinical Oncology. 18 (5), 297-312 (2021).
  8. Sidstedt, M., et al. Inhibition mechanisms of hemoglobin, immunoglobulin G, and whole blood in digital and real-time PCR. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 410 (10), 2569-2583 (2018).
  9. Maass, K. K., et al. From sampling to sequencing: A liquid biopsy pre-analytic workflow to maximize multi-layer genomic information from a single tube. Cancers. 13 (12), 3002(2021).
  10. Greytak, S. R., et al. Harmonizing cell-free DNA collection and processing practices through evidence-based guidance. Clinical Cancer Research: An Official Journal of the American Association for Cancer Research. 26 (13), 3104-3109 (2020).
  11. Trigg, R. M., Martinson, L. J., Parpart-Li, S., Shaw, J. A. Factors that influence quality and yield of circulating-free DNA: A systematic review of the methodology literature. Heliyon. 4 (7), 00699(2018).
  12. Boissier, E., et al. The centrifuge brake impacts neither routine coagulation assays nor platelet count in platelet-poor plasma. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 58 (9), 185-188 (2020).
  13. Johansson, G., et al. Considerations and quality controls when analyzing cell-free tumor DNA. Biomolecular Detection and Quantification. 17, 100078(2019).
  14. Casas-Arozamena, C., et al. Genomic profiling of uterine aspirates and cfDNA as an integrative liquid biopsy strategy in endometrial cancer. Journal of Clinical Medicine. 9 (2), 585(2020).
  15. Alcoceba, M., et al. Liquid biopsy: a non-invasive approach for Hodgkin lymphoma genotyping. British Journal of Haematology. 195 (4), 542-551 (2021).
  16. Szpechcinski, A., et al. Cell-free DNA levels in plasma of patients with non-small-cell lung cancer and inflammatory lung disease. British Journal of Cancer. 113 (3), 476-483 (2015).
  17. Earl, J., et al. Somatic mutation profiling in the liquid biopsy and clinical analysis of hereditary and familial pancreatic cancer cases reveals kras negativity and a longer overall survival. Cancers. 13 (7), 1612(2021).
  18. Lampignano, R., et al. Multicenter evaluation of circulating cell-free DNA extraction and downstream analyses for the development of standardized (pre)analytical work flows. Clinical Chemistry. 66 (1), 149-160 (2020).
  19. Febbo, P. G., et al. Minimum technical data elements for liquid biopsy data submitted to public databases. Clinical Pharmacology and Therapeutics. 107 (4), 730-734 (2020).
  20. De Mattos-Arruda, L., Siravegna, G. How to use liquid biopsies to treat patients with cancer. ESMO Open. 6 (2), 100060(2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة