يصف هذا البروتوكول تلوث قلويدات بيروليزيدين (PAs) في عينات الشاي من الحشائش المنتجة للسلطة الفلسطينية في حدائق الشاي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
يصف هذا البروتوكول تلوث قلويدات بيروليزيدين (PAs) في عينات الشاي من الحشائش المنتجة للسلطة الفلسطينية في حدائق الشاي.
تم العثور على قلويدات بيروليزيدين السامة (PAs) في عينات الشاي ، والتي تشكل تهديدا لصحة الإنسان. ومع ذلك ، ظل مصدر ومسار تلوث السلطة الفلسطينية في عينات الشاي غير واضح. في هذا العمل ، تم تطوير طريقة ماصة مدمجة مع UPLC-MS / MS لتحديد 15 PAs في الأعشاب Ageratum conyzoides L. ، A. conyzoides التربة الجذرية ، أوراق الشاي الطازجة ، وعينات الشاي المجفف . تراوح متوسط حالات التعافي بين 78٪ -111٪ ، مع انحرافات معيارية نسبية تتراوح بين 0.33٪ و 14.8٪. تم جمع خمسة عشر زوجا من عينات التربة الجذرية A. conyzoides و A. conyzoides و 60 عينة من أوراق الشاي الطازجة من حديقة شاي Jinzhai في مقاطعة Anhui ، الصين ، وتم تحليلها ل 15 PAs. لم يتم الكشف عن جميع المناطق المحمية ال 15 في أوراق الشاي الطازجة ، باستثناء إنترميدين-N-أكسيد (ImNO) وسينيسيونين (Sn). كان محتوى ImNO (34.7 ميكروغرام / كجم) أكبر من محتوى Sn (9.69 ميكروغرام / كجم). بالإضافة إلى ذلك ، تركز كل من ImNO و Sn في الأوراق الصغيرة لنبات الشاي ، بينما كان محتواها أقل في الأوراق القديمة. أشارت النتائج إلى أن المناطق المحمية في الشاي تم نقلها من خلال مسار أوراق الشاي الطازجة المنتجة للأعشاب الضارة في حدائق الشاي.
كمستقلبات ثانوية ، تحمي قلويدات بيروليزيدين (PAs) النباتات من الحيوانات العاشبة والحشرات ومسببات الأمراض 1,2. حتى الآن ، تم العثور على أكثر من 660 PAs وأكاسيد PA-N (PANOs) ذات هياكل مختلفة في أكثر من 6000 نوع نباتي في جميع أنحاء العالم 3,4. توجد النباتات المنتجة للسلطة الفلسطينية بشكل رئيسي في عائلات Asteraceae و Boraginaceae و Fabaceae و Apocynaceae 5,6. تتأكسد المناطق المحمية بسهولة إلى قلويدات ديهيدروبيروليزيدين غير مستقرة ، والتي لها كهربية قوية ويمكن أن تهاجم النيوكليوفيليات مثل الحمض النووي والبروتينات ، مما يؤدي إلى نخر خلايا الكبد ، والانسداد الوريدي ، وتليف الكبد ، والاستسقاء ، وأعراض أخرى 7,8. الجهاز المستهدف الرئيسي لسمية السلطة الفلسطينية هو الكبد. يمكن أن تسبب المناطق المحمية أيضا سمية الرئة والكلى والأعضاء الأخرى والسمية المطفرة والمسرطنة والتنموية 9,10.
تم الإبلاغ عن حالات التسمم البشري والحيواني في العديد من البلدان من تناول الأعشاب التقليدية أو المكملات الغذائية أو الشاي الذي يحتوي على المناطق المحمية أو التلوث غير المباشر للأغذية مثل الحليب أو العسل أو اللحوم (السامة من ابتلاع المراعي التي تحتوي على المناطق المحمية)11،12،13. تشير نتائج الهيئة الأوروبية لسلامة الأغذية (EFSA) إلى أن مواد مثل الشاي (العشبي) هي مصدر مهم للتعرض البشري ل PAs / PANOs14. لا تنتج عينات الشاي المناطق المحمية ، في حين توجد النباتات المنتجة للمناطق المحمية بشكل شائع في حدائق الشاي (على سبيل المثال ، إميليا سونشيفوليا ، وسينيسيو أنغولاتوس ، وأجيراتوم كونيزويدس)15. كان يشتبه سابقا في أن الشاي يمكن أن يكون ملوثا بالمناطق المحمية من مصانعها المنتجة أثناء الانتقاء والمعالجة. ومع ذلك ، تم اكتشاف المناطق المحمية أيضا في بعض أوراق الشاي المنتقاة يدويا (أي عدم وجود نباتات منتجة للمناطق المحمية) ، مما يشير إلى أنه يجب أن تكون هناك طرق أو مصادر أخرى للتلوث16. أجريت تجربة زراعة مشتركة لنباتات الراجورت (Senecio jacobaea) مع ميليسا (ميليسا أوفيسيناليس) والنعناع (Mentha piperita) والبقدونس (Petroselinum crispum) والبابونج (Matricaria recutita) ونباتات nasturtium (Tropaeolum majus) ، وأظهرت النتائج أنه تم اكتشاف المناطق المحمية في جميع هذه النباتات17. تم التحقق من أن المناطق المحمية يتم نقلها وتبادلها بالفعل بين النباتات الحية عبر التربة18,19. وجد Van Wyk et al.20 أن شاي الرويبوس (Aspalathus linearis) كان ملوثا بشدة في المواقع الغنية بالأعشاب الضارة ويحتوي على مناطق محمية من نفس النوع والنسبة. ومع ذلك ، لم يتم الكشف عن أي مناطق محمية في شاي الرويبوس في مواقع خالية من الأعشاب الضارة.
في الوقت الحاضر ، تم استخدام قياس الطيف الكتلي الترادفي للكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء (UPLC-MS / MS) مع انتقائية وحساسية عالية على نطاق واسع في التحليل النوعي والكمي للمناطق المحمية في المنتجات الزراعية والأغذية21,22. تتكون طريقة معالجة العينة عادة إما من استخراج الطور الصلب (SPE) أو تنظيف QuEChERS (سريع سهل رخيص فعال وفعال وآمن وعرة) لمستخلصات مصفوفات الطعام المعقدة ، والتي يمكن أن تحصل على أعلى حساسية ممكنة12,19. ومع ذلك ، لا تزال الطرق التحليلية القوية التي تسمح باكتشاف المناطق المحمية وتحديدها كميا في المصفوفات المعقدة مثل التربة والأعشاب الضارة وأوراق الشاي الطازجة مفقودة.
حللت هذه الدراسة 15 PAs في عينات الشاي المجفف وأوراق الشاي الطازجة والأعشاب الضارة وعينات التربة الجذرية للأعشاب الضارة باستخدام UPLC-MS / MS جنبا إلى جنب مع طريقة تنقية الممتزة. علاوة على ذلك ، تم جمع 15 عينة من تربة جذور الحشائش والأعشاب الضارة و 60 عينة من أوراق الشاي الطازجة من خمسة مواقع لأخذ العينات في حديقة شاي Jinzhai في مقاطعة Anhui ، الصين ، وتم تحليلها ل 15 PAs. يمكن أن توفر هذه النتائج طريقة مسح وبعض المعلومات حول مصدر ومسار المناطق المحمية (التلوث) في عينات الشاي لضمان جودة وسلامة الشاي.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
بالنسبة للدراسة الحالية ، تم جمع أنواع الحشائش التالية: لودفيجيا بروستاتا روكسب ، موردانيا تريكيترا (وول. سابقا سي بي كلارك) بروكن ، أجيراتوم كونيزويدس إل ، تشينوبوديوم أمبروسيويدس ، القصبة الهوائية ياسمينويد (L.) ليم ، أجيراتوم كونيزويدس إل ، إميليا سونشيفوليا (L.) DC ، Ageratum conyzoides L. ، و Crassocephalum crepidioides (القاع.) س. مور. تم اختيار أوراق الشاي الطازجة من مجموعة متنوعة من أشجار الشاي Longjing 43 # ، وكانت عينات الشاي المجفف متاحة تجاريا لمعالجة الشاي وفقا لعملية تصنيع الشاي الأخضر (انظر جدول المواد).
1. جمع العينات
2. علاج العينة
3. التحليل الآلي
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم إنشاء طريقة تنقية وتحليل الممتزات المحسنة ل 15 PAs في عينات الشاي المجفف وأوراق الشاي الطازجة والأعشاب الضارة والتربة ومقارنتها بطريقة التنقية شائعة الاستخدام باستخدام خرطوشة SPE. أظهرت النتائج أن عمليات استرداد 15 PAs في عينات الشاي المجفف والأعشاب الضارة وأوراق الشاي الطازجة باستخدام خرطوشة SPE كانت 72٪ -120٪ ، بينما كان استخدام تنقية الممتزات 78٪ -98٪ (الشكل 1). كانت عمليات استرداد 15 PAs في التربة باستخدام تنقية الممتزات 79٪ -111٪ (الشكل 1). تم جمع أربعين...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم تصميم العمل الحالي لتطوير طريقة فعالة وحساسة لاستكشاف طرق التلوث ومصادر المناطق المحمية في عينات الشاي وكذلك توزيع المناطق المحمية في أجزاء مختلفة من نباتات الشاي. ومع ذلك ، في هذه الدراسة ، تم فصل 15 PAs فقط بنجاح على العمود الكروماتوغرافي ، وهو عدد صغير جدا مقارنة بالعدد الكبير من قلويدات في الأنواع النباتية 3,4. لم يكن هذا مرتبطا فقط بخصائص التعبئة للعمود نفسه ولكن أيضا بالمصفوفة المعقدة لعينات الشاي التي تم فحصها. لذلك ، لا تزال طرق الفصل والتنقية الأفضل ل...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (32102244) ، والمشروع الوطني لجودة وسلامة المنتجات الزراعية وتقييم المخاطر (GJFP2021001) ، والمؤسسة العلمية الطبيعية لمقاطعة آنهوي (19252002) ، ووزارة الزراعة الأمريكية (HAW05020H).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الأسيتونيتريل (99.9٪) | شركة Tedia، Inc. | 21115197 | سجل المستخلصات الكيميائية رقم: 75-05-8 |
| الأمونيا (25٪ -28٪) | Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co.، Ltd. | 181210 | سجل المستخلصات الكيميائية رقم: 1336-21-6 |
| فورمات الأمونيوم (97.0٪)تقنيات | مختبر Anpel (شنغهاي) | G0860050 | سجل المستخلصات الكيميائية No: 540-69-2 |
| Carbon-GCB | CNW | B7760030 | 120-400 شبكة ، 10g. لكل صندوق |
| جهاز طرد مركزي Z 36 HK | HERMLE | Z36HK | 30000 دورة في الدقيقة (دقيقة: 10 دورة في الدقيقة) ، الأبعاد (العرض × الارتفاع × العمق) : ؛ 71.5 سم وأمر; 42 سم وأمر; 51 سم |
| منتج الشاي المتاح تجاريا | Lvming ، Qingshan ، Luyuchun ، Changling ، Huixing ، Wuyunjian ، شاي Heshengchun | السائب | الشاي الأخضر |
| Europine N-oxid (EuNO) (98.0٪) | BioCrick | 323256 | CAS No: 65582-53-8 |
| Europine (EU) (98.0٪) | BioCrick | 98222 | CAS No: 570-19-4 |
| Formate (98.0٪) علاء | الدين | E2022005 | رقم CAS: 64-18-6 |
| HC-C18 | CNW | D2110060 | 40-63 & mu ؛ م ، 100 جرام لكل صندوق |
| هليوترين (هو) (98.0٪) | BioCrick | 906426 | CAS No: 303-33-3 |
| Heliotrine-N-oxide (HeNO) (98.0٪) | BioCrick | 22581 | CAS No: 6209-65-0 |
| جهاز طرد مركزي عالي السرعة TG16-WS | cence | 203158000 | الحد الأقصى: 16000 دورة / دقيقة ، 330 مرة ؛ 390 مرة ؛ 300 مم (L & Times ؛ W & مرات ح) ، السعة: 6 مرات ؛ 50 مل |
| HSS T3 عمود | المياه | 186004976 | ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 & مرات ؛ 100 مم 1.8 & mu ؛ م) |
| Intermedine (Im) (98.0٪) | BioCrick | 114843 | CAS No: 10285-06-0 |
| Intermedine-N-oxide (ImNO) (98.0٪) | BioCrick | 340066 | CAS No: 95462-14-9 |
| Jacobine (Jb) (98.0٪) | BioCrick | 132282048 | CAS No: 6870-67-3 |
| Jacobine-N-oxide (JbNO) (98.0٪) ChemFaces | CFN00461 | CAS No: 38710-25-7 | |
| كحول الميثيل (99.9٪) | شركة تيديا ، إنك. | 21115100 | رقم سجل المستخلصات الكيميائية: 67-56-1 |
| PSA | Agela | P19-00833 | 40-60 & mu ؛ م ، 60 & أرينج. 100 جرام لكل صندوق |
| ريترورسين (إعادة) (98.0٪) | BioCrick | 5281743 | سجل المستخلصات الكيميائية رقم: 480-54-6 |
| ريترورسين-N-أكسيد (ReNO) (98.0٪) | BioCrick | 5281734 | CAS No: 15503-86-3 |
| Senecionine (Sc) (98.0٪) | BioCrick | 5280906 | CAS No: 130-01-8 |
| Senecionine-N-oxide (ScNO) (98.0٪) | BioCrick | 5380876 | CAS No: 13268-67-2 |
| Seneciphylline N-oxid (SpNO) (98.0٪) | BioCrick | 6442619 | CAS No: 38710-26-8 |
| Seneciphylline (Sp) (98.0٪) | BioCrick | 5281750 | CAS No: 480-81-9 |
| Senkirkine (Sk) (98.0٪) | BioCrick | 5281752 | CAS No: 2318-18-5 |
| SPE PCX | Agilent Technologies | 12108206 | الوضع المختلط للكاتيون ، 6 مل |
| حمض الكبريتيك (97٪) | Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co.، Ltd. | 1003019 | سجل المستخلصات الكيميائية رقم: 7664-93-9 |
| ثلاثي الصوديوم | سينفارم الكاشف الكيميائي المحدودة | 20121009 | سجل المستخلصات الكيميائية رقم: 6132-04-3 |
| منظف بالموجات فوق الصوتية | Supmile | KQ-600B | حجم الفتحة الداخلية: 500 مرة ؛ 300 مرة ؛ 150 مم ؛ السعة: 22.5 لتر |
| UPLC-xevoTQMS | Waters | ZPLYY-003 | محلل كتلة قضيب ثلاثي رباعي المراحل ، Waters Alliance 2695 / Waters ACQUITY UPLC نظام الطور السائل |
| ترموستات حمام الماء مذبذب | Guoyu أداة | SHY-2AHS | أوقات التذبذب: ؛ 60-300 مرة / دقيقة ، نطاق درجة حرارة ثابتة: درجة حرارة الغرفة إلى 100 درجة ؛ ج |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.