مقالة منهجية

القناة الصفراوية خارج الكبد وتسلخ المرارة في حديثي الولادة في الفأر البالغ من العمر تسعة أيام

2.5K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/64424

⸱

أغسطس 23, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatric Surgery, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, 2Research Laboratory for Pediatric Surgery, 3Research Animal Facility, University Medical Center Hamburg-Eppendorf

في هذه المقالة

ملخص

لمراقبة اضطرابات القناة الصفراوية الوليدية للفئران ، يلزم وجود قناة صفراوية سليمة وإعداد فعال. لذلك ، تم تطوير نهج جديد لعزل نظام القناة الصفراوية خارج الكبد بالكامل في حديثي الولادة الفئران بنجاح مع الحفاظ على سلامة القناة الصفراوية.

الملخص

تم وصف تشريح القنوات الصفراوية لحديثي الولادة في الفئران بأنه صعب. الهدف الرئيسي من إجراء التشغيل القياسي الموصوف هو عزل القناة الصفراوية خارج الكبد (EBD) في حديثي الولادة في الفئران دون الإضرار بالقناة الصفراوية أثناء التحضير. نظرا لإعداده الوثيق بشكل استثنائي مقارنة بخط خلايا الخلايا الصفراوية وحصاد نظام القناة الصفراوية خارج الكبد بأكمله (EBDS) ، فإن النهج الموصوف مفيد للغاية في البحث عن النماذج الحيوانية لاضطرابات القناة الصفراوية لحديثي الولادة ، مثل رتق القناة الصفراوية. بعد القتل الرحيم ، تم الوصول إلى التجويف البريتوني ، وتم استخراج نظام القناة الصفراوية والاثني عشر والكبد باستخدام استئصال En-bloc-Resection الفريد (EbR). يتم وضع العينة المستخرجة على حصيرة رغوية ، ويتم تشريح EBD من الخلايا الملوثة بشكل غير مؤلم دون اللمس اللازم. يعد تشريح EBDS بالكامل ميزة مهمة لهذه الطريقة. يجب توخي الحذر بسبب صغر حجم وكمية أنسجة القناة الصفراوية. باستخدام التقنية الموصوفة ، لا يوجد أي ضرر للخلايا الصفراوية. علاوة على ذلك ، فإن نقاء التقنية قابل للتكرار (n = 10). لذلك ، يمكن حصاد عينات قابلة للمقارنة على النحو الأمثل. علاوة على ذلك ، لا تتضرر أنسجة القناة الصفراوية ، لأنه يمكن تجنب أي اتصال مع نظام القناة الصفراوية أثناء التحضير ، وترك السائل الصفراوي داخل المرارة. الأهم من ذلك ، أثناء إجراء تشريح المرارة والقناة الصفراوية النهائي ، تم استخدام الأدوات الدقيقة غير الرضحية فقط بشكل جانبي قليلا من القناة الصفراوية دون الضغط عليها. هذا هو المفتاح لعينة نظيفة وسليمة ، وضروري لمزيد من التحقيق النسيجي أو عزل الخلايا الصفراوية. للتلخيص ، تمكن تقنية التشريح المبتكرة الموصوفة المشغلين عديمي الخبرة بشكل خاص من المعدات اللازمة لعزل EBDS بشكل نظيف قدر الإمكان.

المقدمة

نشأة وتطور اعتلال الأقنية الصفراوية مثل رتق القناة الصفراوية والتهاب الأقنية الصفراوية المصلب الأولي (PSC) والتهاب الأقنية الصفراوية الأولي (PBC) إما غير معروف أو غير مكتمل 1,2. يؤدي الفهم المحدود لأصل هذه الأمراض وتطورها إلى ندرة خيارات العلاج3. أصعب عقبة في دراسة اضطرابات القناة الصفراوية الوليدية هي اكتساب فهم جزيئي للفيزيولوجيا المرضية. أحد المفاتيح الأساسية لفهم أفضل لعلم الأمراض الجزيئي هو أفضل ملاحظة ممكنة للأنسجة المصابة. لتجنب انخفاض قابلية المقارنة والتناقضات بين الأبحاث ، مثل مراقبة المسببات الفيروسية المحتملة لرتق القناة الصفراوية4 ، تنشأ الحاجة إلى أفضل إعداد ممكن ومشاركة تقنيات التشريح التي يتم إجراؤها. يعد التحضير النقي للأنسجة المستهدفة ضروريا لإجراء تحقيقات مجهرية لاحقة أو تربية الثقافات العضوية الخلوية و 3D. ومع ذلك ، في اضطرابات حديثي الولادة الفئران ، تكون عينات الأنسجة نادرة ولا تحدث إلا بكمية صغيرة بسبب صغر حجمها. فيما يتعلق باضطرابات القناة الصفراوية ، تم وصف الصعوبات في التحضير النظيف للقنوات الصفراوية في حديثي الولادة الفئران5. نظرا لمرحلة تطور حديثي الولادة ، فإن تمايز الأنسجة ليس متقدما بشكل مفرط ، مما يعقد التحضير ويزيد من الصعوبة مقارنة بإعداد عينات البالغين. لذلك ، قامت مجموعة العمل التشغيلية بالتحقيق في استراتيجية جديدة لإعداد EBDS في نموذج فأر حديثي الولادة. في هذه الدراسة ، تسمح التقنية بتشريح فعال لكل عينة.

يتم وضع نظام القناة الصفراوية داخل الصفاق في الجزء العلوي الأيمن من البطن ، الناشئة عن الكبد. تقع المرارة تحت السطح الحشوي للفص الأيمن للكبد. القناة الصفراوية ، جنبا إلى جنب مع الوريد البابي والشريان الكبدي ، مضمنة في الرباط الكبدي الاثني عشر. ينضم إلى الكبد والاثني عشر مباشرة ويستنزف السائل الصفراوي في الاثني عشر6. تشريحيا ، تنقسم القناة الصفراوية إلى القنوات الكبدية اليمنى واليسرى ، والقناة الكبدية المشتركة ، والقناة الكيسية ، والقناة الصفراوية ، التي تتشكل من التقاء القناة الكيسية والقناة الكبدية المشتركة7. هذا واحد في نهاية المطاف يفرغ السائل الصفراوي واللعاب من القناة البنكرياسية إلى الاثني عشر عبر أمبولة فاتر.

تبطن الخلايا الصفراوية القناة الصفراوية داخل وخارج الكبد ، وتسكن في مكانة تشريحية معقدة حيث تساعد في إنتاج الصفراء والتوازن8. يمر السائل الصفراوي بهذه الخلايا الطلائية المتخصصة بتركيزات عالية يوميا. على وجه الخصوص ، تعتبر صيانة مظلة HCO3 مهمة جدا للحماية من سمية حمض الصفراء9. الخلايا الصفراوية هي خط الدفاع الأول في نظام الكبد الصفراوي ضد ، على سبيل المثال ، الكائنات الحية الدقيقة اللمعية10. قد تضعف الفعالية الدفاعية للخلايا الصفراوية ضد الاعتداءات السامة بسبب الاستعداد الوراثي. الحمل الزائد السام يسبب الضرر والدمار وبالتالي يمكن أن يؤدي إلى اعتلال القنوات الصفراوية. علاوة على ذلك ، فإن القناة الصفراوية النامية ليست قادرة تماما على جميع آليات الحماية الذاتية ، مما يؤدي إلى زيادة التعرض للسموم البيئية في القنوات الصفراوية الوليدية11.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

بعد الموافقة الأخلاقية (N045 / 2021) ، تمت ملاحظة ذكور وإناث C57BL / 6 فئران حديثي الولادة حتى عمر 9 أيام. ولدت الحيوانات وقدمت لأغراض تجريبية من قبل مرفق الحيوانات في المركز الطبي الجامعي هامبورغ إيبندورف ، هامبورغ ، ألمانيا. تم إيواء حديثي الولادة في قفص مع حيواناتهم الأم. تم التحكم في الظروف البيئية في درجة حرارة (20-24 درجة مئوية) ، 12:12 ساعة دورة الضوء والظلام ، والرطوبة النسبية من 40٪ -70٪.

1. التحضير التجريبي

  1. قم بإعداد المعدات المطلوبة للعملية الجراحية ، بما في ذلك المقص والملقط وما إلى ذلك (انظر جدول المواد).
  2. ضع الأدوات المطهرة والمعقمة على سطح معقم بجوار طاولة العمليات.
  3. القتل الرحيم للفأر الوليدي البالغ من العمر P9 بسرعة عن طريق قطع الرأس بمقص التشغيل. ضع جسم الفأر الوليدي الرحيم في حقل عملية معقمة. تشريح EBDSs في حديثي الولادة الفئران بعمر 9 أيام (الخطوة 5).
    ملاحظة: يعطي إجراء التشريح الموصوف أي عالم الأدوات المناسبة لإزالة EBDS من الفئران حديثي الولادة وكبار السن. كلما كبر الماوس ، كان التحضير أسهل.

2. الوصول إلى التجويف البريتوني

  1. أمسك الجلد فوق موقع المثانة البولية بالملقط. شق ثقب قطره 2 مم في الجلد باستخدام مقص ، دون الإضرار بالصفاق والهياكل الأساسية. قم بتوسيع القطع إلى موقع قطع الرأس ، باتباع الخط الإبطي الأمامي الأيسر. إزالة الجلد من اليسار إلى الجانب الأيمن مع ملقط غير مؤلم.
  2. امسك الصفاق المحيط بالطحال. ارفعه برفق حتى يشبه الصفاق هيكلا يشبه الخيمة واقطع ثقبا قطره 1 مم في المنتصف. انتظر حتى تمتلئ "الخيمة البريتونية" بالهواء. استخدم تكبيرا مجهريا 10x لهذه الخطوة والخطوات التالية.
  3. اقطع الصفاق في نافذة محاطة بالأضلاع السفلية ، وكلا منطقتي البطن الجانبيتين ، ومنطقة المثانة السفلية لضمان الوصول الكامل إلى الكبد ونظام القناة الصفراوية والمعدة والأمعاء الدقيقة والقولون.
    ملاحظة: لتحسين الوصول إلى الكبد ، يمكن إجراء شق إضافي ، وإزالة الأضلاع الثلاثة السفلية مع ترك عملية الخنجري ، والأربطة المنجلية ، والكبد ، وهياكل القناة الصفراوية سليمة. من السهل الحصول على منظر الكبد.

3. فحص المرارة والقنوات الصفراوية

ملاحظة: تأكد من إبقاء العينة رطبة بشكل منتظم خلال جميع الخطوات التالية.

  1. اسحب عملية الخنجري بعناية في وضع قحفي بطني لفحص المرارة.
    ملاحظة: يزداد التوتر على الرباط المنجلي مع هذه الحركة ، وتصبح المرارة المرفقة مرئية.
    1. قم بإجراء سحب طفيف فقط لتجنب تمزق الرباط المنجلي الذي لا يمكن السيطرة عليه ، مما قد يؤدي إلى تمزق المرارة من نظام القناة الصفراوية. حرر سحب عملية الخنجري قبل الخطوة التالية.
  2. اسحب الاثني عشر برفق لتحرير نظام القناة الصفراوية.
    ملاحظة: مع زيادة التوتر على الرباط الكبدي الاثني عشر ، يصبح نسيج القناة الصفراوية مرئيا.

4. استئصال الكتلة

  1. قم بإجراء التعبئة الداخلية السفلية باتباع الخطوات أدناه.
    1. تحديد حليمة الاثني عشر ، التي تربط نظام القناة الصفراوية إلى الاثني عشر.
    2. قطع من خلال الاثني عشر حوالي 2 سم من إلى الجانب الجانبي الأيمن من الحليمة.
    3. قطع من خلال منطقة البواب. تأكد من وجود محتويات المعدة في منطقة البواب بين موقع القطع وحليمة الاثني عشر.
      ملاحظة: هذه خطوة مهمة لأمان التوجه لاحقا للموقع الصحيح لأجزاء الاثني عشر الفموية والفموية.
  2. أداء التعبئة العليا en-bloc.
    1. اسحب عملية الخنجري برفق واحصل على إمكانية الوصول إلى الرباط المنجلي.
    2. قم بإجراء قطع بطول 1 سم من خلال الرباط المنجلي ، أقرب ما يمكن من عملية الخنجري ، بين المرارة وعملية الخنجري. تأكد من عدم تلف المرارة.
    3. قطع من خلال الهياكل المتصلة التالية بين الكبد والصدر: المريء ، الوريد الأجوف السفلي ، الشريان الأورطي الصدري ، جميع الأربطة التي تحيط بالمنطقة العارية من الكبد ، وجميع وصلات الأنسجة المتبقية ظهريا.
      ملاحظة: يتم تشريح عينة en-bloc بالكامل. أنه يحتوي على الكبد ، ونظام القناة الصفراوية ، والجسم الاثني عشر ، الذي يرتبط مع منطقة البواب في المعدة.

5. تشريح المرارة والقناة الصفراوية النهائي

  1. قم بإجراء التحضير الإجمالي باتباع الخطوات أدناه.
    1. ضع عينة en-bloc على وسادة رغوية تستخدم عادة للتجفيف. استخدم تكبيرا مجهريا 20x وملقطين جراحيين مجهريين بدون رضوح بحد أقصى لحجم الطرف 6 مم لهذه الخطوة والخطوات التالية.
    2. قم بتجميع العينة على وسادة الرغوة. أعد تنظيم العينة في الموضع التشريحي الصحيح. تسطيح الجزء الفموي والفموي من الاثني عشر ، وأداء حركة لطيفة.
    3. ابدأ الحركة عند حليمة الاثني عشر واستمر في حواف القطع باستخدام ملقط غير مؤلم. قم بتنعيم محتويات اللب الأبيض للمعدة ، والتي لن تحدث إلا في الجزء الفموي من الاثني عشر. تأكد من تحديد الجزء الفموي والفموي من الاثني عشر لاستبعاد دوران القناة الصفراوية المحتمل.
    4. قطع بقايا كبيرة من الأنسجة الكبدية لبدء تشريح القناة الصفراوية.
  2. أداء العزل النهائي.
    1. اضغط برفق على الأنسجة الكبدية المتبقية في مسام حصيرة الرغوة. تأكد من أن حركات الكشط تبدأ من نظام القناة الصفراوية وتؤدي إلى حدود الكبد.
    2. انقل العينة إلى وضع أنظف على حصيرة الرغوة بعد بضع حركات كشط في اتجاهات مختلفة. استخدم ميزة أنسجة الكبد الأقل ضغطا في الخلفية لتحسين العرض للحصول على أفضل تمييز ممكن بين EBDS والخلايا غير المرغوب فيها. كشط الأنسجة الكبدية من القناة الصفراوية حتى لا يبقى شيء ، أو أقل قدر ممكن ، من الأنسجة الكبدية.
    3. قم بمعالجة الرباط الكبدي الاثني عشر حتى يبقى EBDS المعزول. إزالة الأوعية الدموية داخل الرباط مثل الشريان الكبدي والوريد البابي والبقايا الصغيرة. قم بإزالة هذا الخيط الرقيق ، مع سحب لطيف وعناية عالية ، إلى الجانب الجانبي الأيسر. قد تكون خطوة التشريح هذه قد بدأت بالفعل عن غير قصد أو جزئيا أثناء الإزالة السابقة للأنسجة الكبدية ، مما يؤدي في النهاية إلى نفس النتيجة.
      ملاحظة: تظهر الأوعية الدموية كخيوط بيضاء وحساسة للغاية حوالي 3-5 مم عن طريق الفم من حليمة الاثني عشر وتنضم إلى الرباط الكبدي الاثني عشر من الجانب الجانبي الأيسر ، وتتراكم مع القناة الصفراوية إلى ثالوث جليسوني. مع الانتهاء من هذه الخطوة ، يتم عزل العينة النهائية تماما. إذا كانت هناك حاجة إلى سجل ، يمكن التقاط الصور بعد تنظيم هياكل القناة الصفراوية في موقعها التشريحي (الشكل 1). يوصى بالقيام بخطوات التحضير الأخيرة على حصيرة رغوية لأن العينة لن تلتصق كثيرا بسطح حقل التشغيل. إذا كانت المسام رطبة ، فإن القناة الصفراوية ترتفع أو تطفو. عند تحريك العينة ، لن تلتصق بقوة كما تفعل مع التحضير على قماش العملية ، مما يؤدي إلى عدم التمزيق أثناء تحريك العينة.

6. التحضير للتحليل النسيجي

  1. ضع العينة المعزولة في محلول مخزن أو وسيط خاص أو مثبتات تحتوي على الفورمالين (انظر جدول المواد) في أسرع وقت ممكن بعد التشريح.
  2. اختر حل تخزين مناسب اعتمادا على خطوات المعالجة المخطط لها.
    تنبيه: استخدم المثبتات المحتوية على الفورمالين فقط تحت فتحة التهوية بسبب السمية الحادة والتآكل والمخاطر الصحية المتنوعة.
    ملاحظة: في الدراسة المقدمة ، تم إدخال عينات EBDS في بارافورمالدهيد ، مجففة ، ومضمنة في البارافين. تم تخزينها في درجة حرارة الغرفة وتبريدها قبل التقسيم. في خزانة الاحترار ، تم الاحتفاظ بشرائح 2 ميكرومتر طوال الليل وتلطيخها باستخدام الهيماتوكسيلين التقليدي والإيوزين4 (انظر جدول المواد).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يوضح الشكل 1A EBDS لحديث الولادة الفئران ، والذي تم تشريحه باستخدام التقنية الموصوفة. مجهريا ، لا يوجد مزيد من الأنسجة الكبدية مرئية. تمت إزالة الأنسجة الكبدية خلال خطوات العزل النهائية للبروتوكول ويمكن تمييزها بسهولة عن أنسجة القناة الصفراوية فيما يتعلق باللون والاتساق. يعرض الشكل 1B العينة المعزولة مقارنة بمقياس ملليمتر. طول EBD (يقاس من المرارة إلى حليمة الاثني عشر) أقل من 10 ملم. يتراوح قطر القناة الصفراوية الحساسة للغاية من 0.05-0.2 مم. يصور

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ذكرت هذه المقالة وناقشت إنشاء والتحقق من صحة نهج جراحي جديد لإزالة EBDS من الفئران حديثي الولادة القتل الرحيم. تكشف النتائج المجهرية والنسيجية أن النهج يكتشف بسرعة EBDs ويشريحها بالقرب من حواف القناة ، حتى في الفئران حديثي الولادة. مطلوب فقط الأدوات الجراحية والمجهر مع تكبير 20x للبروتوكول الموصوف. علاوة على ذلك ، يسمح النهج بعزل EBDS بالكامل. هذه التقنية عالية الكفاءة ومباشرة وسهلة التكرار.

لدراسة أمراض القناة الصفراوية مثل رتق القناة الصفراوية و PSC و PBC ، غالبا ما يكون الاستخراج الميكانيكي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

يعترف المؤلفون بجوانا هاجنز ، وبولين شوبرت ، وكلارا فيليبي ، والمحاضر الجامعي الدكتور كريستيان توموشات ، وسفينيا وارنك ، والمحاضر الجامعي الدكتورة ديانا ليندنر ، والأستاذ الدكتور ديرك ويسترمان ، وميريام تومزاك ، ونيكول لودر ، ونادين كورزاوا ، والدكتورة لايا باجيرولز رالوي ، وبيرجيت أبل، وماجدالينا تروشيميوك لمساهماتهم. حصل هانز كريستيان شميدت على دعم مالي من منحة Else Kröner-Fresenius-Stiftung iPRIME الدراسية (2021_EKPK.10) ، UKE ، هامبورغ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2-PropanolCHEMSOLUTE11365000يستخدم كعامل تجفيف
30 جم قنعةB براون / ستريكان ، Melsungen ألمانيا4656300الكانولا لترطيب العينة
تنفيس الهواءC + P M & ouml ؛ belsysteme GmbH & Co. KG ، Breidenbach ، ألمانياTec-Ononmic AZ 1200يساعد استخدام فتحة تهوية على تجنب استنشاق المثبتات المحتوية على الفورمالين
Aqua ad injectabilia BraunB Braun ، Melsungen ، ألمانيا2351744محلول ملحي ؛ الحاوية: توصيل Mini-Plasco ، 20 × 10 مل ،
ملقط جراحي مجهري أكبرمعقم DIADUST von Aesculap ، Trossingen DeutschlandFD253Rمستقيم ، 180 مم (7 بوصة) ، طرف المنصة ، مقبض دائري ، العرض: 0،800 مم ، مطلي بغبار الماس ، غير معقم ، أداة اختيارية قابلة لإعادة الاستخدام للمراقبة وكل خطوة من خطوات التحضير باستثناء التحضير النهائي جدا ؛ تقسيم الجلد من
الصفاق الكاميرا " سمارت كام 5 "  Basler and Vision Engineering ، Send ، المملكة المتحدةEVC131Aنموذجي كاميرا Lynx Exo الاختياري: نوع المستشعر: CMOS ، الدقة 2560 × 1920 بكسل ، حجم المستشعر: 1/2 بوصة ؛ تستخدم لإنتاج الفيديو والتقييم الفني
آلة الجفاف / Citadel 2000 TissueProcessor Fisher Scientific GmbH ، Schwerte ، ألمانيا12612613تستخدم للتجفيف التلقائي ، برنامج قصير (حوالي 4.8 ساعة)
إسفنجة الجفاف   ؛كارل روث, كارلسروه, ألمانياTT56.1الإسفنج لخطوة التشريح النهائية, الإسفنج / وسادات الرغوة الأخرى مع الحد الأدنى لحجم المسام من 60 المسام في البوصة الواحدة مناسبة أيضا, استخدام   اثنين من وسادات الرغوة لكل تضمين كاسيت ينصح لتغطية العينة من أسفل وأعلى لمنع الانزلاق من خلال ثقب أشرطة التضمين
Dulbecco&حاد; s فوسفات محلول ملحي مخزن (PBS)جيبكو14190-144لا حاد ؛ ر تحتوي على الكالزيوم أو المغنيسيوم ، 500 مل
أشرطة التضمينEngelbrecht GmbH ، Ederm ü ؛ NDE ، ألمانيا17990
EosinMEDITE Medical GmbH ، بورغدورف ، ألمانيا41-6660-00محلول تلطيخ ، جاهز للاستخدام
مقص ناعم CeramaCutFST ، هايدلبرغ ألمانيا14959-09نصائح: حاد حاد ، سبيكة / مواد: فولاذ مقاوم للصدأ مطلي بالسيراميك ، مسنن : ، نعم ؛ الميزة: CeramaCut ، شكل الطرف: مستقيم ، حافة القطع: 22 مم ، الطول: 9 سم ؛ شق الجلد ، شق النافذة البريتونية
Graefe FallpsFST ، هايدلبرغ ألمانيا11051-10الطول: 10 سم ، شكل الطرف: منحني ، مسنن ، عرض الطرف: 0.8 مم ، أبعاد الطرف: 0.8 × 0.7 مم ، سبيكة / مواد: الفولاذ المقاوم
HematoxylinMEDITE Medical GmbH ، Burgdorf ، ألمانيا41-5130-00محلول تلطيخ ، جاهز للاستخدام
Highresolotion المجهرهندسة الرؤية ، Send المملكة المتحدةEVO503 قادرة على التكبير حتى 60x التكبير ، تم استخدام تكبير 6x إلى 20x فقط.
مجهرأوليمبوس البصرية المحدودة ، هامبورغ ، ألمانياBX60F5
غطاء مجهر GlasesMarienfeld ، Lauda-K & ouml ؛ nigshofen ، ألمانيا101244عرض 60 مم ، مصنوع من SCHOTT D 263 Glass
Microscope SlidesR. Langenbrinck GmbH ، Emmendingen ، ألمانيا03-0060
MicrotomeLeica ، Nu & szlig ؛ بحيرة لوخ ، ألمانياSM2010Rأداة للتقسيم (2 & micro ؛ م شرائح) 
حقنة Omnifix-F 1 ملB Braun ، Melsungen ، ألمانيا9161406Vحقنة بدون كانولا
بارافينساكورا فينيتيك ، تورانس ، الولايات المتحدة الأمريكية4511Tissue-Tek Paraffin Wax Tek III ، بدون
آلة تضمين البارافينMEDITE Medical GmbH ، Burgdorf ، ألمانياTES 99احتوت آلة التضمين المستخدمة في هذه الدراسة على الوحدات الفردية الثلاث التالية: TES 99.420 ، TES 99.250 ، TES 99.600. يجب تضمين العينة في البارافين مباشرة بعد الجفاف ، ولا ينبغي إجراء أي تخزين مؤقت في الثلاجة بسبب الانكماش المحتمل والرطوبة في الثلاجة
بارافورمالدهيد (PFA)1176201000 Morphistoتحضير 1 مل Aliquots في 2 مل أنابيب مخروطية Eppendorf لعينات الكبد و 0.5 مل Aliquots في 1 مل أنابيب Eppendorf المخروطية لعينات القناة الصفراوية خارج الكبد ، 4٪ في PBS ph 7.4 
ملقط الجراحة المجهرية الصغيرة EPM (Erich Pfitzer Medizintechnik) ، Bü ؛ tthard ، بايرن ، ألمانيا(00) 165مقبض دائري ، مستقيم ، طرف 0.3 مم ، أداة للمراقبة وكل خطوة من خطوات التحضير ، مفيد بشكل خاص في التحضير النهائي
مسطرة الفولاذ المقاوم للصدأAgntho's AB ، Liding & ouml ؛30085-15150 مم مع متري & بوصة التخرج
مقص جراحي &ndash ؛ حاد حاد لقطع الرأسFST ، هايدلبرغ ألمانيا14001-14جهاز لقطع الرأس
خزانة الاحترارHaraeus ، هاناو ، ألمانياT 6060يجب حفظ العينات المقطعة في خزانة التدفئة لضمان إرفاق العينة على شرائح المجهر
للصدأ DMSO السويد

المراجع

  1. Liwinski, T., Schramm, C. Primär sklerosierende Cholangitis. Der Internist. 59 (6), 551-559 (2018).
  2. Kobayashi, H., Stringer, M. D. Biliary atresia. Seminars in Neonatology. 8 (5), 383-391 (2003).
  3. Patman, G. Biliary tract: Newly identified biliatresone causes biliary atresia. Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 12 (7), 369(2015).
  4. Mack, C. L., Sokol, R. J. Unraveling the pathogenesis and etiology of biliary atresia. Pediatric Research. 57 (5), 87-94 (2005).
  5. Karjoo, S., Wells, R. G. Isolation of neonatal extrahepatic cholangiocytes. Journal of Visualized Experiments. (88), e51621(2014).
  6. Strazzabosco, M., Fabris, L. Functional anatomy of normal bile ducts. The Anatomical Record: Advances in Integrative Anatomy and Evolutionary Biology. 291 (6), 653-660 (2008).
  7. Nakanuma, Y., Hoso, M., Sanzen, T., Sasaki, M. Microstructure and development of the normal and pathologic biliary tract in humans, including blood supply. Microscopy Research and Technique. 38 (6), 552-570 (1997).
  8. Banales, J. M., et al. Cholangiocyte pathobiology. Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 16 (5), 269-281 (2019).
  9. de Buy Wenniger, L. J., et al. The cholangiocyte glycocalyx stabilizes the 'biliary HCO3- umbrella': an integrated line of defense against toxic bile acids. Digestive Diseases. 33 (3), 397-407 (2015).
  10. Pinto, C., Giordano, D. M., Maroni, L., Marzioni, M. Role of inflammation and proinflammatory cytokines in cholangiocyte pathophysiology. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease. 1864 (4), 1270-1278 (2018).
  11. Khandekar, G., et al. Coordinated development of the mouse extrahepatic bile duct: Implications for neonatal susceptibility to biliary injury. Journal of Hepatology. 72 (1), 135-145 (2020).
  12. Grundmann, D., Klotz, M., Rabe, H., Glanemann, M., Schäfer, K. -H. Isolation of high-purity myenteric plexus from adult human and mouse gastrointestinal tract. Scientific Reports. 5 (1), 9226(2015).
  13. Ishii, M., Vroman, B., LaRusso, N. F. Isolation and morphologic characterization of bile duct epithelial cells from normal rat liver. Gastroenterology. 97 (5), 1236-1247 (1989).
  14. Kumar, U., Jordan, T. W. Isolation and culture of biliary epithelial cells from the biliary tract fraction of normal rats. Liver. 6 (6), 369-378 (1986).
  15. Vroman, B., LaRusso, N. F. Development and characterization of polarized primary cultures of rat intrahepatic bile duct epithelial cells. Laboratory Investigation. 74 (1), 303-313 (1996).
  16. Paradis, K., Sharp, H. L. In vitro duct-like structure formation after isolation of bile ductular cells from a murine model. Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 113 (6), 689-694 (1989).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة