هنا ، نصف بروتوكولا يتم فيه استخدام نموذج xenograft المشتق من سرطان الدم الليمفاوي الحاد كاستراتيجية لتقييم ومراقبة السمية المرتبطة بالخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري التي تستهدف CD19.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقييم السمية المرتبطة بالخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري باستخدام نموذج فأر Xenograft المشتق من سرطان الدم الليمفاوي الحاد
في هذه المقالة
إشعار تصحيح
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
ملخص
الملخص
برز العلاج بالخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري (CART) كأداة قوية لعلاج أنواع متعددة من الأورام الخبيثة CD19 + ، مما أدى إلى موافقة إدارة الغذاء والدواء الأمريكية مؤخرا على العديد من علاجات الخلايا CART (CART19) التي تستهدف CD19. ومع ذلك ، يرتبط العلاج بالخلايا CART بمجموعة فريدة من السميات التي تحمل معدلات المراضة والوفيات الخاصة بها. وهذا يشمل متلازمة إطلاق السيتوكين (CRS) والالتهاب العصبي (NI). كان استخدام نماذج الفئران قبل السريرية أمرا حاسما في البحث والتطوير لتكنولوجيا CART لتقييم كل من فعالية CART وسمية CART. تشمل النماذج قبل السريرية المتاحة لاختبار هذا العلاج المناعي الخلوي بالتبني نماذج الفئران الجينية ، و xenograft ، والمعدلة وراثيا ، والإنسانية. لا يوجد نموذج واحد يعكس بسلاسة جهاز المناعة البشري ، ولكل نموذج نقاط قوة وضعف. تهدف ورقة الطرق هذه إلى وصف نموذج xenograft المشتق من المريض باستخدام أرومات اللوكيميا من المرضى الذين يعانون من سرطان الدم الليمفاوي الحاد كاستراتيجية لتقييم السمية المرتبطة ب CART19 ، CRS ، و NI. وقد ثبت أن هذا النموذج يلخص السمية المرتبطة ب CART19 بالإضافة إلى الفعالية العلاجية كما رأينا في العيادة.
المقدمة
أحدث العلاج بالخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري (CART) ثورة في مجال العلاج المناعي للسرطان. لقد أثبت نجاحه في علاج سرطان الدم الليمفاوي الحاد الانتكاسي / المقاوم (ALL) ، وسرطان الغدد الليمفاوية للخلايا البائية الكبيرة ، وسرطان الغدد الليمفاوية لخلايا الوشاح ، وسرطان الغدد الليمفاوية الجريبي ، والورم النقوي المتعدد1،2،3،4،5،6،7 ، مما أدى إلى موافقات إدارة الغذاء والدواء الأخيرة. على الرغم من النجاح الأولي في التجارب السريرية ، فإن ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يتبع هذا البروتوكول إرشادات مجلس المراجعة المؤسسية (IRB) التابع ل Mayo Clinic، واللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC A00001767)، واللجنة المؤسسية للسلامة الحيوية (IBC، Bios00000006.04).
ملاحظة: يجب أن تكون جميع المواد المستخدمة للعمل مع الفئران معقمة.
1. حقن بوسلفان لفئران NSG
- احصل على ذكور ، من عمر 8-12 أسبوعا ، تعاني من نقص المناعة ، NOD-SCID IL2rγnull (NSG) الفئران ، ووزنها قبل الحقن.
ملاحظة: للدلالة الإحصائية ، يوصى باستخدام خمسة فئران على الأقل لكل مجموعة وتكرار هذه التجربة مرة أخرى على الأقل مع إناث الفئران. - تحضير بوسلفان للحقن داخل الصفاق (i.p.) باستخدا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الهدف من هذا البروتوكول هو تقييم السمية المرتبطة بخلايا CART باستخدام نموذج الفئران PDX من الخلايا السرطانية للمرضى الذين يعانون من ALL (الشكل 1). أولا ، تلقت الفئران NSG حقن i.p. من بوسلفان (30 ملغم / كغم) بهدف كبت المناعة لهم وتسهيل تطعيم خلايا CART28. في اليوم التالي ، تلقوا ~ 5 × 106 PBMCs (IV) مشتقة من جميع المرضى. تمت مراقبة الفئران من أجل النقش لمدة ~ 13 أسبوعا عن طريق مقايسة نزيف الذيل. تم جمع خلايا الدم الحمراء وتحليلها ، متبوعا بإعداد قيا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذا التقرير ، تم وصف منهجية لتقييم السمية المرتبطة بخلايا CART باستخدام نموذج ALL PDX. وبشكل أكثر تحديدا ، يسعى هذا النموذج إلى تقليد سميتين تهددان الحياة ، CRS و NI ، والتي غالبا ما يعاني منها المرضى بعد ضخ خلايا CART. يلخص العديد من السمات المميزة لسمية CART التي لوحظت في العيادة: فقدان الوزن ، والخلل الحركي ، والتهاب الأعصاب ، وإنتاج السيتوكين الالتهابي والكيموكين ، وتسلل الخلايا المستجيبة المختلفة إلى الجهاز العصبي المركزي8،20،28.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
S.S.K. هو مخترع براءات الاختراع في مجال العلاج المناعي CAR المرخص لشركة Novartis (من خلال اتفاقية بين Mayo Clinic وجامعة بنسلفانيا وشركة Novartis) وشركة Mettaforge (من خلال Mayo Clinic). R.L.S. و S.S.K. مخترعون على براءات اختراع في مجال العلاج المناعي CAR المرخصة لشركة Humanigen. تتلقى SSK تمويلا بحثيا من Kite و Gilead و Juno و Celgene و Novartis و Humanigen و MorphoSys و Tolero و Sunesis و Leahlabs و Lentigen.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل جزئيا من خلال المعاهد الوطنية للصحة (R37CA266344 ، 1K99CA273304) ، ووزارة الدفاع (CA201127) ، وخط أنابيب Mayo Clinic K2R (SSK) ، ومركز Mayo Clinic للطب الفردي (SSK) ، ومؤسسة Predolin (R.L.S.). بالإضافة إلى ذلك، نود أن نشكر موظفي مرفق الرنين المغناطيسي النووي الأساسي في Mayo Clinic. تم إنشاء الشكل 1 في عام BioRender.com
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| APC مكافحة الإنسان CD19 | Biolegend | 302211 | |
| الكحول الإعدادية الوسادة | Wecol | 6818 | |
| تحليل 14.0 برنامج | AnalyzeDirect Inc. | N / A | https://analyzedirect.com/analyze14/ |
| الدموع الاصطناعية (الزيوت المعدنية والبنزين) | Akorn | 17478-062-35 | جل عيني موضعي لمنع جفاف العين |
| BD FACS محلول التحلل | BD | 349202 | الدم الحمراء المحزن BD |
| Micro-Fin IV محاقن الأنسولين | BD | 329461 | |
| Brillian Violet 421 Anti-Human CD45 | Biolegend | 304032 | |
| Bruker Avance II 7 Tesla | Bruker Biospin | N / A | MRI machine |
| Busulfan (NSC-750) | Selleckchem | S1692 | |
| CountBright حبات العد المطلق | Invitrogen | C36950 | |
| CytoFLEX System B4-R2-V2 | Beckman Coulter | C10343 | التدفق |
| الخلوي Dulbecco's Fossil-Buffered Saline | Gibco | 14190-144 | |
| التحكم / البوابات ERT | SA Instruments | Model 1030 | الصغيرة الجهاز التنفسي والبوابات |
| مصل الأبقار الجنيني | Millipore Sigma | F8067 | |
| مقياس الدم | Bright-Line | Z359629-1EA | |
| مصل AB البشري ؛ المتبرعون الذكور؛ اكتب AB US | Corning | 35-060-CI | |
| Isoflurane (سائل) | Sigma-Aldrich | 792632 | |
| LIVE / DEAD Fixable Aqua Dead Dead Cell Dead Stain Kit ، من أجل إثارة 405 نانومتر | Invitrogen | L34966 | |
| Microvette 500 Lithium heparin | Sarstedt | 20.1345.100 | أنبوب جمع الدم |
| MILLIPLEX Huma / Cytokine / Chemokine لوحة الخرز | المغناطيسي Millipore Sigma | HCYTMAG-60K-PX38 | مقايسة المناعة متعددة الإرسال لتحديد السيتوكينات والكيموكينات |
| Omniscan | Ge Healthcare Inc. | 0407-0690-10 | عامل كونستراست قائم على الجادولينيوم |
| Pd مضاد للفأر CD45 | Biolegend | 103106 | |
| البنسلين الستربتومايسين الجلوتامين (100x) ، سائل | جيبكو | 10378-016 | |
| أنبوب اختبار البوليسترين القاع المستدير | كورنينج | 352008 | |
| أزيد الصوديوم ، 5٪ (وزن / حجم) | ريكا كيميكال | 7144.8-16 | |
| المقاوم للصدأ الجراحي بليد | بارد | باركر 371215 | |
| X-VIVO 15 خلية مكونة للدم خالية من السيروم متوسطة | لونزا | 04-418Q |
المراجع
- Turtle, C. J., et al. Immunotherapy of non-Hodgkin's lymphoma with a defined ratio of CD8+ and CD4+ CD19-specific chimeric antigen receptor-modified T cells. Science Translational Medicine. 8 (355), (2016).
- Kochenderfer, J. N., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
تصحيح
Formal Correction: Erratum: Assessment of Chimeric Antigen Receptor T Cell-Associated Toxicities Using an Acute Lymphoblastic Leukemia Patient-derived Xenograft Mouse Model
Posted by JoVE Editors on 3/14/2023. Citeable Link.
An erratum was issued for: Assessment of Chimeric Antigen Receptor T Cell-Associated Toxicities Using an Acute Lymphoblastic Leukemia Patient-derived Xenograft Mouse Model. The Authors section was updated from:
Claudia Manriquez Roman1,2,3,4,5
R. Leo Sakemura1,2
Fang Jin6
Roman H. Khadka6
Mohamad M. Adada1,2
Elizabeth L. Siegler1,2
Aaron J. Johnson6
Saad S. Kenderian1,2,6
1T Cell Engineering Laboratory, Mayo Clinic, Rochester,
2Division of Hematology, Mayo Clinic, Rochester,
3Mayo Clinic Graduate School of Biomedical Sciences, Mayo Clinic, Rochester,
4Department of Molecular Medicine, Mayo Clinic, Rochester,
5Regenerative Sciences PhD Program, Mayo Clinic, Rochester,
6Department of Immunology, Mayo Clinic, Rochester
to:
Claudia Manriquez Roman1,2,3,4,5
R. Leo Sakemura1,2
Brooke L. Kimball1,2
Fang Jin6
Roman H. Khadka6
Mohamad M. Adada1,2
Elizabeth L. Siegler1,2
Aaron J. Johnson6
Saad S. Kenderian1,2,6
1T Cell Engineering Laboratory, Mayo Clinic, Rochester,
2Division of Hematology, Mayo Clinic, Rochester,
3Mayo Clinic Graduate School of Biomedical Sciences, Mayo Clinic, Rochester,
4Department of Molecular Medicine, Mayo Clinic, Rochester,
5Regenerative Sciences PhD Program, Mayo Clinic, Rochester,
6Department of Immunology, Mayo Clinic, Rochester
