A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Research Article
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
في هذه الورقة ، يتم تقديم ملحق مطبوع 3D مصمم حديثا كنموذج للثقافة المشتركة ويتم التحقق من صحته من خلال دراسة الاتصال بين الخلايا بين الخلايا البطانية والخلايا الكيراتينية.
تتطلب التحليلات الكلاسيكية للاتصال غير المباشر بين أنواع الخلايا المختلفة استخدام وسائط مشروطة. علاوة على ذلك ، لا يزال إنتاج الوسائط المكيفة يستغرق وقتا طويلا وبعيدا عن الظروف الفسيولوجية والمرضية. على الرغم من توفر عدد قليل من نماذج الاستزراع المشترك تجاريا ، إلا أنها تظل مقتصرة على فحوصات محددة وهي في الغالب لنوعين من الخلايا.
هنا ، يتم استخدام إدخالات مطبوعة 3D متوافقة مع العديد من المقايسات الوظيفية. يسمح الملحق بفصل بئر واحد من لوحة 6 آبار إلى أربع مقصورات. يمكن تعيين مجموعة واسعة من المجموعات. علاوة على ذلك ، تم تصميم النوافذ في كل جدار من المقصورات بحيث يكون الاتصال المحتمل بين الخلايا بين كل حجرة ممكنا في وسط الاستزراع بطريقة تعتمد على الحجم. على سبيل المثال ، يمكن دراسة الاتصال بين الخلايا paracrine بين أربعة أنواع من الخلايا في طبقة واحدة ، في 3D (كروية) ، أو عن طريق الجمع بين الاثنين معا. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن زرع مزيج من أنواع الخلايا المختلفة في نفس الحجرة بتنسيق 2D أو 3D (عضويات). يسمح عدم وجود قاع في الإدخالات المطبوعة 3D بظروف الثقافة المعتادة على اللوحة ، والطلاء المحتمل على اللوحة التي تحتوي على الإدراج ، والتصور المباشر بواسطة الفحص المجهري الضوئي. توفر المقصورات المتعددة إمكانية جمع أنواع مختلفة من الخلايا بشكل مستقل أو استخدام ، في كل حجرة ، كواشف مختلفة لاستخراج الحمض النووي الريبي أو البروتين. في هذه الدراسة ، يتم توفير منهجية مفصلة لاستخدام إدراج 3D المطبوع الجديد كنظام ثقافة مشتركة. لإثبات العديد من قدرات هذا النموذج المرن والبسيط ، تم إجراء فحوصات وظيفية منشورة مسبقا للاتصال الخلوي في إدخالات 3D المطبوعة الجديدة وثبت أنها قابلة للتكرار. أدت الإدخالات المطبوعة 3D وثقافة الخلية التقليدية باستخدام الوسائط المكيفة إلى نتائج مماثلة. في الختام ، فإن الإدراج المطبوع 3D هو جهاز بسيط يمكن تكييفه مع العديد من نماذج الثقافات المشتركة مع أنواع الخلايا الملتصقة.
في الجسم الحي ، تتواصل الخلايا مع بعضها البعض إما بشكل مباشر (اتصال الخلية) أو بشكل غير مباشر (عن طريق إفراز الجزيئات). لدراسة التواصل الخلوي ، يمكن تطوير نماذج مختلفة للثقافة المشتركة ، مثل الثقافة المشتركة المباشرة (أنواع الخلايا المختلفة في تفاعل مباشر في نفس البئر) والثقافة المشتركة المجزأة (أنواع الخلايا المختلفة في تفاعل غير مباشر في أجزاء مختلفة من نظام الاستزراع) 1. علاوة على ذلك ، يمكن استخدام الوسائط المشروطة لأنظمة الاستزراع المشترك ، حيث يتم تمكين التفاعل غير المباشر بواسطة جزيئات مفرزة موجودة في الوسائط المشروطة لنوع خلية مستجيبة يتم نقلها إلى نوع خلية مستجيبةمن النوع 1.
في حالة دراسات اتصالات الخلايا الباراكرين ، توفر أنظمة الزراعة المشتركة غير المباشرة نماذج تعكس بقوة تفاعلات الخلايا في الجسم الحي. تم تطوير أنظمة الثقافة المشتركة غير المباشرة وتسويقها ، مما يسمح بإنشاء نماذج الثقافة المشتركةغير المباشرة 2,3. لسوء الحظ ، توفر معظم أنظمة الثقافة المشتركة غير المباشرة جزأين فقط. توفر أنظمة الثقافة المشتركة غير المباشرة الأخرى مقصورات متعددة ، لكنها أقل قابلية للتطوير مقارنة بالنظام المذكور في هذه المخطوطة. بعضها لا يسمح بالتصور الكلاسيكي تحت المجهر ، وغالبا ما يقدمون طرق تطبيق محددة. في العديد من الدراسات ، يتم فحص اتصال paracrine بين أنواع الخلايا المختلفة بواسطة نموذج الوسائط المشروطة4،5،6،7. هذه طريقة أسهل للتحقيق مقارنة بأنظمة الثقافة المشتركة غير المباشرة لأنها لا تتطلب طرقا أو مواد محددة ليتم إنشاؤها1. من ناحية أخرى ، فإن إعداد الوسائط المكيفة يستغرق وقتا طويلا ويوفر معلومات فقط عن إشارات الخلية أحادية الاتجاه (المستجيب إلى المستجيب)1.
في هذه الورقة ، تم اقتراح طريقة جديدة وبسيطة للتحقيق في اتصال الخلية. السماح بالجمع بين عدة أنواع من الخلايا في التفاعل المباشر أو غير المباشر وفي تنسيقات 2D أو 3D ، تقدم الإدخالات المطبوعة العديد من المزايا لإعداد نماذج الثقافة المشتركة بسهولة. تم تكييفها ليتم وضعها في آبار 6 ألواح من 6 آبار ، والملحق المطبوع 3D دائري ويسمح بفصل البئر إلى أربع حجرات (مقصورتان كبيرتان ومقصورتان صغيرتان. الشكل 1 أ). تتميز الإدخالات المطبوعة 3D بعدم وجود قاع. وبالتالي ، فإن الخلايا على اتصال مباشر مع اللوحة التي يتم وضع الإدخال عليها. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن طلاء كل حجرة بشكل مستقل عن الآخرين. علاوة على ذلك ، يمكن متابعة سلوك الخلية بسهولة تحت المجاهر الضوئية. يسمح وجود نوافذ اتصال في كل جدار من الإدراج بإضافة ، في الوقت الأمثل ، وسيط مشترك لإجراء تجارب مختلفة للثقافة المشتركة. يمكن إجراء مجموعات عديدة من الثقافة المشتركة لدراسة الاتصال المباشر و / أو غير المباشر بين عدة أنواع من الخلايا. على سبيل المثال ، يمكن تصميم نموذج للثقافة المشتركة غير المباشرة بين أربعة أنواع مختلفة من الخلايا في طبقة واحدة و / أو في 3D (كروية). يمكن أيضا إجراء مجموعة من نماذج الاستزراع المشترك المباشرة وغير المباشرة عن طريق خلط أنواع مختلفة من الخلايا في نفس الحجرة. يمكن أن يكون تأثير الهياكل المعقدة (المواد العضوية ، وزرع الأنسجة ، وما إلى ذلك) على أنواع الخلايا المختلفة مثالا آخر على النماذج التي يمكن صنعها. علاوة على ذلك ، فإن الإدخالات المطبوعة 3D متوافقة مع المقايسات الوظيفية لبيولوجيا الخلية (الانتشار ، الهجرة ، تكوين الأنبوب الكاذب ، التمايز ، إلخ) ومع اختبارات الكيمياء الحيوية (استخراج الحمض النووي ، الحمض النووي الريبي ، البروتين ، الدهون ، إلخ). أخيرا ، توفر الإدخالات المطبوعة 3D مجموعة واسعة من المخططات التجريبية لنماذج الثقافة المشتركة مع إمكانية الجمع بين المقايسات المختلفة في وقت واحد في نفس التجربة في المقصورات المختلفة.
يتم تقديم بعض قدرات الإدخالات المطبوعة 3D للتحقق من صحتها كنموذج ثقافة مشتركة سريع وسهل الاستخدام. بالمقارنة مع دراسة نشرت سابقا أجريت على اتصالات الخلايا paracrine ، تم إثبات قدرة إدراج 3D المطبوعة لتكون نموذجا قيمة للثقافة المشتركة. لتقييم هذه النقطة ، تمت مقارنة تنظيم تكاثر الخلايا البطانية والهجرة بواسطة الخلايا الكيراتينية بين نظام الإدراج المطبوع 3D والنظام الكلاسيكي باستخدام الوسائط المشروطة. تسمح الإدخالات المطبوعة 3D بالحصول على نتائج مماثلة بسرعة مقارنة بالنظام التقليدي باستخدام الوسائط المكيفة. في الواقع ، توفر الإدخالات المطبوعة 3D نموذجا قويا لدراسة تفاعلات الخلايا في كلا الاتجاهين دون الحاجة إلى إنتاج وسائط مشروطة ومع إمكانية إجراء فحوصات الانتشار والهجرة بالتوازي في نفس التجربة.
في الختام ، في هذه الورقة ، يقترح نموذج جديد وجاهز للاستخدام لدراسة اتصال الخلية. متوافقة مع جميع أنواع الخلايا الملتصقة ، تسمح الإدخالات المطبوعة 3D بأداء مجموعات عديدة من الثقافة المشتركة التي تهدف إلى أن تكون أقرب إلى ظروف الجسم الحي .
ملاحظة: يتم شراء إدخالات 3D (الشكل 1A) تجاريا ويتم طباعتها باستخدام راتنج فوتوبوليمر متوافق حيويا مع زراعة الخلايا والتعقيم (انظر جدول المواد). في هذا القسم ، يتم وصف بروتوكول مفصل لإنشاء نموذج الثقافة المشتركة عن طريق الإدراج (انظر الشكل 1 ب). كما يتم توفير بعض الأمثلة على التطبيقات.
1. وضع الملحق المعقم في ألواح 6 آبار
2. الطلاءات مثل بولي-L-ليسين ، أو بولي-HEMA (خطوة اختيارية)
ملاحظة: لا يتم إجراء الطلاء في هذه التجربة ، ويتم توفير الخطوات للإبلاغ عن إمكانية طلاء الإدخالات.
3. بذر الخلايا
4. تنفيذ الثقافة المشتركة (الشكل 1Bd)
ملاحظة: يتوافق تنفيذ الثقافة المشتركة مع الوقت الذي تتم فيه إضافة الوسيط المشترك. توفر إضافة وسيط فريد لجميع أنواع الخلايا في المقصورات المختلفة إمكانية الاتصال بين الخلايا بسبب وجود نوافذ اتصال (ثقوب بيضاوية في جدران الإدخالات المطبوعة 3D). لتنفيذ الثقافة المشتركة ، اتبع الخطوات 4.1-4.3.
5. مراقبة الخلايا والعد والكشط
6. إدراج التنظيف لإعادة التدوير
7. مقايسة تكاثر الخلايا - مقايسة WST-1
8. مقايسة هجرة الخلايا - جهازان لغرف الهجرة
في العمل الحالي ، تم وصف نظام الثقافة المشتركة الأمثل للحصول على بيانات قوية وموثوقة ومهمة يمكن مقارنتها بالطرق الكلاسيكية من خلال استخدام الوسائط المكيفة. تحاكي الإدخالات المطبوعة 3D ظروف البيئة المكروية في الجسم الحي لأنواع الخلايا المختلفة في التفاعل من خلال التغلب على الصعوبات والإنتاج الذي يستغرق وقتا طويلا للوسائط المكيفة في المنبع في التجارب. تمت إعادة إجراء دراسة منشورة سابقا لتحليل التفاعلات غير المباشرة بين نوعين من الخلايا الموجودة في بصيلات الشعر: الخلايا البطانية الوعائية الدقيقة البشرية (HDMECs) والخلايا الكيراتينية البشرية في غمد الجذر الخارجي (KORS) 8. هنا ، تم إثبات قابلية استنساخ النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام إدخالات 3D المطبوعة مقارنة بالطريقة الكلاسيكية باستخدام الوسائط المكيفة للتحقيق في التفاعلات غير المباشرة بين HDMECs و KORS. كانت ظروف زراعة الخلايا الموصوفة سابقا في الدراسة8 هي نفسها كما في هذا العمل الحالي. تم تكييفها مع الأخذ في الاعتبار أبعاد الإدخالات المطبوعة 3D (انظر البروتوكول). بادئ ذي بدء ، كان النمط الظاهري وصلاحية الخلية قابلين للمقارنة بين الشرطين (الوسائط المكيفة مقابل الإدخالات المطبوعة .3D) لجميع أنواع الخلايا (الشكل 2). في الواقع ، لوحظت صلاحية 90٪ في آبار الألواح المكونة من 6 آبار (الشكل 2 أ والجدول 1) ، ولوحظت 91٪ في الإدخالات المطبوعة ثلاثية الأبعاد (الشكل 2 ب والجدول 1) ل KORS. كانت صلاحية HDMECs 85٪ في آبار اللوحة المكونة من 6 آبار (الشكل 2C والجدول 2) مقابل 86٪ في الإدخالات المطبوعة ثلاثية الأبعاد (الشكل 2D والجدول 2). تم حساب بيانات صلاحية الخلية بواسطة عداد الخلايا الآلي (جدول المواد) على النحو التالي: عدد الخلايا القابلة للحياة مقسوما على عدد الخلايا الكلية (الخلايا الميتة + الخلايا القابلة للحياة). تم الحصول على متوسط البيانات من خلال حساب النسبة المئوية للجدوى التي تم الحصول عليها في ست تجارب مستقلة تم فيها إجراء نسختين متماثلتين (انظر الجدول 1 والجدول 2).
أشارت هذه النتائج إلى أن الإدراج المطبوع 3D لم يغير سلوك الخلية أو صلاحيتها مقارنة بالثقافة المعتادة على ألواح 6 آبار. لذلك ، تم التحقق من صحة الإدخالات المطبوعة 3D كنموذج جديد للثقافة المشتركة.
تم تحليل المعلمات8 الموضحة سابقا للاتصال الخلوي غير المباشر. بالنسبة لجميع التجارب ، تم تنفيذ الثقافة المشتركة للإدراج المطبوع 3D باتباع البروتوكولات وفقا لظروف الثقافة الكلاسيكية (انظر العملالسابق 8).
أولا ، تم تقييم اتصالات الخلية غير المباشرة بين KORS و HDMECs في الإدخالات المطبوعة ثلاثية الأبعاد من خلال تحليل تكاثر الخلايا ومقارنتها بالطريقة الكلاسيكية باستخدام الوسائط المشروطة (الشكل 3). في وجود KORS في الإدخالات (+ KORS) ، زاد انتشار HDMEC بشكل كبير بمقدار 1.5 ضعف بعد 24 ساعة وبمقدار 3.1 أضعاف بعد 48 ساعة مقارنة بحالة التحكم بدون KORS (التحكم) (الشكل 3 أ). كانت هذه النتائج متوافقة مع تلك التي تم الحصول عليها من خلال تجارب الوسائط المشروطة (الشكل 3 ب). في الواقع ، تبين أن KORSCM يزيد بشكل كبير من انتشار HDMEC بمقدار 1.5 ضعف بعد 24 ساعة وبمقدار 2.1 ضعف بعد 48 ساعة.
تم اختبار نموذج الثقافة المشتركة للإدراج المطبوع 3D لتحديد تأثير KORS على انتقال HDMEC. تم إثبات هذا التأثير سابقا في نظام الثقافة المشتركة الكلاسيكي باستخدام الوسائط المشروطة8 (الشكل 4). في حالة التحكم بدون KORS (التحكم) ، هاجرت HDMECs وغطت حوالي 44٪ من منطقة الجرح بعد 24 ساعة (الشكل 4 أ). في وجود KORS (+ KORS) ، لوحظت زيادة قوية وكبيرة في هجرة HDMEC. في الواقع ، أظهرت حركية التئام الجروح أن 43٪ و 67٪ و 99٪ من منطقة الجرح كانت مغطاة ب HDMECs بعد 3 ساعات و 12 ساعة و 24 ساعة على التوالي. كانت هذه النتائج متوافقة مع تلك التي تم الحصول عليها سابقا8 ، حيث تبين أن KORSCM يزيد من انتقال HDMEC بطريقة مماثلة (الشكل 4B).
الشكل 1: سير عمل يوضح تنفيذ الثقافة المشتركة للإدراج المطبوع ثلاثي الأبعاد من التنظيف إلى إعادة تدوير الملحق. (أ) صورة تمثيلية للملحق المطبوع ثلاثي الأبعاد. (ب) يوضح مثال تمثيلي للمقايسات المعروضة في هذه المخطوطة. لاحظ أنه يمكن إجراء اختبار الانتشار في حجرة واحدة من الإدراج المطبوع ثلاثي الأبعاد بالتوازي مع اختبار الترحيل الذي يتم إجراؤه في الحجرة الأخرى باستخدام جهاز غرفتي ترحيل موضوعين في الأجزاء الأخرى من الإدخالات المطبوعة ثلاثية الأبعاد. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: صلاحية KORS و HDMEC. (أ ، ب) مورفولوجيا KORS (10x) في (أ) بئر من لوحة 6 آبار و (ب) في ملحق مطبوع 3D. (ج، د) مورفولوجيا HDMEC (10x) في (C) بئر من لوحة 6 آبار و (D) في ملحق مطبوع ثلاثي الأبعاد. شريط المقياس: 200 ميكرومتر. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 3: تأثير KORS على انتشار HDMEC. (أ) تم قياس انتشار HDMEC بواسطة المقايسة اللونية باستخدام صبغة WST-1 في الملحق المطبوع ثلاثي الأبعاد في غياب KORS (التحكم = CTRL) أو في وجود KORS (+ KORS) لمدة 24 ساعة أو 48 ساعة. (ب) تم قياس انتشار HDMEC بواسطة المقايسة اللونية باستخدام صبغة WST-1 في وجود وسط زراعة الخلايا القاعدية ECM أو KORSCM لمدة 24 ساعة أو 48 ساعة. يتم التعبير عن النتائج كمتوسط ± SEM ، n = 8 مكررات ، وتم إجراء تجربتين مستقلتين. * p < 0.05 و ***p < 0.001 و ****p < 0.0001 و *****p < 0.00001. تم احتضان KORS في ECM بدون FBS وعوامل النمو. بعد 48 ساعة ، تم جمع هذا الوسيط المكيف وتخزينه عند -80 درجة مئوية للتجارب. تم تعديل هذا الرقم من 8 واستنسخه بإذن. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: تأثير KORS على انتقال HDMEC. (أ) يتم عرض ترحيل HDMEC في الملحق المطبوع 3D في غياب KORS (التحكم = CTRL) أو في وجود KORS (+ KORS) وقياسه كميا كنسبة مئوية من الاسترداد. (ب) يتم عرض ترحيل HDMECs في ECM أوKORS CM وقياسه كميا كنسبة مئوية للاسترداد. تم التعبير عن النتائج كمتوسط ± SEM ، n = 3 مكررات ، وتم تحليل ثلاثة حقول لكل نسخة متماثلة ، وتم إجراء تجربتين مستقلتين. ** ص < 0.01 ، ***** ص < 0.00001. شريط الميزان: 200 ميكرومتر. تم احتضان KORS في ECM بدون FBS وعوامل النمو. بعد 48 ساعة ، تم جمع هذا الوسط المكيف وتخزينه عند -80 درجة مئوية للتجارب. تم تعديل هذا الرقم من 8 واستنسخه بإذن. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| عد 1 | عد 2 | دني | المتوسط الكلي | ||
| لوحة 6 آبار | النسخ المتماثل 1 | 95% | 84% | 90% | 90% |
| النسخ المتماثل 2 | 90% | 88% | 89% | ||
| النسخ المتماثل 3 | 85% | 89% | 87% | ||
| النسخ المتماثل 4 | 97% | 89% | 93% | ||
| النسخ المتماثل 5 | 88% | 94% | 91% | ||
| النسخ المتماثل 6 | 86% | 92% | 89% | ||
| 3D إدراج المطبوعة | النسخ المتماثل 1 | 92% | 89% | 91% | 91% |
| النسخ المتماثل 2 | 91% | 80% | 86% | ||
| النسخ المتماثل 3 | 93% | 92% | 93% | ||
| النسخ المتماثل 4 | 94% | 98% | 96% | ||
| النسخ المتماثل 5 | 88% | 86% | 87% | ||
| النسخ المتماثل 6 | 93% | 97% | 95% |
الجدول 1: قياس صلاحية KORS. تم قياس صلاحية KORS في بئر من لوحة 6 آبار وفي ملحق مطبوع 3D باستخدام تلطيخ أزرق trypan والعد التلقائي.
| عد 1 | عد 2 | دني | المتوسط الكلي | ||
| لوحة 6 آبار | النسخ المتماثل 1 | 90% | 88% | 89% | 85% |
| النسخ المتماثل 2 | 79% | 78% | 79% | ||
| النسخ المتماثل 3 | 71% | 75% | 73% | ||
| النسخ المتماثل 4 | 86% | 82% | 84% | ||
| النسخ المتماثل 5 | 91% | 88% | 90% | ||
| النسخ المتماثل 6 | 99% | 94% | 97% | ||
| 3D إدراج المطبوعة | النسخ المتماثل 1 | 99% | 86% | 93% | 86% |
| النسخ المتماثل 2 | 80% | 75% | 78% | ||
| النسخ المتماثل 3 | 79% | 80% | 80% | ||
| النسخ المتماثل 4 | 98% | 85% | 92% | ||
| النسخ المتماثل 5 | 85% | 78% | 82% | ||
| النسخ المتماثل 6 | 89% | 93% | 91% |
الجدول 2: قياس صلاحية HDMEC. تم قياس صلاحية HDMEC في بئر من لوحة 6 آبار وفي ملحق مطبوع 3D باستخدام تلطيخ أزرق trypan والعد التلقائي.
يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود مصالح مالية متنافسة.
في هذه الورقة ، يتم تقديم ملحق مطبوع 3D مصمم حديثا كنموذج للثقافة المشتركة ويتم التحقق من صحته من خلال دراسة الاتصال بين الخلايا بين الخلايا البطانية والخلايا الكيراتينية.
تم إجراء هذه الدراسة بالتعاون مع BASF Beauty Care Solutions. السيدة تشارلي كولين بيير هي زميلة دكتوراه ممولة من BASF / CNRS.
نود أن نشكر السيد مهدي سلامي على تصور إدراج 3D المطبوعة.
| الأوتوكلاف | Getinge | APHP | دورة صلبة ، 121 درجة ؛ C لمدة 20 دقيقة |
| Biomed Clear | Formlabs | RS-F2-BMCL-01 | انطباع أجرته شركة 3D-Morphoz (ريمس ، فرنسا) |
| منظفات زراعة الخلايا ؛ | Tounett | A18590 / 0116 | |
| كاشف انتشار الخلايا WST-1 | Roche | 11،64،48،07،001 | |
| شريحة العد | NanoEnTek | EVE-050 | |
| Culture-Insert 2 Well in & - Dish 35 mm | Ibidi | 80206 | جهاز غرف الهجرة الثنائية. |
| وسيط الخلية البطانية | ScienCell | 1001 | الوسط القاعدي +/- 25 مل من مصل الأبقار الجنينية (FBS ، 0025) ، 5 مل من مكمل نمو الخلايا البطانية (ECGS ، 1052) ، و 5 مل من محلول البنسلين / الستربتومايسين (P / S ، 0503). |
| عداد الخلية الآلي EVE | NanoEnTek | NESCT-EVE-001E | |
| EVOS XL Core | Fisher Scientific | AMEX1200 | 10x من التكبير |
| كاشف السيليكون الغذائي ومجموعة المحفزات | Artificina | RTV 3428 A و B & nbsp ؛ | (10:1) |
| طابعة FORM 3B | Formlabs | PKG-F3B-WSVC-DSP-BASIC | IMPRESSION التي أجرتها شركة 3D-Morphoz |
| الخلايا البطانية الجلدية الدقيقة للخلايا البطانية للأوعية الدموية الدقيقة (HDMEC) | ScienCell | 2000 | |
| الكيراتينية لغمد الجذر الخارجي (KORS) | ScienCell | 2420 | |
| برنامج أداة التئام الجروح الماكرو | برنامج ImageJ | المستخدم لقياس السطح المكشوف (ل فحوصات الهجرة) | |
| وسط الخلايا الجذعية الوسيطة | ScienCell | 7501 | متوسط قاعدي +/- 25 مل من مصل الأبقار الجنينية (FBS ، 0025) ، 5 مل من مكمل نمو الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCGS ، 7552) ، و 5 مل من محلول البنسلين / الستربتومايسين (P / S ، 0503) |
| قارئ Microplate SPECTRO star NANO | BMG Labtech | BMG LABTECH برنامج | |
| PBS | Promocell | C-40232 | بدون Ca2 + < / sup> / Mg2 + < / sup> |
| Trypan Blue Stain | حضانةNanoEnTek | EBT-001 | |
| Trypsin / EDTA | Promocell | C-41020 | ل KORS عند 37 درجة ؛ C مع 5٪ CO2< / sub> لمدة 5 دقائق. حضانة HDMECs لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة |
| 96 بئر Nunclon Delta Surface | Thermoscientific | 167008 |
