تحضير معلق أحادي الخلية من أمعاء البلطي النيلي لتسلسل الخلية الواحدة

Peibo Wang; Yongcan Zhou; Bei Wang; Ahmed Elaswad; Shifeng Wang; Weiliang Guo; Dongdong Zhang

doi:10.3791/64688

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تحضير معلق أحادي الخلية من أمعاء البلطي النيلي لتسلسل الخلية الواحدة

2.6K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/64688

⸱

فبراير 10, 2023

Peibo Wang^*¹ , Yongcan Zhou^*¹^,³ , Bei Wang² , Ahmed Elaswad⁴ , Shifeng Wang¹^,³ , Weiliang Guo¹^,³ , Dongdong Zhang¹^,³

¹State Key Laboratory of Marine Resource Utilization in South China Sea, Hainan University, ²Provincial Key Laboratory of Aquatic Animal Disease Control and Healthy Culture, College of Fishery, Guangdong Ocean University, ³Hainan Provincial Key Laboratory for Tropical Hydrobiology and Biotechnology, College of Marine Science, Hainan University, ⁴Department of Animal Wealth Development, Faculty of Veterinary Medicine, Suez Canal University

^* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نوضح إعداد تعليق أحادي الخلية عالي الجودة لأمعاء البلطي لتسلسل الخلية الواحدة.

الملخص

البلطي النيلي هو واحد من أكثر أنواع أسماك المياه العذبة شيوعا في جميع أنحاء العالم، وهو نموذج بحثي يستخدم على نطاق واسع لدراسات أسماك الاستزراع المائي. يعد تحضير معلقات أحادية الخلية عالية الجودة أمرا ضروريا للدراسات على مستوى الخلية الواحدة مثل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية أو تسلسل الجينوم. ومع ذلك، لا يوجد بروتوكول جاهز للاستخدام لأنواع أسماك الاستزراع المائي، وخاصة لأمعاء البلطي. تختلف إنزيمات التفكك الفعالة حسب نوع الأنسجة. لذلك ، من الضروري تحسين بروتوكول تفكك الأنسجة عن طريق اختيار تركيبة الإنزيم أو الإنزيم المناسبة للحصول على خلايا قابلة للحياة كافية بأقل قدر من الضرر. توضح هذه الدراسة بروتوكولا محسنا لإعداد معلق أحادي الخلية عالي الجودة من أمعاء البلطي النيلي مع مزيج إنزيم من كولاجيناز / ديسباز. هذا المزيج فعال للغاية للتفكك باستخدام ألبومين مصل البقر و DNase لتقليل تراكم الخلايا بعد الهضم. يلبي إخراج الخلية متطلبات تسلسل الخلية الواحدة ، مع قابلية بقاء الخلية بنسبة 90٪ وتركيز الخلية العالي. يمكن أيضا تعديل هذا البروتوكول لإعداد تعليق أحادي الخلية من أمعاء أنواع الأسماك الأخرى. يوفر هذا البحث بروتوكولا مرجعيا فعالا ويقلل من الحاجة إلى تجارب إضافية في تحضير معلقات وحيدة الخلية لأنواع أسماك الاستزراع المائي.

المقدمة

الخلايا هي الوحدات الأساسية للكائنات الحية. مقارنة بدراسات الأنسجة السائبة ، يمكن أن تعكس الدراسات على مستوى الخلية الواحدة عدم تجانس الخلية وتوفر معلومات عالية الدقة¹. في السنوات الأخيرة ، طبق الباحثون تقنيات تسلسل الخلية الواحدة لدراسات الجينوم أو النسخ أو epigenome أو multi-omic على مستوى الخلية الواحدة في الثدييات وأسماك الزرد والكائنات النموذجية الأخرى وأبلغوا عن اختراقات كبيرة²،³،⁴،⁵،⁶^،⁷. وفي حين ركزت معظم الدراسات على الكائنات النموذجية، إلا ....