يصف هذا البروتوكول كيفية استخدام إصابة بوساطة FeCl3 للحث على تجلط الدم الشرياني ، وكيفية جمع وإعداد عينات إصابة الشرايين في مراحل مختلفة من تجلط الدم لتحليل المجهر الإلكتروني.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تجلط الدم الشرياني الناجم عن كلوريد الحديديك وجمع العينات لتحليل المجهر الإلكتروني 3D
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
أمراض القلب والأوعية الدموية هي السبب الرئيسي للوفيات والمراضة في جميع أنحاء العالم. تجلط الدم الشاذ هو سمة شائعة للحالات الجهازية مثل مرض السكري والسمنة ، والأمراض الالتهابية المزمنة مثل تصلب الشرايين والسرطان وأمراض المناعة الذاتية. عند إصابة الأوعية الدموية ، عادة ما يعمل نظام التخثر والصفائح الدموية والبطانة بطريقة منسقة لمنع النزيف عن طريق تكوين جلطة في موقع الإصابة. تؤدي التشوهات في هذه العملية إما إلى نزيف مفرط أو تجلط غير منضبط / نشاط مضاد للتخثر غير كاف ، مما يترجم إلى انسداد الأوعية الدموية وعواقبها. يعد نموذج إصابة الشريان السباتي الناجم عن FeCl3 أداة قيمة في التحقق من كيفية بدء تجلط الدم وتقدمه في الجسم الحي. يتضمن هذا النموذج تلفا / تعرية بطانية وتشكيل جلطة لاحقة في الموقع المصاب. يوفر مقايسة كمية حساسة للغاية لمراقبة تلف الأوعية الدموية وتكوين الجلطات استجابة لدرجات مختلفة من تلف الأوعية الدموية. بمجرد تحسينها ، يمكن استخدام هذه التقنية القياسية لدراسة الآليات الجزيئية الكامنة وراء تجلط الدم ، وكذلك التغيرات الهيكلية في الصفائح الدموية في الخثرة المتنامية. هذا الفحص مفيد أيضا لدراسة فعالية العوامل المضادة للتخثر والمضادة للصفيحات. تشرح هذه المقالة كيفية بدء ومراقبة تجلط الدم الشرياني الناجم عن FeCl3 وكيفية جمع العينات لتحليلها بواسطة المجهر الإلكتروني.
المقدمة
تجلط الدم هو تكوين جلطة دموية تسد الأوعية الدموية جزئيا أو كليا ، مما يعوق التدفق الطبيعي للدم. هذا يؤدي إلى أحداث القلب والأوعية الدموية الشديدة والمميتة ، مثل أمراض القلب الإقفارية والسكتات الدماغية. أمراض القلب والأوعية الدموية هي السبب الرئيسي للمراضة والوفيات ، وتسبب واحدة من كل أربع وفيات في جميع أنحاء العالم1،2،3. على الرغم من أن تجلط الدم يتجلى كخلل في نظام الأوعية الدموية ، إلا أنه قد يكون نتيجة لعدوى ميكروبية أو فيروسية كامنة أو اضطراب مناعي أو ورم خبيث أو حالة استقلابية. يتم الحفاظ على تدفق الدم من خلال التفاعل المعقد بين المكونات المتنوعة لنظام الأوعية الدموية ، ب....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت مراجعة جميع التجارب التي تمت مناقشتها هنا والموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات (IACUC) في جامعة كنتاكي.
ملاحظة: يتم سرد الأدوات الجراحية في الشكل 1 وجدول المواد. تم استخدام الفئران C57BL / 6J ، التي تتراوح أعمارها بين 8 و 10 أسابيع ، ذكر / أنثى أو سلالات ذات صلة تم التلاعب بها وراثيا (Knockout أو Knockin).
1. إصابة الشريان السباتي الناجم عن FeCl3
- تحريض تخدير الفأر
- وزن الماوس.
- تخدير الفأر عن طريق حقن 0.2 جم / كجم من محلول ثلاثي البرومو إيثانول داخل الصفاق (i.p.). تأكد من أن محلول ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يتم تقديم البيانات بشكل عام كوقت للانسداد ، أو الوقت اللازم لتشكيل خثرة انسداد كامل. يمكن رسم هذه البيانات كمنحنى بقاء كابلان-ماير (الشكل 4 أ)19 ، أو مخطط نقطي به أشرطة توضح تدفق الدم النهائي في وقت توقف تدفق الدم أو إنهاء التجربة (الشكل 4 ب) ، أو كرسم بياني خطي (الشكل 4 ج). يمكن دراسة استقرار الجلطة باستخدام هذه التقنية. في معظم الحالات ، عند إصابة FeCl3 ، تتشكل الجلطة تدريجيا ، ومع نموها ، ينخفض .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
التطبيق الموضعي ل FeCl3 على الأوعية الدموية للحث على تجلط الدم هو تقنية مستخدمة على نطاق واسع ، وكان له دور فعال في إنشاء أدوار لمستقبلات الصفائح الدموية المختلفة ، ومسارات إشارات الرباط ، ومثبطاتها20،21،22،23. الآلية التي من خلالها FeCl3 يسبب تجلط الدم متعددة الأوجه. في السابق ، كان التعرية البطانية يعتبر سببا للتخثر ، ولكن في السنوات الأخيرة ، اقترحت تقارير متعددة دور خل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح يتعلق بهذه الدراسة.
ملفات تعريف ORCID: S.J.: 0000-0001-6925-2116 ؛ سو.د.: 00000-0001-5577-0473.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون أعضاء مختبر وايت هارت على اطلاعهم الدقيق على هذه المخطوطة. تم دعم العمل بمنح من المعاهد الوطنية للصحة ، NHLBI (HL56652 ، HL138179 ، و HL150818) ، وجائزة الاستحقاق من وزارة شؤون المحاربين القدامى إلى S.W.W. ، R01 HL 155519 إلى BS ، ومنحة برنامج NIBIB الداخلي إلى R.D.L.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.9٪ محلول ملحي | فيشر العلمية | BP358-212 | كلوريد الصوديوم يستخدم لصنع محلول ملحي بنسبة 0.9٪ ؛ |
| 1 مل حقنة | Becton, Dickinson and Company | 309659 | |
| 190 إثبات الإيثانول | KOPTEC | V1101 | تستخدم لصنع محلول إيثانول بنسبة 70٪ لاستخدامه في تحضير الماوس للجراحة ؛ |
| 2،2،2 Tribromoethanol | Sigma Aldrich | 48402 | |
| 25 ياردة خياطة حريرية مضفرة سوداء (5-0) | DEKNATEL | 136082-1204 | |
| 26G x 3/8 Needle | Becton, Dickinson and Company | 305110 | |
| 2-ميثيل -2-بوتانول | سيجما ألدريتش | 240486 | |
| 7.5 مل نقل ماصة ، متخرجة إلى 3 مل | Globe Scientific Inc. | 135010 | |
| ضمادات تحضير الكحول (70٪ كحول الأيزوبروبيل) Medline | MDS090735 | ||
| Araldite GY 502 ؛ | خدمات المجهر الإلكتروني | 10900 | |
| طبق ثقافة الخلية 35 مم × 10 مم ؛ | Corning Incorporated | 430165 | |
| مقياس مدمج | Ward's Science | 470314-390 | |
| مقص تشريح, 12.5 سم طويل | أداة الدقة العالمية | 15922-G | |
| DMP-30 المنشط | خدمات المجهر الإلكتروني | 13600 | |
| دودينيل السكسينيك أنهيدريد / DDSA | خدمات المجهر الإلكتروني | 13700 | |
| أكياس براز هزلي / حقيبة التخلص من جثة الحيوانات | منتجات التاج | PP-RB-200 | |
| دوبلر فلو بروب | أنظمة ترانسونيك إنك. | MA0.5PSB | |
| الراتنج EMBED 812 | خدمات المجهر الإلكتروني | 14900 | |
| كحول إيثيلي ، لا مائي 200 برهان ؛ | خدمات المجهر الإلكتروني | 15055 | |
| ملقط تضميد العين ، 4 "منحني بالكامل ، قياسي ، نصائح عريضة 0.8 مم | ورق ترشيح Integra Miltex | 18-784 | |
| ؛ | VWR | 28310-106 | |
| مقص ناعم - | أدوات العلوم الدقيقة الحادة الحادة | 14028-10 | |
| لكمات الأذن حلقة الإصبع | أدوات العلوم الدقيقة | 24212-01 | |
| إسفنج شاش 2 "× 2" – 12 رقائق | شركة Dukal | Corporation 2128 | |
| Glutaraldehyde (محلول 10٪) | خدمات المجهر الإلكتروني | 16120 | |
| Integra Miltex شفرة جراحية من الصلب الكربوني # 10 | Integra & Reg ؛ Miltex & reg; | 4110 | |
| كلوريد الحديد (III) | SIGMA-ALDRICH | 157740-100G | |
| مقبض سكين Miltex & reg ؛ الفولاذ المقاوم للصدأ فائق الدقة مقاس 3 | Integra Lifesciences | 157510 | |
| حمض الأسبارتيك | سيجما فيشر | A93100 | |
| حمض الأسبارتيك | L-فيشر العلمي | BP374-100 | |
| نترات الرصاص | فيشر العلمية | L-62 | |
| LEICA S8AP0 المجهر | LEICA | لم يعد متاحا | لم يعد متاحا من شركة |
| LEICA S8AP0 Microscope Stand | لم تعد LEICA | 10447255 | متوفرة من شركة |
| Light-Duty Tissue Wipers | VWR | 82003-822 | |
| ملقط تشريح دقيق ؛ أسنان 1x2 ، منحنى كامل ؛ عرض طرف 0.8 مم ؛ 4 "طول | Roboz Surgical Instrument Company | RS-5157 | |
| رابع أكسيد الأوزميوم 4٪ محلول مائي | خدمات المجهر الإلكتروني | 19150 | |
| بارافورمالدهيد (محلول 16٪) | خدمات المجهر الإلكتروني | 15710 | |
| فيريسيانيد البوتاسيوم | SIGMA-ALDRICH | P-8131 | |
| أكسيد البروبيلين ، كاشف ACS ؛ | خدمات المجهر الإلكتروني | 20401 | |
| Rainin Classic Pipette PR-10 | Rainin | 17008649 | |
| Research Flowmeter | Transonic Systems Inc. | T402B01481 الموديل: T402 | |
| سكوتش ماجيك الشريط غير المرئي ، 3/4 "× 1000" ، سكوتش شفاف | ؛ | 305289 | |
| وسادة ساخنة للحيوانات الصغيرة | K & شركة H Manufacturing Inc. | الموديل: HM10 | |
| كاكوديلات الصوديوم عازلة 0.2 متر ، pH7.4 | خدمات المجهر الإلكتروني ؛ | 11623 | |
| تطبيق قطنية معقمة | الطبية البيوريتانية | 25-806 1WC | |
| Steromaster Illuminator | فيشر العلمية | 12-562-21 | لم يعد متوفرا من شركة |
| Surgical Dumont #7 Plumps | أدوات العلوم الدقيقة | 11271-30 | |
| Thiocarbohydrazide (TCH) | SIGMA-ALDRICH | 88535 | |
| إعادة تحميل طرف الماصة العالمي منخفض الاحتباس (0.1-10 & micro; L) | VWR | 76323-394 | |
| خدمات الفحص المجهري الإلكتروني | لخلات اليورانيل | 22400 | |
| Veet Gel Cream Hair Remover | Reckitt Benckiser | 3116875 | |
| قوارب وزن سداسية بيضاء مضادة للكهرباء الساكنة ، متوسطة ، 64 × 15 × 19 مم | فيشر Scientific ؛ | برنامج S38975 | |
| WinDAQ / 100 لنظام التشغيل Windows | DATAQ Instruments، Inc. | الإصدار 3.38 | متاح للتنزيل مجانا. https://www.dataq.com/products/windaq/ |
| زايس أكسيوكام ICC 1 | ZEISS | 57615 |
المراجع
- Lozano, R., et al. Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2012).
- Raskob, G. E., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
