هنا ، تم تطوير منصة رقمية لتحليل صور الكيمياء المناعية والتحقق من صحتها لتحليل الخلايا المناعية البطانية للمرضى الذين يعانون من الإجهاض المتكرر في نافذة الزرع كميا.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
منصة للكشف الكمي عن الخلايا المناعية البطانية على أساس الكيمياء المناعية وتحليل الصور الرقمية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
لتقييم البيئة الدقيقة المناعية لبطانة الرحم للمرضى الذين يعانون من الإجهاض المتكرر (RM) ، تم تطوير منصة رقمية لتحليل صور الكيمياء المناعية المناعية والتحقق من صحتها لتحليل الخلايا المناعية البطانية كميا خلال المرحلة المتوسطة الصفراء. تم جمع جميع عينات بطانة الرحم خلال المرحلة المتوسطة الصفراء من الدورة الشهرية. تم تقسيم أنسجة بطانة الرحم المضمنة في البارافين إلى شرائح بسمك 4 ميكرومتر ، وتم إجراء تلطيخ الكيمياء المناعية (IHC) للكشف عن الخلايا المناعية البطانية الرحمية ، بما في ذلك خلايا CD56 + uNK ، و Foxp3 + Tregs ، و CD163 + M2 البلاعم ، و CD1a + DCs ، وخلايا CD8 + T. تم مسح الشرائح البانورامية ضوئيا باستخدام ماسح ضوئي رقمي للشرائح وتم استخدام نظام تحليل الصور التجارية للتحليل الكمي. تم حساب النسبة المئوية للخلايا المناعية البطانية بقسمة عدد الخلايا المناعية في إجمالي خلايا بطانة الرحم. باستخدام نظام تحليل الصور التجارية ، يمكن تحليل التقييم الكمي للخلايا المناعية البطانية الرحمية ، والتي يصعب أو يستحيل تحليلها باستخدام تحليل الصور التقليدي ، بسهولة وبدقة. يمكن تطبيق هذه المنهجية لتوصيف البيئة المكروية بطانة الرحم كميا ، بما في ذلك التفاعل بين الخلايا المناعية ، وعدم تجانسها لمرضى الفشل التناسلي المختلفين. قد تكون منصة التقييم الكمي للخلايا المناعية البطانية ذات أهمية سريرية مهمة لتشخيص وعلاج مرضى RM.
المقدمة
الإجهاض المتكرر (RM) هو فقدان حملين متتاليين أو أكثر وهو مرض معقد يجذب انتباه الأطباء في السنوات الأخيرة. معدل حدوث RM في النساء في سن الإنجاب هو 1٪ -5٪ 1. تظهر نتائج الدراسات السابقة أن العوامل المناعية ترتبط ارتباطا وثيقا بالتسبب في RM2،3،4،5. الحفاظ على التوازن المناعي في واجهة الأم والجنين مطلوب لزرع الجنين وتطوره. تؤدي الخلايا المناعية البطانية الرحمية عدة أدوار تنظيمية للحفاظ على هذا التوازن ، مثل تعزيز غزو الأرومة الغاذية ، وإعادة تشكيل الشرايين الحلزونية ، والمساهمة في نمو المشيمة6....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت مراجعة محتوى البحث والبروتوكول بشكل أخلاقي والموافقة عليه من قبل لجنة أخلاقيات البحث في مستشفى شنتشن تشونغشان لجراحة المسالك البولية. قدمت جميع النساء (20-40 سنة) المشاركات في الدراسة موافقة مستنيرة لجمع العينات واستخدامها.
1. اكتساب الأنسجة المرضية
- قم بإعداد أدوات حصاد الأنسجة وهي مسطرة القياس ، والملقط ، وتضمين الكاسيت ، وورق التضمين ، وسلة المناديل.
- لاحظ ما إذا كانت كمية أنسجة بطانة الرحم (أكبر من حبة مونج) ، التي تم جمعها باستخدام نهج قياسي مع قسطرة pipelle ، كافية.
- نقل أنسجة بطانة الرحم من الفورمالين إلى ورقة التضمين مع ملقط وقياس أبعاد أنسجة بطانة الرحم مع المسطرة.
- لف أنسجة ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
من أجل تقييم الخلايا المناعية البطانية كميا وتقليل عدم الاستقرار الناجم عن الأخطاء التشغيلية التي من صنع الإنسان ، أنشأنا منصة تحليل كمي رقمية للخلايا المناعية البطانية باستخدام الكشف المناعي الكيميائي التلقائي ونظام التقييم الكمي الرقمي. تم إنشاء منصة تحليل صور الكيمياء المناعية لتحليل الخلايا المناعية البطانية الرحمية للمرضى الذين يعانون من الإجهاض المتكرر (RM) في نافذة الزرع كميا. تم جمع جميع أنسجة بطانة الرحم خلال المرحلة المتوسطة الصفراء من الدورة الشهرية. تم تقسيم أنسجة بطانة الرحم المضمنة في البارافين إلى شرائح بس.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
أنشأ هذا البروتوكول منصة رقمية لتحليل صور الكيمياء المناعية لتحليل الخلايا المناعية البطانية لمرضى RM كميا. هنا ، تم الكشف عن ست علامات مناعية بطانة الرحم لتقييم البيئة الدقيقة المناعية بطانة الرحم في مرضى RM.
بطانة الرحم الاستقبالية خلال المرحلة المتوسطة الصفراء هي مفتاح نجاح الزرع والحمل27,28. لذلك ، يلعب تقييم النسبة المئوية للخلايا المناعية البطانية دورا مهما في تقدير تقبل بطانة الرحم. تحليل الخلايا المناعية البطانية الرحمية ، بالط.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
المؤلفون ممتنون لجميع النساء اللواتي وافقن وتبرعن بعينات لهذه الدراسة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
غطاء
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الغطاء الآلي | Sakuraus | DRS-Prisma-P-JCS& Film-JC2 | |
| CD163 | GrowGn Biotechnology | NCL-L-CD163 | |
| CD1a | Gene Tech | GM357129 | |
| CD56 | Gene Tech | GT200529 | |
| CD8 | Novocastra | NCL-L-CD8-4B11 | |
| مجفف | Thermo Fisher | Excelsior ES | |
| علم الأمراض الرقمي | ومختبرات Indica | HALO | |
| Foxp3 | YILIFANG البيولوجية | 14-477-82 | |
| IHC ملطخ | Leica | BOND III | |
| منصة تحليل الصور | مختبرات إنديكا | HALO | |
| الشرائح الماسح | الضوئي أوليمبوس علوم الحياة | VS200 |
المراجع
- Practice Committee of the American Society for Reproductive. Evaluation and treatment of recurrent pregnancy loss: a committee opinion. Fertility and Sterility. 98 (5), 1103-1111 (2012).
- Dimitriadis, E., Menkhorst, E., Saito, S., Kutteh, W. H., Brosens, J. J. Recurrent pregnancy loss.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
