يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

النمذجة المبكرة غير الموجهة للدماغ البشري العضوي الوعائي العصبي في الغشاء المشيمي الجنيني المتساهل

2.7K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/65710

⸱

فبراير 16, 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Instituto de Biología Celular y Neurociencias “Prof. E. De Robertis” (IBCN), CONICET - Universidad de Buenos Aires, 2Facultad de Medicina, Departamento de Biología Celular, Histología, Embriología y Genética, Universidad de Buenos Aires, 3Institute of Neurosciences, Pathology and Experimental Therapeutics Dept, University of Barcelona, 4Functional Neurogenomics Group, Neurodevelopmental Disorders, IDIBELL, L’Hospitalet de Llobregat, 5IBE, Institute of Evolutionary Biology (UPF-CSIC), Department of Medicine and Life Sciences, Universitat Pompeu Fabra, 6Institució Catalana de Recerca i Estudis Avançats (ICREA) and Universitat Pompeu Fabra, 7Center for Genomic Regulation (CRG), The Barcelona Institute of Science and Technology, 8BarcelonaBeta Brain Research Center, Pasqual Maragall Foundation, 9Instituto de Investigación en Biomedicina (IBioBA) – CONICET – Instituto Partner de la Sociedad Max Planck

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نقدم بروتوكولا لإدخال عضويات الدماغ البشري في مراحل نضج متعددة في غشاء المشيمية المشيمية (CAM). نمت عضويات الدماغ باتباع بروتوكولات موحدة غير موجهة.

الملخص

أثبت إدخال المواد العضوية في الأنسجة الوعائية في النموذجية ، مثل غشاء الفأر أو جنين الفرخ المشيمي (CAM) ، فعاليته في نمذجة الأوعية الدموية الجديدة. الطب التكميلي والبديل هو غشاء خارج الجنين غني بالأوعية الدموية ، والذي يظهر تفاعلا مناعيا محدودا ، وبالتالي يصبح نموذجا ممتازا لاستضافة عمليات زرع الخلايا ذات الأصل البشري.

تصف هذه الورقة استراتيجية غرس عضويات الدماغ البشري المتمايزة في مراحل النضج المتعددة في CAM. يتغير التركيب الخلوي لعضويات الدماغ مع مرور الوقت ، مما يعكس معالم نمو الدماغ البشري. قمنا بتطعيم عضويات الدماغ في مراحل النضج ذات الصلة: التوسع العصبي الظهاري (18 DIV) ، وتكوين الخلايا العصبية المبكر (60 DIV) ، والتكون الدبقي المبكر (180 DIV) في الطب التكميلي والبديل لأجنة الدجاج الجنينية (E) 7. تم حصاد عضويات الدماغ المطعمة بعد 5 أيام وتم تحليل خصائصها النسيجية.

لم يتم الكشف عن أي علامات نسيجية للأوعية الدموية الجديدة في المواد العضوية المطعمة أو الأوعية الدموية غير الطبيعية المجاورة للطعوم. علاوة على ذلك ، لوحظت تغييرات ملحوظة في التركيب الخلوي للعضويات المطعمة ، أي زيادة في عدد الخلايا النجمية الحمضية الحمضية الليفية الدبقية. ومع ذلك ، كانت التغيرات المعمارية الخلوية تعتمد على مرحلة النضج العضوي. إجمالا ، تشير هذه النتائج إلى أن عضويات الدماغ يمكن أن تنمو في الطب التكميلي والبديل ، وتظهر اختلافات في البنية الخلوية اعتمادا على مرحلة نضجها عند التطعيم.

المقدمة

عضويات الدماغ البشري هي تقنية ناشئة تسمح لنا بتلخيص التطور المبكر للدماغ البشري في المختبر1،2،3. ومع ذلك ، فإن أحد القيود الرئيسية لهذا النموذج هو نقص الأوعية الدموية ، والتي تلعب أدوارا لا غنى عنها ليس فقط في توازن الدماغ ولكن أيضا في نمو الدماغ4. بالإضافة إلى توصيل الأكسجين والمواد المغذية ، تشير الأدلة المتراكمة إلى أن نظام الأوعية الدموية في الدماغ ينظم التمايز العصبي والهجرة وتكوين المشابك أثناء التطور 5,6. لذلك ، هناك حاجة ملحة لإنشاء نماذج موثوقة يمكنها توفير إشارات الأوعية الدموية المفقودة وهيكلها لعضويات الدماغ ، مما يعزز تعقيد توليد الأعضاءفي الدماغ البشري 7.

من بين الطرق المقترحة للأوعية الدموية ، يمكن النظر في خطين رئيسيين: النقش العضوي في كائن حي والتقنيات المختبرية البحتة التي تشارك في زراعة الخلايا البطانية والخلايا العصبية8،9،10،11،12. يعد زرع داخل المخ في الفئران مكلفا ويستغرق وقتا طويلا ، مما يجعل التقنيات الأخرى ذات صلة بالنماذج الأبسط. تم استخدام فحص الغشاء المشيمي المشيمي (CAM) على نطاق واسع لدراسة تكوين الأوعية13،14،15. في العقد الماضي ، نجحت عدة مجموعات في دمج أنواع مختلفة من المواد العضوية ، بما في ذلك الكلى16,17 ، والقلب18 ، وعضويات الورم19,20 ، في الطب التكميلي والبديل. ومع ذلك ، لا يعرف سوى القليل عن الفعالية والسمية / الرفض والتأثير الفسيولوجي وطرق إدخال عضويات الدماغ البشري في الطب التكميلي والمتنقل. جانب آخر مثير للاهتمام وغير مستكشف حتى الآن هو تشكيل حاجز دموي دماغي وهمي (BBB) بين CAM والواجهة النجمية العضوية. اقترح العمل الرائد السابق الجدوى المفترضة لتوليد BBB في الطب التكميلي والبديل عن طريق زرع الخلايا النجمية والوسط المكيف للخلايا النجمية21،22،23. ومع ذلك ، يبدو أن الخلايا النجمية الناضجة غير قادرة على تحقيق ذلك24,25. وبالتالي ، فإن التكوين الناجم عن الخلايا النجمية ل BBB لا يزال قابلا للنقاش ، وزرع عضويات الدماغ البشري سيسمح لنا بإلقاء الضوء على هذا الجدل.

تصف مقالة الفيديو هذه بروتوكولا لزرع الأعضاء في الدماغ البشري في البويضات في الطب التكميلي والبديل الذي يعزز النمو والتحسين والأوعية الدموية ، مما ينتج عنه عضويات تشمل عناصر BBB متوافقة نسيجيا. هنا ، نقدم بروتوكولا يضمن بقاء جنين الدجاج ونبلغ عن جواز الطب التكميلي والبديل للحفاظ على نمو الأعضاء في الدماغ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت معالجة أجنة دجاج ليغورن الأبيض (جالوس جالوس) باتباع دليل رعاية واستخدام المختبر من معهد موارد المختبر ، لجنة علوم الحياة ، المجلس القومي للبحوث ، الولايات المتحدة الأمريكية ، وتمت الموافقة على التجارب من قبل مجلس رعاية واستخدام التجارب من جامعة برشلونة.

1. إعداد عضوي غير موجه في الدماغ

  1. الحفاظ على الخلايا الجذعية الجنينية البشرية H9 (hESCs) في mTESR1 مسخنة مسبقا في درجة حرارة الغرفة (RT) تحت التقاء 70٪ في ألواح 6 آبار مغلفة ب Matrigel المذاب في DMEM (1:40) في حاضنة CO2 بنسبة 5٪ عند 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: يجب حفظ Matrigel في الثلج حتى استخدامه كطلاء لمنع البلمرة.
  2. توليد عضويات الدماغ باتباع بروتوكول الدماغ غير الموجه 2.
    1. فصل H9 hESCs باستخدام 500 ميكرولتر من محلول تفكك الخلايا واحتضانها لمدة 3-5 دقائق عند 37 درجة مئوية. أعد التعليق في mTESR1 الذي يحتوي على مثبط ROCK Y27632 (التركيز النهائي 50 ميكرومتر) والبذور 9000 خلية لكل بئر في صفيحة منخفضة الالتصاق معالجة مسبقا من 96 بئرا.
    2. بمجرد تجميع المواد العضوية في mTESR1 التي تحتوي على مثبط ROCK Y27632 (التركيز النهائي 50 ميكرومتر) ، قم بنقلها إلى وسط تحريضي لمدة 5-6 أيام.
    3. باتباع بروتوكول الدماغ العضويغير الموجه 26 ، انقل المواد العضوية إلى وسائط الحث العصبي في ~ أيام 4-5.
    4. بمجرد اكتسابها الحجم وحلقة الظهارة العصبية ، قم بنقلها إلى قطرة Matrigel باردة الجليد. بمجرد بلمرة Matrigel ، انقل المواد العضوية إلى طبق بتري منخفض الالتصاق 5 سم مع 5 مل من وسط النضج المسخن مسبقا.
    5. بعد 4 أيام ، ضع عضويات الدماغ تحت التحريض المداري.
  3. جمع المواد العضوية للحصاد في DPBS الطازجة مباشرة قبل التطعيم.

2. صيانة البيض ، وتفعيل التنمية ، وثقب قشر البيض

  1. قم بتخزين البيض المخصب (في اليوم 0) في حاضنة على حرارة 18 درجة مئوية حتى الاستخدام.
    ملاحظة: عند درجة الحرارة هذه ، لا تتطور ، وتبقى في نفس مرحلة النضج.
  2. عند الحاجة للاستخدام ، احتضنها عند 38 درجة مئوية ورطوبة نسبية 60٪ مع دوران هزاز ناعم بزاوية 45 درجة مئوية.
  3. في اليوم 1 ، قم بتنظيف سطح قشر البيض بنسبة 70٪ من الإيثانول وجففه بمنشفة ورقية لتعقيمه.
  4. ضع ضمادة لاصقة ورقية جراحية ، يشار إليها فيما يلي باسم "الضمادة" ، فوق البيضة ، تغطي غرفة الهواء في البويضة.
    ملاحظة: سيمنع هذا الغبار من قشر البيض من السقوط في الطب التكميلي والبديل حيث يتعثر.
  5. قم بإجراء ثقب ثقب غرفة الهواء ، المشار إليه فيما يلي باسم ثقب غرفة الهواء (ACH) ، بإبرة معقمة 21 جم × 11/2 بوصة ، مع ثقب قشر البيض برفق. افتح ACH على الطرف العلوي من البيضة لتجنب إزعاج CAM ، والتي في هذه المرحلة منفصلة عن القشرة.
  6. للعثور على أفضل وضع لثقب ACH ، استخدم مصباحا لتحديد أنحف سطح قشر البيض في الطرف العلوي من البيضة. يشير انتقال شعاع الضوء المباشر إلى أفضل وضع للحفر.
  7. قم بتغطية ACH بضمادة جديدة لحماية الجنين من البيئة الخارجية ووضع البويضة مرة أخرى في الحاضنة.
  8. من هذه اللحظة فصاعدا ، توقف عن الدوران في الحاضنة وحافظ على البيض في وضع رأسي مع وجود النافذة في الأعلى.
    ملاحظة: سيسهل ذلك تطور الجنين ، ويصبح الطب التكميلي والبديل متاحا في الأعلى مع غرفة هواء بين الجنين وقشر البيض ، مما يسمح بالتطعيم اللاحق.
  9. افتح ACH من اليوم 1 إلى اليوم 4. تزداد الصلاحية في اليوم 4 (3 أيام قبل يوم التطعيم).

3. تطعيم الدماغ العضوي

  1. قم بإجراء التطعيم في اليوم 7 عندما يكون الطب التكميلي والبديل متطورا جيدا ووعائيا ، ويغطي البويضة في جميع أنحاء الجنين.
  2. قم بإزالة الضمادة ، وامسح سطح قشر البيض بنسبة 70٪ من الإيثانول لتعقيم قشر البيض ، قبل توسيع ACH بعناية في نافذة التطعيم.
  3. ضع ضمادة جديدة أكبر تغطي الامتداد خارج نافذة التطعيم النهائية لتجنب سقوط شظايا قشر البيض في الطب التكميلي والبديل أثناء توسيع نافذة التطعيم.
    ملاحظة: هناك حاجة إلى هذه النافذة الأكبر لتحديد أفضل موضع تطعيم وللتطعيم اللاحق.
  4. قم بتكبير نافذة التطعيم عن طريق ثقب قشر البيض برفق حتى يصل قطر النافذة إلى حوالي 2 سم. قم بإزالة حواف نافذة قشر البيض برفق باستخدام ملاقط حتى يتم تكبير النافذة. قم بإزالة الغبار المتبقي وقطع قشر البيض التي ستبقى ملتصقة بالضمادة عن طريق تقشير الضمادة برفق.
  5. ضع العضو العضوي مع ماصة أوتوماتيكية P200. قم بقص الأطراف بمقص معقم وحاد لتكبير الفتحة وفقا لحجم العضو العضوي ومنع تلف العضو العضوي أو استخدم نصائح معقمة واسعة النطاق. اجمع العضو العضوي بحجم أقصى يبلغ 50 ميكرولتر من PBS وانقله مباشرة إلى CAM ، على جانب مقابل لموقع الجنين.
  6. تأكد من أن موضع الكسب غير المشروع بعيد عن صفار البيض لتجنب تمزقه أثناء الحصاد ، ويفضل وضعه بالقرب من وعاء دموي.
  7. ضع قطرة من 7 ميكرولتر من Matrigel المحيطة بالعضو العضوي بعد وضع العضو العضوي على CAM.
    ملاحظة: هذا سيمنع العضو من التحرك حول الغشاء.
  8. أغلق النافذة باستخدام قطعة صغيرة من parafilm تناسب الحجم الدقيق للنافذة وإرفاقها بالقشرة بضمادة لاصقة.
    ملاحظة: من المهم تغطية النافذة بالكامل بالبارافيلم لتجنب جفاف الجنين مع السماح بتبادل الغازات. حدد بشكل صحيح تمديد تغطية النافذة ، وتجنب تجاوز النافذة ، لأنه قد يعيق تبادل الغازات الضروري لتطور الجنين الصحيح27.

4. حصاد العضوية المزروعة

  1. احصد المواد العضوية المطعمة والطب التكميلي والبديل المحيط بها في اليوم 12 من تطور الدجاج ، الموافق 38 مرحلة هامبرغر وهاملتون من التطور (HH38) 28 ، بعد 5 أيام من التطعيم. في هذه المرحلة ، يتم تمييز الطب التكميلي والبديل تماما مع الأوعية الدموية الناضجة بينما تغطي جراثيم الريش الأجنحة وكذلك الجفن العلوي للجنين.
  2. عند إزالة الضمادة اللاصقة ، قم بتكبير النافذة لتسهيل حصاد العينات باستخدام المقص والملاقط الدقيقة.
  3. تصور العضو العضوي بمساعدة الفحص المجهري للتشريح ثنائي العينين إذا لزم الأمر ، متبوعا بخطوة بادئة لمدة 2 دقيقة مع 4٪ بارافورمالدهيد (PFA) للمساعدة في حصاد الأعضاء والطب التكميلي والبديل.
  4. اجمع مقطع 1.5 سم2 من CAM يحتوي على العضو العضوي.
  5. تثبيت العينة
    1. اغسل العينات باستخدام 1x PBS وقم بتثبيتها باستخدام 4٪ PFA (في PBS ، درجة الحموضة 7.2) لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية. ثم اغسل العينات لمدة 3 × 5 دقائق في برنامج تلفزيوني.
    2. قم بتخزين العينات في درجة حرارة 4 درجات مئوية في برنامج تلفزيوني مع أزيد الصوديوم أو قم بحمايتها بالتبريد مباشرة في 30٪ سكروز - PBS طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
    3. عند الحماية من التبريد ، قم بتضمين العينات في مركب درجة حرارة القطع المثلى (OCT) وتخزينها في -20 درجة مئوية حتى يتم تقسيمها. قطع شرائح الأنسجة بسمك 20 ميكرومتر باستخدام cryostat وجمعها على شرائح xylanized. قم بتخزين الشرائح في درجة حرارة -20 درجة مئوية حتى يتم استخدامها للتلطيخ.

5. التألق المناعي

  1. قم بإزالة OCT. من الأقسام باستخدام محلول PBS بنسبة 0.1٪ Triton X-100 (PBS-T) لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة (RT).
  2. عالج الأقسام بمحلول مانع (BS) بمحلول 2٪ BSA ، 3٪ مصل حمار PBS-T 0.01٪ لمدة 1 ساعة في RT.
  3. تمييع الجسم المضاد الأولي المختار (انظر جدول المواد) في BS واحتضان العينات طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
  4. في اليوم التالي ، اغسل العينات 3 × 10 دقائق في 1x PBS في RT.
  5. تمييع الجسم المضاد الثانوي في BS واحتضان لمدة 2 ساعة في RT (انظر جدول المواد).
  6. احتضان العينات لمدة 10 دقائق باستخدام 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) لتمييز نوى الخلية في RT ، مخففة في PBS-T عند تخفيف 1: 1,000.
  7. قم بتركيب الشرائح بوسط متصاعد وقم بتغطيتها بأغطية زجاجية.
  8. التقط جميع الصور باستخدام مجهر مضان واسع المجال بمعدل 2.5 و 10 و 20 و 40x.
  9. تحفظ الشرائح على حرارة 4 درجات مئوية.

6. تلطيخ الهيماتوكسيلين ويوزين (H&E & E)

ملاحظة: لإثبات نجاح التطعيم ، قم بإجراء تلطيخ H&E.

  1. قم بإزالة OCT باستخدام PBS-T 0.1٪ لمدة 10 دقائق في RT.
  2. أداء الجفاف التسلسلي في غطاء محرك السيارة على النحو التالي: 10 دقائق في الماء المقطر (DW) ، 45 ثانية في الهيماتوكسيلين ، 1 دقيقة في DW ، 20 ثانية في PBS ، 2 × 30 ثانية في 70٪ EtOH ، 2 × 30 ثانية في 80٪ EtOH ، 2 × 30 ثانية في 96٪ EtOH ، 30 ثانية في eosin ، 2 × 15 ثانية في 96٪ EtOH ، 2 × 15 ثانية في 100٪ EtOH ، 1 دقيقة في xylol-100٪ ETOH ، 1 دقيقة في xylol ، 1 دقيقة في xylol (طازج).
  3. قم بتركيب أغطية الزجاج باستخدام وسيط تثبيت قائم على الزيلين.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

اختيار جدول نضج الجنين لعملية الزرع
تبدأ التجربة في D0 عندما يتم تحضين البويضات المخصبة عند 38 درجة مئوية ورطوبة نسبية 60٪. الغشاء المشيمي الألانتوي (CAM) هو غشاء خارج جنيني عالي الأوعية يتطور بعد حضانة البويضة. يتكون من اندماج الألانتوا والمشيمية. في D1 ، بعد 24 ساعة من الحضانة ، يتم ثقب غرفة الهواء لمنع CAM من الالتصاق بغشاء الغلاف الداخلي. يؤدي ثقب غرفة الهواء عند D1 إلى تحسين جودة غرفة الهواء مقارنة بالثقب في المراحل اللاحقة (D4). يستمر الطب التكميلي والبديل في النمو حتى D12 عندما يغلف محتوى البوي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه الدراسة ، وصفنا بروتوكولا مفصلا يحتوي على العديد من الخطوات الرئيسية التي توفر نموا وتطورا إيجابيين لعضويات الدماغ البشري عند التطعيم دون الإخلال ببقاء أجنة الدجاج. أوصينا باستخدام الإبر المعقمة لثقب غرفة الهواء في البويضة بعد 24 ساعة من الحضانة (اليوم 1). بالإضافة إلى ذلك ، حاولنا أيضا إجراء ثقب في اليوم 4 (بعد التحقق من قشر البيض بالضوء لاختبار تطور الأوعية الدموية للتأكد من أننا نعمل فقط مع الأجنة السليمة). ومع ذلك ، أدى ذلك إلى انخفاض في صلاحية الجنين بسبب قرب أوعية الطب التكميلي والبديل من قشر البيض. تجدر الإ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لا يبلغ المؤلفون عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

نشكر الدكتور الكانتارا والدكتور أورتيغا من UB وبقية الأعضاء في مختبر الدكتور أكوستا على المناقشات الثاقبة. SA هو أستاذ مساعد زميل سيرا هنتر من Generalitat de Catalunya في جامعة برشلونة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Anti-TUBB3 [Tuj1], الماوس BioLegend8012011: 1,000
Anti-GFAP ، أرنبGeneTexGTX1087111: 500
مضاد للأرانب AlexaFluor 488 ، ماعز.InvitrogenA-212061: 1,000
AlexaFluor 594 المضاد للفأر ، الماعزجاكسون ImmunoResearch715-585-1501: 500
بيض الدجاج الأبيض المخصب (Gallus gallus) بيضGranja Gibert (Cambrils ، إسبانيا) DAPI
InvitrogenD13061: 10،000
DPXSigma100579وسيط تركيب قائم على الزيلين   ؛
حل التفكك اللطيفCreativeBiolabsITS-0622-YT187حل تفكك الخلايا
MatrigelBD Biosciences356234
Mowiol 4-88 وسائط التركيبMerk81381
منشفة ورقية ،Sigma-AldrichZ188956
Y27632MilliporeSCM07510 نانومتر
مقص جراحي حادVWR470106-340
Superfrost Plus التصاق المجهر ينزلقEprediaJ1800AMNZ
مثبط ROCK من فئة المختبر

المراجع

  1. Camp, J. G., et al. Human cerebral organoids recapitulate gene expression programs of fetal neocortex development. Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (51), 15672-15677 (2015).
  2. Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies. Science. 345 (6194), 1247125(2014).
  3. Yang, Q., Hong, Y., Zhao, T., Song, H., Ming, G. L. What makes organoids good models of human neurogenesis. Front Neurosci. 16, 872794(2022).
  4. Sun, X. Y., et al. Generation of vascularized brain organoids to study neurovascular interactions. Elife. 11, e76707(2022).
  5. Paredes, I., et al. Oligodendrocyte precursor cell specification is regulated by bidirectional neural progenitor-endothelial cell crosstalk. Nat Neurosci. 24 (4), 478-488 (2021).
  6. Matsui, T. K., Tsuru, Y., Hasegawa, K., Kuwako, K. I. Vascularization of human brain organoids. Stem Cells. 39 (8), 1017-1024 (2021).
  7. Apostolou, E., et al. Progress and challenges in stem cell biology. Nat Cell Biol. 25 (2), 203-206 (2023).
  8. Pham, M. T., et al. Generation of human vascularized brain organoids. Neuroreport. 29 (7), 588-593 (2018).
  9. Cakir, B., et al. Engineering of human brain organoids with a functional vascular-like system. Nat Methods. 16 (11), 1169-1175 (2019).
  10. Shi, Y., et al. Vascularized human cortical organoids (vorganoids) model cortical development in vivo. PLoS Biol. 18 (5), e3000705(2020).
  11. Mansour, A. A., et al. An in vivo model of functional and vascularized human brain organoids. Nat Biotechnol. 36 (5), 432-441 (2018).
  12. Revah, O., et al. Maturation and circuit integration of transplanted human cortical organoids. Nature. 610 (7931), 319-326 (2022).
  13. Ribatti, D. Chicken chorioallantoic membrane angiogenesis model. Methods Mol Biol. 843, 47-57 (2012).
  14. Nowak-Sliwinska, P., Segura, T., Iruela-Arispe, M. L. The chicken chorioallantoic membrane model in biology, medicine and bioengineering. Angiogenesis. 17 (4), 779-804 (2014).
  15. Kennedy, D. C., Coen, B., Wheatley, A. M., Mccullagh, K. J. A. Microvascular experimentation in the chick chorioallantoic membrane as a model for screening angiogenic agents including from gene-modified cells. Int J Mol Sci. 23 (1), 452(2021).
  16. Garreta, E., et al. Fine tuning the extracellular environment accelerates the derivation of kidney organoids from human pluripotent stem cells. Nat Mater. 18 (4), 397-405 (2019).
  17. Kaisto, S., et al. Optimization of renal organoid and organotypic culture for vascularization, extended development, and improved microscopy imaging. J Vis Exp. (157), e60995(2020).
  18. Varzideh, F., et al. Human cardiomyocytes undergo enhanced maturation in embryonic stem cell-derived organoid transplants. Biomaterials. 192, 537-550 (2019).
  19. Komatsu, A., et al. The cam model for cic-dux4 sarcoma and its potential use for precision medicine. Cells. 10 (10), 2613(2021).
  20. Worsdorfer, P., et al. Generation of complex human organoid models including vascular networks by incorporation of mesodermal progenitor cells. Sci Rep. 9 (1), 15663(2019).
  21. Janzer, R. C., Jaff, M. C. Astrocytes induce blood-brain barrier properties in endothelial cells. Nature. 325 (6101), 253-257 (1987).
  22. Janzer, R. C. The blood-brain barrier: Cellular basis. J Inherit Metab Dis. 16 (4), 639-647 (1993).
  23. Lobrinus, J. A., Juillerat-Jeanneret, L., Darekar, P., Schlosshauer, B., Janzer, R. C. Induction of the blood-brain barrier specific ht7 and neurothelin epitopes in endothelial cells of the chick chorioallantoic vessels by a soluble factor derived from astrocytes. Brain Res Dev Brain Res. 70 (2), 207-211 (1992).
  24. Holash, J. A., Stewart, P. A. Chorioallantoic membrane (cam) vessels do not respond to blood-brain barrier (bbb) induction. Adv Exp Med Biol. 331, 223-228 (1993).
  25. Holash, J. A., Noden, D. M., Stewart, P. A. Re-evaluating the role of astrocytes in blood-brain barrier induction. Dev Dyn. 197 (1), 14-25 (1993).
  26. Giandomenico, S. L., Sutcliffe, M., Lancaster, M. A. Generation and long-term culture of advanced cerebral organoids for studying later stages of neural development. Nat Protoc. 16 (2), 579-602 (2021).
  27. Wagner-Amos, K., Seymour, R. S. Effect of local shell conductance on the vascularisation of the chicken chorioallantoic membrane. Respir Physiol Neurobiol. 134 (2), 155-167 (2003).
  28. Hamburger, V., Hamilton, H. L. A series of normal stages in the development of the chick embryo. 1951. Dev Dyn. 195 (4), 231-272 (1992).
  29. Paredes, I., Himmels, P., Ruiz De Almodovar, C. Neurovascular communication during cns development. Dev Cell. 45 (1), 10-32 (2018).
  30. Hogan, K. A., Ambler, C. A., Chapman, D. L., Bautch, V. L. The neural tube patterns vessels developmentally using the vegf signaling pathway. Development. 131 (7), 1503-1513 (2004).
  31. Bozoyan, L., Khlghatyan, J., Saghatelyan, A. Astrocytes control the development of the migration-promoting vasculature scaffold in the postnatal brain via vegf signaling. J Neurosci. 32 (5), 1687-1704 (2012).
  32. Himmels, P., et al. Motor neurons control blood vessel patterning in the developing spinal cord. Nat Commun. 8, 14583(2017).
  33. Di Lullo, E., Kriegstein, A. R. The use of brain organoids to investigate neural development and disease. Nat Rev Neurosci. 18 (10), 573-584 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

عضوانيات الدماغزراعة العضوانياتتطور الدماغ البشريالتطعيم بغشاء الكوريون السلوينضج العضوانياتصبغ الهيماتوكسيلين والإيوسينتطور الخلايا الدبقية الصغيرةنموذج وعائي
النمذجة المبكرة غير الموجهة للدماغ البشري العضوي الوعائي العصبي في الغشاء المشيمي الجنيني المتساهل
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.