تعتبر الخلايا الدبقية الصغيرة من أكثر الخلايا تنوعا في الجسم ، وهي قادرة على التكيف المورفولوجي والوظيفي. يتيح عدم تجانسها وتعدد وظائفها الحفاظ على توازن الدماغ ، بينما ترتبط أيضا بأمراض عصبية مختلفة. هنا ، يتم وصف تقنية لتنقية الخلايا الدبقية الصغيرة للحبل الشوكي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الإثراء السريع والفعال للخلايا الدبقية الصغيرة للحبل الشوكي للفأر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يحدد العمود الفقري الفقاريات ويشكل القناة الشوكية ، وهي تجويف يحيط بالحبل الشوكي ويحميه. يعتمد التطور السليم ووظيفة الجهاز العصبي المركزي للثدييات بشكل كبير على نشاط الضامة المقيمة المعروفة باسم الخلايا الدبقية الصغيرة. تظهر الخلايا الدبقية الصغيرة عدم التجانس وتعدد الوظائف ، مما يتيح التعبير الجيني المتميز والسلوك داخل الحبل الشوكي والدماغ. استكشفت العديد من الدراسات وظيفة الخلايا الدبقية الصغيرة الدماغية ، مع تفصيل طرق التنقية على نطاق واسع. ومع ذلك ، فإن تنقية الخلايا الدبقية الصغيرة من الحبل الشوكي في الفئران تفتقر إلى وصف شامل. في المقابل ، فإن استخدام كولاجيناز عالي النقاء ، على عكس المستخلص غير المكرر ، يفتقر إلى الإبلاغ داخل أنسجة الجهاز العصبي المركزي. في هذه الدراسة ، تم استئصال العمود الفقري والحبل الشوكي من الفئران C57BL / 6 البالغة من العمر 8-10 أسابيع. استخدم الهضم اللاحق كولاجيناز عالي النقاء ، واستخدمت تنقية الخلايا الدبقية الصغيرة تدرج الكثافة. خضعت الخلايا لتلطيخ لقياس التدفق الخلوي ، وتقييم الجدوى والنقاء من خلال تلطيخ CD11b و CD45. أسفرت النتائج عن متوسط صلاحية 80٪ ومتوسط نقاء 95٪. في الختام ، تضمن التلاعب بالخلايا الدبقية الصغيرة للفأر عملية الهضم باستخدام كولاجيناز عالي النقاء ، يليه تدرج الكثافة. أنتج هذا النهج بشكل فعال أعدادا كبيرة من الخلايا الدبقية الصغيرة للحبل الشوكي.
المقدمة
السمة المميزة للفقاريات هي العمود الفقري أو العمود الفقري ، حيث تم استبدال notochord بسلسلة من العظام المجزأة تسمى الفقرات ، مقسومة على أقراص الفقرية. هذا التعاقب من المواد العظمية يشكل القناة الشوكية ، وهو تجويف يحيط ويحمي الحبل الشوكي1. في جنس Rodentia ، يتكون العمود الفقري عادة من سبع فقرات عنق الرحم ، وثلاثة عشر فقرة صدرية ، وست فقرات قطنية ، وعدد متغير من الفقرات الذيلية 2,3. طول الحبل الشوكي مشابه لطول العمود الفقري، والخيط الطرفي هو تركيب غير عصبي يثبت الحبل الشوكي بالعجز. بالإضافة إلى ذلك ، تخرج الألياف العصبية من خلال الثقبة الفقرية1.
يعتمد التطور والوظيفة المناسبة للجهاز العصبي المركزي في الثدييات بشكل حاسم على نشاط الضامة المقيمة في الجهاز العصبي ، والتي تسمى الخلايا الدبقية الصغيرة4. على الرغم من أن الخلايا الدبقية الصغيرة وصفت في البداية بأنها خلايا بلعمية مقيمة في الدماغ ، فقد عزت الأبحاث الحديثة العديد من الوظائف الديناميكية إلى هذه الخلايا 5,6. يتراوح حجم الخلايا الدبقية الصغيرة من 7 إلى 10 ميكرومتر في التوازن. تعتبر من بين الخلايا الأكثر تنوعا في الجسم ويمكن أن تتكيف شكليا ووظيفيا مع بيئتها المتغيرة باستمرار7. تظهر هذه الخلايا عدم تجانس عالي خلال كل من المرحلتين الجنينية والبالغة 8,9 ، بينما في مرحلة البلوغ ، فإنها تظهر أيضا عدم تجانس وظيفي معقد بناء على سياقها الزماني المكاني10. يسمح عدم التجانس والوظائف المتعددة للخلايا الدبقية الصغيرة بالتعبير الجيني التفاضلي والسلوك في الحبل الشوكي والدماغ. لقد ثبت أن تعبير CD11b و CD45 و CD86 و CCR9 أعلى في الحبل الشوكي مقارنة بالدماغ 8,9.
توجد بروتوكولات متعددة لعزل الخلايا الدبقية الصغيرة الدماغية11,12 ؛ ومع ذلك ، لا يوجد سوى عدد قليل من الخلايا الدبقية الصغيرة للحبل الشوكي13,14. إن تحسين طريقة لتنقية الخلايا الدبقية الصغيرة من الحبل الشوكي يسهل تطوير دراسات متعددة تركز على اكتشاف فسيولوجيا الخلايا الدبقية الصغيرة. يهدف هذا البروتوكول إلى وصف استخراج بسيط وقابل للتكرار للغاية للحبل الشوكي للفأر وتنقية الخلايا الدبقية الصغيرة (الشكل 1).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت الدراسة وفقا للمعيار المكسيكي الرسمي NOM-062-ZOO-1999 ودليل رعاية واستخدام المختبر. تم الحصول على الموافقة على الدراسة من لجان البحث والأخلاقيات والسلامة البيولوجية في مستشفى المكسيك للأطفال (HIM/2023/006) ولجنة البحوث وأخلاقيات البيولوجيا في المستشفى العام في المكسيك إدواردو ليسياغا (DI/21/501/04/62). تم الحصول على ثلاثة فئران C57BL / 6 تتراوح أعمارهم بين 6 و 8 أسابيع من مستشفى مكسيكو للأطفال ، حيث تم تربيتهم في ظروف معزولة في رفوف جيدة التهوية ، وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية لرعاية واستخدامها.
1. تحضير المواد والكواشف
- قبل التسخينCa 2+ و Mg2+ مجانا PBS وكذلك محلول الملح المتوازن من Hank (HBSS) إلى 37 درجة مئوية.
- استكمل محلول HBSS ب 100 ميكروغرام / مل من الليبراز و 4 ميكروغرام / مل من DNase (HBSS-LD). تأكد من أن الحل يحافظ على درجة الحموضة الفسيولوجية من 7.4.
ملاحظة: 1 مل من محلول العمل لكل الحبل الشوكي ستكون ضرورية. - قم بإعداد محلول متساوي التوتر بنسبة 90٪ للطرد المركزي المتدرج الكثافة (متاح تجاريا ، انظر جدول المواد) وقم بتسخينه مسبقا إلى 37 درجة مئوية.
- قم بإعداد المخزن المؤقت للتلوين عن طريق الجمع بين مصل بقري الجنين المعطل بالحرارة بنسبة 5٪ (FBS) مع برنامج تلفزيوني ، وتخزين الخليط على الثلج.
- قبل التسخين جلوكوز النسر المعدل من Dulbecco (1 جم / لتر) (DMEM) إلى 37 درجة مئوية.
- استكمل وسط DMEM ب 10٪ FBS ، 2 mM L-glutamine ، 200 U / mL البنسلين ، 200 ميكروغرام / مل من الستربتومايسين ، و 500 بيكوغرام / مل من الأمفوتريسين B (انظر جدول المواد) لتحضير DMEM-S.
2. تشريح وإعداد الحبل الشوكي
- القتل الرحيم للفأر بجرعة زائدة داخل الصفاق من بنتوباربيتال بجرعة 150 مجم / كجم. تعقيم الصدر والظهر الماوس باستخدام 70 ٪ من الإيثانول.
ملاحظة: تأكد من نجاح القتل الرحيم قبل متابعة تشريح الفأر. - حلق منطقة الصدر القطني وثبت الأطراف على لوحة التشريح باستخدام شريط لاصق.
- باستخدام مشرط ، قم بعمل شق دقيق على طول خط الوسط الظهري من القذالي إلى المنطقة المقدسة (الشكل 2).
- بمساعدة المجهر الجراحي المجسم ، تشريح في طبقات حتى تصل إلى العمود الفقري القطني وتحديد القوس الساحلي الأخير.
ملاحظة: الأقواس الساحلية ال 13 مفصلية في الفقرات الصدرية. عند تشريحها ، تصبح مرئية متفوقة على الفقرة L12. - حدد آخر فقرة عنق الرحم والعجز ، ثم قم بعمل قطع لفصل العمود الفقري (الشكل 2).
- باستخدام ملقط التشريح ، قم بإجراء استئصال الصفيحة الفقرية الظهرية للفقرات لاستخراج الحبل الشوكي (الشكل 3A-D).
ملاحظة: باستثناء أول فقرتين من عنق الرحم (الأطلس والمحور) ، تشترك جميع الفقرات المتحركة في تصميم مورفولوجي مشترك في مناطق مختلفة (عنق الرحم أو الصدر أو أسفل الظهر). تتميز كل فقرة متحركة نموذجية بجسم فقري أسطواني في نهايتها الأمامية. يرتبط بالجزء الخلفي من الجسم قوس عظمي يعرف باسم القوس الفقري (القوس العصبي) ، ويتكون من الصفيحات والعمليات الشائكة. بين هذه الهياكل تكمن الثقبة الفقرية15. - إزالة الأعصاب الناشئة من خلال الثقبة (الجذور الظهرية والبطنية) التي تشكل الجهاز العصبي المحيطي وقد تحتوي على بلاعم متسللة (الشكل 3D).
ملاحظة: ليس من الضروري إزالة الأم الحنون أو السحايا لأن وسط تدرج الكثافة يزيل الخلايا النجمية الملوثة بشكل فعال. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الاحتفاظ بالسحايا يقلل من وقت التنقية ويعزز قابلية البقاء.
3. هضم الأنسجة وعزل الخلايا الدبقية الصغيرة
- ضع الحبل الشوكي على لوح التشريح ، وباستخدام مقص Vannas ، قم بتقطيع الحبل الشوكي إلى قطع 2 مم ، مما ينتج عنه 10 قطع في المتوسط.
- انقل أقسام الحبل الشوكي إلى أنبوب دقيق مسطح القاع سعة 2 مل (الشكل 3E ، F).
- أضف 1 مل من حل العمل HBSS-LD (الخطوة 1.2). احتضان في 37 درجة مئوية لمدة 25 دقيقة ، دوامة بقوة كل 5 دقائق.
- مرر محتويات كل عملية هضم من خلال مصفاة 40 ميكرومتر ، ثم أضف 7 مل من HBSS مع 2٪ FBS لتحييد الهضم.
- سحق الأنسجة المتبقية باستخدام مكبس حقنة سعة 1 مل. جهاز طرد مركزي التعليق في أنبوب مخروطي سعة 50 مل لمدة 5 دقائق عند 220 × جم ، 4 درجات مئوية.
- تخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة صغيرة سعة 1 مل ، وأعد تعليق الحبيبات في 2 مل من HBSS مع 2٪ FBS في أنبوب مخروطي سعة 15 مل. يمزج مع 2 مل من 90٪ متوسط تدرج الكثافة متساوي التوتر. جهاز طرد مركزي لمدة 25 دقيقة عند 160 × جم ، 18 درجة مئوية.
ملاحظة: استخدم التسارع البطيء وتجنب استخدام الفرامل. - استخدم ماصة نقل لاسترداد الواجهة ونقلها إلى أنبوب مخروطي سعة 15 مل. اغسل الخلايا ب 10 مل من PBS وأجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 220 × جم ، 4 درجات مئوية.
- أعد تعليق الخلايا في DMEM-S (الخطوة 1.6) واحتفظ بها مخزنة على الجليد.
4. تحديد النقاء / الجدوى
- لتحديد كمية الخلايا القابلة للحياة باستخدام غرفة مقياس الدم ، استخدم صبغة تريبان الزرقاء بنسبة 0.4٪ (انظر جدول المواد).
ملاحظة: في المتوسط ، يوفر الماوس الواحد 4-6 ملايين خلية. - لتحديد كمية الخلايا القابلة للحياة عبر مقياس التدفق الخلوي ، استخدم تلطيخ صبغة الفلورسنت التفاعلية للأمين المتاحة تجاريا (انظر جدول المواد).
- انقل 1 مليون خلية إلى أنبوب بوليسترين مستدير القاع (FACS) سعة 5 مل. تمييع صبغة الفلورسنت مع PBS بنسبة 1: 1000 (إنشاء حل العمل الجدوى).
- احتضان العينات بمحلول الصلاحية في الظلام عند 4 درجات مئوية لمدة 30 دقيقة. اغسل الخلايا باستخدام برنامج تلفزيوني بارد مرتين. أعد تعليق الخلايا في 400 ميكرولتر من المخزن المؤقت للتلطيخ (الخطوة 1.4).
- قم بسد الخلايا باستخدام 2.4G2 anti-FcRIII / I (انظر جدول المواد) في المخزن المؤقت للتلطيخ المثلج لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
- قم بصياغة كوكتيل تلطيخ الأجسام المضادة عن طريق إضافة الأجسام المضادة أحادية النسيلة ذات العلامات الفلورية CD45-PerCP و CD11b-eFluor 450 إلى مخزن التلوين المؤقت (بتخفيف 1: 300) (انظر جدول المواد).
ملاحظة: أثناء توفر كلتا الطريقتين ، اختر التقنية التي تتوافق بشكل أفضل مع البروتوكول التالي. - احتضان العينات مع كوكتيل تلطيخ الأجسام المضادة في الظلام عند 4 درجات مئوية لمدة 30 دقيقة. اغسل الخلايا بمحلول تلطيخ بارد مرتين. إعادة تعليق الخلايا في 400 ميكرولتر من العازلة تلطيخ.
- احصل على 250000 حدث على مقياس التدفق الخلوي ، كما هو موضح في استراتيجية البوابة في الخطوة 6 (الشكل 4).
5. تلطيخ المناعي
- ضع غطاء معالج مسبقا في بئر من 6 آبار.
ملاحظة: لمعالجة أغطية الغطاء ، ضعها في طبق بتري مع 500 ميكرولتر من محلول L-polylysine (0.01 مجم / مل ، انظر جدول المواد) واحتضانها لمدة 1 ساعة. بعد ذلك ، اغسلها ثلاث مرات بالماء المقطر واتركها حتى تجف. - زرع 200000 خلية على غطاء الغطاء المعالج باستخدام 500 ميكرولتر من محلول DMEM-S. احتضان لمدة 24 ساعة.
- قم بإزالة أغطية الغطاء وإصلاح الخلايا باستخدام 3.7٪ بارافورمالدهيد (PFA) لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. اغسل أغطية الغطاء ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني بارد.
- تتخلل الخلايا بنسبة 0.2٪ Triton X-100 في PBS لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، اغسل أغطية الأغطية ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني بارد. سد الخلايا مع 0.2٪ BSA في PBS لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
- قم بتخفيف الأجسام المضادة أحادية النسيلة ذات العلامات الفلورية (عند تخفيف 1: 300 ، انظر جدول المواد) في محلول الحجب واحتضانها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. اغسل أغطية الغطاء ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني بارد.
- ضع وسيط التثبيت الذي يحتوي على DAPI على الشريحة ، ثم أغلقه بغطاء غطاء.
ملاحظة: يمكن تحليل الشرائح على الفور باستخدام مجهر مضان أو مجهر متحد البؤر ، أو يمكن تخزينها لمدة تصل إلى 3 أشهر عند -20 درجة مئوية.
6. استراتيجية البوابات للخلايا الدبقية الصغيرة للحبل الشوكي
- قم بإنشاء مخطط نقطي وإنشاء بوابة لعزل الخلايا القابلة للحياة بناء على تلطيخ الجدوى وقناة الفلورسنت الفارغة16. استبعاد الخلايا غير القابلة للحياة.
- إنتاج قطعة أرض أخرى باستخدام معلمات التشتت الأمامية والجانبية لإزالة الحطام16.
- قم بتطوير مخطط نقطي إضافي وتحليل تعبير CD11b و CD45 للتمييز بين الخلايا الدبقية الصغيرة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
باستخدام أنسجة الحبل الشوكي للفأر ، تم إجراء الهضم الأنزيمي باستخدام خليط غني للغاية مع كولاجيناز وثيرموليسين. خضعت الأنسجة المهضومة الناتجة للمرور عبر مرشح 40 ميكرومتر للتخلص من المواد غير المهضومة. تم إثراء الخلايا التي تم جمعها من خلال تدرج كثافة Percoll ، مع 90 ٪ في الجزء السفلي و 45 ٪ في الجزء العلوي. ثم تم تلطيخ الخلايا المخصبة بالخلايا الدبقية الصغيرة داخل الواجهة بالأجسام المضادة CD45 و CD11b وإخضاعها لتحليل التدفق الخلوي (الشكل 1).
تشريح العمود الفقري الم...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تم تطوير العديد من البروتوكولات لدراسة الخلايا الدبقية الصغيرة بسبب أهميتها في توازن الدماغ. في هذه الطرق ، يتم الحصول على الخلايا الدبقية الصغيرة عادة من نصفي الكرة المخية للجرذان والفئران الجنينية أو حديثي الولادة17. تناول عدد محدود من الدراسات تنقية الخلايا الدبقية الصغيرة من الحبل الشوكي للفئران البالغة13,14. تتضمن هذه التقنيات الهضم الأنزيمي باستخدام كولاجيناز و / أو غراء جنبا إلى جنب مع الحمض النووي ، وغالبا ما يتم دمجه مع فصل التدرج...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل بمنح من المنح الدراسية المقدمة من المجلس الوطني للعلوم والتكنولوجيا (CONACYT) (702361). يعترف المؤلفون بالدكتوراه برنامج في العلوم الكيميائية البيولوجية من المدرسة الوطنية للعلوم البيولوجية التابعة للمعهد الوطني للفنون التطبيقية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أنابيب تجميع 15 مل | كورنينج ، الولايات المتحدة الأمريكية | 430790 | |
| 2 مل أنابيب دقيقة | Axygen ، الولايات المتحدة الأمريكية | MCT-200-G | |
| 2.4G2 مضاد ل FcR | BioLegend ، الولايات المتحدة الأمريكية | 101302 | |
| أنابيب تجميع 50 مل | كورنينج ، الولايات المتحدة الأمريكية | 430829 | |
| 70٪ إيثانول | |||
| مضاد حيوي مضاد للفطريات (البنسلين ، الستربتومايسين ، أمفوتريسين ب) | جيبكو ، الولايات المتحدة الأمريكية | 15240062 | |
| الأجسام المضادة CD11b eFluor 450 المضادة للفأر | eBioscience ، الولايات المتحدة الأمريكية | 48-0112 | |
| الأجسام المضادة CD45 PerCP المضادة للماوس ؛ | BioLegend ، الولايات المتحدة الأمريكية | 103130 | |
| محلول ملح متوازن (PBS) خال من الكالسيوم - مغنيسيوم | كورنينج ، الولايات المتحدة الأمريكية | 46-013-CM | |
| مصفاة الخلايا الزرقاء 40 مو ؛ م | كورنينج ، الولايات المتحدة الأمريكية | 352340 | |
| Costar 6-well Clear Not Treatated | كورنينج ، الولايات المتحدة | الأمريكية CLS3736 | |
| Coverslips | |||
| التدفئة الرقمية اهتزاز Drybath | Thermo Scientific Digital HS Drybath ، الولايات المتحدة | الأمريكية 88870001 | |
| تشريح ملقط للجراحة المجهرية | FT بواسطة DUMONT | ||
| DNase | Roche ، الولايات المتحدة | الأمريكية 4536282001 | |
| Dulbecco & acute ؛ s النسر المعدل حاد ؛ s الجلوكوز المتوسط والمرتفع (DMEM) | ميرك ، الولايات المتحدة الأمريكية | D6429 | |
| حلاقة كهربائية | |||
| أنبوب FACS | Thermo ، الولايات المتحدة الأمريكية | 352058 | |
| مصل الأبقار الجنينية (FBS) | PAN Biotech ، Alemania | P30-3306 | |
| مقياس التدفق الخلوي Cytoflex ؛ | بيكمان كولتر | ||
| هانك محلول ملح متوازن | ميرك ، الولايات المتحدة الأمريكية | H2387 | |
| L-glutamine | Corning ، الولايات المتحدة الأمريكية ؛ | 15393631 | |
| Liberase TM | روش ، الولايات المتحدة الأمريكية | 5401119001 | |
| غرفة نيوباور غرف العد | الصين | 1103 | |
| Pentobarbital | |||
| Percoll & nbsp ؛ | ميرك ، الولايات المتحدة الأمريكية | 17089101 | الطرد المركزي المتدرج الكثافة |
| محلول بولي ليسين | ميرك ، الولايات المتحدة الأمريكية | P8920 | |
| مشرط رقم 25 ؛ | HERGOM ، المكسيك | H23 | |
| Snaplock أنابيب الطرد المركزي الدقيقة 2 مل | Axygen ، الولايات المتحدة الأمريكية | 10011-680 | |
| مجهر مجني | فيلاب ، المكسيك | HG927831 | |
| مقص جراحي مستقيم (10 سم) | HERGOM ، المكسيك | ||
| مقص Vannas مستقيم | HERGOM ، المكسيك | ||
| Triton X100 | Merck ، الولايات المتحدة الأمريكية | X100 | |
| Trypan Blue Stain 0.4٪ | ميرك ، الولايات المتحدة الأمريكية | 15250-061 | |
| خلاط دوامة | DLAB ، الصين | 8031102000 | |
| Zombie Aqua Fixable Viability Kit | BioLegend ، الولايات المتحدة الأمريكية | 423102 | تلطيخ صبغة الفلورسنت التفاعلية بالأمين ؛ |
المراجع
- Schröder,, Moser,, Huggenberger, Neuroanatomy of the Mouse. , Springer, Switzerland. 59-78 (2020).
- Sengul, G., et al. Cytoarchitecture of the spinal cord of the postnatal (P4) mouse. Anat Rec. 295, 837-845 (2012).
- Bab, I., et al. Microtomographic atlas of the mouse skeleton. VIII, First ed, Springer. 205(2007).
- Nayak, D., et al. Microglia development and function. Annu Rev Immunol. 32, 367-402 (2014).
- Martinez, F. O., et al. Macrophage activation and polarization. Front Biosci. 13, 453-461 (2008).
- Masuda, T., et al. Microglia heterogeneity in the single-cell era. Cell Rep. 30 (5), 1271-1281 (2020).
- Prinz, M. Microglia biology: one century of evolving concepts. Cell. 179 (2), 292-311 (2019).
- de Haas, A. H., et al. Region-specific expression of immunoregulatory proteins on microglia in the healthy CNS. Glia. 56 (8), 888-894 (2008).
- Xuan, F. L., et al. Differences of microglia in the brain and the spinal cord. Front Cell Neurosci. 13, 504(2019).
- Paolicelli, R. Microglia states and nomenclature: A field at its crossroads. Neuron. 110 (21), 3458-3483 (2022).
- Li, Q., et al. Spinal IL-36γ/IL-36R participates in the maintenance of chronic inflammatory pain through astroglial JNK pathway. Glia. 67 (3), 438-451 (2019).
- Prinz, M., et al. Microglia and central nervous system-associated macrophages-from origin to disease modulation. Annu Rev Immunol. 39, 251-277 (2021).
- Yip, P. K., et al. Rapid isolation and culture of primary microglia from adult mouse spinal cord. J Neurosci Methods. 183 (2), 223-237 (2009).
- Akhmetzyanova, E. R., et al. Severity- and time-dependent activation of microglia in spinal cord injury. Int J Mo. Sci. 24 (9), 1-16 (2023).
- Mahadevan, V. Anatomy of the vertebral column. Surgery. 36 (7), 327-332 (2018).
- Krukowski, K., et al. Temporary microglia-depletion after cosmic radiation modifies phagocytic activity and prevents cognitive deficits. Sci Rep. 8 (1), 1-13 (2018).
- Cardona, A., et al. Isolation of murine microglial cells for RNA analysis or flow cytometry. Nat Protoc. 1, 1947-1951 (2006).
- Schmidt, V. M., et al. Comparison of the enzymatic efficiency of Liberase TM and tumor dissociation enzyme: effect on the viability of cells digested from fresh and cryopreserved human ovarian cortex. Reprod Biol Endocrinol. 16 (57), 1-14 (2018).
- Kusminski, C. M., et al. MitoNEET-parkin effects in pancreatic α- and β-cells, cellular survival, and intrainsular cross talk. Diabetes. 65 (6), 1534-1555 (2016).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
