هنا ، نقدم بروتوكولا لاستخراج السم من Trichogramma dendrolimi باستخدام مضيف اصطناعي تم إنشاؤه باستخدام فيلم البولي إيثيلين ومحلول الأحماض الأمينية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استخراج السم من الدبور الطفيلي Trichogramma dendrolimi باستخدام مضيف اصطناعي
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الدبابير الطفيلية هي مجموعة متنوعة من حشرات غشاء البكارة التي تعمل كموارد لا تقدر بثمن للمكافحة الحيوية للآفات. لضمان التطفل الناجح ، تقوم الدبابير الطفيلية بحقن السم في مضيفيها لقمع مناعة مضيفيها ، وتعديل نمو المضيفين ، والتمثيل الغذائي ، وحتى السلوك. مع أكثر من 600000 نوع تقديري ، فإن تنوع الدبابير الطفيلية يفوق تنوع السامة الأخرى ، مثل الثعابين والقواقع المخروطية والعناكب. سم الدبابير الطفيلي هو مصدر غير مستكشف للجزيئات النشطة بيولوجيا مع تطبيقات محتملة في مكافحة الآفات والطب. ومع ذلك ، فإن جمع سم الطفيليات يمثل تحديا بسبب عدم القدرة على استخدام التحفيز المباشر أو الكهربائي وصعوبة التشريح بسبب صغر حجمها. Trichogramma هو جنس من الدبابير الطفيلية الصغيرة (~ 0.5 مم) التي تستخدم على نطاق واسع للمكافحة البيولوجية للآفات lepidopteran في كل من الزراعة والغابات. هنا ، نبلغ عن طريقة لاستخراج السم من T. dendrolimi باستخدام مضيفات اصطناعية. يتم إنشاء هذه العوائل الاصطناعية مع فيلم البولي ايثيلين ومحاليل الأحماض الأمينية ومن ثم تلقيح مع الدبابير Trichogramma للتطفل. تم جمع السم وتركيزه في وقت لاحق. تتيح هذه الطريقة استخراج كميات كبيرة من سم Trichogramma مع تجنب التلوث من الأنسجة الأخرى الناتجة عن التشريح ، وهي مشكلة شائعة في بروتوكولات تشريح خزان السم. يسهل هذا النهج المبتكر دراسة سم Trichogramma ، مما يمهد الطريق لأبحاث جديدة وتطبيقات محتملة.
المقدمة
الدبابير الطفيلية هي حشرات غشاء البكارة الطفيلية التي تعد موارد مهمة للمكافحة البيولوجية1. هناك مجموعة واسعة من الدبابير الطفيلية ، مع أكثر من 600000 نوع تقديري2. يتجاوز تنوع الدبابير الطفيلية بكثير تنوع المفصليات السامة الأخرى ، مثل الثعابين والقواقع المخروطية والعناكب والعقارب والنحل. السم هو عامل طفيلي مهم في الدبابير الطفيلية. من أجل التطفل الناجح ، يتم حقن السم في المضيف ، مما يؤدي إلى تعديل سلوك المضيف والمناعة والتطور والتمثيل الغذائي3. علاوة على ذلك ، يظهر سم الدبابير الطفيلية تنوعا ملحوظا في هياكلها الجزيئية وأهدافها ووظائفها ، مما يعكس التطور المشترك المعقد مع مضيفيها. وبالتالي ، فإن الس....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. تربية الحشرات
- تغذية Corcyra cephalonica على دقيق الذرة عند درجة حرارة 26 ± 1 درجة مئوية والرطوبة النسبية من 40 ٪ ± 10 ٪.
- سلالة T. dendrolimi من حشرة جيلين في الداخل باستخدام بيض Corcyra cephalonica كمضيفين. تغذية دبور البالغين 10٪ ماء السكروز في أنابيب ذبابة الفاكهة عند درجة حرارة 26 ± 1 درجة مئوية ، الرطوبة النسبية 70٪ ± 10٪ ، الضوء (L): الظلام (D) فترة 14 ساعة: 10 ساعات.
2. إعداد بطاقات البيض فيلم البولي ايثيلين البلاستيك
- خذ فيلم بلاستيكي من البولي إيثيلين بطول 16 سم وعرض 12 سم وسمك 20 ميكرومتر. اضغط على 30 نتوءا نصف دائري....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم قياس تركيز البروتين لعينات السم التمثيلية باستخدام مجموعة مقايسة البروتين ، مع عرض النتائج في الجدول 1. أظهرت النتائج أن تركيز بروتين السم الذي تم جمعه بهذه الطريقة تراوح من 0.35 ميكروغرام / ميكرولتر إلى 0.46 ميكروغرام / ميكرولتر ، في حين أن السيطرة السلبية على محلول الأحماض الأمينية كان تركيز البروتين فقط من 0.03 ميكروغرام / ميكرولتر إلى 0.05 ميكروغرام / ميكرولتر. تركيز بروتين السم الذي تم جمعه بهذه الطريقة أعلى بكثير من تركيز التحكم السلبي ، مما يدل على أن هذه الطريقة يمكن أن تجمع سم الدبابير الطفيل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا ، نقدم طريقة لاستخراج السم من T. dendrolimi باستخدام مضيفات اصطناعية. النقاط الرئيسية في تجربة جمع السم هي كما يلي. (1) أثناء التحضير ، يجب تخدير T. dendrolimi بسرعة بتركيز مناسب من CO2. إذا كان تركيز CO2 منخفضا جدا ، فلن يكون كافيا لتخدير Trichogramma بسرعة. على العكس من ذلك ، إذا كان التركيز مرتفعا جدا ، فقد يموت Trichogramma ، مما يقلل من قدرتها على تطفل المضيف الاصطناعي. (2) يجب ضمان عقم محلول الأحماض الأمينية ، لأن تلوث محلول الأحماض الأمينية قد يؤثر سلبا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلف ما يكشف عنه ولا مصالح مالية متنافسة.
شكر وتقدير
ونعرب عن تقديرنا للدعم المالي المقدم من مؤسسة العلوم الطبيعية في مقاطعة هاينان (المنحة رقم 323QN262)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (المنحة رقم 31701843 و 32172483)، وصندوق جيانغسو للابتكار في مجال العلوم والتكنولوجيا الزراعية (المنحة رقم. CX (22) 3012 و CX (21) 3008) ، ومؤسسة "Shuangchuang Doctor" بمقاطعة Jiangsu (المنحة رقم 202030472) ، وصندوق بدء تشغيل جامعة نانجينغ الزراعية (المنحة رقم 804018).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10 و مو ؛ م نايلون صافي | Millipore | NY1002500 | لتصفية البيض |
| 10٪ كحول بولي فينيل | علاء الدين | P139533 | للجذب T. dendrolimi < / em> لوضع البيض |
| 10٪ ماء السكروز | كاشف سينوفارم الكيميائي | 10021463 | تغذية Trichogramma dendrolimi< / em> |
| 4x LDS تحميل العازلة | Ace Hardware | B23010301 | SDS-PAGE |
| Collection box | Deli | 8555 | Container for T. dendrolimi < / em>parasitism |
| Future PAGE 4– 12٪ (12 بئر) | Ace Hardware | J70236502X | SDS-PAGE |
| GenScript eStain L1 جهاز تلطيخ البروتين | GenScript | L00753 | SDS-PAGE |
| قضيب طحن الزجاج ؛ | Applygen | tb6268 | نتوءات نصف دائرية |
| L- Leucine | Solarbio | L0011 | مكونات المضيف الاصطناعي |
| L-Histidine | علاء الدين | A2219458 | مكونات المضيف الاصطناعي |
| L-Phenylalanine | Solarbio | P0010 | مكونات المضيف الاصطناعي |
| أجهزة الطرد المركزي الصغيرة | Scilogex | D1008 | الطرد المركزي |
| MOPS-SDS تشغيل العازلة | Ace Hardware | B23021 | SDS-PAGE |
| مجموعة فحص بروتين BCA الفورية Omni-Easy | Yamay Biomedical Technology | ZJ102 | لقياس تركيز البروتين |
| لوحة PCR من 96 حفرة | Thermo Fisher | AB1400L | نتوءات نصف دائرية ؛ |
| فيلم البولي إيثيلين البلاستيكي | Suzhou Aopang Trading ؛ | 001c5427 | بطاقة بيض اصطناعي |
| بروتين ملونة مسبقة (10 & ndash; 180 كيلو دالتون) | YiFeiXue Biotech | YWB007 | SDS-PAGE |
| الشريط المطاطي | قوانغتشو qianrui علم الأحياء والتكنولوجيا | 009 | تشديد الفيلم البلاستيكي وصندوق التجميع |
| حصيرة حاجز مطاط السيليكون ، 96 بئر ، ثقب دائري | Sangon Biotech | F504416-0001 | نتوءات نصف دائرية ؛ |
المراجع
- Pennacchio, F., Strand, M. R. Evolution of developmental strategies in parasitic hymenoptera. Annual Review of Entomology. 51, 233-258 (2006).
- Yan, Z. C., Ye, X. H., Wang, B. B., Fang, Q., Ye, G. Y. Research advances on....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
