مقالة منهجية

إنشاء نموذج تجريبي للفأر من ورم بطانة الرحم لدراسة العقم المرتبط به

DOI:

10.3791/66240

⸱

أبريل 5, 2024

 ,  ,  , 
1Department of Obstetrics and Gynaecology, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hong Kong, 2Reproduction and Development, Li Ka Shing Institute of Health Sciences, The Chinese University of Hong Kong, 3School of Biomedical Sciences, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hong Kong, 4Chinese University of Hong Kong-Sichuan University Joint Laboratory in Reproductive Medicine, The Chinese University of Hong Kong

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقدم هذه الدراسة نموذجا جديدا للفأر مصمم خصيصا لمحاكاة ورم بطانة الرحم ، وهو نوع فرعي مهم سريريا من الانتباذ البطاني الرحمي. من خلال استخدام الفئران C57BL / 6J ، يهدف النموذج إلى توضيح الآليات الفيزيولوجية المرضية الكامنة وراء العقم المرتبط بورم بطانة الرحم ، مما يوفر أداة محسنة لسد الفجوة المعرفية الحالية في الطب التناسلي.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ورم بطانة الرحم (OMA) ، وهو نوع فرعي من الانتباذ البطاني الرحمي يتميز بتكوين خراجات بطانة الرحم في المبيضين ، يصيب 17-44٪ من الأفراد الذين تم تشخيص إصابتهم بالانتباذ البطاني الرحمي. غالبا ما تعاني النساء المصابات ب OMA من ضعف الخصوبة ، ومع ذلك لا تزال الآليات الدقيقة الكامنة وراء العقم المرتبط ب OMA غير واضحة. والجدير بالذكر أن النماذج الحيوانية الحالية تحاكي الانتباذ البطاني الرحمي البريتوني السطحي (SUP) والانتباذ البطاني الرحمي العميق (DIE) ، مما يترك فجوة ملحوظة في الأبحاث التي تركز على OMA. استجابة لفجوة المعرفة ، تقدم هذه الورقة نموذجا رائدا لمحاكاة OMA وتقدم وصفا شاملا للتقنيات والإجراءات المستخدمة في النموذج. مع معدل نجاح مرتفع يبلغ 83٪ وخصوصية آفة المبيض ، يحمل هذا النموذج وعدا كبيرا لتعزيز فهمنا ل OMA ، لا سيما في سياق العقم. إنه يوفر منصة قيمة لإجراء أبحاث مستهدفة حول تحديات الخصوبة المرتبطة ب OMA، مما قد يمهد الطريق لتحسين الاستراتيجيات التشخيصية والعلاجية في مجال الطب التناسلي.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ورم بطانة الرحم (OMA) هو النوع الفرعي الأكثر انتشارا من الانتباذ البطاني الرحمي ، والذي لوحظ في حوالي 17-44٪ من الأفراد الذين تم تشخيص إصابتهم بالانتباذ البطانيالرحمي 1،2. يتميز بتكوين الخراجات بطانة الرحم داخل المبايض. هذه الأكياس ، التي يطلق عليها بالعامية "أكياس الشوكولاتة" ، تستمد اسمها من قوامها البني المميز الذي يشبه القطران3. بالإضافة إلى OMA، يمكن أن يظهر الانتباذ البطاني الرحمي أيضا على شكل الانتباذ البطاني الرحمي البريتوني السطحي (SUP) وبطانة الرحم المتطفلة العميقة (DIE). يشير SUP إلى الآفات الموجودة على البطانة البريتونية ، بينما يشير DIE إلى الآفات التي تخترق أكثر من 5 مم تحت السطح البريتوني4. يؤدي عدم التجانس في موقع الآفة ومظهرها وعمقها بين هذه الأنواع الفرعية من الانتباذ البطاني الرحمي إلى أعراض سريرية متنوعة وشدة مرض متغيرة5،6. يرتبط OMA بشكل خاص بمراحل الانتباذ البطاني الرحمي الأكثر حدة وقد تورط في العقم والالتصاقات الحوضية وزيادة خطر الإصابة بسرطان المبيض1،7،8،9.

يعد ارتباط الانتباذ البطاني الرحمي ، وخاصة OMA ، بالعقم مشكلة سريرية تثير قلقا بالغا. يوجد الانتباذ البطاني الرحمي في 25-50٪ من النساء المصابات بالعقم ، حيث تعاني 30-50٪ من النساء المصابات بالانتباذ البطاني الرحمي من العقم10،11،12،13،14. في حين أن آليات العقم المرتبطة ب OMA بالضبط لا تزال بعيدة المنال ، فقد أثيرت بعض الفرضيات. يقترح أحدهم أن الانتباذ البطاني الرحمي يؤدي إلى حالة التهابية مزمنة ، والتي يمكن أن تعطل وظيفة المبيض الطبيعية وتضعف جودة البويضات15،16. يقترح آخر فرط الحديد غير الطبيعي في السائل الجريبي للمبيض ، والذي يعتقد أنه مرتبط باضطراب نضج البويضات14. تتناول دراسات أخرى الاضطرابات في التنظيم الهرموني17 ، وجودة البويضات18 ، ونمو الجنين19.

تاريخيا ، لعبت نماذج القوارض دورا مهما في تعميق فهمنا للانتباذ البطاني الرحمي ، لا سيما في دراسة أمراضه ، وتأثيره على الخصوبة ، وآليات الألم20،21،22،23. تم استخدام القوارض ، وخاصة الجرذان والفئران ، على نطاق واسع كنماذج حيوانية في استكشاف علاقات السبب والنتيجة ، والآليات الأساسية ، وتقنيات التشخيص المحتملة ، والتدخلات العلاجية لهذاالمرض 22،24،25،26. من المهم أن ندرك أن جميع النماذج الحيوانية لها استخداماتها وقيودها الخاصة. يعتمد اختيار نموذج معين على النتيجة أو الجانب المحدد الذي يتم قياسه أو دراسته27. على سبيل المثال ، أظهر نموذج الفئران أن الإجهاد يمكن أن يؤدي إلى تفاقم مظاهر الانتباذ البطاني الرحمي والتأثير على المعلمات الالتهابية ، مما يوفر نظرة ثاقبة حول المحفزات المحتملة للمرض28.

في سياق أبحاث الانتباذ البطاني الرحمي ، هناك العديد من نماذج القوارض المستخدمة. أحد الأساليب الشائعة الاستخدام هو النموذج المتماثل ، والذي يتضمن زرع أنسجة رحم القوارض في التجويف البريتوني أو الأوعية المساريقية لنفس النوع29. يقدم هذا النموذج مزايا من حيث الكفاءة المناعية والملاءمة للدراسات طويلةالمدى 30. ومع ذلك ، تنشأ قيود بسبب التباين الجزئي بين أنسجة الرحم خارج الرحم المزروعة وخصائص آفات بطانة الرحم البشرية31. نهج آخر هو النموذج غير المتجانس ، حيث يتم زرع خزعة بطانة الرحم البشرية في فأر مثبطللمناعة 32. يسمح هذا النموذج باستخدام بطانة الرحم خارج الرحم البشرية كنسيج متبرع لتطور الآفة ، مما يوفر الصلاحيةالبناءة 32. ومع ذلك ، فإنه يعتمد على الفئران المثبطة للمناعة كمتلقين ، مما يعيق التقييم الشامل للاستجابات المناعية التي تنطوي عليها مسببات الاضطراب33. ومع ذلك ، من المهم الاعتراف بأن النماذج الحالية تركز بشكل أساسي على عكس الحالة المعممة SUP ، مما لا يلتقط بشكل كاف الخصائص الفريدة ل OMA و DIE34. حاليا ، هناك ندرة في النماذج المحددة المتاحة لدراسة DIE ، مع وجود عدد قليل فقط من النماذج ، بما في ذلك نموذج القوارض الحديث الذي طوره Yan et al.35. تؤكد هذه الندرة على الحاجة إلى مزيد من البحث وتطوير نماذج تلتقط بدقة الخصائص المحددة ل DIE. بالإضافة إلى ذلك ، فإن فهمنا ل OMA ، وخاصة ارتباطه الدقيق بالخصوبة ، لا يزال محدوداأيضا 26،36.

لمعالجة التحديات الحالية ، تقدم هذه الورقة نموذجا تجريبيا متماثلا تجريبيا جديدا مصمما لمحاكاة OMA على وجه التحديد. يهدف إلى تقديم رؤى فريدة حول الآليات المرضية الكامنة وراء العقم المرتبط ب OMA ، وبالتالي سد الفجوة المعرفية في هذا المجال الحاسم من الطب التناسلي. باختصار ، تم استخدام الفئران C57BL / 6J لسماتها الإنجابية الشبيهة بالإنسان. بعد تزامن دورة الشبق ، تم تقطيع أنسجة الرحم من الفئران المانحة وزرعها في جراب المبيض للفئران المتلقية بنسبة 1: 2. بعد فترة 4 أسابيع ، تم إجراء كل من الفحوصات المورفولوجية والنسيجية لآفات المبيض للتحقق من صحة وجود OMA وتقييم أي رتق جريبي مرتبط. مع معدل نجاح 83٪ ، يوفر هذا النموذج للباحثين منصة موثوقة لدراسات OMA ، مع التركيز على تطور الآفة على وجه التحديد في المبايض لإجراء فحوصات مركزة.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية التي أجريت في هذه الدراسة وتنظيمها بموجب البروتوكول رقم 21-203-MIS_ [C] من قبل اللجنة الأخلاقية للجامعة الصينية في هونغ كونغ.

1. تأقلم واختياره

  1. تحضير الفئران
    1. احصل على 18 فأرا C57BL / 6J (إناث أوليات ، تتراوح أعمارهن بين 8-9 أسابيع: 6 متبرعين ، 12 مستفيدا) من مورد حسن السمعة. التحقق من الشهادات الصحية.
    2. حافظ على جميع الفئران في بيئة سكنية خاضعة للرقابة: 22-24 درجة مئوية ، ومستويات الرطوبة بين 40٪ و 60٪ ، ومع دورة إضاءة / ظلام لمدة 12 ساعة. استخدم الهواء المفلتر بتقنية HEPA، إن وجد.
    3. اسمح بالتأقلم لمدة 72 ساعة للفئران مع الوصول المستمر إلى الطعام والماء ، مما يقلل من التفاعل البشري لتقليل التوتر.
  2. تزامن الدورة الوحشية
    1. جمع الفراش الذي يحتوي على الفيرومونات الذكور. قدمه إلى أقفاص الإناث لمدة 48 ساعة.
  3. علم الخلايا المهبلية
    1. إجراء علم الخلايا المهبلية في صباح اليوم التالي.
      ملاحظة: من الضروري إجراء مسحة في وقت ثابت من اليوم ، عادة 9:00 صباحا.
      1. قم بإعداد مسحات قطنية مزدوجة الرأس ، و PBS معقم ، وطبق بتري مقاس 35 مم ، وشرائح زجاجية مسبقا. استغن عن 10 مل من PBS في طبق بتري. اغمر أحد طرفي قطعة القطن في PBS للسماح لها بامتصاص السائل.
      2. أخرج فأرا واحدا برفق من قفصه وضعه على غطاء قفص فارغ.
      3. أمسك الذيل باستخدام إصبع الإبهام والسبابة بيد واحدة ، وباليد الأخرى خذ قطعة القطن المبللة وأدخلها بدقة في مهبل الفأر. أدخل بعناية طرف عصا المسحة على عمق حوالي 1.0 سم في مهبل الفأر. قم بتدوير المسحة برفق ، مع الحفاظ على زاوية حوالي 45 درجة على المحور الطويل لجسم.
        ملاحظة: يمكن أن يؤدي تدوير المسحة ببطء أثناء الإدخال إلى تسهيل إجراء أكثر سلاسة وتقليل التحفيز المحتمل لعنق الرحم.
      4. قم بإزالة الخلايا برفق من تجويف المهبل والجدران عن طريق تدوير المسحة باستمرار ، ثم اسحب المسحة بعناية.
        ملاحظة: أثناء هذه العملية ، تأكد من تدوير المسحة باستمرار مع توخي الحذر من ملامسة الشعر المحيط. بعد ذلك ، اسحب المسحة بعناية لتجنب أي تلوث محتمل.
      5. انقل الخلايا المجمعة عن طريق لف طرف المسحة برفق على شريحة زجاجية نظيفة ومسماة مسبقا.
        ملاحظة: يجب التخلص من عصا المسحة بعد نقل الخلايا إلى شرائح ، ويجب استخدام واحدة جديدة لكل.
      6. افحص الشرائح تحت المجهر للكشف عن الخلايا الظهارية المتقرنة. ابحث عن الوجود المنتظم للخلايا الظهارية المتقنية في علم الخلايا المهبلية ، مما يدل على مرحلة الشبق. التقط الصور وسجل الملاحظات.
        ملاحظة: مع الخبرة المناسبة ، ليس من الضروري تلطيخ اللطاخات المهبلية. ومع ذلك ، إذا لم يتمكن المجرب من "قراءة" اللطخات دون تلطيخها ، فمن الضروري ذلك.

2. إنشاء نموذج الورم البطاني الرحمي

ملاحظة: حدد الفئران فقط في مرحلة الشبق كفئران مانحة ومتلقية في المؤسسة النموذجية. عند إجراء تجارب على فأر واحد ، تأكد من أنه بعيد عن أنظار الآخرين وأنه لا يتم إعادة إدخاله إلى شركة الأخرى حتى يتم تعافيه تماما. يمكن العثور على الرسم البياني لتوليد النموذج في الشكل 1.

  1. تحضير أنسجة المتبرع بها
    1. تخدير الفئران المانحة بمزيج من الكيتامين (75 ملغم/كغ) والزيلازين (10 ملغم/كغ). القتل الرحيم للفئران المانحة عن طريق نقل عنق الرحم تحت التخدير.
    2. تطهير منطقة البطن بقطعة 70٪ من الإيثانول.
    3. استخدم مقصا جراحيا معقما لإنشاء شق (1 سم) على طول خط الوسط للبريتونيوم لكشف الطبقة العضلية. اختر زوجا آخر من المقصات الجراحية لقطع طبقة العضلات والكشف عن تجويف الحوض.
    4. أغلق أطراف الملقط وارفع الأمعاء برفق باستخدام الجزء المركزي الحاد.
    5. حدد موقع أنسجة الرحم والمبيض. إجراء تشريح معقم لقرن الرحم بالكامل ، بما في ذلك قرني الرحم ، مع التأكد من أن الحجم التقريبي للقطعة التي يتم إزالتها هو ~ 1.5 سم في الطول. ضع الأنسجة المستأصلة في طبق بتري يحتوي على PBS وقم بإزالة أي أنسجة دهنية زائدة.
    6. قم بتشريح الأنسجة بدقة إلى قطع 1 مم³ باستخدام مشرط معقم. حافظ على رطوبة الأنسجة عن طريق إضافة PBS بشكل دوري.
  2. إجراء الزرع
    1. تخدير الفئران المتلقية بمزيج من الكيتامين (75 ملغم/كغ) والزيلازين (10 ملغم/كغ).
    2. ضع مرهم العين لمنع جفاف العين أثناء الجراحة. ضع الفئران في وضع ضعيف على لوح جراحي معقم.
    3. حدد موقع الجراحة عن طريق التلاعب برفق بالساقين الخلفيتين للفأر ، مع بروز عظمي واضح تحت الجلد. تعمل نقطة البروز هذه ، التي يمكن رؤيتها بوضوح من خلال الجلد ، كعلامة تشريحية موثوقة لمبايض الفأر المتلقي أثناء العملية الجراحية.
    4. حلق موقع الجراحة ، مع التأكد من تنظيف 150٪ من المنطقة المحيطة به من الفراء. بعد ذلك ، قم بتطهير الجلد بجولات متناوبة من البيتادين و 70٪ كحول 3 مرات على الأقل. استخدم ستارة جراحية معقمة لمنع ملامسة الأنسجة والأدوات المعقمة والخيوط مع أي فراء متبقي. أخيرا ، قم بإنشاء شق جانبي دقيق (3-5 مم) في موقع الجراحة المحدد مسبقا.
    5. تثبيت المبيض باستخدام ملقط اليد غير السائد. حقن 100 ميكرولتر من PBS برفق في الجراب المبيضي ، مع ملاحظة الانفصال الطفيف.
    6. اصنع شقا صغيرا في الجراب. زرع شظايا أنسجة الرحم (1 مم³) باستخدام ملقط دقيق.
      ملاحظة: تجنب الإفراط في الحشو لمنع الضغط على الأنسجة المحيطة.
    7. بالنسبة للجراحة الصورية، كرر جميع الخطوات باستثناء الخطوة 2.2.6.
  3. رعاية ما بعد الجراحة
    1. خياطة طبقات العضلات بخيوط قابلة للامتصاص (أي 5-0 فيكريل) والجلد بخيوط غير قابلة للامتصاص (أي 5-0 نايلون).
    2. ضع الماوس على وسادة تسخين مضبوطة على 37 درجة مئوية حتى يعود الوعي الكامل. راقب التنفس وانتظر حتى تتحول الأطراف إلى اللون الوردي.
    3. تطبيق البوبرينورفين (0.1 ملغ/كغ، تحت الجلد) لتسکین الألم كل 12 ساعة لمدة 48 ساعة. تحقق من علامات الألم أو العدوى أو الضيق كل 8 ساعات لأول 24 ساعة ثم 3 مرات يوميا لمدة 3 أيام قادمة.
      ملاحظة: لا يترك دون رقابة حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي.

3. التحقق من صحة النموذج

  1. التحقق الإجمالي
    1. بعد 4 أسابيع ، قم بتخدير الفئران المتلقية باستخدام مزيج من الكيتامين (75 مجم / كجم) والزيلازين (10 مجم / كجم). ثم ، تحت التخدير العميق ، قتل الفئران عن طريق إجراء نقل عنق الرحم.
    2. قم بإجراء شق خط الوسط وكشف تجويف البطن لفحص الأعضاء.
    3. استخرج المبايض مع وجود آفات مرئية والتقط صورا فوتوغرافية.
    4. افحص بدقة بحثا عن آفات بطانة الرحم الدخيلة.
  2. التحقق النسيجي
    ملاحظة: نظرا لوجود مذيبات عطرية مزعجة في التجارب النسيجية ، يجب إجراؤها في غطاء الدخان.
    1. ثبت المبايض مع الآفات في الفورمالين المحايد بنسبة 10٪.
    2. قم بمعالجة الأنسجة باتباع نفس الإجراءات كما هو موضح من قبل Adeniran et al.37 ، بما في ذلك تخصيص الأنسجة والتثبيت والتضمين.
    3. الأنسجة المقطعة بشكل متسلسل بسمك 4-5 ميكرومتر ، تطفو في حمام مائي عند 45 درجة مئوية ، وتوضع على شرائح زجاجية. قم بتسمية الشرائح بوضوح برقم الماوس وجانب المبيض ورقم القسم. يجف طوال الليل عند 37 درجة مئوية.
    4. تلطيخ PAS-hematoxylin
      1. إزالة البارافين: ضع الشرائح في الزيلين أو بديل الزيلين لإزالة البارافين.
        ملاحظة: قد تحتاج إلى تنفيذ هذه الخطوة عدة مرات.
      2. الإماهة: أعد ترطيب أقسام الأنسجة تدريجيا عن طريق وضع الشرائح في سلسلة من تركيزات الإيثانول المتناقصة (100٪ ، 95٪ ، 80٪ ، 70٪).
      3. العلاج الحمضي الدوري: قم بتغطية أقسام الأنسجة بمحلول حمضي دوري بنسبة 1٪ واتركها لمدة 5-10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
        ملاحظة: تعمل هذه الخطوة على أكسدة مجموعات الجليكول في الأنسجة إلى مجموعات الألدهيد ، مما يسمح بالتفاعل مع كاشف شيف وتشكيل بقعة أرجوانية وردية للإشارة إلى هياكل المبيض.
      4. اشطف الشرائح جيدا بالماء المقطر لإزالة أي حمض دوري متبقي.
      5. تلطخ أقسام الأنسجة بمحلول شيف لمدة 15 دقيقة.
      6. اشطف الشرائح أولا بماء الصنبور الساخن الجاري لإزالة البقع الزائدة ، ثم في الماء المقطر.
      7. قم بتلطيخ الأقسام ب 1 جم / لتر من الهيماتوكسيلين من ماير لمدة 2-3 دقائق.
      8. اشطف الشرائح بماء الصنبور الجاري لمدة 2-3 دقائق.
      9. ضع كاشف أزرق لمدة 30 ثانية.
      10. اشطف الشرائح بالماء المقطر.
      11. قم بتجفيف الأقسام تدريجيا عن طريق غمرها في زيادة تركيزات الإيثانول (70٪ و 80٪ و 95٪ و 100٪).
      12. اغمر الأقسام في عامل مقاصة (على سبيل المثال ، الزيلين) لجعلها شفافة.
      13. ضع وسيطا للتثبيت على الأقسام الموجودة على الشرائح وضع غطاء برفق فوق الأقسام ، مع التأكد من عدم وجود فقاعات هواء. اترك الشرائح تجف في الهواء في غطاء المحرك لتسهيل تصلب وسط التثبيت.
    5. افحص تحت المجهر الضوئي. توثيق وجود غدد بطانة الرحم والسدى والخراجات النزفية التي تؤكد الانتباذ البطاني الرحمي في المبيض.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التأسيس الناجح ل OMA
من بين 12 فأرا خضعت لبروتوكول الزرع ، أظهرت 10 آفات OMA مميزة ، على المستوى التشريحي والنسيجي الإجمالي ، مما يترجم إلى معدل نجاح 83٪. كشف الفحص الإجمالي عن آفات مملوءة بالسوائل ملتصقة بالمبايض ، تذكرنا بعروض OMA السريرية (الشكل 2). أكد التدقيق النسيجي المرضي ، كما هو موضح في الشكل 3 ، الزرع الناجح لأنسجة بطانة الرحم خارج الرحم. علاوة على ذلك ، أدى تسلل آفات بطانة الرحم إلى رتق هائل للبصيلات بجانب الغرسات ، مما يشير إلى تداخلها مع بيئة المبيض.

خصوصية النموذج
كان من الأهمية بمكان لصحة النموذج خصوصيته لالتهاب بطانة الرحم المبيضي. بعد الفحص الشامل ، لم يتم تحديد أي غرسات بطانة الرحم الدخيلة في أي عضو آخر في الحوض أو البطن ، مما يؤكد دقة النموذج وإمكاناته كأداة قوية للتحقيق في ورم بطانة الرحم والعقم المرتبط به.

figure-results-1
الشكل 1: توليد نموذج الورم البطاني الرحمي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

figure-results-2
الشكل 2: التشريح الإجمالي لورم بطانة الرحم. بالمقارنة مع مجموعة التحكم الزائفة ، كان النمو الكيسي خارج الرحم للبطانة الرحم مرئيا بالاشتراك مع مورفولوجيا المبيض بعد 4 أسابيع من الزرع في مجموعة OMA في التشكل. الخطوط العريضة المتقطعة الزرقاء: آفة بطانة الرحم. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-3
الشكل 3: قسم ملطخ نسيجي لآفة بطانة الرحم من نموذج الفأر. بالمقارنة مع المجموعة الضابطة الزائفة ، كان النمو الكيسي خارج الرحم في بطانة الرحم مرئيا بالاشتراك مع المبيض بعد 4 أسابيع من الزرع في مجموعة OMA في الأنسجة. تشير الأسهم السوداء إلى بصيلات الأذن. أشرطة المقياس = 0.5 مم. اختصار: OMA = ورم بطانة الرحم. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يؤكد انتشار OMA بين الإناث في العالم على مصدر قلق صحي خطير38. بالإضافة إلى الأعراض العامة للانتباذ البطاني الرحمي ، يجلب OMA تحديات إضافية للخصوبة ، بما في ذلك آلام الحوض الشديدة ، واحتمال التواء المبيض ، وغيرها من الآثار البارزة39،40. في حين أن فهم التسبب في OMA وتطوره يكتنفه الغموض إلى حد كبير ، فإن الفراغ المعرفي لا يعيق صياغة استراتيجيات علاجية مستهدفة فحسب ، بل يعني أيضا أن العديد من النساء لا يزلن يعانين من علاجات دون المستوى الأمثل وأعراض متكررة. إن قرار العديد من النساء الحديثات بتأجيل الإنجاب يزيد من تضخيم مخاوف الخصوبة المتعلقة ب OMA، مما يجعل من الضروري فهم الفيزيولوجيا المرضية ومعالجتها بشكل شامل.

تاريخيا ، كان أحد أهم العوائق التي تحول دون تعزيز فهمنا ل OMA هو عدم وجود نموذج حيواني حازم ودقيق. في حين تم استكشاف العديد من النماذج في الماضي ، إلا أنها غالبا ما فشلت في إعادة إنتاج خصوصيات OMA أو إدخال متغيرات مربكة إضافية بسبب ظهور آفات في أعضاء أخرى غير المبايض41. قمنا بتطوير نموذج فأر لتكرار OMA وتحسين فهمنا للمرض. تضمنت تقنيتنا الجراحية زرع أنسجة الرحم المفرومة في جراب المبيض للفئران لضمان تطور آفات بطانة الرحم في المبايض. سمحت لنا المراقبة الدقيقة بعد الجراحة بتقييم تطور OMA وضمان رفاهية الفئران. لتعزيز أهمية النموذج ، حافظنا على جراب المبيض سليما بدلا من إزالته. يهدف هذا التغيير إلى منع تسرب الغرسات إلى الأعضاء الأخرى وضمان توطين الآفات في المبايض. بالإضافة إلى ذلك ، عالجنا المضاعفات المحتملة ، مثل النزيف أو العدوى ، أثناء العملية. في هذه الدراسة ، تم استخدام تلطيخ PAS للكشف عن وجود المخاط ، والذي يتم إجراؤه بشكل شائع لتقييم أنسجة بصيلات المبيض42،43. يعد تحديد بصيلات الرئين في أقسام المبيض المجاورة للآفة بطانة الرحم دليلا حاسما على كيفية تأثير الانتباذ البطاني الرحمي سلبا على نمو البصيلات43،44،45. تحمل هذه النتيجة أهمية كبيرة لمزيد من التحقيقات في العقم المرتبط بورم بطانة الرحم ، كما يدعمه نموذجنا. سمح دمج التحقق النسيجي بفهم شامل للتغيرات المرضية المرتبطة بالانتباذ البطاني الرحمي في نموذجنا. يعزز هذا التضمين موثوقية وأهمية النتائج التي توصلنا إليها ويساعد في إثبات العلاقة بين الانتباذ البطاني الرحمي وضعف المبيض. من المهم أيضا الاعتراف بقيود تقنيتنا. في حين أن هذا النموذج نجح في تكرار آفات المبيض المرتبطة ب OMA ، إلا أنه قد لا يلتقط تعقيد الانتباذ البطاني الرحمي بشكل كامل. ترجمة النتائج من النماذج الحيوانية إلى البشر لها قيود متأصلة بسبب الاختلافات بين الأنواع.

في المقابل ، تعتمد هذه الدراسة على الأبحاث السابقة حول نماذج فأر الانتباذ البطاني الرحمي المبيضي ، حيث تم إجراء إجراء مماثل لزرع قرون الرحم في المبايض46. ومع ذلك ، هناك اختلافات ملحوظة بين هذه الطريقة والنماذج السابقة. أولا ، يشكل هذا النموذج آفات حصريا على المبايض ، بينما أظهر النموذج السابق آفات بطانة الرحم في الأعضاء الأخرى أيضا ، وليس فقط في المبايض. هذا التمييز يجعل نموذجهم أكثر عرضة لتقليد الأنواع الفرعية المشتركة من الانتباذ البطاني الرحمي بدلا من أن يكون خاصا ب OMA. يمكن مظهرنا المركز الباحثين من التركيز بشكل خاص على الفروق الدقيقة في OMA دون التأثير المربك للآفات في الأعضاء الأخرى. من خلال التغلب على هذه القيود ، يوفر نموذجنا تمثيلا أكثر دقة ل OMA ويعمل كمنصة قوية للتحقيقات المستقبلية. ثانيا ، يوضح هذا النموذج معدل نجاح جدير بالثناء بنسبة 83٪ في عكس OMA ، مما يضمن دقة عالية في إعادة إنتاج المرض.

تجدر الإشارة إلى أن تكرار OMA يمثل مصدر قلق كبير ، حيث تعاني العديد من النساء من أعراض متكررة حتى بعد تدخلات العلاج الأولية. قامت العديد من الدراسات بتقييم تكرار الانتباذ البطاني الرحمي والاختبارات التشخيصية في هذا السياق. على سبيل المثال ، ييلدز وآخرون ناقش استخدام الموجات فوق الصوتية عبر المهبل كأداة تشخيصية للكشف عن علامات وأنماط الموجات فوق الصوتية المحددة للتشخيص الدقيق ومراقبة التكرار47. ركزت دراسة أخرى على المتابعة طويلة الأمد للنساء المصابات بالانتباذ البطاني الرحمي وقيمت معدل التكرار بعد العلاجالجراحي 48. تؤكد هذه الدراسة على أهمية استراتيجيات العلاج الفردية القائمة على خصائص المرض وعوامل المريض لتقليل مخاطر تكرار الإصابة علاوة على ذلك ، فحص بعض الباحثين إمكانات المؤشرات الحيوية المنتشرة للتنبؤ بتكرار الانتباذ البطانيالرحمي 49. تستكشف الدراسة علامات جزيئية محددة وارتباطها بتكرار المرض ، مما يوفر رؤى حول تطوير الاختبارات التشخيصية غير الغازية وأساليب الإدارة الشخصية. تسلط هذه الدراسات الضوء على الجهود المستمرة لفهم ومعالجة تكرار الانتباذ البطاني الرحمي وتطوير الاختبارات التشخيصية لتحسين نتائج المرضى. يمكن أن يساهم دمج المعرفة من هذه الدراسات في أبحاث نموذج الفئران OMA في فهم شامل للمرض وأنماط التكرار واستراتيجيات التشخيص المحتملة لمراقبة وإدارة OMA.

في الختام ، يعد إنشاء نموذج الفأر OMA المحدد هذا بمثابة حجر الزاوية لعصر جديد من البحث في مجال الانتباذ البطاني الرحمي. من خلال معالجة فجوة طويلة الأمد ، فإنها تعد بسلسلة من الرؤى والاختراقات التي يمكن أن تحدث ثورة في الطريقة التي نفهم بها ورم بطانة الرحم ونعالج وربما نمنعه ، مما يؤدي إلى نتائج سريرية محسنة وتحسين نوعية الحياة للنساء المتضررات. الأهم من ذلك ، من خلال مقارنة هذه الطريقة بنماذج OMA السابقة ودمج نتائج الدراسات حول تكرار الانتباذ البطاني الرحمي والاختبارات التشخيصية ، يمكننا زيادة تعزيز أهمية بحثنا وقابليته للتطبيق في السياق الأوسع لأبحاث الانتباذ البطاني الرحمي ورعاية المرضى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم تمويل هذه الدراسة من قبل مخطط البحث القائم على الموضوع الممنوح من قبل مجلس المنح البحثية لحكومة هونغ كونغ للمنطقة الإدارية الخاصة (T13-602 / 21-N).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1 سم مكعب حقنة مع إبرة 25 جرامBD Biosciences301320
10 مم طبق زراعة الأنسجةصقر353001
10٪ فورمالين مخزنفيشر العلميةSF100-4
10x المحلول الملحي الفوسفات (PBS)فيشر العلميةرقم 9625
إبرة 30 جرامBD Biosciences305107
5-0 خياطة حريرية مضفرة سوداء غير قابلة للامتصاصشركة إيثيكوندبليو 500 إتش
70٪ إيثانول
شرائح مجهر لاصقةمارينفيلد810401
حقن البوبرينورفين ميد فيت الدوليةRXBUPRENOR5
مسحة قطن برأسينسانيو المحدودةهوبي -340
ملقط ناعمأدوات العلوم الجميلة11254-20
الكيتامينالفسان الدولية بي في2203095-08
الأنابيب الدقيقةكورنينج MCT-150-C
حامل إبرةشركة إكسلتا2827-NH-35-SE-ND
مرهم العيونالمستحضرات الصيدلانية الرئيسية10033691
طقم صبغة حمض شيف الدوري (PAS)   ؛أبكامأب150680
قفازات معقمة خالية من المسحوقفيشر العلمية19020558
معالجة/تضمين الكاسيتفيشر العلمية15-197-700 أ
مشرط مقاس 3فيشر العلمية22-079-657
ملقط صغير مسنن شبه منحنيشركة روبوز للأدوات الجراحيةآر إس-5135
مقص جراحي صغيرشركة روبوز للأدوات الجراحيةآر إس-5850
مجهر ضوئي قياسيلتقييم مسحات الخلايا المهبلية والتحليل النسيجي.
شفرات مشرط فولاذية # 10ب. براونبي بي 510
شاش معقمميديكومإتش إم دبليو إس 077
أطباق بتري زجاجية معقمة من بيركسكورنينج70160-101
وسادة كهربائية منظمة حراريا   ؛
فيكريل رابيد (بولي جلاكتين 910) خياطة قابلة للامتصاصشركة إيثيكوندبليو 9918
زيلازين الفسان الدولية بي في2110333-10

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Khan, K. N., et al. Pelvic pain in women with ovarian endometrioma is mostly associated with coexisting peritoneal lesions. Hum Reprod. 28 (1), 109-118 (2013).
  2. Gałczyński, K., Jóźwik, M., Lewkowicz, D., Semczuk-Sikora, A., Semczuk, A. Ovarian endometrioma - a possible finding in adolescent girls and young women: A mini-review. J Ovarian Res. 12 (1), 104(2019).
  3. Tan, Z., et al. Impacts of endometrioma on ovarian aging from basic science to clinical management. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 1073261(2022).
  4. Khan, K. S., et al. Mri versus laparoscopy to diagnose the main causes of chronic pelvic pain in women: A test-accuracy study and economic evaluation. Health Technol Assess. 22 (40), 1-92 (2018).
  5. Nisenblat, V., et al. Blood biomarkers for the non-invasive diagnosis of endometriosis. Cochrane Database Syst Rev. 2016 (5), 012179(2016).
  6. Harirchian, P., et al. Lesion kinetics in a non-human primate model of endometriosis. Hum Reprod. 27 (8), 2341-2351 (2012).
  7. Santulli, P., et al. Endometriosis-related infertility: Ovarian endometrioma per se is not associated with presentation for infertility. Hum Reprod. 31 (8), 1765-1775 (2016).
  8. Dai, Y., Li, X., Shi, J., Leng, J. A review of the risk factors, genetics and treatment of endometriosis in chinese women: A comparative update. Reprod Health. 15 (1), 82(2018).
  9. Younis, J. S. Endometriosis-associated ovarian cancer: What are the implications for women with intact endometrioma planning for a future pregnancy? A reproductive clinical outlook. Biomolecules. 12 (11), 1721(2022).
  10. Bonavina, G., Taylor, H. S. Endometriosis-associated infertility: From pathophysiology to tailored treatment. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 1020827(2022).
  11. Filip, L., et al. Endometriosis associated infertility: A critical review and analysis on etiopathogenesis and therapeutic approaches. Medicina (Kaunas). 56 (9), 460(2020).
  12. Tanbo, T., Fedorcsak, P. Endometriosis-associated infertility: Aspects of pathophysiological mechanisms and treatment options. Acta Obstet Gynecol Scand. 96 (6), 659-667 (2017).
  13. Bulletti, C., Coccia, M. E., Battistoni, S., Borini, A. Endometriosis and infertility. J Assist Reprod Genet. 27 (8), 441-447 (2010).
  14. Ni, Z., et al. Iron-overloaded follicular fluid increases the risk of endometriosis-related infertility by triggering granulosa cell ferroptosis and oocyte dysmaturity. Cell Death Dis. 13 (7), 579(2022).
  15. Mohammed Rasheed, H. A., Hamid, P. Inflammation to infertility: Panoramic view on endometriosis. Cureus. 12 (11), e11516(2020).
  16. Jing, X., et al. Systemic inflammatory response markers associated with infertility and endometrioma or uterine leiomyoma in endometriosis. Ther Clin Risk Manag. 16, 403-412 (2020).
  17. Marcellin, L., et al. Serum antimullerian hormone concentration increases with ovarian endometrioma size. Fertil Steril. 111 (5), 944-952 (2019).
  18. Deng, Y., et al. Does current ovarian endometrioma increase the time for dor patients to reach live birth in ivf. BMC Pregnancy Childbirth. 22 (1), 324(2022).
  19. Dongye, H., Tian, Y., Qi, D., Du, Y., Yan, L. The impact of endometrioma on embryo quality in in vitro fertilization: A retrospective cohort study. J Clin Med. 12 (6), 2416(2023).
  20. He, Y., et al. Re-evaluation of mouse models of endometriosis for pathological and immunological research. Front Immunol. 13, 986202(2022).
  21. Kanellopoulos, D., et al. The interplay between endometriosis and fertility in rats: A systematic review. J Med Life. 15 (6), 742-746 (2022).
  22. Tejada, M. A., et al. Rodent animal models of endometriosis-associated pain: Unmet needs and resources available for improving translational research in endometriosis. Int J Mol Sci. 24 (3), 2422(2023).
  23. Bruner-Tran, K. L., Mokshagundam, S., Herington, J. L., Ding, T., Osteen, K. G. Rodent models of experimental endometriosis: Identifying mechanisms of disease and therapeutic targets. Curr Womens Health Rev. 14 (2), 173-188 (2018).
  24. Buigues, A., et al. Evaluation of pai-1 in endometriosis using a homologous immunocompetent mouse model. Biol Reprod. 99 (2), 326-335 (2018).
  25. Tirado-Gonzalez, I., et al. Endometriosis research: Animal models for the study of a complex disease. J Reprod Immunol. 86 (2), 141-147 (2010).
  26. Lagana, A. S., et al. Translational animal models for endometriosis research: A long and windy road. Ann Transl Med. 6 (22), 431(2018).
  27. Mukherjee, P., Roy, S., Ghosh, D., Nandi, S. K. Role of animal models in biomedical research: A review. Lab Anim Res. 38 (1), 18(2022).
  28. Cuevas, M., et al. Stress exacerbates endometriosis manifestations and inflammatory parameters in an animal model. Reprod Sci. 19 (8), 851-862 (2012).
  29. Nunez-Badinez, P., et al. Preclinical models of endometriosis and interstitial cystitis/bladder pain syndrome: An innovative medicines initiative-paincare initiative to improve their value for translational research in pelvic pain. Pain. 162 (9), 2349-2365 (2021).
  30. Umezawa, M., et al. Expression profile of extracellular matrix and adhesion molecules in the development of endometriosis in a mouse model. Reprod Sci. 19 (12), 1365-1372 (2012).
  31. Grummer, R. Animal models in endometriosis research. Hum Reprod Update. 12 (5), 641-649 (2006).
  32. Tejada, M. A., et al. Identification of altered evoked and non-evoked responses in a heterologous mouse model of endometriosis-associated pain. Biomedicines. 10 (2), 501(2022).
  33. Bruner-Tran, K. L., Carvalho-Macedo, A. C., Duleba, A. J., Crispens, M. A., Osteen, K. G. Experimental endometriosis in immunocompromised mice after adoptive transfer of human leukocytes. Fertil Steril. 93 (8), 2519-2524 (2010).
  34. Malvezzi, H., Marengo, E. B., Podgaec, S., Piccinato, C. A. Endometriosis: Current challenges in modeling a multifactorial disease of unknown etiology. J Transl Med. 18 (1), 311(2020).
  35. Yan, D., Liu, X., Guo, S. -W. The establishment of a mouse model of deep endometriosis. Human Reproduction. 34 (2), 235-247 (2018).
  36. Santulli, P., et al. Protein oxidative stress markers in peritoneal fluids of women with deep infiltrating endometriosis are increased. Hum Reprod. 30 (1), 49-60 (2015).
  37. Adeniran, B. V., Bjarkadottir, B. D., Appeltant, R., Lane, S., Williams, S. A. Improved preservation of ovarian tissue morphology that is compatible with antigen detection using a fixative mixture of formalin and acetic acid. Hum Reprod. 36 (7), 1871-1890 (2021).
  38. Sima, R. M., et al. Novel diagnosis of mesenteric endometrioma: Case report. Medicine (Baltimore). 98 (29), e16432(2019).
  39. Eskenazi, B., Warner, M. L. Epidemiology of endometriosis). Obstet Gynecol Clin North Am. 24 (2), 235-258 (1997).
  40. Laufer, M. R., Goitein, L., Bush, M., Cramer, D. W., Emans, S. J. Prevalence of endometriosis in adolescent girls with chronic pelvic pain not responding to conventional therapy. J Pediatr Adolesc Gynecol. 10 (4), 199-202 (1997).
  41. Tan, Z., et al. What we have learned from animal models to understand the etiology and pathology of endometrioma-related infertility. Biomedicines. 10 (7), 1483(2022).
  42. Meyerholz, D. K., et al. Glycogen depletion can increase the specificity of mucin detection in airway tissues. BMC Research Notes. 11 (1), 763(2018).
  43. Fang, E., et al. Cpeb3 deficiency in mice affect ovarian follicle development and causes premature ovarian insufficiency. Cell Death Dis. 13 (1), 21(2021).
  44. Zhou, J., Peng, X., Mei, S. Autophagy in ovarian follicular development and atresia. Int J Biol Sci. 15 (4), 726-737 (2019).
  45. Kitajima, M., et al. Enhanced follicular recruitment and atresia in cortex derived from ovaries with endometriomas. Fertil Steril. 101 (4), 1031-1037 (2014).
  46. Hayashi, S., et al. Novel ovarian endometriosis model causes infertility via iron-mediated oxidative stress in mice. Redox Biol. 37, 101726(2020).
  47. Yildiz, S., et al. The pain symptoms and mass recurrence rates after ovarian cystectomy or uni/bilateral oophorectomy procedures in patients over 40 years old with endometriosis. Ginekol Pol. 91 (6), 295-300 (2020).
  48. Guney, G., et al. Neutrophil gelatinase-associated lipocalin serum level: A potential noninvasive biomarker of endometriosis. Medicine (Baltimore). 102 (41), e35539(2023).
  49. Kaya, C., et al. The role of serum caspase 3 levels in prediction of endometriosis severity. Gynecol Obstet Invest. 83 (6), 576-585 (2018).

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

OMA OMA

مقالات ذات صلة