يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تحريض المستعمرات الصغيرة في المبيضات عن طريق العلاج الضوئي الديناميكي بوساطة روز البنغال

1.5K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/66549

⸱

مارس 29, 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Dermatology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Department of Ophthalmology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 4National Institute of Infectious Diseases and Vaccinology, National Health Research Institutes, 5Department of Internal Medicine, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 6Insititute of Basic Medical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 7Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 8Center of Applied Nanomedicine, National Cheng Kung University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

لم يتم استكشاف أهمية المستعمرات الصغيرة في المبيضات spp. مقاومة الأدوية بشكل كامل. يقدم العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) استراتيجية واعدة ضد الالتهابات الفطرية المقاومة للأدوية. توضح هذه الدراسة أن aPDT بوساطة البنغال الوردية يعطل بشكل فعال المبيضات glabrata ويحفز المستعمرات الصغيرة ، مما يقدم إجراء فريدا.

الملخص

في مواجهة معدل وفيات بنسبة 40٪ في مرضى المبيضات ، لا تزال المبيضات المقاومة للأدوية ومحورها الصغير تمثل تحديا علاجيا كبيرا. يستهدف العلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروبات (aPDT) هياكل فطرية متعددة ، على عكس المضادات الحيوية / مضادات الفطريات ، مما قد يحبط المقاومة. تعتمد الطرق التقليدية لتحفيز المستعمرات الصغيرة على بروميد الإيثيديوم أو الفلوكونازول ، مما قد يؤثر على قابلية الدواء واستجابات الإجهاد. بحثت هذه الدراسة في تطبيق الضوء الأخضر (ذروة 520 نانومتر) وحساس ضوئي لورد البنغال (RB) لمكافحة عزل المبيضات غلابراتا المقاوم للأدوية. كشفت النتائج أن علاج aPDT يثبط بشكل كبير نمو الخلايا (انخفاض بنسبة ≥ 99.9٪) ويحفز بشكل فعال تكوين مستعمرة صغيرة ، كما يتضح من انخفاض حجم وفقدان تلطيخ مؤشر الأكسدة والاختزال في الميتوكوندريا. تقدم هذه الدراسة دليلا أوليا على أن aPDT يمكن أن يحفز المستعمرات الصغيرة في سلالة C. glabrata المقاومة للأدوية المتعددة في المختبر ، مما يوفر نهجا تحويليا محتملا لمكافحة الالتهابات الفطرية المقاومة.

المقدمة

تشكل الالتهابات الفطرية ، خاصة تلك التي تسببها المبيضات البيض والمبيضات جلابراتا المقاومة للأدوية بشكل متزايد ، تهديدا عالميا خطيرا1. يمكن أن تكون هذه العدوى مميتة ، خاصة بالنسبة للمرضى في المستشفى وأولئك الذين يعانون من ضعف في جهاز المناعة. يهدد ارتفاع المقاومة المضادة للفطريات السيطرة على داء المبيضات الغازي ، وهو عدوى فطرية شديدة مع ارتفاع معدل الوفيات ، وخاصة من المبيضات البيض2. تعيق السلالات المقاومة العلاج الفعال ، مما قد يزيد من التعقيد ومعدلات الوفيات. في مقاطعة ألاميدا ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية ، أصبحت C. glabrata أكثر الأنواع الغازية انتشارا3. قد يتأثر هذا التحول في انتشار وتوزيع أنواع المبيضات بممارسات الرعاية الصحية المحلية ، والتركيبة السكانية للمرضى ، واستخدام العوامل المضادة للفطريات ، وانتشار عوامل الخطر لعدوى المبيضات.

تكشف الطفرات الصغيرة في المبيضات ، التي تفتقر إلى الميتوكوندريا الوظيفية ، كيف تؤثر هذه العضية على الاستجابة للأدوية ، والفوعة ، ومقاومة الإجهاد 4,5. تشكل C. glabrata هذه المستعمرات بسهولة ، وتكتسب حساسية تجاه polyenes بينما تفقدها إلى الأزول6. ترتبط حساسية الآزول ووظيفة الجهاز التنفسي ارتباطا وثيقا ، مع انخفاض التنفس مما يؤدي إلى المقاومة عن طريق فقدان الحمض النووي للميتوكوندريا7. تم عزل المستعمرات الصغيرة من C. glabrata مع مقاومة الآزول من عينات البراز البشري من متلقي زرع نخاع العظم الذي يخضع لعلاج الفلوكونازول8 ومن زجاجات مزرعة الدم للمرضى الذين يعانون من التهابات مجرى الدم9. إن آثارها المحتملة في مقاومة الأدوية والفوعة والاستجابة للإجهاد تسلط الضوء على أهميتها السريرية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن خصائصها المميزة تجعلها أدوات قيمة للتحقيق في الأسئلة الأساسية في بيولوجيا الميتوكوندريا5. مع استمرار البحث في الطفرات الصغيرة ، من المرجح أن تتوسع تطبيقاتها في كل من البحوث السريرية والأساسية.

اكتشفت هذه الدراسة أن العلاج الضوئي الديناميكي (PDT) يمكن أن يحفز المستعمرات الصغيرة في C. glabrata ، مما يوسع نطاق الطرق إلى ما وراء التقنيات التقليدية لتعريض C. glabrata لبروميد الإيثيديوم أو الفلوكونازول.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. زراعة C. glabrata

ملاحظة: يتم استخدام C. glabrata المقاوم للأدوية المتعددة (C2-1000907) المقاوم لمعظم العوامل المضادة للفطريات ، بما في ذلك الفلوكونازول ، في التجارب. قد تحتاج الظروف التجريبية إلى التكيف مع سلالة معينة ، حيث قد توجد اختلافات بين سلالات مختلفة. استخدمت جميع التجارب المبيضات اللوغاريتمية التي نمت عند 25 درجة مئوية (تحاكي العدوى الطبيعية) من أجل الاتساق. إن افتقار C. glabrata إلى الخيوط يبسط القياس الكمي مقارنة ب C. albicans ، التي تشكل خيوط عند 37 درجة مئوية10.

  1. لتحضير استزراع لوغاريتمي الطور ل C. glabrata ، اختر مستعمرة واحدة من صفيحة أجار وانقلها إلى أنبوب اختبار زجاجي يحتوي على 3 مل من وسط خميرة البيبتون المعقمة (YPD) (انظر جدول المواد). احتضان لمدة 14-16 ساعة عند 25 درجة مئوية مع اهتزاز (155 دورة في الدقيقة ، زاوية 45 درجة لزيادة انتقال الهواء إلى الوسط).
  2. بعد الحضانة ، قم بتخفيف الثقافة باستخدام YPD الطازج إلى OD600 من 0.1 باستخدام تقنية معقمة. احتضان عند 25 درجة مئوية لمدة 6 ساعات مع الاهتزاز عند 155 دورة في الدقيقة. تحقق من مرحلة السجل ل C. glabrata عن طريق قياس OD600. الهدف ل 0.65-1.00 ، وهو ما يتوافق مع 1 × 10 7-1.5 × 107 خلايا / مل.

2. تحريض المستعمرات الصغيرة عن طريق بروميد الإيثيديوم والفلوكونازول والعلاج الضوئي الديناميكي

  1. تحريض مستعمرة بروميد الإيثيديوم الصغير
    1. اضبط معلق الخميرة إلىOD 600 من 0.1 (5 × 106 خلايا / مل) مع YPD إلى حجم نهائي قدره 3 مل ، ثم أضف 30 ميكرولتر من مخزون بروميد الإيثيديوم (10 ملغم / مل) (انظر جدول المواد) لتركيز نهائي قدره 100 ميكروغرام / مل.
    2. احتضان تعليق الخميرة بين عشية وضحاها (16-18 ساعة) عند 25 درجة مئوية ، 155 دورة في الدقيقة ، زاوية 45 درجة. اضبط على OD600 من 0.65 (1 × 107 خلايا / مل). قم بإجراء سلسلة تخفيف 10 أضعاف في لوحة 96 بئرا عن طريق إضافة 20 ميكرولتر من تعليق الخميرة المعدل إلى 180 ميكرولتر من PBS لكل بئر. هذا يخلق ستة تخفيفات تتراوح من 10-1 إلى 10-5.
    3. حدد 4 عوامل تخفيف (على سبيل المثال ، 100 و 101 و 102 و 103) ولوحة 3 قطرات (20 ميكرولتر) لكل منها على 4 أرباع من ألواح أجار YPD (ثلاث نسخ).
    4. احتضان الأطباق طوال الليل عند 37 درجة مئوية. حدد الأرباع التي تحتوي على 5-80 مستعمرة من التخفيفات المختارة مسبقا لتلطيخ كلوريد ثلاثي فينيل تترازوليوم (TTC)11 (انظر الخطوة 3). امسح اللوحات ضوئيا بدقة 1200 نقطة في البوصة باستخدام ماسح ضوئي بالألوان الكاملة 48 بت.
  2. تحريض مستعمرة الفلوكونازول الصغيرة
    ملاحظة: لتسريع العملية ، استخدم خلايا T3 (خليط من الخلايا الطبيعية والصغيرة التي تم الحصول عليها بعد 3 علاجات RB-PDT ؛ انظر الخطوة 2.3) لتشكيل مستعمرة صغيرة مستحثة بالفلوكونازول. وذلك لأن العلاج القياسي يؤدي عادة إلى تكوين أبطأ.
    1. تحضير وضبط معلق خلية الخميرة كما هو موضح في الخطوة 2.1.1.
    2. احتضان بين عشية وضحاها (16-18 ساعة) عند 25 درجة مئوية. اضبط OD600 إلى 0.1 مرة أخرى.
    3. انقل 1 مل من التعليق المعدل إلى أنبوب معقم سعة 5 مل.
    4. اغمس قطعة قطن معقمة (بطول 15 سم ، بطرف 0.9 سم × 2.6 سم ، انظر جدول المواد) في تعليق الخميرة ، مع ضمان ملامسة قاع الأنبوب والالتواء لإزالة السائل الزائد من جدار الأنبوب.
    5. قم بإعداد الألواح في غطاء المحرك باستخدام أجار مولر-هينتون (انظر جدول المواد).
    6. امسح القطن ذهابا وإيابا على الأجار ، وقم بتدويره 60 درجة مرتين ، ثم امسح المحيط لتغطية متساوية.
    7. تعقيم ملقط على اللهب لمدة 1-2 ثانية ، والسماح لهم بالتبريد لفترة وجيزة ، ثم استخدامها لالتقاط الأقراص الفارغة.
    8. قسم اللوحة إلى ثلاثة قطاعات متساوية باستخدام علامة. ضع قرصا فارغا واحدا في وسط كل قطاع.
    9. أضف 12.5 ميكرولتر من مخزون الفلوكونازول (2 مجم / مل ، انظر جدول المواد) إلى كل قرص (25 ميكروغرام / قرص) ، واخلطه جيدا لتجنب الفقاعات ، واحتضنه عند 37 درجة مئوية لمدة 20-24 ساعة.
    10. قم بإجراء تلطيخ TTC (انظر الخطوة 3). امسح اللوحات ضوئيا بدقة 1200 نقطة في البوصة باستخدام ماسح ضوئي بالألوان الكاملة 48 بت.
  3. PDT الحث مستعمرة صغيرة
    ملاحظة: قد تنتج الفطريات المختلفة أعدادا مختلفة من المستعمرات الصغيرة بعد PDT. بعض السلالات قد لا تنتج أي شيء على الإطلاق.
    1. إعداد نظام aPDT.
      ملاحظة: يتبع إجراء الإعداد لجهاز نظام aPDT الطريقة التي أبلغ عنها Hung etal 12. باختصار ، يتكون نظام aPDT من مجموعة LED خضراء مع ذروة عند 520 نانومتر (انظر جدول المواد) ، يضيء الضوء من الأسفل مع محاذاة جيدة مع كل بئر من لوحة 96 بئرا.
    2. اضبط تعليق خلية الخميرة في وسط YPD إلىOD 600 من 0.65 (حوالي 1 × 107 خلايا / مل).
    3. امزج 1 مل من معلق الخميرة مع 111 ميكرولتر من البنغال الوردي 2٪ (RB ، الشكل 1) (انظر جدول المواد) في أنبوب دائري لإعطاء تركيز RB نهائي بنسبة 0.2٪. احتضان الخليط على حرارة 25 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة ، مع تدويره بزاوية 45 درجة عند 155 دورة في الدقيقة.
    4. انقل الخليط إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل وجهاز طرد مركزي عند 16100 × جم لمدة 2.5 دقيقة (في درجة حرارة الغرفة).
    5. تخلص من المادة الطافية وكشط الأنبوب برفق خمس مرات على أرضية غطاء المحرك لإعادة تعليق الحبيبة.
    6. اغسل التعليق باستخدام 1x PBS أربع مرات لإزالة كل RB. يتبع كل غسلة إعادة تعليق الحبيبات مع دوامة قصيرة أو ماصة للتعليق الشامل.
      1. بعد الغسيل النهائي ، أضف 1000 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. الحل وردي فاتح اللون. انقل 200 ميكرولتر من معلق الخميرة المغسول المحمل ب RB إلى كل من الآبار الثلاثة في صفيحة 96 بئرا (ثلاث نسخ).
    7. ضع لوحة 96 بئرا على نظام الإضاءة الديناميكية الضوئية مع مصابيح LED التي تسلط الضوء الأخضر من الأسفل. أطفئ أضواء الغرفة لضمان إضاءة موحدة ومنع التداخل. تنشيط نظام إضاءة LED لتوصيل جرعة PDT البالغة 4.38 جول / سم2 على مدى دقيقتين ؛ تأكد من محاذاة النظام بشكل صحيح مع الآبار.
    8. بعد التشعيع ، قم بتخفيف تعليق الخميرة في لوحة 96 بئرا. أضف 20 ميكرولتر من تعليق الخميرة إلى بئر يحتوي على 180 ميكرولتر PBS ، مما يؤدي إلى تخفيف 10 أضعاف. كرر التخفيفات المتبقية لتحقيق نطاق من 10-1 إلى 10-5.
    9. اختر أربعة عوامل تخفيف (على سبيل المثال ، 10-2 إلى 10-5) بناء على تعديل تركيز خلية الخميرة.
    10. لكل عامل تخفيف ، لوحة 3 قطرات (20 ميكرولتر لكل منهما) لكل ربع على ألواح أجار YPD.
    11. بعد امتصاص معلق الخميرة بالكامل ، حوالي 10 دقائق بواسطة ألواح الآجار ، اقلب واحتضن طوال الليل عند 37 درجة مئوية.
    12. حدد T0 على أنه عنصر التحكم الأبوي C. glabrata بدون علاج PDT. تحضير الفطريات T0 في مرحلة نمو السجل كما هو موضح أعلاه وتعريضها لضوء أخضر 4.38 جول / سم2 في وجود 0.2٪ RB. تمنع حالة PDT هذه باستمرار 3 إلى 3.5 سجلات من نمو الفطريات.
      1. تشير إلى الفطريات الناجية على أنها T1 وتعريضها لنفس جرعة PDT مرة أخرى بعد توسيعها في المختبر إلى مرحلة نمو السجل. يشار إلى الفطريات الباقية بعد PDT الثاني باسم T2 وهكذا دواليك.
    13. في اليوم التالي ، اختر الأرباع التي يتراوح عدد المستعمرات فيها بين 5 و 80. احسب عدد المستعمرات في كل ربع واحسب العيار بالصيغة التالية: وحدة تشكيل المستعمرة (CFU) / مل = عدد المستعمرات (متوسط ثلاث نسخ) × عامل التخفيف × 50.
    14. قم بإجراء تلطيخ TTC (انظر الخطوة 3). امسح اللوحة ضوئيا كما هو موضح سابقا (الخطوة 2.2).

3. تحليل وظيفة الميتوكوندريا (اختبار تلطيخ TCC)

ملاحظة: TTC هو مؤشر الأكسدة والاختزال ومستقبل الإلكترون. يتحول إلى اللون الأحمر عندما يتم كسر المركبات البيضاء بواسطة الإلكترونات11. لاحظ أنه ليس بالضرورة أن تشكل جميع الخلايا مستعمرات مرئية في غضون 24 ساعة بعد الزراعة على صفيحة أجار. تتحول المستعمرات ذات الميتوكوندريا الوظيفية إلى اللون الأحمر ، بينما تظل المستعمرات التي تحتوي على ميتوكوندريا غير وظيفية بيضاء. هذا يسمح بالتمايز بين المستعمرات ذات وظائف الميتوكوندريا المختلفة.

  1. بعد العلاج ، قم بتخفيف معلقات المبيضات على ألواح أجار YPD وفقا لكثافة الخلايا المطلوبة للحصول على مستعمرات مميزة لسهولة التصور والتلطيخ.
  2. بعد 24 ساعة من النمو عند 37 درجة مئوية ، تتشكل المستعمرات المرئية من خلية واحدة. ماصة 20 ميكرولتر من 20٪ TTC مباشرة على وسط كل مستعمرة.
  3. بعد الامتصاص الكامل ، حوالي 10 دقائق من TTC من قبل المستعمرات ، احتضان في 37 درجة مئوية لمدة 30-40 دقيقة.

4. حركية النمو العادية والصغيرة C. glabrata

ملاحظة: تمت مقارنة ثلاث سلالات من الخميرة: C. glabrata C2-1000907 T0 (عزل سريري بدون علاج PDT) ، T3n (C. glabrata C2-1000907 بعد 3 مستعمرات RB-PDT متتالية تظهر مستعمرات يبلغ متوسط قطرها 1.5 ± 0.8 مم مماثلة للخلايا الأبوية) ، و T3p (مستعمرات صغيرة من C. glabrata C2-1000907 بعد 3 RB-PDT متتالية).

  1. اضبط تعليق خلية الخميرة في وسط YPD إلىOD 600 من 0.1 (5 × 106 خلايا / مل) في أنبوب 3 مل.
  2. قم تلقائيا بقياس OD600 للثقافة الساكنة كل 20 دقيقة باستخدام قارئ الصفائح الدقيقة متعدد الأوضاع (انظر جدول المواد) لمدة 24 ساعة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم تقديم البيانات كمتوسط مع ± الخطأ المعياري وتم الحصول عليها من ثلاث تجارب مستقلة ، مع ثلاث نسخ على الأقل في كل مجموعة. تم رسم البيانات التجريبية ، بما في ذلك عدد المستعمرات ، وقياسات OD600 ، ونتائج تلطيخ TTC ، وتحليلها إحصائيا باستخدام الرسوم البيانية والبرامج الإحصائية (انظر جدول المواد). تم استخدام اختبار ANOVA أو t أحادي الاتجاه لتحليل البيانات ، واعتبرت القيمة p <0.05 مهمة. تم إجراء المسح باستخدام ماسح ضوئي بالألوان الكاملة 48 بت بدقة 1200 نقطة في البوصة ، وتم إجراء ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تكشف هذه الدراسة النقاب عن PDT كأول طريقة تم الإبلاغ عنها للحث على تكوين مستعمرة صغيرة في المبيضات ، متجاوزة التأثيرات الثابتة لبروميد الإيثيديوم والفلوكونازول. تتطلب هذه الملاحظة الجديدة مزيدا من الاستكشاف لكشف آثارها على كل من القضاء على الفطريات عن طريق تقليل الفوعة وظهور آليات المقاومة.

يمنع PDT بوساطة RB بشكل فعال نمو C. glabrata ، مما يشير إلى نهج علاج بديل محتمل لعدوى المبيضات. كحساس ضوئي منشط بالضوء ، ينتج RB الأكسجين الفردي وأنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) عند تعرضه لطول موجي ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تلقى هذا العمل تمويلا من وزارة العلوم والتكنولوجيا ، تايوان [MOST 110-2314-B-006-086-MY3] ، جامعة تشنغ كونغ الوطنية [K111-B094] ، [K111-B095] ، مستشفى جامعة تشنغ كونغ الوطني ، تايوان [NCKUH-11204031] ، [NCKUMCS2022057].

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.22 & مرشح mMerck ، تايبيه ، تايوانMillex ، SLGVR33RS
1.5 مل أنبوب ميكرونبتون ، سان دييغو ، الولايات المتحدة الأمريكية# 3745
20٪ كلوريد ثلاثي فينيلترازوليوم (TTC)سيجما ألدريتش ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةT8877
5 مل أنبوب دائري من البولي بروبيلينكورنينج ، أريزونا ، الولايات المتحدة الأمريكية352059
5 مل أنبوب دائري القاع مع غطاء مصفاة الخليةكورنينج ، أريزونا ، الولايات المتحدة الأمريكيةفالكون ، # 352235
لوحة 96 بئرAlpha plus ، Taoyuan Hsien ، تايوان# 16196
AgarBRS ، تاينان ، تايوانAG012
قرص فارغAdvantec ، طوكيو ، اليابان49005040
جهاز طرد مركزيEppendorf ، المملكة المتحدة5415R
محلول بروميد الإيثيديومSigma-Aldrich ، MO ، الولايات المتحدة الأمريكيةE1510
فلوكونازول ، 2 مجم / ملفايزر ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكيةBC18790248
برنامج GraphPad PrismGraphPadالإصدار 7.0
الصمام الثنائي الباعث للضوء الأخضر (LED)Nanyi للإلكترونيات المحدودة ، تاينان ، تايوان5050موجة الإثارة: 500 ~ 550 نانومتر
درجة حرارة منخفضة. حاضنات اهتزازYihder ، تايبيه ، تايوانLM-570D (R)
مسحاتقطنية للعناية بالفمGood Verita Enterprise ، تايبيه ، تايوان161357
مولر هينتون الثاني أجارBD للعلوم الحيوية ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية211438
قارئ الألواح الدقيقة متعدد الأوضاعالأجهزة الجزيئيةSpectraMax i3x
OD600< / sub> مقياس الطيف الضوئيBiochrom ، لندن ، المملكة المتحدةUltrospec 10
روز البنغالسيجما ألدريتش ، الولايات المتحدة الأمريكية330000تركيز المخزون 40 مجم / مل = 4٪ ، تحضير في PBS ، مخزن عند 4 درجات ؛ ج
أنبوب زجاجي معقمSunmei ، تاينان ، تايوانAK45048-16100
مستخلص الخميرة ببتون سكر العنب متوسطHIMEDIA ، الهندM1363
فيوج شريط

المراجع

  1. Soriano, A., et al. Invasive candidiasis: current clinical challenges and unmet needs in adult populations. J Antimicrob Chemother. 78 (7), 1569-1585 (2023).
  2. Pappas, P. G., Lionakis, M. S., Arendrup, M. C., Ostrosky-Zeichner, L., Kullberg, B. J. Invasive candidiasis. Nat Rev Dis Primers. 4, 18026(2018).
  3. Meyahnwi, D., Siraw, B. B., Reingold, A. Epidemiologic features, clinical characteristics, and predictors of mortality in patients with candidemia in Alameda County, California; a 2017-2020 retrospective analysis. BMC Infect Dis. 22 (1), 843(2022).
  4. Whittaker, P. A. The petite mutation in yeast. Subcell Biochem. 6, 175-232 (1979).
  5. Hatab, M. A., Whittaker, P. A. Isolation and characterization of respiration-deficient mutants from the pathogenic yeast Candida albicans. Antonie Van Leeuwenhoek. 61 (3), 207-219 (1992).
  6. Defontaine, A., et al. In-vitro resistance to azoles associated with mitochondrial DNA deficiency in Candida glabrata. J Med Microbiol. 48 (7), 663-670 (1999).
  7. Brun, S., et al. Relationships between respiration and susceptibility to azole antifungals in Candida glabrata. Antimicrob Agents Chemother. 47 (3), 847-853 (2003).
  8. Bouchara, J. P., et al. In-vivo selection of an azole-resistant petite mutant of Candida glabrata. J Med Microbiol. 49 (11), 977-984 (2000).
  9. Badrane, H., et al. Genotypic diversity and unrecognized antifungal resistance among populations of Candida glabrata from positive blood cultures. Nat Commun. 14 (1), 5918(2023).
  10. Shantal, C. -J. N., Juan, C. -C., Lizbeth, B. -U. S., Carlos, H. -G. J., Estela, G. -P. B. Candida glabrata is a successful pathogen: An artist manipulating the immune response. Microbiol Res. 260, 127038(2022).
  11. Gamarra, S., Mancilla, E., Dudiuk, C., Garcia-Effron, G. Candida dubliniensis and Candida albicans differentiation by colony morphotype in Sabouraud-triphenyltetrazolium agar. Rev Iberoam Micol. 32 (2), 126-128 (2015).
  12. Hung, J. H., et al. Rose bengal-mediated photodynamic therapy to inhibit Candida albicans. J Vis Exp. (181), e63558(2022).
  13. Cardoso, D. R., Franco, D. W., Olsen, K., Andersen, M. L., Skibsted, L. H. Reactivity of bovine whey proteins, peptides, and amino acids toward triplet riboflavin as studied by laser flash photolysis. J Agric Food Chem. 52 (21), 6602-6606 (2004).
  14. Hall, R. M., Trembath, M. K., Linnane, A. W., Wheelis, L., Criddle, R. S. Factors affecting petite induction and the recovery of respiratory competence in yeast cells exposed to ethidium bromide. Mol Gen Genet. 144 (3), 253-262 (1976).
  15. Chen, X. J., Clark-Walker, G. D. The petite mutation in yeasts: 50 years on. Int Rev Cytol. 194, 197-238 (2000).
  16. Piskur, J. Inheritance of the yeast mitochondrial genome. Plasmid. 31 (3), 229-241 (1994).
  17. Wong, T. W., Wang, Y. Y., Sheu, H. M., Chuang, Y. C. Bactericidal effects of toluidine blue-mediated photodynamic action on Vibrio vulnificus. Antimicrob Agents Chemother. 49 (3), 895-902 (2005).
  18. Wong, T. W., et al. Indocyanine green-mediated photodynamic therapy reduces methicillin-resistant Staphylococcus aureus drug resistance. J Clin Med. 8 (3), 411(2019).
  19. Warrier, A., Mazumder, N., Prabhu, S., Satyamoorthy, K., Murali, T. S. Photodynamic therapy to control microbial biofilms. Photodiagnosis Photodyn Ther. 33, 102090(2021).
  20. Hung, J. H., et al. Recent advances in photodynamic therapy against fungal keratitis. Pharmaceutics. 13 (12), 2011(2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

كانديدا جlabrataالعلاج الضوئي الديناميكي المضاد للميكروباتكانديدا المقاومة للأدويةالعلاج بالضوء الأخضرمؤشر الأكسدة والاختزال في الميتوكوندرياعلاج العدوى الفطريةالفطريات المقاومة للأدوية المتعددة
تحريض المستعمرات الصغيرة في المبيضات عن طريق العلاج الضوئي الديناميكي بوساطة روز البنغال
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.