مقالة منهجية

تقنية معدلة لتحريض متلازمة المبيض المتعدد الكيسات في الفئران

2.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/66637

⸱

يوليو 5, 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Obstetrics and Gynecology Hospital, Institute of Reproduction and Development, Fudan University, 2Women's Hospital, Key Laboratory of Reproductive Genetics (Ministry of Education), Zhejiang University School of Medicine, 3International Institutes of Medicine, the Fourth Affiliated Hospital, Zhejiang University School of Medicine, 4Research Units of Embryo Original Diseases, Chinese Academy of Medical Sciences (No. 2019RU056), 5State Key Laboratory of Cardiology

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يقدم هذا البروتوكول تقنية لتحفيز نماذج متلازمة المبيض المتعدد الكيسات (PCOS) في الفئران من خلال إطلاق الليتروزول المتحكم فيه باستخدام مضخات صغيرة. تحت التخدير الكافي ، تم زرع المضخة الصغيرة تحت الجلد ، وتم إحداث متلازمة تكيس المبايض بنجاح في الفئران بعد فترة معينة من إطلاق المضخة الصغيرة.

الملخص

متلازمة المبيض المتعدد الكيسات (PCOS) هي أحد الأسباب الرئيسية للعقم عند النساء. تستخدم النماذج الحيوانية على نطاق واسع لدراسة الآليات المسببة لمتلازمة تكيس المبايض وتطوير الأدوية ذات الصلة. تكرر نماذج الفئران التي يسببها Letrozole الأنماط الظاهرية الأيضية والإنجابية لمرضى متلازمة تكيس المبايض. تتطلب الطريقة التقليدية لعلاج الليتروزول في فئران متلازمة تكيس المبايض جرعات يومية على مدى فترة معينة ، والتي يمكن أن تكون كثيفة العمالة وتسبب ضغطا كبيرا على الفئران. تصف هذه الدراسة طريقة بسيطة وفعالة لتحفيز متلازمة تكيس المبايض في الفئران عن طريق زرع مضخة صغيرة تتحكم فيها تطلق الليتروزول. تم تصنيع مضخة صغيرة قادرة على الإطلاق المستقر والمستمر لكمية كمية كمية من الليتروزول وزرعها تحت الجلد في الفئران تحت التخدير. أظهرت هذه الدراسة أن نموذج الفأر نجح في محاكاة ميزات متلازمة تكيس المبايض بعد زرع مضخة الليتروزول الصغيرة. المواد والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة متاحة بسهولة لمعظم المختبرات ، ولا تتطلب تخصيصا خاصا. بشكل جماعي ، توفر هذه المقالة طريقة فريدة وسهلة الأداء لإحداث متلازمة تكيس المبايض في الفئران.

المقدمة

متلازمة المبيض المتعدد الكيسات (PCOS) هي واحدة من أكثر الحالات شيوعا بين النساء في سن الإنجاب1. يصيب ما يصل إلى 18٪ من النساء على مستوى العالم وهو السبب الرئيسي للعقم عند النساء في جميع أنحاء العالم2،3. تتميز متلازمة تكيس المبايض بسلسلة من التشوهات الإنجابية المترابطة ، بما في ذلك إفراز موجهة الغدد التناسلية المضطربة ، وانقطاع الإباضة المزمن ، وزيادة إنتاج الأندروجين ، ومورفولوجيا المبيض المتعددالكيسات 4. بالإضافة إلى اضطرابات أمراض النساء ، تزيد متلازمة تكيس المبايض أيضا من خطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية5،6. على الرغم من عقود من البحث ، لا تزال مسببات متلازمة تكيس المبايض غير واضحة7،8.

لاكتساب رؤى أفضل حول التسبب في متلازمة تكيس المبايض وتطوير علاجات جديدة ، فإن إنشاء نماذج حيوانية تحاكي عن كثب علم وظائف الأعضاء البشري له أهمية قصوى. تشمل نماذج القوارض المبلغ عنها حاليا من متلازمة تكيس المبايض تلك التي تسببها العلاجات بالتستوستيرون والليتروزول والاستراديول فاليرات وغيرها. التستوستيرون يحفز فرط أندروجينيا ويستخدم بشكل أكثر شيوعا كمحفز لمتلازمة تكيس المبايض في الفئران10. وقد استخدمت دهيا للحث على متلازمة تكيس المبايض في القوارض, زيادة مستويات هرمون تستوستيرون, LH/FSH (هرمون ملوتن/هرمون تحفيز المسام) نسب , والتسبب في دورات الشبق غير المنتظمة11. استراديول فاليرات (EV) هو هرمون الاستروجين طويل المفعول ، وتظهر الدراسات التي تستخدم هذه الطريقة أن مستويات هرمونات الستيرويد الجنسية وموجهة الغدد التناسلية تختلف اعتمادا على جرعة EV التي يتم إعطاؤها12،13،14. ليتروزول هو مثبط أروماتاز غير ستيرويدي15. يحفز علاج الليتروزول الشبق غير الدوري ، ويزيد من وزن المبيض ، ووزن الجسم ، ويوسع الخلايا الشحمية ، ويزيد من نمو البصيلات ، ويرفع مستويات هرمون التستوستيرون في الفئران16،17. تظهر الفئران المعالجة بالليتروزول أعدادا متزايدة من بصيلات الجيوب الأنفية والخراجات النزفية ، بالإضافة إلى تركيزات مرتفعة من LH و FSH و estradiol و progesterone18،19.

حاليا ، تتضمن الطرق الرئيسية لنمذجة متلازمة تكيس المبايض التي يسببها الليتروزول الإعطاء عن طريق الفم والحقن تحت الجلد ، وكلاهما يتطلب جرعات يوميةمتكررة 20،21،22. تستغرق هذه الأساليب وقتا طويلا وتتطلب عمالة كثيفة ، ومن المحتمل أن تسبب الإدارة المتكررة ضغطا كبيرا على23. على الرغم من أن بعض الدراسات تستخدم حبيبات الليتروزول24,25, هذه المنتجات تحتاج إلى تخصيص وهي باهظة الثمن. يصف هذا التقرير تقنية لتحفيز متلازمة تكيس المبايض في الفئران باستخدام مضخات صغيرة. هذه الطريقة بسيطة وموفرة للوقت وتستخدم أدوات ومعدات جراحية متوفرة بسهولة في معظم المختبرات.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية الحيوانية في هذه الدراسة من قبل لجنة أخلاقيات بجامعة فودان. تم استخدام إناث الفئران C57BL / 6J ، التي تتراوح أعمارها بين 4 أسابيع ، هنا. تفاصيل والكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.

1. تحضير المضخة الصغيرة

  1. خذ مسحوق الليتروزول (50 مجم) المخزن في زجاجة العبوة الأصلية ، وقم بالطرد المركزي لمسحوق الليتروزول في الزجاجة عند 300 × جم لمدة 5 ثوان (في درجة حرارة الغرفة) ، ثم افتح الغطاء.
  2. أضف ببطء 625 ميكرولتر من DMSO إلى مسحوق الليتروزول باستخدام ماصة واخلطه جيدا للحصول على محلول مخزون بتركيز 8 مجم / 100 ميكرولتر ، بإجمالي 625 ميكرولتر.
    ملاحظة: إذا كنت تستخدم حجم عبوة مختلفا من مسحوق الليتروزول ، فيرجى حساب الحجم المطلوب من DMSO مسبقا لتكوين محلول المخزون. يجب أن يكون مسحوق الليتروزول و DMSO والمركبات الأخرى ذات الصلة من الدرجة المعقمة. يجب أن تكون أطراف الماصة والأنابيب والعناصر الأخرى ذات الصلة معقمة أو معقمة قبل الاستخدام.
  3. احسب عدد الفئران المطلوبة وفقا للتصميم التجريبي.
  4. ارسم الكمية الإجمالية لمحلول مخزون الليتروزول المطلوب باستخدام الماصة ، اعتمادا على عدد الفئران المطلوبة ، وحقنها في أنبوب الطرد المركزي ببطء.
    ملاحظة: تم اختيار الفئران البالغة من العمر 4 أسابيع للتعرض لمدة 8 أسابيع للحث على نموذج الفئران متلازمة تكيس المبايض. الجرعة الإجمالية من الليتروزول هي 8 مجم لكل فأر ، الأمر الذي يتطلب زرع مضختين متتاليتين (يتم إطلاق مضخة واحدة لمدة 4 أسابيع) ، أي 4 مجم / 4 أسابيع لكل مضخة. كما هو مذكور في الخطوة 1.2 ، فإن تركيز محلول مخزون الليتروزول هو 8 مجم / 100 ميكرولتر. لتحضير المضخات ، يلزم 50 ميكرولتر من محلول المخزون لكل مضخة كما هو محسوب: ما مجموعه 4 مجم ليتروزول مقسوما على 8 مجم / 100 ميكرولتر.
  5. ارسم كمية متساوية من PEG300 ، وأضفها إلى محلول الليتروزول ، واخلطها جيدا (يمكن دوامها بشكل مناسب).
  6. تحضير محلول مركبة التحكم لمجموعة التحكم (50 ميكرولتر من DMSO + 50 ميكرولتر من PEG300 لكل مضخة بدون ليتروزول).
  7. إعداد عدد كاف من أنابيب الطرد المركزي المعقمة وفقا لعدد المضخات المطلوبة ؛ يجب تحضير أنبوب طرد مركزي واحد سعة 15 مل لكل مضخة.
  8. ارسم المحلول الملحي بحقنة وأضف 5 مل من المحلول الملحي إلى كل أنبوب طرد مركزي. بعد ذلك ، قم بتغطية أنابيب أجهزة الطرد المركزي وضعها على رف أنبوب لمزيد من الاستخدام.
  9. ارتد زوجا جديدا من القفازات المعقمة ، وأخرج المضخات الصغيرة بالكمية المطلوبة ، وضعها على سطح عمل أو حاوية نظيفة ومعقمة.
  10. اضغط برفق على الغطاء الذي يتناسب مع جسم المضخة بالإبهام والسبابة ، وامسك جسم المضخة باليد الأخرى.
  11. كزة منفذ تعبئة المضخة ببطء عدة مرات مع توصيل الأنبوب الرفيع بالغطاء (الشكل 1 ب).
    ملاحظة: إذا لم يتم فك انسدادها ، فقد لا يتدفق السائل بحرية في الأنبوب بعد التعبئة.
  12. خذ الإبرة التي تتناسب مع المضخة وحقنة معقمة سعة 1 مل. اربط الإبرة بالمحقنة واجعلها مشدودة (الشكل 1 ج).
  13. ارسم بعناية وببطء الحل النهائي لليتروزول الذي تم تكوينه أعلاه باستخدام المحقنة المجمعة حديثا (الشكل 1 د).
    ملاحظة: يجب أن يتم شفط محلول الليتروزول ببطء وبشكل متساو. قد يولد الشفط السريع فقاعات هواء ، مما قد يؤثر على حقن محلول الدواء اللاحق.
  14. حقن محلول الليتروزول في المضخة الصغيرة.
    1. اضغط بعناية على مضخة صغيرة بيد واحدة بحيث تقف في وضع مستقيم ، وباليد الأخرى ، أمسك المحقنة المذكورة أعلاه سعة 1 مل وأدخلها ببطء في قاع المضخة (الشكل 1E).
      ملاحظة: إذا لم يتم إدخال الإبرة في قاع المضخة ، يمكن أن ينفجر السائل الموجود في المضخة بسهولة أثناء الحقن ، مما سيؤثر على إطلاق المضخة لاحقا للدواء.
    2. ثم حقن الحل الذي تم تكوينه ببطء ؛ يمكن ملاحظة الحقن عندما يكون فتح المضخة فقاعات قليلا.
    3. حقن بشكل أبطأ عندما يقترب حجم الحقن من 90 ميكرولتر. بمجرد ملء المضخة بالكامل (حوالي 100 ميكرولتر) ، اسحب المحقنة.
    4. أدخل الغطاء بعناية في جسم المضخة واجعله مشدودا ؛ في هذه المرحلة ، سوف تتسرب كمية صغيرة من المحلول. امسحها بعناية.
  15. خذ المضخة المحملة بالدواء ، بحيث يكون المخرج متجها لأعلى (النهاية مع الغطاء) ، وخذ أنبوب الطرد المركزي المعد مسبقا ، واغمر المضخة بالكامل في محلول ملحي معقم (الشكل 1F). ثم قم بتغطية أنبوب الطرد المركزي وضعه على رف الأنبوب.
    ملاحظة: احرص على تجنب تلويث المضخة طوال العملية.
  16. بعد تصنيع جميع المضخات الصغيرة ، ضع جميع أنابيب الطرد المركزي في ترموستات 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.

2. التحضير للعملية والتخدير

  1. تحضير وتعقيم جميع الأدوات المطلوبة في يوم الجراحة ، بما في ذلك الملقط ، ومرقئ ، والمقص الجراحي ، وحاملات الإبر ، والخيوط الجراحية القابلة للامتصاص 4-0.
  2. قبل استخدام آلة تخدير الأيزوفلوران (الشكل 2 ب) ، تحقق بعناية مما إذا كان اتصال خط الأنابيب صحيحا وتأكد من أن خط الأنابيب سليم ولا يتسرب.
  3. قم بفك غطاء مانع التسرب في مبخر آلة التخدير ، ثم أضف المخدر ببطء.
  4. حافظ على مستوى التخدير بين الحدود العليا والسفلية المشار إليها على جهاز التخدير.
  5. قم بتحويل مفتاح الصمام ثلاثي الاتجاهات للتأكد من توصيل تدفق الهواء من مبخر آلة التخدير بصندوق تحريض التخدير.
  6. افتح مضخة الهواء والمبخر ، ثم اضبط تركيز الأيزوفلوران لتحريض التخدير (بشكل عام 3٪ -4٪).
  7. انتظر لمدة دقيقة واحدة تقريبا حتى يملأ المخدر صندوق الحث ، ثم ضع الماوس في صندوق الحث وانتظر حتى يكتمل التخدير (تستغرق هذه العملية حوالي 2-3 دقائق).
  8. تأكد من تخدير الفئران بشكل كاف عن طريق قلب الصندوق برفق. إذا تم قلب الفئران ولم تظهر عليها أي علامات على العودة إلى وضع الاستلقاء ، يتم تحفيز التخدير.

3. زرع مضخة ليتروزول الصغيرة

  1. ارتد قناعا جراحيا وقفازات معقمة.
  2. قم بإزالة الفئران المخدرة مسبقا من صندوق الحث وقم بتطبيق كريم إزالة الشعر على الجزء الخلفي من الفئران ، ثم انتظر لمدة 1 دقيقة. امسحي كريم إزالة الشعر والشعر برفق بشاش مبلل.
  3. في الوقت نفسه ، قم بتغيير مفتاح الصمام ثلاثي الاتجاهات للتأكد من توصيل تدفق الهواء من مبخر آلة التخدير بقناع التخدير وضبط تركيز الصيانة (بشكل عام 2٪).
  4. بعد إزالة الشعر ، أمسك الفأر باليد المهيمنة وضع رأسه / أنفه في قناع التخدير.
  5. تحقق من عمق التخدير عن طريق اختبار منعكس سحب الدواسة.
    ملاحظة: يجب تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على التخدير باستخدام فلاتر الغاز المزودة بأقراص الفحم المنشط ، ويجب تنفيذ الإجراء في غطاء الدخان.
  6. قم بتثبيت الماوس في وضع الانبطاح على لوحة العمليات وقم بتطبيق زيوت تشحيم العين على كلتا العينين.
  7. ضع مسحات بوفيدون اليود ثلاث مرات على الجلد المكشوف (الشكل 2 ج). ثم حقن ميلوكسيكام تحت الجلد بجرعة 2 ملغ/كغ.
  8. تأكد من عمق التخدير عن طريق قرصة إصبع القدم مرة أخرى. ثم ، عند خط الوسط من الجزء الخلفي من الرقبة ، مع تفضيل الجلد على الجانب الخالي من الشعر ، التقط الجلد بالملقط وقم بعمل شق يبلغ حوالي 0.5 سم بشكل جانبي باستخدام مشرط أو مقص جراحي (الشكل 2 د).
  9. ثم افتح البشرة الموجودة أسفل الشق وقم بالوصول إليها باستخدام حامل الإبرة أو الإبرة لتحرير الجلد ، مما يوفر مساحة لمضخة صغيرة (على بعد حوالي 2 سم من الشق) (الشكل 2 ه).
  10. أخرج المضخة من المحلول الملحي في أنبوب الطرد المركزي باستخدام ملقط معقم ، بحيث يكون الطرف المفتوح للمضخة متجها لأسفل ، وكن مستعدا لإدخال المضخة تحت الجلد في الفئران (الشكل 2F).
  11. قم بتثبيت جانب واحد من شق الجلد بالملقط وادفع المضخة إلى الفراغ تحت الجلد. يجب ألا تكون هناك مقاومة عند دخول المضخة. بمجرد الدخول ، استخدم الأصابع للضغط قليلا وبرفق على المضخة إلى الداخل قدر الإمكان (الشكل 1G).
  12. خياطة موقع الشق بعناية باستخدام 4-0 خيوط جراحية (الشكل 2H).
    ملاحظة: احرص على عدم إتلاف جسم المضخة تحت الجلد عند الخياطة.
  13. بعد الخياطة ، قم بتطهير الجلد في موقع الجراحة مرتين باستخدام مسحات اليودوفور.

4. استعادة

  1. بعد الجراحة، انقل الفئران برفق من المرتبة المستخدمة أثناء التخدير إلى مرتبة جافة ونظيفة. تأكد من أن الفئران في بيئة دافئة وهادئة.
  2. راقب عن كثب ظروف الفئران ، مثل عمق وتواتر أنفاسها.
  3. راقب سلوك الفئران عندما تبدأ حركتها في العودة. أخيرا ، تأكد من قدرتهم على الوقوف والمشي دون أي سلوكيات غير طبيعية واضحة مثل الدوخة أو الحركات غير المنسقة.
  4. بعد أن تتعافى الفئران ، انقلها برفق إلى أقفاص معدة مسبقا. ضع الهلام المعقم والطعام في قاع القفص لتتغذى عليه الفئران.
    ملاحظة: قد يمنع تمدد موقع الجراحة الفئران من الشرب والأكل بسهولة خلال فترة ما بعد الجراحة المبكرة ، لذا ضع الهلام والطعام في قاع القفص.
  5. حقن ميلوكسيتام تحت الجلد بجرعة 2 مجم / كجم (كل 24 ساعة لأول 3 أيام بعد الجراحة). بعد 8 أسابيع من العلاج بالليتروزول (أي زرعتين متتاليتين بمضخة صغيرة) ، اختبر نماذج الفئران.

النتائج

يظهر البروتوكول التجريبي وبعض الخطوات الحاسمة في الشكل 1 والشكل 2. يتم عرض مستويات هرمون التستوستيرون في الدم في الشكل 3 أ. أظهرت الفئران المعالجة بالمضخة الصغيرة Letrozole (المشار إليها فيما يلي باسم فئران LTZ) مستويات مرتفعة بشكل ملحوظ من هرمون التستوستيرون في الدم مقارنة بإناث الفئران الضابطة. وفي الوقت نفسه ، أظهر التحليل النسيجي للمبايض أن الفئران LTZ أظهرت تكيس المبايض مع انخفاض كبير في عدد الجسم الأصفر (الشكل 3 ب ، ج) ، مما يشير إلى عدم تكوين الإباضة. علاوة على ذلك ، أظهرت الفئران LTZ عدم وجود دورة كبيرة في الشبق مقارنة بإناث الفئران الضابطة (الشكل 3 د). كشف تقييم وزن الجسم أن فئران LTZ كانت أثقل من الفئران الضابطة (الشكل 3E). أظهرت نتائج اختبار تحمل الجلوكوز وحسابات AUC أن الفئران LTZ طورت عدم تحمل الجلوكوز مقارنة بالفئران الضابطة (الشكل 3F ، G). أشارت مقايسة الدهون في المصل إلى أن الفئران LTZ أظهرت تغيرا في ملف الدهون في المصل مقارنة بالفئران الضابطة (الشكل 3H).

figure-results-1
الشكل 1: المواد والخطوات الحاسمة لإعداد المضخة الصغيرة. (أ) رسم تخطيطي يوضح تحضير مضخات الليتروزول الصغيرة. (ب) تم فك المضخة الصغيرة بواسطة أنبوب رفيع متصل بالغطاء. (ج) تم توصيل إبرة مطابقة للمضخة بنهاية إبرة حقنة سعة 1 مل. (د) تم شفط محلول Letrozole ببطء دون فقاعات. (ه) تم حقن محلول الليتروزول ببطء من قاع المضخة. (و) تم تغطية المضخات المملوءة وتخزينها في محلول ملحي مع توجيه نهاية الغطاء لأعلى. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-2
الشكل 2: المواد والخطوات الحاسمة لزرع المضخات في الفئران لتحريض متلازمة تكيس المبايض. (أ) رسم تخطيطي يوضح زرع مضخات الليتروزول الصغيرة. (ب) معدات التخدير: مضخة الهواء ، آلة التخدير ، صندوق الحث ، وفلاتر الغاز. (ج) تم إصلاح وتعقيم الفئران المخدرة. (د) قطع 0.5 سم بالقرب من خط الوسط الظهري. (ه) تم تحرير الجلد لإفساح المجال لإدخال المضخة الصغيرة. (و) تم قص مضخة صغيرة من المحلول الملحي بملقط نظيف ومعقم. (ز) زرعت المضخة الصغيرة تحت الجلد الذي تم تحريره سابقا. (ح) تم إغلاق الجلد ب 4-0 خيوط. (ط) سمح للفأر المزروع بالتعافي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-3
الشكل 3: توصيف الأنماط الظاهرية التناسلية والتمثيل الغذائي في نماذج الفئران المزروعة بمضخة صغيرة ليتروزول. (أ) كانت مستويات هرمون التستوستيرون في البلازما في الفئران المعالجة ب LTZ أعلى بكثير من تلك الموجودة في الفئران الضابطة (ن = 9 لكل مجموعة). (ب) التحليل النسيجي للمبايض. يشير السهم إلى corpora lutea. شريط المقياس: 1 مم. (ج) عدد المجموعات الصفراء في المجموعات المشار إليها (ن = 9 لكل مجموعة). (د) أظهرت الفئران LTZ عدم التدوير مقارنة بإناث الفئران الضابطة. (ه) وزن الجسم في المجموعات المشار إليها (ن = 10 لكل مجموعة). (إف ، ز) ينتج اختبار تحمل الجلوكوز في المجموعات المشار إليها (ن = 8 لكل مجموعة). (ح) مستويات الدهون في المصل في المجموعات المشار إليها (ن = 8 لكل مجموعة). يتم التعبير عن البيانات كمتوسط ± SEM. يشير AUC إلى المنطقة تحت المنحنى. ه ، مرحلة الشبق. LDL-C, كوليسترول البروتين الدهني منخفض الكثافة; HDL-C, كوليسترول البروتين الدهني عالي الكثافة; ف ، مرحلة البروستيروس. م / د ، مرحلة metestrus / diestrus ؛ TC, الكوليسترول الكلي; و TG ، الدهون الثلاثية. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

المناقشة

يوضح هذا التقرير بروتوكولا بسيطا لتحفيز متلازمة تكيس المبايض في الفئران باستخدام مواد يسهل الوصول إليها. يعد نموذج متلازمة تكيس المبايض في الفأر ضروريا لاستكشاف آليات متلازمة تكيس المبايض وفحص الأدوية26. من بين الطرق المتاحة لتحفيز نماذج متلازمة تكيس المبايض في الفئران ، يعد تحريض الليتروزول أحد أكثر الطرق استخداما. يمكن أن يؤدي استخدام الليتروزول إلى تطوير حالة فرط الأندروجين والحفاظ عليها عن طريق تثبيط تحويل هرمون التستوستيرون إلى استراديول أو عن طريق زيادة تخليق هرمون التستوستيرون27. يظهر نموذج الفأر الناجم عن الليتروزول أوجه تشابه أيضية وإنجابية مع مرضى متلازمة تكيس المبايض28. ومع ذلك ، فإن التقنيات التقليدية لعلاج الليتروزول في نموذج متلازمة تكيس المبايض في الفئران تتطلب تغذية يومية عن طريق الفم أو حقن عقار ليتروزول في الفئران لمدة 21 يوما أو أكثر29،30. إن التخصيص المستمر للأدوية على المدى الطويل مع الجرعات الموقوتة للتغذية أو الحقن يستغرق وقتا طويلا ويتطلب عمالة مكثفة ، ويمكن أن يكون الإعطاء المتكرر للأدوية مرهقا للفئران ، مما يؤدي إلى عوامل غير تجريبية تؤثر على نتائج النموذج23،31. على الرغم من أن بعض دراسات متلازمة تكيس المبايض للفئران والفئران تستخدم كريات الليتروزول القابلة للزرع28،32 ، إلا أن المنتجات المستخدمة تحتاج إلى التخصيص وقد لا تكون متاحة في الوقت المناسب. تقترح الدراسة الحالية تقنية زرع مضخات صغيرة ليتروزول للحث على متلازمة تكيس المبايض في الفئران. الطريقة بسيطة وموفرة للوقت وتستخدم الأدوات والمعدات الجراحية المتوفرة بسهولة في معظم المختبرات.

الخطوات الهامة واستكشاف الأخطاء وإصلاحها
من الضروري ملاحظة بعض الخطوات الرئيسية لتحقيق أفضل النتائج عند ممارسة هذه الطريقة. أولا ، قم بفك انسداد المضخة باستخدام الأنبوب الرفيع المتصل بالغطاء المطابق قبل الاستخدام. تشير التجربة السابقة إلى أن المضخة المسدودة يمكن أن تعطل تحميل الدواء وإطلاقه. بالإضافة إلى ذلك ، يجب تنفيذ كل خطوة في تكوين محلول الليتروزول بعناية لضمان أن يكون المحلول النهائي بالتركيز المطلوب بدقة. طوال عملية تجميع المضخة ، يجب الانتباه لمنع التلوث. علاوة على ذلك ، من الضروري إجراء تعديلات دقيقة قبل وأثناء التخدير لضمان التخدير الكافي للفئران التجريبية وتقليل الآثار الضارة للتخدير على الفئران التي تم تشغيلها.

المزايا والقيود
تقدم الطريقة الموضحة في هذه الدراسة العديد من المزايا: (1) توفر الوقت وتسمح بإطلاق الليتروزول المستمر بعد زرع المضخة. (2) يتجنب الضغط الناجم عن إعطاء الأدوية المتكرر على التجارب ويقلل من تأثير العوامل غير التجريبية على نتائج النمذجة ؛ (3) المواد والأدوات الجراحية والمعدات الضرورية متوفرة بشكل شائع في معظم المختبرات ؛ (4) تحفز الطريقة بشكل فعال الأنماط الظاهرية لمتلازمة تكيس المبايض في الفئران. ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة لها أيضا قيود: (1) قد يتسبب التخدير والإجراء الجراحي المطلوب لزرع المضخة الصغيرة في تهيج الفئران ، ويمكن أن يؤدي وجود المضخة الصغيرة تحت الجلد إلى إزعاج نشاطها. (2) قد تتأثر فعالية طريقة النمذجة هذه بالتلوث أو التلف الذي يلحق بجسم المضخة أثناء العملية. بناء على تجربة المؤلفين ، يمكن أن يؤدي التنفيذ الدقيق لخطوات البروتوكول إلى معدل نجاح مرتفع في تحفيز نموذج ماوس PCOS.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم الدراسة من قبل البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (منح 2021YFC2700701) ، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (منح 82088102 ، 82071731 ، 82171613 ، 8227034 ، 81601238) ، صندوق ابتكار الأكاديمية الصينية للعلوم الطبية للعلوم الطبية (منحة 2019-I2M-5-064) ، لجنة العلوم والتكنولوجيا في بلدية شنغهاي (منح 21Y11907600) ، لجنة بلدية شنغهاي للصحة وتنظيم الأسرة (منحة 20215Y0216) ، برنامج الابتكار التعاوني التابع للجنة الصحة ببلدية شنغهاي (منحة 2020CXJQ01) ، خطة البحث السريري لمركز تطوير مستشفى شنغهاي (منحة SHDC2020CR1008A) ، مركز شنغهاي للبحوث السريرية لأمراض النساء (منحة 22MC1940200) ، مركز شنغهاي لأبحاث أمراض الجهاز البولي التناسلي (منحة 2022ZZ01012) ، قاعدة أبحاث علوم شنغهاي فرونترز للتكاثر والتطوير ، لجنة العلوم والتكنولوجيا في بلدية تشوتشو (منحة 2022K54) ، مشروع الصندوق المفتوح للمختبر الرئيسي لعلم الوراثة التناسلية ، وزارة التعليم ، جامعة تشجيانغ (منحة KY2022035) ، ومشروع الصندوق المفتوح لأكاديمية قوانغدونغ للعلوم الطبية (منحة YKY-KF202202).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حقنةBofeng BiotechBD3008411 مل (معقمة)
أنبوب الطرد المركزيالأمل البيولوجي1850-K15ML (معقم)
ماصةEppendorf3123000268-A100 & mu ؛ L-1000 & L (معقمة)
ماصةTopPette701010100810 & mu ؛ L-100 و مو ؛ L (معقم)
مسحوق LetrozoleSigmaL6545-50MGأدوية تعمل بشكل أولي (معقمة) PEG
(بولي (إيثيلين جلايكول))SolarbioP8250تستخدم للذوبان (معقم)
محلول ملحي فسيولوجي معقمBiosharpBL158Aلتخزين المضخة
الصغيرة ALZET1004تخزين Letrozole والإفراج المستدام (معقم)
ثنائي ميثيل سلفوكسيدBiosharpBS087تستخدم للذوبان (معقمة)
آلة تخدير الصغيرةRWD & nbsp ؛R500IPالمستخدمة للتخدير
Isoflurane   ؛RWD20071302تستخدم للتخدير
HemostatsBiosharpBS-HF-S-125مقص الأدوات الجراحية
BiosharpBS-SOR-S-100Pحامل إبرة أداة جراحية
ShangHaiJZJ32010أداة جراحية
ملقطRWD & nbsp ؛F12028إبرة أداة جراحية
وخياطة قابلة للامتصاص 4-0JINGHUANCR413أداة جراحية
مسحات بوفيدون اليودSingleLadyGB26368-2010تطهير الجلد
ZIKERBIOTECHNOLOGYZK-L2701  عامل إزالة الشعر لحيوانات المختبر
قفازات النتريلBiosharpBC040-Lتستخدم للعملية المعقمة
شاش معقمZHENDEBA69087تستخدم لمسح السوائل
C57BL / 6J الفئرانمركز الكائنات الحية النموذجية شنغهايN / Aالعمر: 4 أسابيع
زيوت تشحيم عين الأليفةBAITESHF021153تستخدم لزيوت تشحيم عين الفأر
حقن MeloxicamMEIDAJIAR21064-21تستخدم لتسكين الفئران (معقم)
مضخات تناضحية كريم

المراجع

  1. Dapas, M., Dunaif, A. Deconstructing a syndrome: Genomic insights into PCOS causal mechanisms and classification. Endocr Rev. 43 (6), 927-965 (2022).
  2. Teede, H., et al. Anti-müllerian hormone in PCOS: A review informing international guidelines. Trends Endocrinol Metab. 30 (7), 467-478 (2019).
  3. Joham, A. E., et al. Polycystic ovary syndrome. Lancet Diabetes Endocrinol. 10 (9), 668-680 (2022).
  4. Pan, J. X., et al. Aberrant expression and DNA methylation of lipid metabolism genes in PCOS: A new insight into its pathogenesis. Clin Epigenetics. 10, 6(2018).
  5. Gao, L., et al. Calcitriol attenuates cardiac remodeling and dysfunction in a murine model of polycystic ovary syndrome. Endocrine. 52 (2), 363-373 (2016).
  6. Gao, L., et al. Polycystic ovary syndrome fuels cardiovascular inflammation and aggravates ischemic cardiac injury. Circulation. 148 (24), 1958-1973 (2023).
  7. Rosenfield, R. L., Ehrmann, D. A. The pathogenesis of polycystic ovary syndrome (PCOS): The hypothesis of PCOS as functional ovarian hyperandrogenism revisited. Endocr Rev. 37 (5), 467-520 (2016).
  8. Wang, F., et al. Alternative splicing of the androgen receptor in polycystic ovary syndrome. Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (15), 4743-4748 (2015).
  9. Noroozzadeh, M., Behboudi-Gandevani, S., Zadeh-Vakili, A., Ramezani Tehrani, F. Hormone-induced rat model of polycystic ovary syndrome: A systematic review. Life Sci. 191, 259-272 (2017).
  10. Tyndall, V., et al. Effect of androgen treatment during foetal and/or neonatal life on ovarian function in prepubertal and adult rats. Reproduction. 143 (1), 21-33 (2012).
  11. Jang, M., et al. Oriental medicine Kyung-ok-ko prevents and alleviates dehydroepiandrosterone-induced polycystic ovarian syndrome in rats. PLoS One. 9 (2), e87623(2014).
  12. Brawer, J. R., Munoz, M., Farookhi, R. Development of the polycystic ovarian condition (PCO) in the estradiol valerate-treated rat. Biol Reprod. 35 (3), 647-655 (1986).
  13. Mirabolghasemi, G., Kamyab, Z. Changes of the uterine tissue in rats with polycystic ovary syndrome induced by estradiol valerate. Int J Fertil Steril. 11 (1), 47-55 (2017).
  14. Li, X., et al. Amitriptyline plays important roles in modifying the ovarian morphology and improving its functions in rats with estradiol valerate-induced polycystic ovary. Arch Pharm Res. 42 (4), 344-358 (2019).
  15. Mamounas, E. P., et al. Use of letrozole after aromatase inhibitor-based therapy in postmenopausal breast cancer (NRG oncology/NSABP B-42): A randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial. Lancet Oncol. 20 (1), 88-99 (2019).
  16. Deveci, H. S., et al. Histological evaluation of rat larynx in experimental polycystic ovary syndrome model. Eur Arch Otorhinolaryngol. 269 (8), 1945-1950 (2012).
  17. Du, D. F., Li, X. L., Fang, F., Du, M. R. Expression of anti-müllerian hormone in letrozole rat model of polycystic ovary syndrome. Gynecol Endocrinol. 30 (12), 885-889 (2014).
  18. Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. The gut microbiome is altered in a letrozole-induced mouse model of polycystic ovary syndrome. PLoS One. 11 (1), e0146509(2016).
  19. Arroyo, P., Ho, B. S., Sau, L., Kelley, S. T., Thackray, V. G. Letrozole treatment of pubertal female mice results in activational effects on reproduction, metabolism and the gut microbiome. PLoS One. 14 (9), e0223274(2019).
  20. Pyun, B. J., et al. Tetragonia tetragonioides (pall.) Kuntze regulates androgen production in a letrozole-induced polycystic ovary syndrome model. Molecules. 23 (5), 1173(2018).
  21. Patel, R., Shah, G. Insulin sensitizers modulate GNRH receptor expression in PCOS rats. Arch Med Res. 49 (3), 154-163 (2018).
  22. Chaudhari, N., Dawalbhakta, M., Nampoothiri, L. GNRH dysregulation in polycystic ovarian syndrome (PCOS) is a manifestation of an altered neurotransmitter profile. Reprod Biol Endocrinol. 16 (1), 37(2018).
  23. Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: Routes of administration and factors to consider. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).
  24. Lee, Y. H., et al. Welsh onion root (Allium fistulosum) restores ovarian functions from letrozole induced-polycystic ovary syndrome. Nutrients. 10 (10), 1430(2018).
  25. Yang, H., et al. Traditional medicine (mahuang-tang) improves ovarian dysfunction and the regulation of steroidogenic genes in letrozole-induced PCOS rats. J Ethnopharmacol. 248, 112300(2020).
  26. Corrie, L., et al. Recent updates on animal models for understanding the etiopathogenesis of polycystic ovarian syndrome. Life Sci. 280, 119753(2021).
  27. Corbin, C. J., Trant, J. M., Walters, K. W., Conley, A. J. Changes in testosterone metabolism associated with the evolution of placental and gonadal isozymes of porcine aromatase cytochrome p450. Endocrinology. 140 (11), 5202-5210 (1999).
  28. Ryan, G. E., Malik, S., Mellon, P. L. Antiandrogen treatment ameliorates reproductive and metabolic phenotypes in the letrozole-induced mouse model of PCOS. Endocrinology. 159 (4), 1734-1747 (2018).
  29. Bhattarai, P., Rijal, S., Bhattarai, J. P., Cho, D. H., Han, S. K. Suppression of neurotransmission on gonadotropin-releasing hormone neurons in letrozole-induced polycystic ovary syndrome: A mouse model. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 1059255(2022).
  30. Annie, L., Gurusubramanian, G., Roy, V. K. Inhibition of visfatin by fk866 mitigates pathogenesis of cystic ovary in letrozole-induced hyperandrogenised mice. Life Sci. 276, 119409(2021).
  31. Mcdonald, L. T., et al. Early blood profile of C57BL/6 mice exposed to chronic unpredictable stress. Front Psychiatry. 10, 230(2019).
  32. Torres, P. J., et al. Exposure to a healthy gut microbiome protects against reproductive and metabolic dysregulation in a PCOS mouse model. Endocrinology. 160 (5), 1193-1204 (2019).

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

نموذج فأر لمتلازمة تكيس المبايضمضخة ليتروزول صغيرةتحرير دوائي محكومزرع تحت الجلدتستوستيرون المصلعدم تحمل الجلوكوزنسيج المبيضاضطرابات أيضيةأمراض القلب والأوعية الدموية
تقنية معدلة لتحريض متلازمة المبيض المتعدد الكيسات في الفئران
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.