مقالة منهجية

بروتوكول وحدة ضربة الفأر مع التصنيف العصبي الموحد لدراسات سكتة دماغية الفئران الانتقالية

DOI:

10.3791/66847

⸱

فبراير 7, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacology Medical School of Athens, National and Kapodistrian University of Athens, 2Institute for Stroke and Dementia Research (ISD), University of Munich Medical Center, 3Department of Neurointensive Care, Schoen Clinic Bad Aibling

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقدم هذه المقالة بروتوكولا لتنفيذ مفهوم وحدة السكتة الدماغية (mSU) عالي الترجمة والمثبت بشكل مستقل في الفئران ذات السكتة الدماغية الكبيرة. كما يوفر بروتوكولا موحدا لتنفيذ مقياس السكتة الدماغية التجريبي البؤري في الفئران ، والذي يقيم العجز البؤري للسكتة الدماغية المكتشفة حتى على المدى الطويل.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ربما يكون نموذج خيوط انسداد الشريان الأوسط (fMCAo) هو نموذج سكتة الفأر الأكثر تعدية ، مما يسمح بنقص التروية المتحكم فيه مع إعادة التروية / إعادة القناة داخل الأوعية الدموية. ومع ذلك ، فإنه يفتقر إلى التوافق مع التطورات السريرية الحالية لرعاية السكتة الدماغية (على سبيل المثال ، وحدات السكتة الدماغية) ، وعادة ما يستخدم التسجيل العصبي الذاتي أو الغامض بين المختبرات ، ويظهر معدل وفيات مرتفع في المرحلة الحادة. هنا ، نعالج هذه القيود من خلال بروتوكولات موجهة بالفيديو تم التحقق من صحتها. نقدم بروتوكول وحدة السكتة الدماغية للفأر (mSU) مع مقاطع فيديو تعليمية وخوارزمية قرار (درجة التقسيم الطبقي للمخاطر) ، مما يسد الفجوة بين نمذجة السكتة الدماغية السريرية والفئران. لزيادة دقة وحساسية التسجيل العصبي للسكتة الدماغية ، نقدم لأول مرة تنسيقا موحدا بالفيديو لمقياس السكتة الدماغية التجريبي البؤري (fESS) ونثبت قيمته حتى 6 أشهر بعد السكتة الدماغية. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقديم بروتوكولات اختبار درجة السلم للفئران ، بالإضافة إلى اختبار الأسطوانة المعروف ، للتقييم الكمي غير المتحيز للوظيفة الحركية للأطراف. تسلط النتائج الضوء على الفعالية الانتقالية ل mSU. يتفوق Focal ESS (fESS) على المقاييس الأخرى المعروفة في اكتشاف عجز السكتة الدماغية البؤرية ، والتقاط التعافي ، والحفاظ على الحساسية لمدة تصل إلى 6 أشهر بعد السكتة الدماغية. تحدد اختبارات درجات السلم والأسطوانة بشكل موضوعي عجز حركي الأطراف الأمامية والخلفية وتراقبها على المدى الطويل. باختصار ، يوفر دمج اختبارات mSU و fESS والوظيفة الحركية إطارا قويا لتحقيقات السكتة الدماغية ذات الصلة سريريا. تعمل بروتوكولاتنا على تحسين القيمة الانتقالية في أبحاث سكتة دماغية الفئران.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

السكتة الدماغية الإقفارية الكبيرة هي أحد الأسباب الرئيسية للمراضة والعجز في جميع أنحاءالعالم 1. ومع ذلك ، تواجه أبحاث سكتة الفئران كتلة انتقالية في جميع العلاجات التي تم اختبارها قبل السريرية تقريبا حتىالآن 2. وقد استعرضت الأسباب المتعددة لهذه المشكلة والجهود المبذولة للتغلب عليها بالتفصيل في المنشورالسابق 2. تنشأ هذه التحديات من التكامل المحدود للتطورات السريرية في النماذج الحيوانية ذات الصلة2 ونقاط الضعف في أنظمة التسجيل السلوكية والعصبية في الكشف عن عجز ما بعد السكتة الدماغية بدقة وحساسية2.

تدعم الاكتشافات الحديثة3 أن نموذج خيوط انسداد الشريان الأوسط (fMCAo) في الفئران له مزايا انتقالية كبيرة مقارنة بالنماذج الأخرى ذات إصابة الجمجمة المفتوحة والصدمة2،4. علاوة على ذلك ، هذا هو الوحيد الذي يصمم إعادة التروية واستئصال الخثرة الميكانيكية لإعدادات السكتة الدماغية السريرية5،6،7. ومع ذلك ، يواجه النموذج وفيات عالية تحت الحادة بين 3-7 أيام بعد السكتة الدماغية ، مما يحظر الدراسات طويلة المدى للسكتات الدماغية الكبيرة وكان يعتبر حتى وقت قريب قطعة أثرية متأصلة ولا يمكن التغلب عليها في النموذج. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الكشف عن العجز العصبي بعد السكتة الدماغية صعب نسبيا ومتحيز في الفئران نظرا لصغر حجمها ، خاصة بين غير الأطباء أو الباحثين عديمي الخبرة8،9. لمعالجة هذا ، طورت مجموعات مختلفة مقاييس مختلفة للكشف عن العجز. تشمل المقاييس الأكثر استخداما والمعروفة مقياس Bederson المكون من 3 نقاط (BS) 10 ، ومقياس Bederson المعدل المكون من 5 نقاط (mBS) 11 ، ودرجة Longa المكونة من 5 نقاط (LS) (والتي تشبه mBS) 6 ، ومقياس السكتة الدماغية العصبية المعدل (mNSS) 12،13 ، ومقياس Garcia المكون من 18 نقطة (GS) 9 و DeSimmoni14 الأكثر تفصيلا أو المعروف بشكل مختلف باسم "Neuroscore" (NS) 9 ، 15 مقياس. لسوء الحظ ، فإن بعض هذه المقاييس إما بدائية جدا وتقتصر فقط على أيام المرحلة الحادة القليلة التي تلي السكتة الدماغية (BS و mBS و LS) 8،9 أو أن تفسيرها غير واضح بسبب العجز العام (NS).

مع هذه الخلفية ، قمنا سابقا بتطوير والتحقق من صحة بروتوكول دعم وحدة السكتة الدماغية للفأر (mSU) ، جنبا إلى جنب مع مقياس السكتة الدماغية التجريبي (ESS) للفئران13. كان الأساس المنطقي ل mSU هو تكييف المعرفة من الروتين السريري (أي وحدات السكتة الدماغية البشرية) في أبحاث ما قبل السريرية للسكتة الدماغية ، بينما قامت ESS بتوحيد مقاييس السكتة الدماغية الموجودة سابقا ولكنها "غير حساسة" أو زائدة عن الحاجة في مقاييس عملية ومكررة وحساسة وفعالة من حيث الوقت. يتكون mSU من مراقبة متكررة ومتكيفة للمعايير السريرية الأساسية للفأر مع التطبيق المكيف لدعم لتعزيز البقاءعلى قيد الحياة 13.

في الواقع ، تتحقق البيانات من مختبرنا وغيره من قيمة كلتا الطريقتين. يترجم mSU التدابير الداعمة الأساسية السريرية ويتقدم7 من البشر إلى الفئران ، ويقلل بشكل كبير من وفيات fMCAo في الفئران من 60-70٪ إلى 10-15٪ 13 مما يسمح بإجراء دراسات عن السكتات الدماغية الأكبر ، ويمكن تطبيقه بشكل فعال في المختبرات المستقلة منذ ذلك الحين16،17،18،19. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يميز ESS بين البؤري (المكون البؤري ل ESS ، fESS) والعام (المكون العام ل ESS ، gESS) عجز وأعراض ما بعد السكتة الدماغية ، ونماذج الدرجات السريرية البشرية (التمييز بين العلامات والأعراض البؤرية والعامة في البشر) ، ويرتبط خطيا بحجم آفة السكتة الدماغية وهو حساس على المدى الطويل للعجز13،20. ومع ذلك ، على الرغم من القيمة والفعالية المثبتة لكل من mSU و ESS ، فإن الافتقار إلى تعليمات واضحة ومرئية وموحدة حتى للباحثين عديمي الخبرة يترك العديد من الأسئلة المفتوحة حول تطبيق mSU والذاتية الكبيرة حول تسجيل العجز البؤري على fESS.

على هذا النحو ، تهدف مقالتنا الحالية إلى توفير تعليمات واضحة بمساعدة الفيديو لبروتوكولات mSU و fESS. نعتقد اعتقادا راسخا أنه سيدعم الباحثين في مجال السكتة الدماغية لزيادة الكفاءة الانتقالية لدراسات السكتة الدماغية الخاصة بهم ، وتقليل فقدان بشكل كبير خلال أول 3-10 أيام بعد السكتة الدماغية ، وتقليل تكاليف التجارب ، وفي النهاية تقييم العجز العصبي بشكل متكرر لأشهر بعد السكتة الدماغية13. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن للمجموعة الإضافية من اختبار درجة السلم واختبار الأسطوانة أن تحدد بسهولة شلل جزئي للأطراف البؤرية (الأطراف الأمامية والخلفية) بسبب fMCAo.

لعرض كفاءة mSU و fESS ، نقدم بيانات متوسطة (14 يوما) وطويلة الأجل (6 أشهر) عن الفئران بعد fMCAo. تم استخدام ذكور الفئران C57Bl / 6J البالغة من العمر اثني عشر أسبوعا (ن = 31) وإيوائها تحت درجة حرارة خاضعة للرقابة (22 ± 2 درجة مئوية) ، مع فترة دورة فاتحة وظلام 12 ساعة والوصول إلى الطعام المحبب والماء المجاني. تم تقسيم الفئران إلى مجموعتين تمت متابعتهما لمدة 14 يوما (ن = 10 ، المجموعة 1) و 6 أشهر (ن = 15 ، المجموعة 2) على التوالي. تعرضت هذه الفئران لنقص تروية دماغي لمدة 60 دقيقة باستخدام النموذج الموصوف جيدا ل fMCAo13،20،21 تحت تخدير الأيزوفلوران. التي يتم تشغيلها بواسطة الشام (ن = 6 ، تعمل كمجموعتين أعلاه ، ولكن لم يتم إحداث نقص التروية) متبعة لمدة 6 أشهر كضوابط. تم استخدام البوبرينورفين كمسكن قبل الجراحة و 3 أيام. كما تم إجراء اختبارات درجات السلم والأسطوانة لمجموعة مدتها 6 أشهر كجزء من التسجيل العصبي.

تم فحص جميع يوميا بحثا عن نقاط نهاية إنسانية خلال أول 14 يوما بعد الوقوف ، والتي تم تعريفها على النحو التالي: 1) انخفاض حرارة الجسم الشديد (<33 درجة مئوية) و / أو عدم الحركة (على سبيل المثال ، الدرجة 4 في الاختبار 6 من fESS أو اختبار "النشاط التلقائي" ل gESS) الذي لم يتم تحسينه من خلال علاج "وحدة السكتة الدماغية للفأر" (أي التسخين السلبي والتغذية النشطة ، انظر 1.4 ، 1.6 ، 1.8) في غضون ساعة واحدة ، 2) علامات الألم أو سلوك القلق (على سبيل المثال ، الدرجة >2 في اختبار "القلق / السلوك التلقائي" ل gESS) ، حتى بعد تسكين ما بعد الجراحة وفقا للبروتوكول.

في هذا البروتوكول ، يبدأ دعم الفئران بعد السكتة الدماغية على شكل mSU مباشرة بعد تعافي الماوس من عملية fMCAo. هذا له 3 مراحل: المرحلة أ (0-48 ساعة بعد إعادة التروية), المرحلة ب (>48 ساعة وحتى "نهاية الدعم النشط المطلوب", عادة في اليوم 10-14, اعتمادا على المرحلة ب للحيوان الفردي), والمرحلة ج (اليوم 14 فصاعدا). يحتوي على خمسة تدخلات مهمة (الزيارات / درجة التقسيم الطبقي للمخاطر ، والتغذية ، والسوائل ، ودرجة الحرارة ، والتطهير المحلي ؛ انظر 1.1. إلى 1.8. أدناه) مصممة خصيصا لكل ، وفقا لكل مرحلة (A أو B أو C) وحالته السريرية الفعلية اليومية التي تم تقييمها بواسطة درجة التقسيم الطبقي للمخاطر (RSS) ، انظر الشكل التكميلي 1 والجدول 1 مع ثلاثة أمثلة نموذجية. يتم عرض المواد والأدوات المطلوبة ل mSU في الشكل 1 أ وموصوفة في جدول المواد. نقدم أيضا نموذجا لمراقبة أثناء mSU (انظر الملف التكميلي 1).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أجريت التجارب الواردة في هذه المقالة وفقا للإرشادات الوطنية والأوروبية لاستخدام التجارب وتمت الموافقة عليها من قبل اللجان الحكومية اليونانية (أثينا ، رقم الترخيص "843895_06-09-2022").

1. "وحدة ضربة الماوس" (mSU)

  1. تقييم الحالة السريرية للحيوان يوميا ("الزيارات") وحساب درجة RSS الخاصة به
    1. اطبع الملف التكميلي 1 ، ويفضل أن يكون ذلك قبل جراحة ، لتسجيل البيانات والمراقبة.
    2. تقييم كل سريريا في النقاط الزمنية القياسية (الزيارات): في الصباح الباكر (حوالي الساعة 08:00) ، ومنتصف النهار (بين الساعة 14:00 إلى الساعة 16:00) ، وفي وقت متأخر من الليل (حوالي الساعة 22:00 - الساعة 23:00).
      ملاحظة: قم بتكييف هذه الزيارات القياسية وفقا لمرحلة متابعة: تحقق من حالة 2x / يوميا (من الصباح إلى الليل) للمرحلة A ، و 3x / يوميا للمرحلة B ، ومرة واحدة يوميا للمرحلة C. قم بتكييف تكرار الزيارات وفقا لدرجة RSS (انظر 1.1.6). يفضل العمل في فريق مكون من >2 شخصا لتقليل عبء العمل. تعتبر الزيارات الصباحية والمسائية ضرورية للدعم الناجح والمراقبة وتقليل الوفيات لأن المرحلة الليلية (النشطة) للفئران تزيد من متطلبات التمثيل الغذائي والطاقة13،22،23 وترتبط بزيادة الوفيات الليلية بعد السكتة الدماغية.
    3. قم بوزن الماوس باستخدام ميزان قياسي حساس أثناء الزيارة الصباحية.
    4. قم بقياس درجة الحرارة باستخدام مقياس حرارة بدون تلامس يوضع فوق مركز الجسم البطني أثناء الزيارة الصباحية. امسك الماوس وشل حركته بظهره. خذ القراءة خلال الثواني القليلة الأولى بعد الشلل (انظر الشكل 1 و).
      ملاحظة: لا تستخدم مقياس حرارة المستقيم بسبب تمزق الأمعاء المحتمل بعد القياسات المتكررة مع التهاب الصفاق المصاحب.
    5. تقييم وتسجيل الحالة السريرية العامة للفأر (الحركة ، الجروح ، غطاء مجرى البول ، التفاعل ، الفراء ، حالة الترطيب ، إلخ) في الزيارة الصباحية لجميع المراحل ، يوميا حتى اليوم 14.
    6. احسب درجة RSS في الزيارة الصباحية عن طريق جمع النقاط وفقا لوزن ودرجة حرارته ودرجة fESS كما هو موضح في الشكل التكميلي 1. للحساب التلقائي ل RSS في جدول جداول بيانات، استخدم الصيغة الموجودة في الجدول 1 وقم بتكييفها. قتل بطريقة مؤسسية معتمدة ، في حالة وجود نقاط نهاية إنسانية (انظر أعلاه).
    7. قم بتكييف كل من تكرار الزيارات وشدة الدعم ، يوميا وفقا لدرجة RSS ومرحلة ما بعد السكتة الدماغية للحيوان.
      ملاحظة: المرحلة B هي الأكثر أهمية بالنسبة للوفيات. زيادة وتيرة الزيارات وكثافة الدعم لخدمة RSS ≥3 (للاطلاع على التعريف والتعليمات، انظر الجدول 1). إذا استمر في إظهار RSS >3 في المرحلة C ، فقم بزيارته ودعمه كما في المرحلة B. استخدم RSS والأوصاف العامة (مثل التعافي ، والمستقر ، والمرض المنخفض / المتوسط ، والمريض الحرج) لوصف حالته السريرية بين فريق الدعم. بعد اليوم 14 ، قلل من زيارات إلى تلك التي يتطلبها البروتوكول التجريبي فقط (على سبيل المثال للتقييمات السلوكية / العصبية).
  2. تحضير طعام الجل للدعم الغذائي
    1. سحق كريات الطعام الشائعة باستخدام الخلاط (الشكل 1 أ).
    2. أضف السكر التجاري بنسبة 5-10٪ لزيادة محتوى السعرات الحرارية في الطعام.
    3. أضف الماء لإنشاء قوام سائل يشبه الهلام (الشكل 1 ب).
    4. استخدم هذا الطعام الجل للدعم الغذائي السلبي والنشط.
      ملاحظة: اختياريا ، استخدم طعاما جليا تجاريا جاهزا للاستخدام. يمكن أن يبقى الطعام الجاهز في الثلاجة لمدة 2-3 أيام.
  3. الدعم الغذائي السلبي للفئران
    1. املأ طبق بتري بالطعام الهلامي وضعه على أرضية القفص (دعم غذائي سلبي من خلال توفير طعام هلامي لسهولة الوصول إلى الماوس). اترك 2-3 حبيبات طعام بجانب طبق بتري.
    2. قم بتحديث طبق بتري مع طعام الجل يوميا. خلال الأيام القليلة الأولى ، قد تملأ الفئران طبق بتري أو تغطيه بفراش القفص. سيبدأ البعض في تناول الطعام منه (الشكل 1 ج).
  4. الدعم الغذائي النشط (التغذية النشطة)
    ملاحظة: تحدث التغذية النشطة خلال المرحلة ب. تردد التغذية القياسي هو 3x / يوميا ويتم تكييفه مع المزيد من الأوقات وفقا لدرجة RSS (على سبيل المثال ، حتى 4-5 مرات / يوم). من حين لآخر ، بالنسبة للفئران التي لديها باستمرار درجة RSS من 0-1 (أي السكتة الدماغية الصغيرة) وتأكل بنشاط بمفردها ، قم بتقليل التردد إلى 1-2 / يوميا.
    1. املأ مسبقا محاقن 1 مل بالطعام الهلامي.
    2. أمسك الفأر وامسكه برفق ولكن بثبات من فرو رقبته ، كما هو موضح في الشكل 1 د (رأس السهم الأحمر).
    3. قم بتثبيت خد الماوس بالإصبع الأوسط ، كما هو موضح في الأسهم الحمراء في الشكل 1 د: أثناء إمساك الماوس بقوة ، حرك الإصبع جانبا باتجاه أنف الفأر على خده. شغل موقف.
    4. ضع طرف المحقنة في فم الفأر بين أسنانه ووجه طرفه نحو الجانب الداخلي من خده (السهم الأحمر ، الشكل 1 ه).
    5. أعط ما يقرب من 40-50 ميكرولتر من الطعام الجل في كل مرة (جرعة من الفم).
    6. أعد الماوس برفق إلى شبكة القفص. اترك وقتا للمضغ.
    7. كرر التغذية بعد 1-2 دقيقة ، حتى يأكل كل فأر 1-1.5 مل من طعام الجل.
      ملاحظة: إطعام 5-10 فئران في كل شوط (1-2 أقفاص) ؛ يأكل الآخرون ويبتلعون طعام الهلام حيث يتم إعطاء كل فأر جرعة من اللقمة لا تمنح العملية أي ضغط على الفئران. وقد لوحظ أيضا أن بعض تضع نفسها في النهاية للإمساك والتغذية.
  5. مكملات المحلول الملحي العادي
    1. قم بوزن الفأر أثناء الزيارة الصباحية (انظر 1.1.2 و 1.1.3).
    2. احسب خسارة / زيادة الوزن مقارنة بالقياس السابق عن طريق طرح القيم.
    3. استكمل نقص الوزن (بالجرام) بمل من المحلول الملحي العادي (تحت الجلد).
      ملاحظة: تجنب الحمل الزائد للسوائل والوذمة بأي ثمن. لا تتجاوز 1-2 مل لكل جرعة و 3-4 مل من السوائل يوميا. ابدأ بعد 36 ساعة بعد fMCAo.
  6. مكملات الجلوكوز
    1. تحقق من درجة RSS المحسوبة للماوس وحركته الإجمالية.
    2. حقن 0.5 - 1 مل من الجلوكوز بنسبة 5٪ تحت الجلد إذا كان RSS >3 وظهرت على الفأر علامات مصاحبة لانخفاض حرارة الجسم (<34 درجة مئوية) أو الشلل / بطء الحركة. يفضل الحقن فقط أثناء الزيارة الليلية.
      ملاحظة: تجنب ارتفاع السكر في الدم بعد السكتة الدماغية بأي ثمن. ارتفاع السكر في الدم بعد السكتة الدماغية سام7. على هذا النحو ، لا يتم استكمال الجلوكوز إلا بعد التغذية النشطة وفي حالات الحالة السريرية الشديدة أو لمنع نقص السكر في الدم أثناء النشاط الليلي. يجب أن تكون التغذية النشطة (انظر 1.4) هي قياس الدعم الرئيسي ، لأنها توفر دعما أكثر سلاسة وأطول أمدا للطاقة وتترجم الإرشادات السريرية 7. لا تكمل الجلوكوز قبل اليوم 3.
  7. إدارة درجة الحرارة (سلبية)
    1. قم بقياس درجة حرارة جسم سطح قبل الجراحة عند خط الأساس وبعد الجراحة في كل زيارة (الشكل 1 أ). قم بالقياس كما هو موضح في الشكل 1f والموضح في 1.1.4. قم بتدوين القيم.
      ملاحظة: يعرف انخفاض حرارة الجسم في الفئران بأنه درجة حرارة الجسم <35 درجة مئوية 24،25. تشير البيانات السابقة13 إلى أن أي درجة حرارة أقل من 34 درجة مئوية هي علامة تحذير للدعم بعد السكتة الدماغية (انظر أدناه).
    2. عند ملاحظة انخفاض حرارة الجسم بين 33 و 34 درجة مئوية ، قم بتسخين الماوس بشكل سلبي في قفص على لوح تسخين (أو أي جهاز تسخين سلبي آخر) حتى يصل إلى درجة حرارة الجسم >34 درجة مئوية. قم بإطعام الفأر بنشاط لتوفير الطاقة لإنتاج الحرارة النشطة من قبل (إمدادات الطاقة طويلة الأمد).
      ملاحظة: احتفظ بالحيوان في حالة تسخين سلبي لمدة 1 إلى بضع ساعات. تجنب ارتفاع الحرارة السلبي بأي ثمن.
    3. عند ملاحظة انخفاض حرارة الجسم ، <33 درجة مئوية ، قم بتصعيد الدعم بإعطاء الجلوكوز الإضافي تحت الجلد (إمداد سريع ولكن قصير الأمد بالطاقة ؛ انظر 1.6 أعلاه).
  8. تنظيف الأعضاء التناسلية و / أو جرح الرقبة ("التطهيرات" المحلية)
    ملاحظة: في بعض الأحيان ، يمكن ملاحظة تفرز الجرح أو سدادة مجرى البول. تفرز الجرح نادر الحدوث. سدادة مجرى البول عبارة عن سدادة صلبة عند طرف الأعضاء التناسلية للفأر (الشكل 1 ز) ويلاحظ أنها أكثر شيوعا ، خاصة في ذات الشدة الجلطة الدماغية الأعلى. عندما تسد السدادة مجرى البول ، قد تحدث متلازمة انسداد المسالك البولية ويمكن أن تؤدي إلى المراضة والوفاة26. لذلك ، يجب تنظيفه جيدا.
    1. انقع سدادة مجرى البول ، إن وجدت ، بمحلول ملحي عادي لتسهيل إزالتها.
    2. قم بإزالة سدادة مجرى البول برفق عن طريق مسحة صغيرة أو ملاقط بسيطة في كل فحص / زيارة للحيوانات. تطهير مجرى البول باستخدام مقياس أو مسحة مبللة بمحلول مطهر.
    3. في حالة وجود تفكك في الجرح ، قم بتطهيره محليا بأي محلول مطهر جراحي شائع (على سبيل المثال ، Octanisept) وقم بخياطة الجرح بشكل روتيني باستخدام خياطة حريرية 5/0.

2. المكون البؤري لمقياس السكتة الدماغية التجريبي (fESS)

  1. تحضير حقل الاختبار
    1. قم بتنظيف مقعد يحتوي على 70٪ كحول لإزالة المحفزات الخارجية (البصرية أو الروائح) وإعداد مواد الاختبار ، كما هو موضح في الشكل 2 أ.
    2. اطبع ورقة تسجيل ESS المقدمة كملف تكميلي 2 واتبع الاختبارات واحدة تلو الأخرى.
  2. شلل جزئي في الطرف الأمامي (الاختبار 1)
    1. ارفع الماوس مع الاستمرار برفق من قاعدة ذيله.
    2. تحقق وقم بالتقييم بصريا للامتداد الأمامي المتماثل والحركة المتماثلة للأطراف الأمامية أثناء تحرك الفأر (الشكل 2 ج).
    3. النتيجة اعتمادا على النتائج البصرية على النحو التالي: 0 للتمديد الطبيعي والمتماثل وحركة الأطراف الأمامية ؛ 1 ل "عدم تناسق طفيف" يعرف بأنه انثناء خفيف و/أو انخفاض حركة الطرف المقابل أو تصلب الأطراف؛ 2 ل "الانثناء الملحوظ" للطرف المقابل ؛ 3 لالتصاق الطرف المقابل بالجذع ؛ النتيجة 4 لعدم وجود حركة للجسم أو الأطراف.
      ملاحظة: يكشف الاختبار عن شلل جزئي في الطرف الأمامي المقابل. كما أنه جزء من مقاييس BS و LS و mNSS و NS. قد يكون من الصعب تحديد النتيجة 1 بسبب مناورات هروب.
  3. شلل جزئي في الأطراف الخلفية (الاختبار 2)
    1. استمر في إمساك الماوس من قاعدة ذيله ، كما هو موضح في الاختبار 1.
    2. تحقق بصريا من الامتداد المتماثل وحركة الأطراف الخلفية وأصابع القدم (الشكل 2 ج).
    3. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 للوضع / التمديد الطبيعي المتماثل وحركة الأطراف الخلفية وأصابع القدم. 1 لعدم التناسق الواضح ، عند انخفاض الحركة بشكل كبير والموضع / التمديد غير المتماثل للطرف الخلفي المقابل (الأيمن) (الشكل 2 د).
      ملاحظة: يكشف الاختبار عن شلل جزئي في الطرف الخلفي المقابل. كما أنه جزء من مقياس mNSS. قد يكون هذا الاختبار صعبا للتسجيل بدقة.
  4. تناظر الجذع (الاختبار 3)
    1. استمر في إمساك الماوس من قاعدة ذيله (بعد 2.3) وقم بتقييم حركات جذعه.
    2. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 للعادة، لا يوجد ثني للجذع أو انثناء/حركة خفيفة متماثلة للجذع على كلا الجانبين (كمناورة "هروب")؛ 1 لثني الرأس / الجذع الملحوظ (>30 درجة) في الغالب معاكس (إلى اليمين) ، خلال أول 10 ثوان من الإمساك.
      ملاحظة: يكتشف الاختبار عدم التناسق عن طريق الآفات الحركية أحادية الجانب. إنه أيضا جزء من تسجيل mNSS.
  5. سلوك الدوران (الاختبار 4)
    1. ضع الماوس برفق على سطح مستو واتركه يتحرك بحرية لمدة 1 دقيقة على الأقل. راقب نمط حركته.
    2. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 للحركة الاستكشافية والحيوية والخطية دون سلوك دائري ؛ 1 للميل إلى التحول إلى جانب واحد ولكن ليس في دوائر مغلقة ؛ 2 للحركة غير المستمرة في دوائر مغلقة إلى جانب واحد ؛ 3 للحركة المستمرة في دوائر مغلقة إلى جانب واحد ؛ 4 للدوران أو التأرجح أو عدم الحركة على الإطلاق.
      ملاحظة: يكشف الاختبار عن عجز الملاحة الحسية والحركية والمكانية. وهي أيضا جزء من NS.
  6. تناسق الجسم (الاختبار 5)
    1. تابع من الاختبار 4 واترك الماوس يتحرك بحرية على السطح المستو. راقب محورها من الأنف إلى الذيل.
    2. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 للوضع الطبيعي مع جذع مرتفع من المقعد ، وذيل مستقيم ؛ 1 ل "عدم تناسق طفيف" إذا كان الجسم ينحني طفيف إلى جانب واحد وذيل منحني بعيدا ؛ 2 بالنسبة ل "عدم التناسق المعتدل" إذا كان الجسم واضحا ينحني أو يميل إلى الجانب المقابل مع ذيل وثني قريب و/أو أطراف تمتد خارج الجسم؛ 3 ل "عدم التناسق البارز" إذا كان الانحناء الملحوظ للجسم ، يقع جانب واحد بشكل غير منتظم على المقعد والذيل عازم بشكل قريب من الواضح (أكثر من النتيجة 2) ؛ 4 ل "عدم التناسق الشديد" إذا كان الجسم مثنيا ، فإن أحد الجانبين يقع باستمرار على المقعد والذيل منحني للغاية.
      ملاحظة: يكتشف العجز الحسي الحركي أحادي الجانب والذيل. إنه أيضا جزء من مقياس NS.
  7. تقييم المشي (الاختبار 6)
    1. تابع من الاختبار 5 ، واترك الماوس يتحرك بحرية على السطح المستو. راقب الآن مشيتها وتحقق من وجود عجز حركي في المشي مثل الشلل الجزئي ، وتصلب الأطراف ، والمشية التشنجية ، والأطراف.
    2. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 للمشي الطبيعي إذا كانت استكشافية ، متماثلة وسريعة مع أطراف مرنة تتحرك "مخفية" تحت الجسم ؛ 1 للمشي القاسي وغير المرن والأبطأ للفأر الذي يتحرك بحرية دون العرج ؛ 2 للعرج الواضح مع حركات غير متماثلة (يسار ويمين) ؛ 3 للارتعاش أو الانجراف أو السقوط بعد دفع لطيف ؛ 4 لعدم المشي التلقائي (المشي لا يزيد عن 3 خطوات عند تحفيزه بدفع لطيف).
      ملاحظة: يكتشف عجز المشي المشترك. وهي أيضا جزء من NS.
  8. الدوران الإجباري (الاختبار 7)
    1. أمسك الفأر من قاعدة ذيله لرفعه عن السطح واتركه يمشي فقط على أطرافه الأمامية. راقب حركتها.
    2. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 للحركة الخطية العادية. 1 للميل إلى التحول إلى جانب واحد ؛ 2 للتحول إلى جانب واحد في دوائر مغلقة ؛ 3 إذا كان الدوران إلى جانب واحد بحركات خرقاء أو فشل ببطء في إكمال دائرة ؛ 4 إذا لم يكن هناك تقدم ويقع الجزء الأمامي من الجذع على المقعد.
      ملاحظة: يكمل الاختبار اختبار السلوك الدائري (الاختبار 4 ، انظر 2.5). ربما يكتشف العجز الحسي والمكاني. كما أنه جزء من نظام تسجيل NS.
  9. الموقف ضد القوى الجانبية (الاختبار 8)
    1. ضع الفأر على راحة اليد ، مع محور أنف الذيل (طولي) مواز لمحور النخيل السهمي.
    2. قم بتأرجح الماوس للأمام إلى الخلف بسرعة ثابتة لتحفيز قوى عمودية على محوره الطولي.
      ملاحظة: هذا يجبر الماوس على الاحتفاظ بوضعه المستقيم والتوازن مع القوى الجانبية أثناء التأرجح. لا يتصل جسمه عادة براحة اليد أو الأصابع.
    3. راقب البصرية واشعر بأي ملامسات راحة اليد للجانبين الأيسر والأيمن من الماوس أثناء موازنه مع التأرجح. تحقق من وجود أي سقوط غير متماثل أو لمس راحة اليد أو مؤشر على ضعف جانبي.
    4. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 إذا كان الفأر يقف في وضع مستقيم طبيعي مع ظهره مواز لراحة اليد ويمكنه التوازن مع التأرجح دون لمس راحة اليد بشدة. 1 إذا قام الماوس بتسطيح جسمه أثناء التأرجح للحصول على الاستقرار ؛ 2 إذا كان جزء من الفأر يكذب أو يلمس راحة اليد لفترة وجيزة أثناء التأرجح ؛ 3 إذا كان الماوس يكذب على جانب واحد ، بالكاد قادر على استعادة الوضع المستقيم ؛ 4 إذا كان الماوس يقع على وضع الانبطاح ، فلا يمكنه استعادة الوضع الرأسي.
      ملاحظة: يكتشف الاختبار العجز الوضعي مقابل التسارع الجانبي ، ولكن قد يكون تسجيله شخصيا. كما أنها جزء من mNSS ، NS.
  10. وضع الطرف الأمامي المستهدف (الاختبار 9)
    1. أمسك الماوس من ظهره أو من قاعدة الذيل. قم بتوجيهه بشكل عمودي على الحزمة ، والتي تعمل ك "هدف للوصول إليه". راقب "الوصول" المتماثل والإمساك.
    2. بمجرد أن يمسك الشعاع بثبات ، اسحبه برفق بعيدا وراقب "تحرير" متماثل للأطراف الأمامية.
    3. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 ل "التواصل" المتماثل والاستيعاب و "الإفراج" ؛ 1 لأي عدم تناسق في "الوصول" و / أو "الإفراج" ، مما يدل على ضعف الطرف الأمامي المعاكس.
  11. العجز الحسي الحركي للأطراف الأمامية (الاختبار 10)
    1. أمسك الماوس بقوة من ظهره وواجهه بطنيا (انظر الفيديو أو الشكل 1 ه).
    2. حفز الكفوف الأمامية على التوالي بطرف رفيع (مثل عود أسنان خشبي) من زاوية عمياء. لاحظ رد فعل المخلب الأمامي.
    3. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 لحركة الإمساك العادية والسريعة على كلا الجانبين ؛ 1 للإمساك الغائب أو المتأخر بشكل واضح على عكس ذلك.
      ملاحظة: يختبر كل من 2.10 و 2.11 العجز الحسي الحركي الدقيق في الطرف الأمامي. هم أيضا جزء من mNSS.
  12. المشي الشعاعي (الاختبار 11)
    1. ضع شعاعا خشبيا بطول 1 متر (جدول المواد) لتوصيل سطحين مرتفعين (مثل المقاعد والطاولات) على ارتفاع 1-1.5 متر فوق سطح الأرض. قم بتثبيت حواف الشعاع لتجنب الاهتزازات أو عدم الاستقرار.
    2. ضع الماوس في منتصف الشعاع مع محور ذيل الأنف الموازي للشعاع (الشكل 2 ه). السماح بالتوازن أو المشي الحر على العارضة. مراقبة توازنها أو شلل جزئي في الأطراف والسقوط.
      ملاحظة: يجب أن يكتسب الماوس توازنا على الشعاع قبل تسجيله. امسك قفازا سميكا أسفل (على مسافة حوالي 15-20 سم) لحمايته في حالة سقوطه.
    3. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 إذا كان الماوس يوازن ويمشي بوضعية ثابتة نحو جانب واحد من الشعاع ؛ 1 إذا أمسك بجانب العارضة ولم يمشي عليه. 2 إذا سقط أحد الأطراف من العارضة ؛ 3 إذا سقط طرفان من العارضة. 4 إذا حاول الماوس تحقيق التوازن على الشعاع ولكنه سقط (بعد 40 ثانية) ؛ 5 إذا سقطت بين 20-40 ثانية. النتيجة 6 إذا سقطت دون أي محاولة لتحقيق التوازن أو التعليق على العارضة (<20 ثانية).
      ملاحظة: يكشف الاختبار عن العجز الحركي المشترك للأطراف الأمامية والخلفية والجذع. كما أنه جزء من مقياس mNSS.
  13. إحساس الشعيرات (الاختبار 12)
    1. ضع الماوس على سطح مقعد مفتوح (كما في الاختبارين 4 و 5). امنح بعض الوقت للإقامة.
    2. حفز شعيراته اليمنى واليسرى على التوالي ، باستخدام قطعة قطن رفيعة طويلة الرأس ، من "زاوية عمياء". لاحظ استجابة الدوران الفوري للرأس نحو التحفيز.
    3. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 للدوران العادي والسريع عند التحفيز ، على المستوى الثنائي ؛ 1 للاستجابة المقابلة البطيئة عند التحفيز ؛ 2 لغياب الاستجابة المقابلة (لا يوجد دورة) ؛ 3 للاستجابة المتناقضة الغائبة وأبطأ ؛ 4 للاستجابة الغائبة الثنائية.
      ملاحظة: تجنب الكشف البصري عن القطن لأن هذا قد يتسبب بشكل خاطئ في دوران الرأس المماثل. يكون الاختبار صحيحا من الناحية الفنية فقط عندما "يفاجأ" الماوس بتحفيز الشعيرات. يعد الاختبار أيضا جزءا من NS ويكتشف العجز الحسي الحركي للشعيرات (القشرة البرميلية).
  14. التسلق (الاختبار 13)
    1. استخدم سطحا مائلا مطلي بالمطاط بزاوية 45 درجة (الشكل 2 أ) وضع الماوس في مركزه. راقب جهد الفأر للتسلق.
    2. النتيجة اعتمادا على النتائج على النحو التالي: 0 (عادي) إذا صعد الماوس بسرعة وبدون مجهود إلى قمة السطح ؛ 1 إذا صعد مع إجهاد ، مع ضعف الأطراف. 2 إذا تمسك بالمنحدر دون الانزلاق أو التسلق ؛ 3 إذا انزلق إلى أسفل المنحدر على الرغم من الجهود المبذولة لمنع السقوط ؛ 4 إذا انزلق دون أي جهد لمنع السقوط.
      ملاحظة: الاختبار هو أيضا جزء من NS ويكتشف القوة الحركية العامة.
  15. حساب علامة المدرسة بجمع جميع درجات الاختبارات من 1 إلى 13
    ملاحظة: تشير درجة fESS 0 إلى وجود ماوس عادي ، والدرجة القصوى هي 42. عادة ما تحفز الاحتشاء الكبيرة ذات الآفات المخططة والقشرية الدرجات >7-9. افحص العديد من الفئران الطبيعية وسجلها قبل البدء في تقييم الفئران المصابة بالسكتة الدماغية ، لاستيعاب الاختلافات في السلوك الطبيعي وتقليل درجات fESS الإيجابية الكاذبة. استخدم بروتوكول الفيديو المقدم باستمرار لتوحيد التسجيل خلال التجربة بأكملها.

3. المكون العام ل ESS (gESS)

ملاحظة: قم بتقييم gESS للكشف عن علامات "مرض الفئران العام" ، على سبيل المثال ، الالتهاب أو العدوى ، وعادة ما تكون موجودة خلال أول 1-2 أسابيع بعد fMCAo. استخدم ورقة التسجيل في الملف التكميلي 2. يفضل تقييم gESS بعد الانتهاء من fESS.

  1. ضع الماوس على سطح مستو (مقعد) واتركه يتحرك بحرية كما في 2.5. قم بتقييم الدرجات التالية بالتتابع.
  2. راقب فراءها. النتيجة وفقا لورقة تسجيل gESS (الدرجات 0-2، انظر الملف التكميلي 2).
  3. تحقق من استجابة الماوس المفاجئة: فاجئ الماوس بالتصفيق المفاجئ من زاوية عمياء ، عندما يكون مسترخيا. تحقق من رد فعل آذان الفأر وسجله وفقا لورقة تسجيل gESS (الدرجات 0-2 ، انظر الملف التكميلي 2).
  4. قم بتقييم عيون الفأر المريح بصريا: تحقق من وجود عيون مفتوحة / مغلقة أو مخاط. النتيجة وفقا لورقة تسجيل gESS (الدرجات 0-4 ، انظر الملف التكميلي 2).
  5. راقب النشاط التلقائي العام للفأر ويقظته. النتيجة وفقا لورقة تسجيل gESS (الدرجات 0-4 ، انظر الملف التكميلي 2).
  6. راقب السلوك العفوي العام للماوس لأي وجود للقلق أو فرط الاستثارة أو العدوان أو الدوران على طول محوره أثناء أي معالجة. النتيجة وفقا لورقة تسجيل gESS (الدرجات 0-4 ، انظر الملف التكميلي 2).
  7. احسب درجة gESS عن طريق إضافة درجات جميع الخطوات المذكورة أعلاه (تسجيل الملاحظة ، الخطوات 3.2. إلى 3.6).
    ملاحظة: لا تكتشف درجة gESS العجز البؤري الناجم عن آفات السكتة الدماغية ولا تتأثر ب mSU ، كما هو موضح سابقا 13. جميع الاختبارات مقتبسة من مقياس NS 9،15.

4. القياس الكمي لعجز الأطراف الأمامية باستخدام اختبار الأسطوانة

ملاحظة: تم وصف اختبار الأسطوانة مسبقا بالتفصيل9،15،27 ولن يتم وصفه بالتفصيل هنا. اختبار الأسطوانة هو اختبار سلوكي مستقل يحدد عجز الأطراف الأمامية بشكل غير متحيز (انظر 4.2).

  1. قم بإجراء الاختبار باتباع الإرشادات الواردة هنا15. التقط مقاطع فيديو وقم بتحليلها كما في 15. قم بقياس ملامسات الأطراف الأولى اليمنى واليسرى بالجدران. يوضح الشكل 3 أ ، ب صور الإعداد.
  2. احسب التحول الجانبي لاستخدام الأطراف بسبب الشلل الجزئي المعاكس (الأيمن) كنسبة مئوية. استخدم الصيغة: النسبة المئوية للتفضيل للخطوات اليسرى = [(يسار - يمين) جهات الاتصال الأولى / جهات الاتصال (اليمنى + اليسار)] × 100.
    ملاحظة: قم بإجراء اختبار أسطوانة أساسي لكل ماوس قبل إحداث ضربة. قم بإجراء الاختبارات في نقاط زمنية وفقا لكل خطة تجريبية.

5. القياس الكمي للعجز الأمامي والخلفي باستخدام اختبار درجات السلم

ملاحظة: قم ببناء جهاز للفئران من زجاج شبكي (كما هو موضح في الشكل 3 ج): ممر بطول 1 متر بجدران بارتفاع 20 سم ، ودرجات بلاستيكية (قطر 3 مم) موضوعة على فترات منتظمة تبلغ 15 مم (الشكل 3 ج1) وصندوق "ملجأ" في الطرف البعيد. ضع فراش في صندوق الملجأ للتعرف عليه وبعض حبيبات الطعام أو زبدة الفول السوداني كمكافأة. يجب أن يكون عرض الممر 10 سم ويجب أن يكون مرتفعا حوالي 30 سم من الأرض.

  1. تدريب الفئران على الجهاز قبل 1-3 أيام من خط الأساس للتجربة. قم بتشغيل التدريب كما في الخطوات من 5.1.1 إلى 5.1.4.
    ملاحظة: التدريب ضروري من أجل استيعاب في المشي العادي بسرعة ثابتة عبر ممر الدرجة ، دون توقف أو منعطفات أو سلوك استكشافي. أداء التدريب لمدة يومين متتاليين (جلستان). تتكون كل جلسة تدريبية من 3 أشواط (تشغيل = نزهة واحدة عبر الممر بأكمله باتجاه صندوق الملجأ). ويعد جمع بيانات خط الأساس ضروريا للمتابعة.
    1. نظف الدرجات والجدران قبل كل تشغيل بنسبة 70٪ كحول ، لتجنب الروائح والانحرافات / التوقفات "الاستكشافية" للماوس.
    2. ضع الماوس في بداية ممر درجة السلم ، في مواجهة صندوق الملجأ ، لبدء الجري. دع الفأر يمشي بحرية نحو صندوق الملجأ في نهاية الممر. لا تجبر على المشي.
      ملاحظة: عادة ما تكون الجري أثناء التدريب متغيرة للغاية من حيث المدة ونمط المشي. الهدف من التدريب هو المشي المستقر نحو صندوق الملجأ ، عادة في غضون <10 ثانية ، بدون توقف / منعطفات ، والذي يتم تحقيقه عادة بنهاية يوم التدريب الثاني. تعامل مع دائما برفق لتجنب تحريض الإجهاد الذي سيشتت انتباه التدريب المناسب. قم بإزالة من الممر وأعد الجري إذا بقيت في الممر واستكشف محليا لمدة >1 دقيقة ، لتجنب التعود.
    3. أداء 1جولة التدريب. دع يرتاح في صندوق الملجأ لمدة 5 دقائقبعد التشغيل الأول .
      ملاحظة: يسمح وقت الراحة المطول هذا للفأرة بالتعرف على صندوق الملجأ وإدراكه على أنه هدف "للراحة / المجزي" للوصول إليه. يعد تحقيق "تصور مجز" لصندوق الملجأ أمرا بالغ الأهمية لنجاحها.
    4. قم بإزالة الماوس من صندوق الملجأ وقم بإجراء التدريبات الثانية والثالثة كما في 5.1.2. اترك وقتا أقصر للراحة في صندوق الملجأ في نهاية هذه الأشواط (30-60 ثانية) ، لتجنب التعود.
      ملاحظة: يكتمل التدريب في اليوم 2. بحلول اليوم 2 ، تتعلم جميع تقريبا المشي عبر الممر بوتيرة ثابتة. ضع في اعتبارك استبعاد من المزيد من التجارب إذا لم تكن تتعلم.
  2. قم بإجراء التجربة على الفئران المدربة. اختبار الفئران لمدة 2 أشواط في كل مرة خلال جميع النقاط الزمنية للتجربة وخط الأساس.
    1. قم بتنفيذ عمليات التشغيل كما هو موضح في الخطوتين 5.1.1 و 5.1.2. اترك 5 دقائق كحد أقصى من وقت الراحة بين 2 أشواط في صندوق الملجأ.
    2. استخدم هاتفا ذكيا (أو كاميرا مكافئة) و "عصا سيلفي" لالتقاط مقاطع فيديو (بيانات) للحيوانات بزاوية بطنية و "عمياء" طفيفة من مسافة ما (كما هو موضح في الشكل 3c2). تأكد من التقاط الأطراف أثناء سير في الممر. لا تشتت انتباه الماوس بصريا أثناء تشغيله واتبع أطرافه أثناء تشغيله (الشكل 3c2).
    3. سجل كلا الجولتين ولكن استخدم البيانات وقم بتحليلها من التشغيل الثاني.
    4. قم بقياس عدد خطوات الخطأ (السقوط) بين الدرجات لكل طرف (يسار / يمين ، أمامي / خلفي) (الشكل 3c3) ، من خلال مراجعة الفيديو باستخدام أي برنامج مشغل وسائط مع خيارات الحركة البطيئة. احسب الفرق المطلق أو النسبة المئوية بين خطوات خطأ الطرف الأيمن والأيسر ، بشكل منفصل للأطراف الأمامية والخلفية.
      ملاحظة: يعطي التشغيل الثاني نتائج أكثر موثوقية. عادة ما يكون لدى الفأر السليم 0-1 خطوات خطأ تعسفية لكل طرف (يمين أو يسار) أثناء تشغيله الثاني ، والذي يعطي عادة نطاق فرق يبلغ 0 ±1. سيقوم الفأر المكتظ بخطوات خطأ في طرفه الأيمن (المعاكس) الجزئي (الطرف الأمامي أو الخلفي) ، مما يؤدي إلى جانبي إيجابي "باتجاه اليمين". قد يكون المصاب بالسكتة الدماغية الشديدة أبطأ أو لا يكمل الجري خلال أول 7-10 أيام بعد السكتة الدماغية ، ومع ذلك ، فإنه سيحقق الجري المناسب بعد ذلك ويظهر عجزا شديدا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يبدأ mSU ، كما هو موضح أعلاه ، بعد عملية fMCAo. تؤكد نتائجنا التمثيلية في مجموعتي الفئران المستقلتين من السكتة الدماغية والوزيمة (الشكل 4 أ) القيمة المثبتة سابقا ل mSU ، لا سيما خلال الفترة الحرجة بين الأيام 3 و 1013. في مجموعاتنا ، حدثت الوفيات ل 3/15 من المجموعة 1 (السكتة الدماغية ، متابعة لمدة 6 أشهر) ، و 2/10 من الفوج 2 (السكتة الدماغية ، متابعة لمدة 14 يوما) ، و 0/6 من التي يتم تشغيلها بشكل زائف (الشكل 4 أ) كجزء من الفيزيولوجيا المرض...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البروتوكول الحالي هو دليل شامل لبروتوكول دعم mSU ، مصمم لتقليل الوفيات الاصطناعية بين الأيام 3-10 في الفئران المعرضة لسكتات دماغية إقليمية كبيرة بواسطة نموذج fMCAo13. بالإضافة إلى ذلك ، يتضمن البروتوكول الحالي دليلا موحدا بالفيديو للمكون البؤري لمقياس ESS (fESS) لتقليل الذاتية الممتدة والتحيز للتسجيل البؤري العصبي في الفئران بعد السكتة الدماغية. إلى جانب ذلك ، نقدم اختبار درجة السلم لقياس العجز الحركي للأطراف الأمامية والخلفية على المدى الطويل (حتى 6 أشهر).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لا توجد إفصاحات للإبلاغ.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر نيكولاوس بلاكوبيتيس ويوانيس تاتسيديس على الدعم الجراحي القيم خلال أجزاء من الدراسة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<أدوات قوية > لمحلول سكر العنب < / قوي >
5٪   ؛VIOSER S.Ana (غير قابل للتطبيق)أي
مقياس حرارة رقمي بدون تلامسعام AVRONYTC20095أي
مقياس وزن رقميعام KERN & Sohn GmbhFCB6K1أي genericon
الكريات الغذائيةMucedola srlnaأي genericon, استخدم الطعام العادي لمنشأة الخاصة بك
لوحة التدفئةPhotaxnaPhotax Dishwarmer 2
مطهرسائل Schü lke & Mayr GmbHnaOctenisept & reg;
خلاطNA لسحق الحبيبات. أي genericon
Normal SalineDEMO SAحقنكلوريد الصوديوم 0,9٪
وبراعمفيأي
سكرعام وأيجنيريكون
(1 مل) بإبرةوأي عام. لإدارة الغذاء (بدون إبرة) ولإدارة السوائل تحت الجلد (بإبرة)
<قوية >أدوات ESS< / قوي >
45 درجة ؛ سطح بزاوية   ؛قم ببنائهنامصنوع من زجاج شبكي أو مواد أخرى ، مع سطح مطاطي ، لاختبارات التسلق
مسحة القطن   ؛أي عامفيبراعم قطن الأذن التجارية ، اجعل طرفها القطني طويلا وخفيفا
عصا خشبية حادة بحافةأي عامعلىسبيل المثال المسواك
شعاع طويل  قم ببنائهالأبعاد: 1 × 1 × 1 سم ، طوله حوالي 100 سم ، خشبي. ضع بين حواف طاولة لاختبار المشي
شعاع قفاز سميك   ؛أي جنريكوننالمنع صدمة عند السقوط من شعاع
الطعام العادي القطن محاقن قياس 27

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).
  2. Lourbopoulos, A., et al. Translational block in stroke: A constructive and "out-of-the-box" reappraisal. Front Neurosci. 15, 652403(2021).
  3. Cai, R., et al. Panoptic imaging of transparent mice reveals whole-body neuronal projections and skull-meninges connections. Nat Neurosci. 22 (2), 317-327 (2019).
  4. Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research. Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).
  5. Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse. Neurol Res. 19 (6), 641-648 (1997).
  6. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  7. Powers, W. J., et al. Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: 2019 update to the 2018 guidelines for the early management of acute ischemic stroke: A guideline for healthcare professionals from the american heart association/american stroke association. Stroke. 50 (12), e344-e418 (2019).
  8. Schaar, K. L., Brenneman, M. M., Savitz, S. I. Functional assessments in the rodent stroke model. Exp Transl Stroke Med. 2 (1), 13(2010).
  9. Ruan, J., Yao, Y. Behavioral tests in rodent models of stroke. Brain Hemorrhages. 1 (4), 171-184 (2020).
  10. Bederson, J. B., et al. Rat middle cerebral artery occlusion: Evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).
  11. Bieber, M., et al. Validity and reliability of neurological scores in mice exposed to middle cerebral artery occlusion. Stroke. 50 (10), 2875-2882 (2019).
  12. Lourbopoulos, A., Karacostas, D., Artemis, N., Milonas, I., Grigoriadis, N. Effectiveness of a new modified intraluminal suture for temporary middle cerebral artery occlusion in rats of various weight. J Neurosci Methods. 173 (2), 225-234 (2008).
  13. Lourbopoulos, A., et al. Inadequate food and water intake determine mortality following stroke in mice. J Cereb Blood Flow Metab. 37 (6), 2084-2097 (2017).
  14. De Simoni, M. G., et al. Neuroprotection by complement (c1) inhibitor in mouse transient brain ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 23 (2), 232-239 (2003).
  15. Llovera, G., Roth, S., Plesnila, N., Veltkamp, R., Liesz, A. Modeling stroke in mice: Permanent coagulation of the distal middle cerebral artery. J Vis Exp. (89), e51729(2014).
  16. Dzirkale, Z., et al. Long-term behavioural alterations in mice following transient cerebral ischemia. Behav Brain Res. 452, 114589(2023).
  17. Kolabas, Z. I., et al. Distinct molecular profiles of skull bone marrow in health and neurological disorders. Cell. 186 (17), 3706-3725.e29 (2023).
  18. Kestner, R. I., et al. Gene expression dynamics at the neurovascular unit during early regeneration after cerebral ischemia/reperfusion injury in mice. Front Neurosci. 14, 280(2020).
  19. Pinto, R., et al. Bridging the transient intraluminal stroke preclinical model to clinical practice: From improved surgical procedures to a workflow of functional tests. Front Neurol. 13, 846735(2022).
  20. Damigos, G., et al. Machine learning based analysis of stroke lesions on mouse tissue sections. J Cereb Blood Flow Metab. 42 (8), 1463-1477 (2022).
  21. Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J Vis Exp. (47), (2011).
  22. Bowman, T. A., et al. Acyl coa synthetase 5 (acsl5) ablation in mice increases energy expenditure and insulin sensitivity and delays fat absorption. Mol Metab. 5 (3), 210-220 (2016).
  23. John, L. M., et al. Housing-temperature reveals energy intake counter-balances energy expenditure in normal-weight, but not diet-induced obese, male mice. Commun Biol. 5 (1), 946(2022).
  24. Tashiro, M., Hosokawa, Y., Amao, H., Tohei, A. Duration of thermal support for preventing hypothermia induced by anesthesia with medetomidine-midazolam-butorphanol in mice. J Vet Med Sci. 82 (12), 1757-1762 (2020).
  25. Taylor, D. K. Study of two devices used to maintain normothermia in rats and mice during general anesthesia. J Am Assoc Lab Anim Sci. 46 (5), 37-41 (2007).
  26. Bendele, A. M. Urinary system. Jones, T. C., Hard, G. C., Mohr, U. , Springer Berlin Heidelberg. Berlin, Heidelberg. 456-462 (1998).
  27. Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. Cns plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury. Neuropharmacology. 39 (5), 777-787 (2000).
  28. Mathis, A., et al. Deeplabcut: Markerless pose estimation of user-defined body parts with deep learning. Nat Neurosci. 21 (9), 1281-1289 (2018).
  29. Fonarow, G. C., et al. Relationship of national institutes of health stroke scale to 30-day mortality in medicare beneficiaries with acute ischemic stroke. J Am Heart Assoc. 1 (1), 42-50 (2012).
  30. Allen reference atlas - adult mouse brain coronal. Available from atlas.Brain-map.Org. , Allen Institute for Brain Science. (2011).
  31. Groger, M., et al. Release of bradykinin and expression of kinin b2 receptors in the brain: Role for cell death and brain edema formation after focal cerebral ischemia in mice. J Cereb Blood Flow Metab. 25 (8), 978-989 (2005).
  32. Kolbinger, A., et al. Behind the wall-compartment-specific neovascularisation during post-stroke recovery in mice. Cells. 11 (10), (2022).
  33. Merino-Serrais, P., et al. Microanatomical study of pyramidal neurons in the contralesional somatosensory cortex after experimental ischemic stroke. Cereb Cortex. 33 (4), 1074-1089 (2023).
  34. Metz, G. A., Whishaw, I. Q. The ladder rung walking task: A scoring system and its practical application. J Vis Exp. (28), (2009).
  35. Metz, G. A., Whishaw, I. Q. Cortical and subcortical lesions impair skilled walking in the ladder rung walking test: A new task to evaluate fore- and hindlimb stepping, placing, and co-ordination. J Neurosci Methods. 115 (2), 169-179 (2002).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة