يضمن الالتزام الصارم بالإرشادات الأخلاقية الرفاهية والتعامل المناسب مع أسماك الزرد المشاركة في تجاربنا. تم إجراء جميع الأنشطة التجريبية وفقا للمعايير التي وضعتها اللجان المؤسسية لرعاية واستخدامه (IACUC). تم تنفيذ التجارب والنتائج المفصلة هنا بموافقة IACUC بموجب البروتوكول المصرح به AUP-21-066.
< p class = "jove_title" >
1. تحضير وتخزين محاليل المخزون
< p class = "jove_content" > تنبيه: قم بإعداد محلول مخزون التريكيين في غطاء الدخان ، مع ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة (PPE).
- قم بقياس 400 مجم من مسحوق التريكيين وحله في 97.9 مل من الماء منزوع الأيونات (DI). ضع أداة التحريك المغناطيسي في الحاوية واخلط المحلول تدريجيا.
- اضبط الرقم الهيدروجيني عن طريق إضافة أقل من 17 مل من محلول هيدروكسيد الصوديوم بشكل تدريجي. استمر في إضافة قطرات هيدروكسيد الصوديوم حتى يصل الرقم الهيدروجيني إلى نطاق 6.8.-7.2.
- حدد التركيز النهائي لمحلول التريكيين ، مع مراعاة هيدروكسيد الصوديوم المضاف الضروري لضبط الأس الهيدروجيني وتخزينه.
ملاحظة: محلول التريكايين حساس للضوء ويجب تخزينه في حاوية بلون كهرماني عند 4 درجات مئوية عندما لا يكون قيد الاستخدام.
- قم بقياس 258.13 مجم من أميودارون وحلها في 1 لتر من ماء DI. أدخل أداة تقليب مغناطيسية في الحاوية وحركها لبضع دقائق حتى يذوب المحلول تماما ويخلو من أي مسحوق. قم بتخزين المحلول داخل الثلاجة على حرارة 4 درجات مئوية عندما لا يكون قيد الاستخدام.
ملاحظة: يجب تحضير Amiodarone داخل شفاط الدخان وتخزينه داخل الثلاجة عند 4 درجات مئوية.
< ص الفئة = "jove_title" >
2. تربية الأسماك
- الحفاظ على الأسماك في أحواض فردية مرتبطة بنظام مياه متداولة ، مع الحفاظ على درجة الحرارة بين 28-29 درجة مئوية.
- ضمان المراقبة المستمرة لجودة المياه والالتزام بدورة 14 ساعة / 10 ساعات ليلا ونهارا.
- قسم 40 سمكة إلى أربع مجموعات ، تتكون كل منها من 10 أسماك ، وضعها في أحواض منفصلة.
3. إعداد الجهاز
ملاحظة: يجب تنفيذ الإجراء الموضح في الخطوة 3.2 لكل غرفة من غرف الجهاز (<فئة قوية = "xfig" >الشكل 1). بينما يمكن إعداد كل غرفة بشكل مختلف ، من أجل الاتساق في التجربة ، ينصح بالحفاظ على إعدادات موحدة في جميع الغرف.
- قم بتوصيل الجهاز بمصدر طاقة وابدأ التشغيل بالضغط على الزر الأحمر الموجود على اللوحة الأمامية.
- انتقل عبر شاشة اللمس الخاصة بالجهاز لاختيار الغرفة المراد تكوينها.
- اضبط إعداد مرشح التردد المنخفض على 0.1 هرتز وإعداد مرشح التردد العالي على 500 هرتز. اضبط إعداد الكسب على 10,000.
- ارفع الغطاء الأمامي للوصول إلى الغرف الأربع. قبل بدء التجربة ، اغمر إسفنجة كل غرفة (إسفنجة السليلوز القياسية) في محلول التريكايين ، ثم اعصر أي سائل زائد.
- قم بتدوير المصفوفة المكونة من أربعة أقطاب كهربائية للتأكد من إمكانية الوصول إلى الإسفنجة قبل إدخال السمكة.
< ص الفئة = "jove_title">
4. علاج أميودارون
ملاحظة: استخدم المياه من أحواض الأسماك (مياه السمك) لتحضير محاليل مخففة من أميودارون وتريكايين. يجب تكرار الخطوتين 4.3 و4.4 لكل مجموعة مفصولة في الخطوة 2.3 لكل محلول معد في الخطوة 4.1.
- اتبع الخطوات الموضحة أدناه لتخفيف محلول مخزون Amiodarone.
قم - بتخفيف 8.75 مل من محلول المرق إلى 41.25 مل من ماء السمك لتحقيق تركيز 70 ميكرومتر.
- قم بتخفيف 12.5 مل من محلول المرق إلى 37.5 مل من ماء السمك لتحقيق تركيز 100 ميكرومتر.
قم - بتخفيف 25 مل من محلول المرق في 25 مل من ماء السمك لتحقيق تركيز 200 ميكرومتر.
- تحضير محلول التخدير عن طريق تخفيف 4 مل من محلول مخزون التريكايين في 100 مل من ماء السمك ، مما ينتج عنه تركيز تريكايين 0.16 مجم / مل
- اغمر كل سمكة على حدة في محلول أميودارون المحضر لمدة 5 دقائق. استخدم أجهزة ضبط الوقت لمراقبة مدة الغمر بدقة.
- انقل السمك إلى محلول التريكايين لمدة 2-3 دقائق للتخدير. تأكد من أن العلاج لا يسبب موت الأسماك. إذا أظهرت سمكة سلوكا غير طبيعي ، مثل فقدان اللون أو انخفاض كبير في حركة الخياشيم ، فقم بإزالتها من المحلول على الفور ووضعها مرة أخرى في مياه السمك النظيفة.
< p class = "jove_title" >
5. جمع بيانات تخطيط القلب
ملاحظة: اتبع هذه التعليمات على الفور بعد إكمال الخطوة 4.4. كرر العملية لكل غرفة قبل إغلاق الجهاز. تم تصميم الغرف لاستيعاب الأسماك التي يتراوح عرضها من 4-10 مم وطولها 25-50 مم.
- ارفع السمك من محلول التريكايين وضعه على الإسفنجة ، مع التأكد من أن جانبه البطني متجها لأعلى.
- ضع مجموعة الأقطاب الكهربائية في شكل معين فوق منطقة صدر السمكة لالتقاط إشارات تخطيط القلب من أربع نقاط مختلفة في وقت واحد (<فئة قوية = "xfig" >الشكل 2 أ ، ب). تأكد من ضبط كل قطب كهربائي بعناية حتى يتلامس كل دبوس مع جلد السمكة.
- قم بتدوير كل قطب كهربائي ، وخفض الدبوس حتى يتلامس مع الجانب السفلي للسمكة. إذا كان الدبوس مرتفعا جدا ، فقم بتدوير المسمار اللولبي المقابل في اتجاه عساعت لخفضه حتى يلامس السمكة.
- قم بإجراء الضبط الموضح أعلاه للأقطاب الكهربائية في جميع الغرف.
- أغلق غطاء الغرف بمجرد وضع جميع مصفوفات الأقطاب الكهربائية بشكل صحيح فوق السمكة في غرف التشغيل.
- ضع علامة على كل غرفة للتسجيل عن طريق تحديدها على شاشة اللمس، ثم ابدأ التسجيل بالنقر فوق الزر "تسجيل" على الشاشة.
- انقر فوق الزر "إيقف" بعد دقيقتين ثم انقر فوق الزر "حفظ" من النوافذ المطالبة التي تنبثق على الشاشة بعد التوقف. احفظ المعلومات إما على قرص أو على السحابة ، اعتمادا على احتياجات البحث المحددة.
6. استكشاف أخطاء نظام تحديد المواقع ذو الأربعة أقطاب كهربائية وإصلاحها
ملاحظة: في بعض الأحيان ، قد يفشل قطب كهربائي واحد أو عدة أقطاب كهربائية في التقاط إشارة تخطيط كهربية القلب واضحة ، مما يستلزم إعادة التوضع. استخدم الخطوات التالية لاستكشاف أخطاء مصفوفة الأقطاب الكهربائية وإصلاحها عند الحاجة.
- اضغط على زر الإيقاف على واجهة الجهاز لإيقاف عملية التسجيل وتحديد القناة أو القنوات ذات الإشارات غير المتسقة.
- ارفع الغطاء الأمامي للوصول إلى غرف القطب. حدد الغرفة (الغرف) والأقطاب الكهربائية المحددة التي تسبب المشكلات.
- أدر المسمار العلوي في اتجاه عقارب الساعة لضبط قرب القطب من السمكة. سيؤدي هذا الإجراء إلى خفض القطب الكهربائي بالقرب من السمكة.
- كرر الخطوة 6.3 حسب الحاجة. إذا لم يؤد مجرد الاقتراب إلى حل المشكلة ، فقم بتدوير القطب الكهربائي إلى مكان مختلف على السمكة حتى يتم الحصول على إشارة مرضية.
< p class = "jove_title" >
7. استخراج البيانات وتحليلها
ملاحظة: تستخدم جميع تحليلات البيانات الأساسية المقدمة في هذه الورقة تقنية Wavelet < sup class = "xref" >21 لتقليل أنواع مختلفة من الضوضاء والانحراف المعياري لنبضات الجيوب الأنفية الطبيعية (SDNN) لحساب تباين النبض إلى النبض ل HR في مقاطع مدتها دقيقة واحدة.
- بمجرد حفظ البيانات على القرص أو السحابة ، قم باستردادها لتحليلها أو أرسلها مباشرة إلى خادم سحابي لمزيد من المعالجة.
- انتقل إلى البيانات المحفوظة بالنقر فوق الزر استعراض على الشاشة وحدد مجموعات البيانات المراد استخدامها.
- حدد الزر "استخراج" على الخيارات التي تظهر على الشاشة وقم بتوصيل محرك أقراص USB بالجزء الخلفي من الجهاز لاستخراج البيانات.
- اتبع مطالبات الجهاز لحفظ مجموعات البيانات المحددة على محرك الأقراص الخارجي للاسترداد والتحليل اللاحق.