هنا ، نقدم بروتوكولا لمقايسة السمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة (ADCC) باستخدام مجموعة المقايسة الحيوية ADCC. توفر هذه الطريقة أداة قيمة لتوضيح آلية ADCC وتقييم الإمكانات العلاجية للأجسام المضادة في العلاج المناعي للسرطان.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقييم السمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة والوسيطة الخلوية في الخلايا السرطانية باستخدام الاختبار الحيوي لمراسل السمية الخلوية المعتمد على الأجسام المضادة
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تمثل طريقة السمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة والوسطاء الخلوي (ADCC) أداة مهمة لتقييم فعالية الأجسام المضادة العلاجية في العلاج المناعي للسرطان. يعد تقييم نشاط مركز أبوظبي للسرطان في الخلايا السرطانية أمرا ضروريا لتطوير وتحسين العلاجات القائمة على الأجسام المضادة. هنا ، نقترح نهجا منهجيا لاستخدام مجموعة الاختبار الحيوي ADCC للتقييم الكمي لتفاعل ADCC باستخدام خلايا سرطان الغدة الدرقية كخلايا مستجيبة. يتضمن البروتوكول الزراعة المشتركة للخلايا المستجيبة مع الخلايا السرطانية المستهدفة بنسب مختلفة في وجود جسم مضاد علاجي. تتضمن مجموعة المقايسة الحيوية ADCC المستخدمة في هذه التجربة الخلايا المستجيبة المعدلة وراثيا التي تعبر عن جين مراسل لوسيفيراز تحت سيطرة العوامل النووية لعناصر استجابة الخلايا التائية المنشطة (NFAT). عند ارتباط المستضد السطحي بالخلايا المستهدفة بالأجسام المضادة والخلايا المستجيبة ، تطلق الخلايا المستجيبة لوسيفيراز ، مما يتيح القياس الكمي للسمية الخلوية من خلال قياس إشارة اللمعان. على عكس فحوصات ADCC التقليدية ، أثبتت هذه الطريقة ارتباط المستضد المستهدف بالأجسام المضادة والخلايا المستجيبة ، والتي يمكن أن تؤدي إلى نتائج موثوقة في فترة قصيرة.
المقدمة
السمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة (ADCC) هي آلية مهمة تمارس من خلالها الأجسام المضادة تأثيرات قتل الخلايا بوساطة المناعة1،2،3. يتم تنشيط الخلايا المناعية عن طريق الارتباط بالجسم المضاد العلاجي ، الذي يتفاعل مع المستضدات السطحية للخلايا المستهدفة لإطلاق الجرانزيم ، البيرفورين ، مما يؤدي إلى موت الخلية المستهدفة. تشمل هذه الخلايا المناعية الخلايا القاتلة الطبيعية (NK) والعدلات2،3،4،5،6،7. أصبح اختبار ADCC أداة مهمة لتقييم فعالية الأجسام المضادة العلاجية8،9.
في مقايسة ADCC التقليدية ، يتم استخدام خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMCs) أو الخلايا القاتلة الطبيعية كخلايا مستجيبة لمراقبة فعالية الجسم المضاد العلاجي عن طريق تحديد معدل موت الخلايا المستهدفة. تستخدم طريقتنا مجموعة المقايسة الحيوية ADCC التي تتضمن خلايا مستجيبة معدلة وراثيا تعبر عن جين مراسل لوسيفيراز تحت سيطرة العامل النووي لعناصر استجابة الخلايا التائية المنشطة (NFAT). ثم نقوم بتحديد ارتباط المستضد السطحي بالخلايا المستهدفة بالجسم المضاد والخلايا المستجيبة. تعتمد هذه الطريقة على تفاعل ADCC الذي يحدث في فترة قصيرة دون الحاجة إلى خلايا PBMC البشرية. تشمل الخطوات التجريبية الزراعة المشتركة للخلايا المستجيبة مع الخلايا المستهدفة في وجود الأجسام المضادة العلاجية.
أثناء الحضانة ، يرتبط الجسم المضاد العلاجي بالمستضد المستهدف على سطح الخلايا المستهدفة ، مما يؤدي إلى ارتباط الخلايا المستجيبة وجزء Fc للجسم المضاد. يؤدي هذا إلى تنشيط عنصر استجابة NFAT وإطلاق إشارات تلألؤ للتقييم الكمي لتفاعل ADCC.
قبل إجراء التجربة ، يجب تأكيد التعبير عن المستضد المستهدف في الخلايا المستهدفة إما عن طريق قياس التدفق الخلوي أو النشاف الغربي. يتم زراعة الخلايا المستهدفة وتمريرها إلى ألواح 96 بئرا لمدة 24 ساعة قبل التجربة. تتم إضافة تركيزات مختلفة من الجسم المضاد العلاجي مع عدد الخلايا المختلفة للخلايا المستجيبة لتحقيق نسبة الخلايا المحسوبة من المستجيب إلى الهدف.
تشمل الخطوات الرئيسية في هذه الطريقة (1) تحضير الخلايا المستهدفة والخلايا المستجيبة ، (2) نسب الخلايا المستجيبة إلى الهدف ، (3) تحضير تركيزات مختلفة من الجسم المضاد ، و (4) مدة حضانة متفاوتة. بعد الحضانة ، يتم قياس إشارات التلألؤ باستخدام مقياس الإضاءة ، مما يوفر قراءة كمية لنشاط ADCC. بالمقارنة مع الطرق الأخرى لقياس ADCC ، فإن هذه الطريقة سهلة التشغيل نسبيا ، والنتائج دقيقة.
يشير الاختبار الحيوي لمراسل ADCC إلى ارتباط المستضد المستهدف والأجسام المضادة العلاجية والخلايا المناعية في تنشيط مسار ADCC. ينشط هذا الارتباط النسخ الجيني من خلال مسار NFAT في خلايا Jurkat المهندسة بالخلايا المستجيبة مع التعبير بثبات عن مستقبلات FcγRIIIa ، متغير V158 (عالي التقارب). يتوسط عنصر استجابة NFAT في التعبير عن لوسيفيراز في الخلايا المستجيبة10،11. يتم قياس النشاط البيولوجي للجسم المضاد في آلية العمل (MOA) ل ADCC من خلال إشارة لوسيفيراز المنتجة من مسار NFAT. يتم قياس إشارة لوسيفيراز في الخلايا المستجيبة - مستقبلات FcγRIIIa التي تعبر عن خلايا Jurket - باستخدام قارئ التلألؤ (الشكل 1). نسبة الإشارة إلى الضوضاء في الفحص عالية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. الكشف عن تعبير EGFR و VEGFR في الخلايا المستهدفة
ملاحظة: استخدم النشاف الغربي للكشف عن تعبير المستضد المستهدف في الخلايا المستهدفة.
- تحضير العينة
- استزراع الخلايا (خطوط خلايا سرطان الغدة الدرقية البشرية BHT-101 و SW-1736) في قوارير T75 باستخدام وسط معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) المكملة بمصل بقري الجنين بنسبة 10٪ (FBS) ، و 1٪ L-glutamine ، و 1٪ مضادات حيوية (Penicillin-Streptomycin).
- احصد الخلايا عندما تكون ملتصقة بنسبة 80٪ عن طريق إزالة وسائط الثقافة وغسل الخلايا باستخدام PBS. أضف 5 مل من PBS وقم بإلغاء الخلايا باستخدام مكشطة الخلايا لإزالة الخلايا من قارورة الثقافة. انقل الخلايا إلى أنبوب مخروطي سعة 15 مل.
- عد الخلايا بعداد الخلايا.
- Aliquot 5 × 106 من خلايا BHT-101 و SW-1736 في أنابيب مخروطية سعة 15 مل.
- قم بتدوير الخلايا عند 135 × جم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. قم بإزالة PBS الطافي.
- قم بتحلل حبيبات الخلية عن طريق إضافة 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت لتحلل RIPA الذي يحتوي على مثبطات البروتياز والفوسفاتيز لمدة 5 دقائق على الثلج. انقل المحللة إلى أنبوب سعة 2 مل ، وجهاز الطرد المركزي عند 15,000 × جم لمدة 15 دقيقة ، وانقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد سعة 2 مل.
- قم بقياس تركيز البروتين في محللة الخلية باستخدام مجموعة مقايسة حمض البيسنجونينيك (BCA).
- Aliquot 70 ميكروغرام من البروتين من محللة الخلية من كل عينة ، أضف 2x عازلة عينة Laemmli مكملة بنسبة 10٪ 2-mercaptoethanol ، وغلي العينات عند 100 درجة مئوية لمدة 5 دقائق لتمسخ العينات.
- الرحلان الكهربائي للهلام ونقل الغشاء
- تحضير 8٪ جل بولي أكريلاميد دوديسيل الصوديوم (SDS) باستخدام الماء المقطر (4.7 مل) ، 30٪ أكريلاميد (2.7 مل) ، 1.5 M Tris Buffer ، درجة الحموضة 8.8 (2.5 مل) ، 10٪ كبريتات دوديسيل الصوديوم (0.1 مل) ، 10٪ بيرسلفات الأمونيوم (100 ميكرولتر) ، و TEMED (10 ميكرولتر).
- قم بتشغيل 70 ميكروغرام من العينات المشوهة في جل SDS-بولي أكريلاميد بنسبة 8٪ عند 80 فولت لمدة 20 دقيقة وعند 120 فولت لمدة 100 دقيقة.
- انقل البروتين الموجود على الجل إلى غشاء فلوريد البولي فينيلدين (PVDF) عند 100 فولت لمدة 90 دقيقة.
- بعد النقل ، قم بسد الغشاء بحليب خالي الدسم بنسبة 7٪ مخفف في مخزن TBS-T (20 ملي مولار تريس الرقم الهيدروجيني 7.6 ، 140 ملي كلوريد الصوديوم ، 0.2٪ توين -20) لمدة 1 ساعة.
- حضانة الأجسام المضادة
- احتضان الغشاء المسدود بمستقبلات عامل نمو البشرة المضادة للفأر (EGFR) والأجسام المضادة أحادية النسيلة لمستقبلات عامل النمو البطاني للأوعية الدموية للأرانب (مخففة عند 1: 1,000 في حليب خالي الدسم بنسبة 7٪) طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
- بعد الحضانة ، اغسل الغشاء جيدا باستخدام محلول ملحي مخفض (TBS-T) (20 ملي مولار Tris pH 7.6 ، 140 ملي كلوريد الصوديوم ، 0.2٪ Tween-20) لمدة 7 دقائق وكرر 4x.
- احتضان الغشاء بالجسم المضاد الثانوي المترافق ب HRP (مخفف عند 1: 4,000 في حليب خالي الدسم بنسبة 7٪ (TBS-T)) لمدة ساعة واحدة.
- بعد الحضانة ، اغسل الغشاء جيدا باستخدام المخزن المؤقت TBS-T لمدة 7 دقائق وكرر ذلك 4 مرات.
- كشف البروتين
- احتضان الغشاء في ركيزة HRP الكيميائية المحضرة عن طريق خلط 1 مل من محلول بيروكسيد الركيزة HRP مع 1 مل من كاشف لومينول الركيزة HRP (كلا الكواشف من مجموعة الركيزة الكيميائية المضيئة) لمدة دقيقتين.
- تصور الغشاء باستخدام نظام التصوير.
2. تحضير الخلايا المستهدفة
- استزراع الخلايا التائية المستهدفة ، خلايا BHT-101 و SW-1736 بشكل كبير حتى 80٪ ملتقى في وسائط RPMI مكملة بنسبة 10٪ FBS و 1٪ L-glutamine و 1٪ مضادات حيوية (Penicillin-Streptomycin) في قوارير T-75.
- بعد إزالة الوسائط ، اغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام PBS. احتضان الخلايا ب 1 مل من المخزن المؤقت لتفكك الخلايا غير الأنزيمية لمدة 5 دقائق لطرد الخلايا الملتصقة. أضف PBS لإيقاف تفاعل المخزن المؤقت لتفكك الخلايا غير الأنزيمية. قم بتدوير الخلايا عند 135 × جم لمدة 5 دقائق وأضف 5 مل من PBS.
ملاحظة: هنا ، نستخدم مخازلة لتفكك الخلايا غير الأنزيمية للحفاظ على سلامة بروتين سطح الغشاء. - عد الخلايا وبذرها في 15,000 خلية / بئر في 96 بئرا من البوليسترين الأبيض ذات قاع شفاف ومسطح.
3. تحضير تركيزات متفاوتة من الجسم المضاد العلاجي
- لاتباع هذا البروتوكول ، استخدم سيتوكسيماب (الجسم المضاد الخيمري المضاد ل EGFR) لربط EGFR واستخدام Bevacizumab (جسم مضاد مضاد ل VEGF-A) كعنصر تحكم سلبي.
- قم بإعداد المخزن المؤقت للمقايسة الحيوية من ADCC عن طريق إضافة 1.4 مل من مصل IgG منخفض إلى 33.6 مل من RPMI-1640 (المتوفرة في المجموعة).
- استخدم المخزن المؤقت للمقايسة الحيوية ADCC لتخفيف الأجسام المضادة. تحضير 400 ميكرولتر من كل جسم مضاد بثلاثة تركيزات مختلفة: 30 ميكروغرام / مل ، و 3 ميكروغرام / مل ، و 0.3 ميكروغرام / مل (تركيز 3x) للحصول على التركيز النهائي البالغ 10 ميكروغرام / مل ، و 1 ميكروغرام / مل ، و 0.1 ميكروغرام / مل لتغطية واسعة الطيف للكشف عن الجرعة المثلى.
ملاحظة: تعتمد تركيزات الأجسام المضادة النهائية على 25 ميكرولتر من الخلايا المستهدفة المستنبتة ، و 25 ميكرولتر من الخلايا المستجيبة ، و 25 ميكرولتر من الجسم المضاد في كل بئر من صفيحة 96 بئرا.
4. تحضير الخلايا المستجيبة
- قم بتخزين خلايا المستجيب عند -80 درجة مئوية قبل الاستخدام.
- قم بتسخين المخزن المؤقت للمقايسة الحيوية من ADCC في حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل الاستخدام.
- قم بإذابة خلايا مستجيب المقايسة الحيوية ADCC من التخزين البارد -80 درجة مئوية عن طريق وضعها في حمام مائي 37 درجة مئوية (حوالي 2-3 دقائق). قم بالصخور برفق وفحص القارورة بصريا ، لكن لا تقلبها أثناء عملية الذوبان.
- انقل 630 لتر من خلايا المستجيب إلى أنبوب سعة 15 مل يحتوي على 3.6 مل من المخزن المؤقت لفحص ADCC. تخلط جيدا عن طريق قلب الأنبوب برفق 2x.
5. حضانة الخلايا المستجيبة بالجسم المضاد والخلايا المستهدفة
- بعد الحضانة بين عشية وضحاها ، قم بإزالة الوسائط من الخلايا المستهدفة (15,000 خلية سرطانية لكل بئر) وأضف 25 ميكرولتر من المخزن المؤقت للمقايسة الحيوية ADCC و 25 ميكرولتر من سيتوكسيماب (مضاد EGFR) و Bevacizumab (مضاد VEGF) للحصول على التركيز النهائي البالغ 0.1 ميكروغرام / مل ، أو 1 ميكروغرام / مل ، أو 10 ميكروغرام / مل من الخلايا المستهدفة في كل بئر وفقا للشكل 2.
- أضف 75,000 خلية مستجيب في 25 ميكرولتر من المخزن المؤقت للمقايسة الحيوية ADCC لكل بئر في الصفيحة الدقيقة المكونة من 96 بئرا التي تحتوي على الخلايا المستهدفة. تعمل الآبار المسماة على أنها لا يوجد mAb كأي تحكم في الأجسام المضادة (الشكل 2).
- أضف المخزن المؤقت للمقايسة الحيوية من ADCC إلى الآبار المسماة AB (المخزن المؤقت للمقايسة الحيوية ADCC) للتحكم الفارغ.
- احتضان اللوحة لمدة 6 ساعات.
6. القراءة الكمية لنشاط مجلس أبوظبي للتوزيع
- قم بإعداد كاشف فحص لوسيفيراز قبل 4 ساعات من القياس عن طريق إضافة المخزن المؤقت لفحص لوسيفيراز إلى ركيزة فحص لوسيفيراز (المجففة بالتجميد).
- بعد 6 ساعات من حضانة الخلايا المستهدفة والأجسام المضادة والخلايا المستجيبة ، أضف 75 ميكرولتر من كاشف فحص لوسيفيراز إلى كل بئر واحتضنه لمدة 30 دقيقة.
- بعد فترة الحضانة ، قم بقياس إشارة التلألؤ في كل بئر باستخدام مقياس الإضاءة ، مما يوفر قراءة كمية لنشاط ADCC.
- لتحليل البيانات ، احسب الحث الطية على النحو التالي:
تحريض الطي = RLU (أجسام مضادة مستحثة - خلفية) / RLU (لا يوجد تحكم في الأجسام المضادة - خلفية).
حيث RLU هي وحدات تلألؤ نسبية ؛ الأجسام المضادة المستحثة هي الآبار B3 إلى B8 و C3 إلى C8. لا يوجد تحكم في الأجسام المضادة = B2 و C2 ؛ الخلفية = متوسط RLU من البئر A2 إلى A5 (الشكل 2).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم الكشف عن التعبير عن EGFR و VEGFR في خلايا BHT-101 و SW-1736 المستهدفة باستخدام النشاف الغربي. تم اكتشاف تعبير EGFR في كل من خلايا BHT-101 و SW-1736 ولكن ليس تعبير VEGFR (الشكل 3).
باستخدام مجموعة الاختبار الحيوي ADCC ، اكتشفنا تفاعل ADCC للجسم المضاد ل EGFR ، سيتوكسيماب ، باستخدام خطوط الخلايا الإيجابية ل EGFR ، BHT-101 و SW-1736 ، كخلايا مستهدفة. تم استخدام Bevacizumab ، وهو منشط VEGF ، كجسم مضاد للتحكم السلبي. تم تحضين تركيزات مختلفة من الأجسام المضادة والخلا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا ، قدمنا طريقة المقايسة الحيوية ADCC لتقييم تفاعل ADCC للجسم المضاد العلاجي. الطريقة واضحة ومباشرة وتستخدم تنسيقا بسيطا "إضافة ومزيج قراءة" للقياس.
قبل إجراء التجربة ، يجب تأكيد التعبير عن المستضد المستهدف في الخلايا المستهدفة إما عن طريق قياس التدفق الخلوي أو النشاف الغربي. سيكون قياس التدفق الخلوي أداة أفضل للكشف عن المستضد السطحي. ومع ذلك ، فإن استخدام قياس التدفق الخلوي يمكن أن يضغط على الخلايا ، مما يتسبب في موت الخلايا المبرمج ويؤثر على صلاحية الخلية...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن جميع المؤلفين عدم وجود تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
نحن ممتنون للبروفيسور تسنغ (IMCB ، A * STAR) لدعمه هذا العمل. تم دعم هذه الدراسة من قبل مؤسسة الشباب للمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (NSFC) (82202231) ، ومشروع العلوم والتكنولوجيا الطبية والصحية في مقاطعة تشجيانغ ، الصين (2021KY110،2024KY824).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.5٪ Trypsin-EDTA | Gibco | 15400-054 | تمييع 10x في PBS لصنع 0.05٪ Trypsin |
| 1x Tris Buffer Saline (TBS) 1st | BASE | BUF-3030-1X1L | لغسل الأغشية في النشاف الغربي |
| 1.5 M Tris Buffer ، درجة الحموضة 8.8 | 1st BASE | BUF-1419-1L-pH8.8 | لتحضير جل SDS |
| 2-Mercaptoethanol | Sigma Aldrich | M7522-100ML | لإعداد عينة النشاف الغربي |
| 30٪ محلول أكريلاميد / مكرر | Bio-Rad | # 1610158 | لتحضير جل SDS |
| 4x Laemmli Buffer | Bio-Rad | # 1610747 | لتحضير عينة من |
| صفيحة البوليسترين الأبيض ذات النشاف الغربي 96 بئر مع قاع مسطح شفاف | Corning Incorporated | 3610 | لفحص |
| ADCC خلايا مستجيب المقايسة الحيوية ADCC (0.65 مل) Promega | G7011 | يتضمن في مجموعة أدوات الاختبار الحيوي الأساسية لمراسل ADCC (Promega G7010) ، 1 × 1 قارورة | |
| الاختبار الحيوي لمراسل ADCC | Promega | G7010 | المذكورة كمجموعة اختبار حيوي من ADCC لمقايسة ADCC في هذه التجربة |
| Ammonium Persulfate | Sigma Aldrich | A3678-25G | لتحضير جل SDS |
| Bevacizumab (جسم مضاد مضاد ل VEGF متوافق مع البشر) | MVASI-استخدم | كجسم مضاد للتحكم السلبي في اختبار | |
| ADCCBHT-101 | معهد لايبنيز DSMZ | ACC279 | خلايا سرطان الغدة الدرقية الحليمي البشري |
| Bio-Glo Luciferase Assay Buffer | Promega | G7941 | يتضمن في مجموعة أدوات المقايسة الحيوية لمراسل ADCC الأساسية (Promega G7010) ، 1 × 10 مل |
| Bio-Glo Luciferase Sterize Strase Substrate (المجففة بالتجميد) | يتضمن Promega | G7941 | في مجموعة أدوات المقايسة الحيوية الأساسية لمراسل ADCC (Promega G7010) ، 1 × 1 قارورة |
| مكشطة خلية | GenFollower | GD00235 | لإزالة الخلية من قارورة المزرعة |
| Cetuximab (الجسم المضاد الخيمري المضاد ل EGFR) | ERBITUX | - | استخدم كجسم مضاد علاجي في مقايسة ADCC |
| ركيزة HRP الكيميلومنسونسينت | Merck Millipore | WBKLS0500 للكشف عن البروتين في النشاف الغربي | |
| الماء المقطر | Gibco | 15230-162 | لتحضير جل |
| SDS مصل الأبقار الجنيني (FBS) | Gibco | 10270-106 | مكمل وسائط الثقافة |
| iBright CL1500 نظام | التصوير2462621100038 علمي حراري | للكشف عن البروتين في النشاف الغربي | |
| L-glutamine ، 200 ملي مولار | Gibco | 25030-081 | مكمل وسائط |
| الثقافة Low IgG Serum | Promega | G7110 | يتضمن في مجموعة أدوات الاختبار الحيوي لمراسل ADCC الأساسية (Promega G7010) ، 1 × 4 مل |
| Megafuge 8R | Thermo Scientific | 42876589 | الطرد المركزي |
| ماوس الأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة ل EGFR | BD Biosciences | 610016 | الجسم المضاد الأساسي في النشاف الغربي |
| الفأر الأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة ل VEGFR | BD Biosciences | 571194 | الجسم المضاد الأساسي في النشاف |
| الغربي المخزن المؤقت لتفكك الخلايا غير الأنزيمية | Sigma Aldrich | C5789-100ML | لحصاد الخلايا من قارورة T75 |
| Penicillin-Streptomycin | PAN Biotech | P06-07100 | مضاد للبكتيريا ل وسائط الثقافة |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، درجة الحموضة 7.2 ، معقم مفلتر | 1st BASE | CUS-2048-1x1L | استخدم كمحلول غسيل للخلايا |
| مجموعة فحص بيرس BCA | Thermo Scientific | 23225 | لقياس تركيز البروتين |
| مثبط البروتياز والفوسفاتيز | Thermo Scientific | A32959 | لهضم البروتين في تحضير العينة ل |
| PVDF الغربي غشاء (Immobilin-P) | Merck Millipore | IPVH00010 | لنقل البروتين في الأرانب |
| المضادة للفأر IgG ، FC & gamma ؛ الجسم المضاد الثانوي المترافق HRP | Jackson ImmunoResearch | 315-035-046 | الجسم المضاد الثانوي في النشاف الغربي |
| معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) متوسط | الجدي العلمي | RPMI-XA | وسائط ثقافة الخلايا |
| RPMI-1640 | Promega | G7080 | يتضمن في مجموعة أدوات الاختبار الحيوي لمراسل ADCC الأساسية (Promega G7010) ، 1 × 36 مل |
| مسحوق حليب خالي الدسم | Merck Millipore | 70166-500G | لحجب الغشاء في النشاف الغربي |
| كبريتات الصوديوم دوديسيل | 1st BASE | BIO-2050-500g | لإعداد هلام |
| SDS SW-1736 | Cytion | 300453 | خط الخلية السرطانية للخلايا الحرشفية للغدة الدرقية |
| البشرية T75 قوارير ثقافة | SPL Lifesciences | 70075 | قارورة ثقافة الخلية |
| Tecan Multimode Reader نموذج Spark 10M | Tecan | 1607000294 | ل القياس الكمي لللمعان |
| TEMED | Bio-Rad | # 1610801 | لإعداد جل SDS |
| Tween-20 | Promega | H5151 | لغسل الأغشية في محلل |
| قابلية جدوى الخلية Vi-cell XR | الغربي Beckman Coulter | AL15072 | Cell Counter |
المراجع
- Zahavi, D., AlDeghaither, D., O'Connell, Enhancing antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity: a strategy for improving antibody-based immunotherapy. Antib Ther. 1 (1), 7-12 (2018).
- Fenis, A., Demaria, O., Gauthier, L., Vivier, E. New immune cell engagers for cancer immunotherapy. Nat Rev Immunol. 24 (7), 471-486 (2024).
- Pinto, S., Pahl, J., Schottelius, A., Carter, P. J. Reimagining antibody-dependent cellular cytotoxicity in cancer: the potential of natural killer cell engagers. Trends Immunol. 43 (11), 932-946 (2022).
- Ochoa, M. C., et al. Antibody-dependent cell cytotoxicity: immunotherapy strategies enhancing effector NK cells. Immunol Cell Biol. 95 (4), 347-355 (2017).
- Wang, W., Erbe, A. K., Hank, J. A., Morris, Z. S. NK cell-mediated antibody-dependent cellular cytotoxicity in cancer immunotherapy. Front Immunol. 6, 368(2015).
- Chung, S., et al. Characterization of in vitro antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity activity of therapeutic antibodies - impact of effector cells. J Immunol Methods. 407, 63-75 (2014).
- Shimasaki, N., Jain, A., Campana, D. NK cells for cancer immunotherapy. Nat Rev Drug Discov. 19 (3), 200-218 (2020).
- Cheng, Z. J., et al. Development of a robust reporter-based ADCC assay with frozen, thaw-and-use cells to measure Fc effector function of therapeutic antibodies. J Immunol Methods. 414, 69-81 (2014).
- Parekh, B. S., et al. Development and validation of an antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity-reporter gene assay. MAbs. 4 (3), 310-318 (2012).
- Hogarth, P. M., Pietersz, G. A. Fc receptor-targeted therapies for the treatment of inflammation, cancer and beyond. Nat Rev Drug Discov. 11 (4), 311-331 (2012).
- Chung, S., et al. Quantitative evaluation of fucose reducing effects in a humanized antibody on Fcgamma receptor binding and antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity activities. MAbs. 4 (3), 326-340 (2012).
- Promega. ADCC Reporter Bioassay Core Kit Technical Manual. , https://www.promega.sg/-/media/files/resources/protocols/technical-manuals/101/adcc-reporter-bioassay-core-kit-protocol.pdf?rev=bec36264c0b6470591ded081377d207d&sc_lang=en (2023).
- Miller, A. S., Tejada, M. L., Gazzano-Santoro, H. Methods for measuring antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in vitro. Methods Mol Biol. 1134, 59-65 (2014).
- Lo Nigro, C., et al. NK-mediated antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in solid tumors: biological evidence and clinical perspectives. Ann Transl Med. 7 (5), 105(2019).
- Gómez Román, V. R., Murray, J. C., Weiner, L. M. Antibody Fc. Ackerman, M. E., Nimmerjahn, F. , Academic Press. 1-27 (2014).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
