يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج الإجهاد الاجتماعي المتكامل المتعدد للاضطرابات النفسية في إناث الفئران C57BL / 6J

1.7K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/67117

⸱

يوليو 15, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesiology, Xuzhou Medical University, 2Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesia and Analgesia Application Technology, Xuzhou Medical University, 3NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Narcotic and Psychotropic Drugs, Xuzhou Medical University

في هذه المقالة

ملخص

من خلال دمج أربعة ضغوطات اجتماعية يومية ، تصف الدراسة الحالية نموذج الإجهاد الاجتماعي المتكامل المتعدد (MISS) للاضطرابات النفسية في إناث الفئران C57BL / 6J. بعد عشرة أيام من التعرض المتكرر ل MISS ، طورت الفئران أنماطا ظاهرية شبيهة بالاكتئاب والقلق ، مما يوفر نموذجا حيوانيا طبيعيا قائما على المسببات لدراسة الاضطرابات النفسية لدى الإناث.

الملخص

على الرغم من أن الإناث يمثلن غالبية الأفراد الذين يعانون من اضطرابات نفسية ، إلا أن الدراسات قبل السريرية ركزت بشكل حصري تقريبا على الذكور ، ويرجع ذلك جزئيا إلى عدم وجود نماذج حيوانية مثالية للأنثى. لا يزال تطوير نماذج فعالة لدراسة الاضطرابات النفسية في إناث يمثل تحديا علميا طويل الأمد في علوم الحياة. تم إنشاء "نموذج الإجهاد الاجتماعي المتكامل المتعدد (MISS)" في إناث الفئران C57BL / 6J مؤخرا من خلال محاكاة ودمج عوامل الخطر الاجتماعية التي تساهم في تطور الاضطرابات النفسية. لإنشاء نموذج MISS هذا ، تعرضت إناث الفئران C57BL / 6J بشكل عشوائي كل يوم ، لمدة عشرة أيام متتالية ، لسلسلة من الضغوط: فشل المنافسة الاجتماعية في اختبار الأنبوب ، وإجهاد الهزيمة الاجتماعية غير المباشر المعدل ، وإجهاد الاكتظاظ الذي لا مفر منه ، والعزلة الاجتماعية اللاحقة. بالمقارنة مع الفئران الساذجة ، أظهرت الفئران المعرضة ل MISS أنماطا ظاهرية شبيهة بالاكتئاب والقلق ، كما تم قياسها من خلال تفضيل السكروز ، وتعليق الذيل ، والمجال المفتوح ، واختبارات المتاهة المرتفعة. يقدم هذا النموذج أداة قيمة للتحقيق في الآليات العصبية الحيوية الكامنة وراء الاكتئاب والقلق لدى الإناث ، لا سيما أولئك الذين يعانون من مسببات غامضة وأعراض معقدة.

المقدمة

يعيش مئات الملايين من الأشخاص مع اضطرابات نفسية ، والقلق واضطرابات الاكتئاب هي الأكثر شيوعا. وفقا لمنظمة الصحة العالمية ، كان أكثر من 280 مليون و 301 مليون شخص في جميع أنحاء العالم يعانون من الاكتئاب والقلق ، على التوالي ، في عام 20191. بسبب جائحة COVID-19 ، زاد عدد الأشخاص المصابين باضطرابات القلق والاكتئاب بشكل ملحوظ - بنسبة 26٪ و 28٪ على التوالي - في غضون عام واحد فقط. من بين المتضررين ، يبلغ انتشار الاضطرابات النفسية لدى النساء على مدى الحياة ضعف ما هو عليه لدى الرجال2 ، حيث تظهر النساء أعراضا أكثر حدة ، وضعف وظيفي أكبر ، وأنماط ظاهرية اكتئابية غير نمطية ، وانتكاسات أكثر تواترا ، واستجابة أقل للأدوية3 ، 4 ، 5.

على الرغم من أن الفروق بين الجنسين في العديد من جوانب الاضطرابات النفسية موثقة جيدا6،7،8 ، إلا أن معظم الأبحاث قبل السريرية ركزت في الغالب على الذكور ، ويرجع ذلك أساسا إلى عدم وجود نماذج حيوانية مناسبة للإناث9،10. نتيجة لذلك ، لا يزال التسبب في هذه الاضطرابات لدى النساء غير مفهوم جيدا. هذا يؤكد على الحاجة الملحة لتطوير نماذج حيوانية تشمل الموضوعات الإناث ، مما يسهل التحقيق في الآليات العصبية الحيوية الكامنة وراء الاضطرابات النفسية لدى الإناث.

تم تطوير عدد متزايد من نماذج الإجهاد الاجتماعي لإناث الفئران بناء على نموذج إجهاد الهزيمة الاجتماعية المتكرر (RSDS)11،12،13،14. على سبيل المثال ، تضمن نموذجان من RSDS تم إنشاؤهما مؤخرا في إناث الفئران تعزيز عدوانية الذكور بشكل مصطنع من خلال تطبيق بول الذكور على إناث الفئران والتنشيط الكيميائي للتقسيم الفرعي البطني الجانبي لما تحت المهاد البطني في المعتدين الذكور11،12،13. ومع ذلك ، فقد قيل إن هذه السلوكيات العدوانية المستحثة لا تحدث بشكل طبيعي وقد لا تمثل الضغوطات ذات الصلة لإناثالفئران 10. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الحمل الناتج عن السلوك المتصاعد يعقد الدراسات الميكانيكية اللاحقة.

نموذج آخر معدل قائم على RSDS هو نموذج إجهاد الهزيمة الاجتماعية غير المباشرة ، حيث تشهد إناث الفئران بصريا هزيمة اجتماعية بين الذكور12. كما تم تطوير بروتوكولات الهزيمة الاجتماعية بين الإناث والإناث في سلالات القوارضالمختلفة 14،15،16. على الرغم من بعض المخاوف ، يبدو أن الضغوطات الاجتماعية المستخدمة في هذين النموذجين الأخيرين أكثر صلة من الناحية المسببة للاضطرابات النفسية البشرية14. يتطلب نموذج الاكتئاب المثالي صلاحية بنائية (مسببة) ، مما يعني أن الأساليب المحفزة للتوتر المستخدمة في النموذج يجب أن تعكس عن كثب الأسباب الواقعية للاضطراب.

يعتقد أن مسببات الاضطرابات النفسية متعددة العوامل ، وتشمل عوامل بيولوجية ووراثية وبيئية ونفسية. يعد التلاعب بعوامل الخطر هذه في المختبر أمرا ضروريا لتطوير النماذج ذات الصلة للبحث الميكانيكي وفحص الأدوية. يمكن لكل من النماذج الحيوانية الاجتماعية وغير الاجتماعية التي تحاكي واحدا أو أكثر من الضغوطات أن تكرر الأعراض الأساسية والتغيرات العصبية البيولوجية المرتبطة بالاضطرابات النفسية البشرية. على سبيل المثال ، يحفز نموذج الإجهاد الخفيف المزمن (CMS) الأنماط الظاهرية السلوكية المرضية العصبية والاكتئابية المستقرة والفعالة عن طريق مجموعات متناوبة بشكل عشوائي من الضغوطات الجسدية المتعددة (على سبيل المثال ، الفراش الرطب ، تعليق الذيل ، لقط الذيل ، الصيام) 17،18،19،20،21،22،23. تشير هذه النتائج إلى أن النمذجة المتكررة لعوامل الخطر المتعددة هي استراتيجية قابلة للتطبيق لبناء نماذج لدراسة الاضطرابات النفسية. يعد نموذج الإجهاد الاجتماعي المزمن (CSDS) أحد أكثر النماذج استخداما للاكتئاب الذي يحاكي الضغوطات الاجتماعية24،25،26. على الرغم من أن هذا النموذج يقتصر على تقليد نوع واحد من الضغوطات ، إلا أن أهميته المسببة أدت إلى تقدم كبير في البحث الانتقالي. على سبيل المثال ، حددت الدراسات المستندة إلى CSDS قنوات البوتاسيوم (K +) على الخلايا العصبية الدوبامينية في المنطقة السقيفية البطنية كأهداف رئيسية تتوسط في المرونة في مواجهة الاكتئاب ، وسلطت الضوء على فتاحات قنوات K + من نوع KCNQ - مثل retigabine (ezogabine) - كمرشحين واعدين لمضادات الاكتئاب في كل من الفئران الشبيهة بالاكتئاب والمرضى الذين يعانون من الاكتئاب27،28،29،30،31. نتيجة لذلك ، حاولت العديد من الدراسات الأساسية تعديل نموذج CSDS لنمذجة اكتئاب الإناث عن طريق إحداث العدوان الموجه من قبل الإناث11،12. تدعم الأدلة أعلاه فكرة أن دمج الضغوطات الاجتماعية المتعددة مع التعرض المتكرر يمثل اتجاها مهما لتطوير نماذج نفسية في إناث.

في إناث الفئران C57BL / 6J ، تم تطوير نموذج الإجهاد الاجتماعي المتكامل المتعدد (MISS) لمدة 10 أيام لنمذجة الاضطرابات النفسية ، مما يدل على مصداقيات مسببة موثوقة ، ووجه ، وبناء ، وتنبؤية32. لإنشاء نموذج MISS ، تعرضت إناث الفئران C57BL / 6J بشكل عشوائي كل يوم لمدة 10 أيام متتالية لأربعة ضغوطات متسلسلة: الفشل في المنافسة الاجتماعية (اختبار الأنبوب) ، وإجهاد الهزيمة الاجتماعية غير المباشر المعدل ، وإجهاد الاكتظاظ الذي لا مفر منه ، والعزلة الاجتماعية اللاحقة32. توفر هذه الدراسة بروتوكولا مفصلا لنمذجة نموذج MISS.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل لجنة رعاية واستخدام بجامعة Xuzhou الطبية (رقم الموافقة 202207S127) وتم إجراؤها وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبر. تم الحصول على إناث الفئران C57BL / 6J (7-8 أسابيع للفئران الموضوعة ؛ 10-14 أسبوعا للمرشحين الفائزين) ، وذكور الفئران C57BL / 6J (7-8 أسابيع لفحص CD1 العدواني) ، وفئران المربية المتقاعدة CD1 المستخدمة في هذه التجارب من مصدر تجاري. تم إيواء جميع الفئران تحت دورة إضاءة / مظلمة مدتها 12 ساعة مع توفير الطعام والماء بشكل مجاني33. تم أخذ القياسات السلوكية الأساسية - وإن لم يكن بالضرورة لكل مجموعة - قبل بدء نموذج MISS ، للتأكد من أن النتائج السلوكية اللاحقة تعزى إلى التعرض للإجهاد بدلا من التباين الفردي. يتم تقديم نظرة عامة على البروتوكول الكامل في الشكل 1 ، ويتم عرض الإعدادات التجريبية المكتملة في الشكل 2. وترد تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة في جدول المواد.

1. التعود

  1. التعود على البيئة
    1. قم بتخصيص غرفة منفصلة حصريا لبروتوكول MISS، مع الحفاظ على درجة حرارة ثابتة (23 درجة مئوية ± 2 درجة مئوية) والرطوبة (50٪ -60٪) وشدة الضوء (15-20 لوكس) في دورة الضوء والظلام لمدة 12 ساعة.
      ملاحظة: ما لم ينص على خلاف ذلك ، فئران منزلية في هذه الغرفة طوال فترة النمذجة بأكملها.
    2. قم بإعداد أقفاص الفأر القياسية (الطول × العرض × الارتفاع: 37 سم × 16 سم × 12 سم) بأغطية من الأسلاك الفولاذية وفراش كوز الذرة.
    3. استخدم إناث الفئران C57BL / 6J التي تتراوح أعمارها بين 7-8 أسابيع كفئران موضوعة. قم بتعيين الفئران بشكل عشوائي لمجموعات ساذجة و MISS ، وقم بإيواءها في خمسة فئران لكل قفص.
      ملاحظة: حدد إناث الفئران ذات العمر ووزن الجسم المتماثلين للتجربة.
    4. استخدم إناث الفئران C57BL / 6J التي تتراوح أعمارها بين 10 و 14 أسبوعا كمرشحين لفحص الفائز30. قم بإيواء هذه الفئران في مجموعات من أربعة لكل قفص لإنشاء رتب اجتماعية مستقرة.
    5. استخدم ذكور الفئران المربية المتقاعدة CD1 كمرشحين للمعتدين. منزل الفئران CD1 بشكل فردي لتأسيس الإقليمية ومنع القتال. استخدم الفئران الذكور C57BL / 6J التي تمت تربيتها في المجموعة (5 فئران لكل قفص ، تتراوح أعمارهم بين 7-8 أسابيع) كمتسللين لفحص CD1 العدواني.
    6. اسمح لجميع الفئران بالتعود والتعافي من إجهاد النقل لمدة 7 أيام بعد الشراء (الشكل 1A1).
    7. اسكنوا جميع الفئران بالطعام والماء المتاح مجانا.
  2. التعود على الأنابيب والمناولة
    1. ضع أنبوبا أكريليا قصيرا (الشكل 2 أ ؛ بطول 10 سم ، قطر داخلي 26 مم) في كل قفص من إناث الفئران والمرشحين الفائزين. اسمح للفئران بالتأقلم مع الأنابيب وتعلم المرور عبرها لمدة 3 أيام.
      ملاحظة: يجب أن يكون قطر الأنبوب كافيا فقط للسماح لفأر بالغ بالمرور بسلاسة دون الالتفاف.
    2. تعامل مع إناث الفئران والمرشحين الفائزين لمدة 1-2 دقيقة / يوم لمدة 3 أيام لتقليل التوتر المرتبط بالمجربين غير المألوفين (الشكل 1A2).
    3. في نهاية فترة التعود ، ضع علامة على ذيل كل فأر بعلامة زيتية حمراء أو سوداء.
      ملاحظة: تحقق من العلامات بانتظام وأعد وضعها إذا لزم الأمر.

2. التدريب على مسابقة الأنبوب ، وفحص الفائز ، وفحص المعتدي CD1

  1. التدريب على منافسة الأنبوب
    ملاحظة: للاطلاع على تفاصيل هذا الإجراء، يرجى الرجوع إلى التقارير السابقة 34،32.
    1. قم بإعداد الفئران الموضوعية ، والمرشحات الفائزات ، وأنابيب الأكريليك الشفافة (الشكل 2 ب ؛ بطول 30 سم ، وقطر داخلي 26 مم) ، والعصي البلاستيكية ، و 75٪ من الإيثانول والمناشف الورقية. نظف الطاولة والأنابيب والعصي البلاستيكية بنسبة 75٪ من الإيثانول للتخلص من إشارات الرائحة.
    2. أمسك برفق ذيل كل فأر موضوع أو مرشح فائز وضع الماوس على الطاولة. اسمح لها بالاستكشاف بحرية لمدة 1 دقيقة تقريبا للتأقلم البيئي.
    3. أمسك الماوس من الذيل وضعه في أحد طرفي الأنبوب.
      ملاحظة: تأكد من أن رأس الماوس يواجه نهاية الأنبوب، مع ملامسة كفوفه الأمامية للطاولة، لتقليل الضغط وتسهيل الدخول.
    4. حرر الذيل بمجرد دخول الماوس إلى الأنبوب واتركه يمر طواعية.
      ملاحظة: استخدم عصا بلاستيكية للمس الذيل برفق إذا توقف الماوس أو حاول الرجوع للخلف.
    5. ضع الماوس في الطرف المقابل من الأنبوب وكرر الخطوة 2.1.4. عد الخطوات 2.1.3 - 2.1.5 كدورة واحدة.
    6. كرر الخطوتين 2.1.3 و 2.1.5 لدورتين (الشكل 1B1).
    7. أعد الماوس إلى قفص منزله. نظف الأنبوب بنسبة 75٪ من الإيثانول لإزالة الروائح والبول والبراز.
      ملاحظة: تأكد من أن الأنبوب نظيف وجاف وخالي من رائحة الكحول المتبقية قبل الاستخدام بالماوس التالي.
    8. كرر الخطوات 2.1.2-2.1.7 لجميع إناث الفئران لمدة 3 أيام متتالية ، مما يضمن اعتياد كل فأر على المرور عبر الأنبوب.
  2. فحص الفائزين
    ملاحظة: للاطلاع على تفاصيل هذا الإجراء، يرجى الرجوع إلى التقارير السابقة 34،32.
    1. قم بإعداد المرشحات الفائزات ، والأنابيب (بطول 30 سم ، والقطر الداخلي 26 مم) ، والعصي البلاستيكية ، والإيثانول بنسبة 75٪ ، والمناشف الورقية ، وجهاز توقيت. نظف الجهاز وجففه لتقليل إشارات الرائحة.
    2. قبل الفحص ، أعد تدريب كل فأر على المرور عبر الأنبوب لدورة واحدة. ارسم خطا وسطا مرئيا على الأنبوب.
    3. أمسك كلا الفئران من ذيولهما وضعها في طرفي نقيض من الأنبوب. اسمح لهم بالدخول والالتقاء عند نقطة المنتصف ، ثم حررهم في نفس الوقت وبدء المؤقت.
      ملاحظة: استخدم الفئران من نفس القفص لكل مسابقة.
    4. حدد "الفائز" على أنه الفأر الذي يدفع الآخر خارج الأنبوب ؛ منحه 1 نقطة. يحصل "الخاسر" على 0 نقطة.
      ملاحظة: استخدم عصا بلاستيكية لمنع الفائز من التراجع. إذا تجمد كلا الفأرين ولم يتراجعا في غضون دقيقة واحدة ، فالمس ذيل كل فأر برفق بعصي بلاستيكية لتحفيز العمل.
    5. اعكس مواضع بدء الفئران وكرر الخطوات 2.2.3-2.2.4 ، وسجل النتيجة مرة أخرى (الشكل 1B2).
    6. أعد كلا الفئران إلى قفص منزليهما ونظف الأنبوب جيدا بنسبة 75٪ من الإيثانول.
    7. استخدم تنسيق round-robin لمطابقة كل ماوس مع جميع زملائه الآخرين في القفص ، وكرر الخطوات 2.2.3-2.2.5 لكل زوج.
      ملاحظة: يضمن هذا النهج ترتيبا شاملا وعادلا.
    8. رتب الفئران بناء على إجمالي الدرجات. حدد الماوس الأعلى تسجيلا في كل قفص باعتباره "الفائز" للتجارب اللاحقة.
  3. فحص المعتدي CD1
    ملاحظة: للاطلاع على تفاصيل حول هذا الإجراء، يرجى الرجوع إلى التقرير السابق35.
    1. قم بإعداد فئران المربية المتقاعدة CD1 ، وذكور الفئران C57BL / 6J (المتسللين) ، وجهاز توقيت.
    2. ضع فأر ذكر C57BL / 6J مباشرة في القفص المنزلي لذكر CD1 (المعتدي المقيم) لمدة 3 دقائق.
      ملاحظة: لا يمكن للدخيل الهروب أثناء الجلسة.
    3. سجل زمن الوصول إلى الهجوم الأول وعدد الهجمات ومدة السلوكيات العدوانية خلال فترة 3 دقائق كمؤشرات على العدوانية.
    4. كرر الخطوات 2.3.2-2.3.3 مرة واحدة يوميا لمدة 3 أيام متتالية باستخدام فئران دخيلة مختلفة كل يوم (الشكل 1B3).
    5. حدد فئران CD1 كمعتدين لمزيد من التجارب بناء على معيارين: (1) يجب أن يكونوا قد هاجموا في جلستين على الأقل من الجلسات الثلاث ، و (2) يجب أن يكون زمن انتقال هجومهم أقل من دقيقة واحدة في كل جلسة.

3. النمذجة

ملاحظة: تتضمن هذه الخطوة التعرض العشوائي لفشل المنافسة الاجتماعية في اختبار الأنبوب ، وإجهاد الهزيمة الاجتماعية غير المباشر المعدل ، وإجهاد الاكتظاظ الذي لا مفر منه ، يليه العزلة الاجتماعية ، لمدة 10 أيام متتالية.

  1. فشل المنافسة الاجتماعية
    ملاحظة: للاطلاع على التفاصيل، يرجى الرجوع إلى التقارير السابقة32، 34.
    1. قم بإعداد الفئران المصاحبة ، والفئران "الفائزة" التي تم فحصها ، والأنابيب (بطول 30 سم ، وقطر داخلي 26 مم) ، والعصي البلاستيكية ، و 75٪ من الإيثانول ، والمناشف الورقية ، وجهاز توقيت.
    2. أعد إيواء الفئران المصاحبة بشكل فردي (1 فأر لكل قفص) وإيواء الفئران الساذجة في مجموعات (5 فئران لكل قفص).
      ملاحظة: انقل الفئران الساذجة إلى أقفاص جماعية جديدة في بداية النمذجة. التغيير إلى قفص جديد غير مطلوب خلال فترة النمذجة.
    3. نظف الطاولة والأنابيب والعصي البلاستيكية بنسبة 75٪ من الإيثانول للتخلص من إشارات الرائحة.
    4. قم بإزالة الفئران بعناية من أقفاص منزلها. ضع ماوس MISS وفأرة "فائزة" على طرفي نقيض من الأنبوب بحيث يسيران للأمام ويلتقيان عند نقطة المنتصف. سيتم دفع فأرة MISS خارج الأنبوب من قبل "الفائز".
      ملاحظة: يضمن الحجم الأكبر ووزن الجسم المرتفع والرتبة الاجتماعية المهيمنة ل "الفائز" أن فأر MISS التجريبي يخسر دائما منافسة الأنبوب. إذا ظلت الفئران غير متحركة لأكثر من 30 ثانية ، فقم بلمس ذيل الفائز برفق بعصا بلاستيكية لتشجيع الدفع.
    5. قم بتبديل مواضع الفئران وكرر الخطوة 3.1.4. عد الخطوتين 3.1.4 و 3.1.5 كدورة واحدة.
    6. أعد الفئران MISS و "الفائزة" إلى أقفاص منزلها. نظف الطاولة والأنبوب والعصا البلاستيكية لإزالة الروائح.
    7. قدم ماوس فائز جديد وكرر الخطوات 3.1.4-3.1.5 باستخدام نفس ماوس MISS. وهكذا يخضع كل فأر MISS لدورتين متتاليتين من منافسة الأنبوب الفاشلة (الشكل 1C1 ، الشكل 2E).
    8. كرر الخطوات 3.1.4-3.1.7 لجميع فئران MISS لمدة 10 أيام متتالية.
  2. تعديل الإجهاد الهزيمة الاجتماعية غير المباشرة
    1. قم بإعداد فئران المربية المتقاعدة CD1 العدوانية (منفردة) ، وذكور الفئران C57BL / 6J ، وإناث الفئران MISS ، وأغطية الأكريليك المثقبة (الشكل 2 ج ؛ L × W × H: 8 سم × 8 سم × 5.5 سم) مع ثقوب (5 × 5 في اللوحة العلوية ، 3 × 5 في الجدران الجانبية ؛ كل ثقب بقطر 0.5 سم).
    2. ضع أنثى فأرة MISS داخل قفص المعتدي CD1 ، محصورة تحت غطاء أكريليك مثقوب ، للسماح بالملاحظة غير المباشرة للتفاعلات العدوانية.
      ملاحظة: راقب الانقلاب المحتمل لغطاء الأكريليك إما بواسطة الماوس CD1 أو MISS. يساعد تقليل فراش كوز الذرة في أقفاص CD1 على منع الانقلاب.
    3. أدخل فأر دخيل ذكر C57BL / 6J في القفص ليتعرض للهجوم الجسدي بواسطة ماوس CD1 لمدة 10 دقائق. تلاحظ أنثى فأر MISS التفاعل من خلال الغطاء المثقوب (الشكل 1C2 ، الشكل 2F).
      ملاحظة: إذا أصيب الفأر الدخيل بجروح خطيرة ، فقم بإنهاء الجلسة على الفور وعالج. يعزز استخدام حبيبات الذرة الصغيرة التجربة الغامرة لماوس MISS عن طريق تضخيم إزاحة الفراش أثناء المعارك.
    4. بعد 10 دقائق ، قم بإزالة الدخيل الذكر واسمح لأنثى فأر MISS ب 5 دقائق إضافية من التعرض الحسي لماوس CD1.
    5. كرر الخطوات 3.2.3-3.2.4 مرتين أخريين مع متسللين ذكور مختلفين.
    6. أعد ماوس MISS إلى قفص منزله. مراقبة وعلاج أي إصابات في المتسللين الذكور.
    7. نظف أغطية الأكريليك المثقبة وامسح أي فراش مسكوب.
    8. كرر الخطوات 3.2.2-3.2.5 باستخدام مربي متقاعد جديد CD1 لمدة 10 أيام متتالية.
  3. إجهاد الاكتظاظ الذي لا مفر منه
    1. تحضير إناث الفئران MISS ، غلاف أبيض غير شفاف (الشكل 2D ؛ الطول × العرض × الارتفاع: 14 سم × 10 سم × 20 سم) ، أقفاص فأر قياسية مع فراش قطعة خبز الذرة ، 75٪ إيثانول ، مناشف ورقية ، ومؤقت.
    2. ضع الغلاف غير الشفاف داخل قفص قياسي مع الفراش.
    3. أدخل 12-15 فأرة أنثى (إما جميع الفئران MISS أو مختلطة مع إناث أخريات) في الغلاف لمدة 30 دقيقة يوميا (الشكل 1C3 ، الشكل 2G).
      ملاحظة: اضبط عدد الفئران وفقا لحجمها لضمان الازدحام دون الدوس. امنع الهروب عن طريق تغطية الغلاف بغطاء مثقب شفاف إذا لزم الأمر.
    4. أعد الفئران إلى أقفاص منزلها ونظف الغلاف بنسبة 75٪ من الإيثانول.
    5. كرر الخطوة 3.3.3 لمدة 10 أيام متتالية.
  4. العزلة الاجتماعية
    1. قم بإعداد إناث الفئران MISS وأقفاص الفئران القياسية مع فراش كوز الذرة.
    2. فئران House MISS بشكل فردي عندما لا تمر بفشل المنافسة الاجتماعية ، أو إجهاد الهزيمة غير المباشر ، أو إجهاد الاكتظاظ ، للفترة المتبقية من فترة النمذجة التي تبلغ 10 أيام (الشكل 1C4 ، الشكل 2H).
      ملاحظة: يتم نقل الفئران الساذجة برفق عن طريق الذيل إلى قفص مؤقت ، ثم إعادتها إلى قفص منزلها دون أي تعرض للإجهاد. توفير الطعام والماء بشكل مجاني ، كما هو الحال مع الفئران MISS.

4. الاختبارات السلوكية

ملاحظة: يتم إجراء التجارب السلوكية في غضون أسبوع واحد بعد النمذجة لتقييم السلوكيات الشبيهة بالاكتئاب والقلق في الفئران. قبل كل اختبار ، يتم نقل إناث الفئران إلى غرفة الاختبار السلوكي (إضاءة 15-20 لوكس) لمدة ساعة واحدة من التعود. بعد كل اختبار ، يتم إرجاع الفئران إلى منشأتها السكنية الأصلية.

  1. اختبار تفضيل السكروز
    ملاحظة: للاطلاع على التفاصيل، يرجى الرجوع إلى التقارير السابقة36،37،38.
    1. قم بإعداد الفئران الموضوعية الإناث ، وزجاجات الشرب (50 مل) بأنابيب كروية ، وأقفاص ماوس قياسية مع أسطح من الأسلاك الفولاذية ، والسكروز ، وميزان إلكتروني ، وأسطوانة متدرجة ، وقضيب تحريك ، وورق وزن ، وماء ، ودفتر ملاحظات ، وقلم.
    2. إيواء جميع الفئران الموضيعة (الفئران الساذجة والآنسة) بشكل فردي.
    3. املأ الزجاجات بمياه الشرب (~ 2/3 من الحجم).
      ملاحظة: تأكد من عدم وجود تسرب من الزجاجات قبل بدء التجربة.
    4. تزويد كل فأر بزجاجتين مملوءتين بالماء موضوعتين جنبا إلى جنب لمدة يومين من التعود.
    5. تحضير 1٪ ماء سكروز (1 جم من السكروز لكل 99 مل من الماء).
    6. في بداية الاختبار ، استبدل الماء في زجاجة واحدة بمحلول سكروز 1٪. سجل الأوزان الأولية لكلتا الزجاجتين.
    7. بعد 12 ساعة ، سجل أوزان الزجاجة مرة أخرى وقم بتبديل مواضع الزجاجات لتجنب التحيز الموضعي.
    8. بعد 24 ساعة ، سجل الأوزان النهائية واحسب تفضيل السكروز على النحو التالي: تفضيل السكروز (٪) = (تناول السكروز / إجمالي كمية السوائل) × 100
    9. في نهاية الاختبار ، أعد الفئران إلى أقفاص منازلها بزجاجات مياه عادية.
    10. نظف جميع الزجاجات وأنابيب الحبر الكروي جيدا بالماء.
  2. اختبار تعليق الذيل
    ملاحظة: يمكن إجراء هذا الاختبار32 على نفس المجموعة أو مجموعة منفصلة من الفئران اعتمادا على التصميم التجريبي. في هذه الدراسة ، تم إجراؤه بعد 3 أيام من اختبار تفضيل السكروز.
    1. قم بإعداد الفئران الموضيعة ، وصندوق اختبار تعليق الذيل (ارتفاع 55 سم × عرض 60 سم × عمق 12 سم) ، وشريط لاصق ، وساعة توقيت ، و 75٪ كحول ، ومناشف ورقية.
    2. قم بإعداد نظام تتبع الفيديو39. حدد منطقة نشطة وابدأ التسجيل.
    3. نظف صندوق الاختبار بنسبة 75٪ من الإيثانول.
    4. قم بلصق الماوس برفق ~ 2 سم من نهاية الذيل وعلقه رأسا على عقب ، مع التأكد من أن رأسه ~ 25 سم من أسفل الصندوق.
      ملاحظة: قلل من التأرجح وتجنب الإجهاد غير الضروري.
    5. سجل السلوك باستخدام برنامج التتبع35 6 دقائق. استخدم وقت الجمود من آخر 4 دقائق للتحليل.
      ملاحظة: يعرف الجمود بأنه غياب الحركة مع تعليق الجسم بشكل سلبي. استبعاد البيانات إذا سقط الماوس أو صعد.
    6. افصل الشريط بعناية وأعد الماوس إلى قفص منزله.
  3. اختبار المجال المفتوح
    ملاحظة: للاطلاع على التفاصيل، يرجى الرجوع إلى التقارير السابقة40، 41.
    1. قم بإعداد إناث الفئران ، وصندوق اختبار مفتوح (40 سم × 40 سم × 40 سم) ، و 75٪ إيثانول ، ومناشف ورقية.
    2. قم بإعداد نظام تتبع الفيديو. تقسيم الساحة فعليا إلى 4 × 4 مناطق فرعية. حدد الوحدات المركزية 4 على أنها المنطقة المركزية ، والباقي على أنها المنطقة الطرفية.
    3. نظف صندوق الاختبار بنسبة 75٪ من الإيثانول.
    4. ضع ماوس الهدف برفق في وسط الصندوق ، بحيث يكون رأسه متجها في نفس الاتجاه. اسمح لها بالاستكشاف لمدة 5 دقائق.
      ملاحظة: استخدم منصة نقالة للنقل لتقليل إجهاد المناولة.
    5. سجل إجمالي المسافة المقطوعة والوقت الذي تقضيه في المنطقة المركزية باستخدام نظام تتبع الفيديو.
    6. في نهاية الاختبار ، أعد الماوس إلى قفص منزله ونظف الجهاز.
  4. اختبار متاهة مرتفعة بالإضافة إلى
    ملاحظة: للاطلاع على التفاصيل، يرجى الرجوع إلى التقرير السابق32.
    1. قم بإعداد الفئران الموضيعة ، ومتاهة مرتفعة بالإضافة إلى 75٪ ، و 75٪ من الإيثانول ، والمناشف الورقية.
      ملاحظة: تتكون المتاهة من مدرجين متعامدين (50 سم فوق الأرض) ، لكل منهما ذراعان (بطول 30 سم × عرض 5 سم). تحتوي مجموعة واحدة على جدران بارتفاع 15 سم (أذرع مغلقة) ، بينما المجموعة الأخرى مفتوحة. المساحة المركزية 5 سم × 5 سم.
    2. قم بإعداد نظام تتبع الفيديو وحدد الأذرع المفتوحة والأذرع المغلقة والمنطقة المركزية.
    3. نظف المتاهة بنسبة 75٪ من الإيثانول.
    4. ضع الماوس برفق في وسط المتاهة ، في مواجهة ذراع مفتوحة. السماح بالاستكشاف المجاني لمدة 5 دقائق.
      ملاحظة: استخدم منصة نقالة لتقليل الضغط أثناء الوضع.
    5. سجل الوقت الذي تقضيه في كل ذراع باستخدام نظام التتبع.
      ملاحظة: إذا سقط الماوس من المتاهة ، فاستبعد بياناته.
    6. أعد الماوس إلى قفص منزله ونظف المتاهة جيدا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

للتحقق مما إذا كان التعرض ل MISS يؤدي إلى تغييرات سلوكية شبيهة بالاكتئاب ، تم تقييم إناث الفئران C57BL / 6J (ن = 16 لكل مجموعة ؛ تم تحديد حجم العينة عن طريق تحليل الطاقة ، انظر الملف التكميلي 1 والملف التكميلي 2) الخاضعة لنموذج MISS باستخدام تفضيل السكروز واختبارات تعليق الذيل ، والتي تقيم الأعراض الأساسية للاكتئاب وانعدام التلذذ واليأس السلوكي ، على التوالي (الشكل 3A-F). بالمقارنة مع الفئران الساذجة ، أظهرت الفئران...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ركز عدد متزايد من الدراسات على تطوير نماذج خاصة بالإناث للاضطرابات النفسية باستخدام نماذج إجهاد الهزيمة الاجتماعية المزمنة (CSDS)11،13،14. على سبيل المثال ، في نموذجين من نماذج CSDS الأنثوية التي تم إنشاؤها مؤخرا ، تم إحداث عدوان الذكور تجاه إناث الفئران بشكل مصطنع إما عن طريق طلاء إناث الفئران ببول الذكور أو عن طريق التنشيط الكيميائي للتقسيم الفرعي البطني الجانبي لمنطقة ما تحت المهاد البطنية في...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ويعلن أصحاب البلاغ عدم وجود مصالح متضاربة.

شكر وتقدير

تم دعم الدراسة الحالية من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (31970937 و 82271255) ، وبرنامج فريق الابتكار وريادة الأعمال في مقاطعة جيانغسو ، ومشروع التنمية الاجتماعية لبرنامج البحث والتطوير الرئيسي لمقاطعة جيانغسو (BE2023690) ، وبرنامج الدراسات العليا للبحث والممارسة في مقاطعة جيانغسو (KYCX22_2932 ، KYCX23_2952).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
75٪ كحولعلاء الدينA171299-500 ملتستخدم لتعقيم وتنظيف معدات وأدوات المختبرات
زجاجة مع صنبور كرة الأسطوانةزجاجة(50 مل) مع سدادة مطاطية مع صنبور كروي لاختبار تفضيل السكروز
C57BL / 6J إناث الفئران  ؛ بكين فيتال ريفر مختبر تكنولوجيا المحدودة219C57BL / 6J تستخدم الفئران الإناث التي تتراوح أعمارها بين 7-8 أسابيع كفئران موضوعية ، وتستخدم الفئران التي تتراوح أعمارها بين 10 و 14 أسبوعا كمرشحين فائزين
C57BL / 6J ذكور الفئران   ؛يتم استخدام إناث الفئران C57BL / 6J التي تتراوح أعمارها بين 7-8 أسابيع كفئران موضوعية ، ويتم استخدام الفئران التي تتراوح أعمارها بين 10 و 14 أسبوعا كمرشحين فائزين219فأرانا ذكورا C57BL / 6J في سن 8-16 أسبوعا كمتسللين لفحص CD1 العدواني.
متاهة مرتفعة بالإضافةإلى مصممة خصيصا-تتكون المتاهة المرتفعة المرتفعة من مدارج مرتفعة متقاطعة (50 سم فوق الأرض). يحتوي كل مدرج على ذراعين متعارضين (بطول 30 سم وعرض 5 سم). يحتوي أحد المدارج على جدران طويلة (ارتفاع 15 سم ، أذرع مغلقة) ، والآخر لا يحتوي على جدران طويلة (أذرع مفتوحة). تسمى منطقة التقاطع المنطقة المركزية (5 سم & مرات ؛ 5 سم)
ذكور CD-1 متقاعد من الفئران المربية  ؛ بكين فيتال ريفر مختبر تكنولوجيا المحدودة201ذكور CD-1 الفئران المربية المتقاعدين الذين تتراوح أعمارهم بين 4-6 أشهر كمرشحين معتدين
صندوق اختبار مفتوحصندوقأكريليك أبيض مصنوع حسب الطلب (L & times; W & مرات الارتفاع: 40 سم ومرات. 40 سم & مرات ؛ 40 سم) لاختبار المجال المفتوح
غطاء مثقوبمثقب شفاف حسب الطلب (L & times; W & مرات الارتفاع: 8 سم ومقات. 8 سم وأوقات; 5.5 سم) لحماية الإناث من الاتصال الجسدي المباشر مع فئران CD1 (مع 5 مرات ؛ 5 ثقوب في السقف العلوي و 3 مرات ؛ 5 ثقوب في الجدران الجانبية ، كل ثقب بقطر 0.5 سم) غلاف
حسب الطلبغير شفاف (L & Times ؛ W & مرات الارتفاع: 14 سم والمرات ؛ 10 سم وأمر. 20 سم) لحمل الفئران في التعرض للازدحام
قفص فأر قياسي مع أعلى أسلاك فولاذيةSuzhou Fengshi Laboratory Equipment Co.، Ltd.FS-SAGIVC-X30قفص الماوس القياسي (L & times; W & مرات الارتفاع: 37 سم & مرات ؛ 16 سم وأمر; 12 سم) مع أعلى من الأسلاك الفولاذية ؛
V900116السكروزسيجمايستخدم لتحضير محلول السكروز بنسبة 1٪ في اختبار تفضيل السكروز
صندوق تعليق الذيلصندوقأكريليك أبيض مصنوع حسب الطلب (H & times; W & مرات D: 55 سم & مرات ؛ 60 سم & مرات ؛ 12 سم) لاختبار تعليق الذيل   ؛  
أنابيب أكريليك شفافةأكريليك شفافة مصنوعة حسب الطلب بقطر داخلي 26 مم: بطول 30 مم لمنافسة الأنبوب ، وطول 10 مم لتكييف الأنبوب.
نظام تتبع الفيديو (SMART V3.0)Panlab76-0695يستخدم لتتبع وتسجيل وتحليل مسارات النشاط ومدد حركات الفئران
مياه شرب مصنوعة حسب الطلب غطاء بلاستيكي مصنوع أنابيب

المراجع

  1. Mental disorders. , WHO. https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/mental-disorders (2025).
  2. Huang, Y., et al. Prevalence of mental disorders in China: A cross-sectional epidemiological study. Lancet Psychiatry. 6 (3), 211-224 (2019).
  3. Kulkarni, J. Why depression in women is so misunderstood. Nature. 608 (7924), S54(2022).
  4. Labonté, B., et al. Sex-specific transcriptional signatures in human depression. Nat Med. 23 (9), 1102-1111 (2017).
  5. Bangasser, D. A., Cuarenta, A. Sex differences in anxiety and depression: Circuits and mechanisms. Nat rev neurosci. 22 (11), 674-684 (2021).
  6. Najt, P., Fusar-Poli, P., Brambilla, P. Co-occurring mental and substance abuse disorders: A review on the potential predictors and clinical outcomes. Psychiatry Res. 186 (2-3), 159-164 (2011).
  7. Marcus, S. M., et al. Sex differences in depression symptoms in treatment-seeking adults: Confirmatory analyses from the sequenced treatment alternatives to relieve depression study. Compr Psychiatry. 49 (3), 238-246 (2008).
  8. Khan, A., Brodhead, A. E., Schwartz, K. A., Kolts, R. L., Brown, W. A. Sex differences in antidepressant response in recent antidepressant clinical trials. J Clin Psychopharmacol. 25 (4), 318-324 (2005).
  9. Beery, A. K., Zucker, I. Sex bias in neuroscience and biomedical research. Neurosci Biobehav Rev. 35 (3), 565-572 (2011).
  10. Lopez, J., Bagot, R. C. Defining valid chronic stress models for depression with female rodents. Biol Psychiatry. 90 (4), 226-235 (2021).
  11. Harris, A. Z., et al. A novel method for chronic social defeat stress in female mice. Neuropsychopharmacology. 43 (6), 1276-1283 (2018).
  12. Iniguez, S. D., et al. Vicarious social defeat stress induces depression-related outcomes in female mice. Biol Psychiatry. 83 (1), 9-17 (2018).
  13. Takahashi, A., et al. Establishment of a repeated social defeat stress model in female mice. Sci Rep. 7 (1), 12838(2017).
  14. Newman, E. L., et al. Fighting females: Neural and behavioral consequences of social defeat stress in female mice. Biol Psychiatry. 86 (9), 657-668 (2019).
  15. Trainor, B. C., et al. Sex differences in social interaction behavior following social defeat stress in the monogamous California mouse (Peromyscus californicus). PLoS One. 6 (2), 17405(2011).
  16. Logan, R. W. Adapting social defeat stress for female mice using species-typical interfemale aggression. Biol Psychiatry. 86 (9), e31-e32 (2019).
  17. Chai, H., et al. Antidepressant effects of rhodomyrtone in mice with chronic unpredictable mild stress-induced depression. Int J Neuropsychopharmacol. 22 (2), 157-164 (2019).
  18. Baker, S., Bielajew, C. Influence of housing on the consequences of chronic mild stress in female rats. Stress. 10 (3), 283-293 (2007).
  19. Ayuob, N. N., Firgany, A. E. L., El-Mansy, A. A., Ali, S. Can ocimum basilicum relieve chronic unpredictable mild stress-induced depression in mice. Exp Mol Pathol. 103, 153-161 (2017).
  20. Cavigelli, S. A., et al. Timing matters: The interval between acute stressors within chronic mild stress modifies behavioral and physiologic stress responses in male rats. Stress. 21 (5), 453-463 (2018).
  21. D'aquila, P. S., Brain, P., Willner, P. Effects of chronic mild stress on performance in behavioural tests relevant to anxiety and depression. Physiol Behav. 56 (5), 861-867 (1994).
  22. Erburu, M., et al. Chronic mild stress and imipramine treatment elicit opposite changes in behavior and in gene expression in the mouse prefrontal cortex. Pharmacol Biochem Behav. 135, 227-236 (2015).
  23. Grippo, A. J., Moffitt, J. A., Johnson, A. K. Evaluation of baroreceptor reflex function in the chronic mild stress rodent model of depression. Psychosom Med. 70 (4), 435-443 (2008).
  24. Becker, C., et al. Repeated social defeat-induced depression-like behavioral and biological alterations in rats: Involvement of cholecystokinin. Mol Psychiatry. 13 (12), 1079-1092 (2008).
  25. Bondar, N., et al. Molecular adaptations to social defeat stress and induced depression in mice. Mol Neurobiol. 55 (4), 3394-3407 (2018).
  26. Golden, S. A., Covington, H. E., Berton, O., Russo, S. J. A standardized protocol for repeated social defeat stress in mice. Nat Protoc. 6 (8), 1183-1191 (2011).
  27. Costi, S., Han, M. H., Murrough, J. W. The potential of KCNQ potassium channel openers as novel antidepressants. CNS Drugs. 36 (3), 207-216 (2022).
  28. Costi, S., et al. Impact of the KCNQ2/3 channel opener ezogabine on reward circuit activity and clinical symptoms in depression: Results from a randomized controlled trial. Am J Psychiatry. 178 (5), 437-446 (2021).
  29. Friedman, A. K., et al. KCNQ channel openers reverse depressive symptoms via an active resilience mechanism. Nat Commun. 7, 11671(2016).
  30. Tan, A., et al. Effects of the KCNQ channel opener ezogabine on functional connectivity of the ventral striatum and clinical symptoms in patients with major depressive disorder. Mol Psychiatry. 25 (6), 1323-1333 (2020).
  31. Wang, H. R., et al. Kcnq channels in the mesolimbic reward circuit regulate nociception in chronic pain in mice. Neurosci Bull. 37 (5), 597-610 (2021).
  32. Zhai, X., et al. Multiple integrated social stressnduces depressive-like behavioral and neural adaptations in female C57bl/6j mice. Neurobiol Dis. 190, 106374(2024).
  33. Zhang, G., et al. Neural and molecular investigation into the paraventricular thalamic-nucleus accumbens circuit for pain sensation and non-opioid analgesia. Pharmacol Res. 191, 106776(2023).
  34. Fan, Z., et al. Using the tube test to measure social hierarchy in mice. Nat Protoc. 14 (3), 819-831 (2019).
  35. Zhang, H., et al. Alpha1- and beta3-adrenergic receptor-mediated mesolimbic homeostatic plasticity confers resilience to social stress in susceptible mice. Biol Psychiatry. 85 (3), 226-236 (2019).
  36. Krishnan, V., et al. Molecular adaptations underlying susceptibility and resistance to social defeat in brain reward regions. Cell. 131 (2), 391-404 (2007).
  37. Vialou, V., et al. Serum response factor promotes resilience to chronic social stress through the induction of deltafosb. J Neurosci. 30 (43), 14585-14592 (2010).
  38. Yohn, C. N., et al. Chronic non-discriminatory social defeat is an effective chronic stress paradigm for both male and female mice. Neuropsychopharmacol. 44 (13), 2220-2229 (2019).
  39. SMART VIDEO TRACKING Software. , https://www.Panlab.Com/en/products/smart-video-tracking-software-panlab (2025).
  40. Cho, J. R., et al. Dorsal raphe dopamine neurons modulate arousal and promote wakefulness by salient stimuli. Neuron. 94 (6), 1205-1219.e8 (2017).
  41. Liu, Y., et al. Protective effects of luteolin on cognitive impairments induced by psychological stress in mice. Exp Biol Med (Maywood). 238 (4), 418-425 (2013).
  42. Senst, L., Baimoukhametova, D., Sterley, T. L., Bains, J. S. Sexually dimorphic neuronal responses to social isolation. Elife. 5, e18726(2016).
  43. Gh, W. Comparative psychology monographs. Hunter, W. S. 2, 1-27 (1923).
  44. Burke, A. W., Broadhurst, P. L. Behavioural correlates of the oestrous cycle in the rat. Nature. 209 (5019), 223-224 (1966).
  45. Van Doeselaar, L., et al. Chronic social defeat stress in female mice leads to sex-specific behavioral and neuroendocrine effects. Stress. 24 (2), 168-180 (2021).
  46. Zhao, W., et al. Behaviors related to psychiatric disorders and pain perception in c57bl/6j mice during different phases of estrous cycle. Front Neurosci. 15, 650793(2021).
  47. Becker, J. B., Prendergast, B. J., Liang, J. W. Female rats are not more variable than male rats: A meta-analysis of neuroscience studies. Biol Sex Differ. 7, 34(2016).
  48. Prendergast, B. J., Onishi, K. G., Zucker, I. Female mice liberated for inclusion in neuroscience and biomedical research. Neurosci Biobehav Rev. 40, 1-5 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

نموذج الإجهاد الاجتماعي المتكامل المتعدد للاضطرابات النفسية في إناث الفئران C57BL / 6J
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.