مقالة منهجية

تحسين إجراءات جمع عينات خزعة الثدي واستئصال الثدي للبنوك الحيوية والطب الشخصي وتطبيقات البحث

DOI:

10.3791/67193

⸱

سبتمبر 2, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biology, University of the Philippines Baguio, 2Philippine Genome Center, University of the Philippines, 3Department of Surgery, Philippine General Hospital, University of the Philippines, 4Institute of Biology, College of Science, University of the Philippines Diliman, 5Department of Pathology, College of Medicine, University of the Philippines Manila, 6Institute of Human Genetics, National Institutes of Health, University of the Philippines Manila

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقدم هذه المقالة بروتوكولا مفصلا لجمع عينات سرطان الثدي ، مصمما لتحسين فائدتها للبنوك الحيوية والطب الشخصي والتطبيقات البحثية الأخرى. يتم وصف سير العمل لجمع العينات ، بما في ذلك خزعة الثدي واستئصال الثدي ، بالتفصيل ، مع التركيز على تقليل تلف الأنسجة وتعظيم جودة العينة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سرطان الثدي هو أكثر أنواع السرطان انتشارا التي تصيب النساء ، لا سيما في آسيا ، مع أعلى معدل الإصابة به في الفلبين. على الرغم من الجهود المستمرة ، لا يزال فهم بيولوجيا سرطان الثدي غير كاف ، ويتفاقم بسبب الافتقار إلى برامج الفحص الفعالة والعلاجات في الوقت المناسب. لمعالجة هذه القضايا ، اكتسبت البنوك الحيوية والمستودعات الأخرى للعينات البيولوجية زخما عالميا. أنشأت جامعة الفلبين - المستشفى العام الفلبيني (UP-PGH) بنكا حيويا للسرطان ، مما يدل على جدوى مبادرة مدعومة من الحكومة لأبحاث السرطان في الفلبين. تتضمن الدراسة ملاحظة مستقبلية ل 100 مريض فلبيني بسرطان الثدي في مراحل مرضية مختلفة ، مستفيدين من خبرة UP-PGH ، ومركز الجينوم الفلبيني (PGC) ، وجامعة الفلبين ديليمان - معهد علم الأحياء (UPD-IB). إنه يدمج جمع العينات الحيوية ومعالجتها وتخزينها جنبا إلى جنب مع بيانات المريض الشاملة. تشمل الإجراءات استخراج الحمض النووي الريبي وإعداد المكتبة والتسلسل. بالإضافة إلى ذلك ، تشارك مجموعة فرعية من المرضى في تجربة زراعة الخلايا ثلاثية الأبعاد (3D) في المختبر للفحص المسبق للعلاج الكيميائي. تهدف البيانات المجمعة إلى الكشف عن الاستراتيجيات العلاجية التي يمكن أن تؤدي إلى علاجات مخصصة حيث تكون الأساليب السريرية القياسية غير كافية. تشمل التقنيات الرئيسية خزعة الإبرة الأساسية الموجهة بالموجات فوق الصوتية ، وجمع أنسجة الثدي الطبيعية الدقيقة ، وتحديد النسبة المئوية للورم بدقة لضمان استخراج الحمض النووي الريبي عالي الجودة ، والتسلسل ، وزراعة الخلايا ثلاثية الأبعاد. تتناول الدراسة أيضا التحديات التي تمت مواجهتها في المساعي السابقة للبنوك الحيوية. في النهاية ، يهدف هذا البحث إلى المساهمة بشكل كبير في أبحاث سرطان الثدي ، ووضع نفسه كنموذج للبحث التعاوني ، وإنشاء البنك الحيوي ، والنهوض بالطب الدقيق في البلدان النامية ، مثل الفلبين.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد سرطان الثدي أكثر أشكال السرطان انتشارا بين النساء الفلبينيات. في آسيا ، تظهر الفلبين واحدا من أعلى معدلات الوفيات الناجمة عن سرطان الثدي وأدنى نسبة وفيات إلى حدوث1. قد تكون المعدلات قد تأثرت بشكل كبير بغياب برامج الفحص والعلاج الفعال في الوقت المناسب لسرطان الثدي. في البلاد ، يتم تشخيص سرطان الثدي عادة في مراحل لاحقة لأن معظم مرضى السرطان يسعون للحصول على الاستشارة فقط في مراحل السرطان المتقدمة. في الفلبين ، حيث لوحظ معدل حدوث مرتفع لسرطان الثدي ، تم تشخيص 53٪ من حالات سرطان الثدي في المرحلتين الثالثة والرابعة ، وتم تشخيص 2-3٪ فقط في المرحلة الأولى1،2،3. بصرف النظر عن تعزيز امتصاص الفحص وتثقيف المرضى حول سرطان الثدي ، يجب استكشاف البحث والتطوير المتعلق بسرطان الثدي بشكل أكبر لتقليل الإصابة بسرطان الثدي في البلاد.

سمح إنشاء البنوك الحيوية في جميع أنحاء العالم بتسريع التقدم الطبي. تستخدم البنوك الحيوية لتخزين وحفظ العينات البيولوجية ذات القيمة العلمية للبحث والتطوير في المستقبل4. منذ ذلك الحين ، تم استخدام البنوك الحيوية للبحث الانتقالي5 وتحسين الأساليب الطبية الشخصية6. في آسيا ، تتركز البنوك الحيوية في الغالب في شرق آسيا ، وخاصة في الصين واليابان وكوريا4. وفي البلدان المنخفضة الدخل والمتوسطة الدخل في آسيا، مثل الفلبين، لا يزال مفهوم المصارف الحيوية في الظهور. البنوك الحيوية في الفلبين مملوكة في الغالب لمؤسسات الرعاية الصحية الخاصة ، حيث قد لا تكون الحالة الصحية والتعرض للتركيبة السكانية الفلبينية الأوسع ممثلة بشكل جيد.

أثبت إنشاء البنك الحيوي للسرطان في مستشفى الفلبين العام بجامعة مانيلا (UPM) جدوى إنشاء بنك حيوي للسرطان مدعوم من الحكومة يمكنه تطوير الدراسات المتعلقة بالسرطان في الفلبين7. بناء على هذا الأساس من خلال جهد تعاوني يربط بين الخبرة الطبية والابتكار البحثي وسياسة الرعاية الصحية ، نسعى لإحداث تحول إيجابي في مشهد رعاية سرطان الثدي وأبحاثه في الفلبين. مع ذلك ، هناك حاجة ملحة إلى وجود سير عمل للبنوك الحيوية لظاهرة السرطان ونهج موسع يبسط جمع البيانات الشاملة والطبقية الخاصة بالمريض على نطاق وطني. تصف هذه الدراسة بروتوكول إجراءات جمع عينات خزعة الثدي واستئصال الثدي ، مع التركيز على دمجها في إطار عمل البنوك الحيوية. توقع ليس فقط تعزيز فهمنا للتسبب في سرطان الثدي في سياق السكان الفلبينيين ولكن أيضا تسهيل تطوير علاجات دقيقة تتوافق مع السمات الجينية والبيئية والسريرية الفريدة للأفراد المصابين.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذه دراسة مستقبلية قائمة على الملاحظة مع مجموعة من العينات الحيوية غير المحددة (الورم وأنسجة الثدي الطبيعية) والبيانات السريرية المرضية والعلاجية والنتائج من 100 مريض فلبيني بسرطان الثدي في مراحل مختلفة. هذا عمل تعاوني بين المستشفى الفلبيني العام (PGH) ومركز الجينوم الفلبيني (PGC) ومعهد علم الأحياء (IB) التابع لجامعة الفلبين ديليمان ، ولكل منها مهام محددة. تم تسجيل البروتوكول في مكتب إدارة المنح البحثية (RGAO-2020-0933) ، وتمت مراجعته واعتماده من قبل مجلس أخلاقيات البحث بجامعة مانيلا (UPMREB) للتنفيذ بموجب رقم التخليص الأخلاقي UPMREB 2020-822-01. تلتزم جميع المختبرات المستخدمة بإرشادات السلامة البيولوجية لكل مؤسسة. ضمن تجنيد المرضى من PGH التباين والتمثيل من حيث العوامل السريرية المرضية والعرق والتعرضات البيئية. تم استخدام إجراء التشغيل الموحد (SOP) الذي تم تطويره والتحقق من صحته في المشاريع السابقة كإطار لاقتناء العينات واستلامها ونقلها والترتيبات اللوجستية الأخرى المتعلقة بالعينات.

ملاحظة: انظر الشكل 1 - سير العمل التخطيطي للبروتوكول للحصول على ملخص سير عمل البروتوكول وأدوار كل مؤسسة مشاركة في الدراسة.

1. إجراء جمع عينات ما قبل الثدي

  1. تحديد وفحص المرضى المؤهلين لإدراجهم في الدراسة أثناء استشارة العيادة أو مؤتمر ما قبل الجراحة.
    1. معايير الاشتمال لمرضى السرطان
      1. تشمل الفلبينيات والإناث الذين تتراوح أعمارهم بين 19 و 75 عاما تم تشخيص إصابتهم بسرطان الثدي في المرحلة 1 و 2 و 3 ، والإناث الفلبينيات اللواتي تتراوح أعمارهن بين 19 و 70 عاما تم تشخيص إصابتهن بسرطان الثدي في المرحلة 3 ب و 4.
      2. قم بتضمين الحالات المشتبه بها سريريا أو التي تم تشخيصها بشكل مرضي لسرطان الثدي الغازي في أي مرحلة.
      3. قم بتضمين المرضى الذين سيخضعون للعلاج الجراحي (استئصال الثدي الجذري المعدل أو استئصال الثدي الجذري) إما مقدما (المرحلة السريرية الأولى أو الثانية) أو العلاج الكيميائي التالي المساعد الجديد (المرحلة IIIB ، IIIC). قد يخضع مرضى المرحلة IIIA إما لجراحة مسبقة أو علاج مساعد جديد وفقا لتوصيات الطبيب. بالنسبة لمرضى المرحلة الرابعة ، أولئك الذين يرغبون في الخضوع لخزعة إبرة أساسية من ورم الثدي والأنسجة الطبيعية المجاورة. لن يخضع مرضى سرطان الثدي في المرحلة الرابعة للعلاج الجراحي.
      4. قم بتضمين مرضى سرطان الثدي في المرحلة الثالثة اللواتي خضعن للعلاج المساعد الجديد قبل التوظيف ، وهناك سجل كامل للاستجابة الطبية والسريرية للعلاج.
      5. قم بتضمين المرضى الذين يمكنهم فهم الموافقة المستنيرة والتوقيع عليها.
    2. معايير الاستبعاد لمرضى السرطان
      1. استبعاد المرضى الذين يعانون من ورم خبيث سابق أو متزامن ، بما في ذلك التشخيص المسبق لسرطان الثدي.
      2. استبعاد المرضى الذين يعانون من سرطان الثدي الثنائي.
      3. استبعاد المرضى الذين خضعوا سابقا للعلاج الإشعاعي المساعد الجديد أو العلاج الهرموني.
      4. استبعاد المرضى الذين خضعوا لخزعة أساسية أو جراحية سابقة حيث لا توجد موافقة على تكرار إجراء الخزعة للمرضى الذين سيخضعون للعلاج الكيميائي المساعد الجديد (حيث لا يمكن الحصول على عينة ورم جديدة قبل العلاج الكيميائي)
      5. استبعاد المرضى الذين خضعوا لخزعة استئصالية سابقة بدون ورم متبقي.
      6. استبعاد المرضى الذين يعانون من أمراض مصاحبة تحول دون الإدارة الجراحية أو العلاج الكيميائي المساعد الجديد.
    3. معايير الانسحاب
      1. أبلغ المشاركين أنه يمكنهم الانسحاب في أي وقت بسبب السلامة أو غيرها من المخاوف دون التأثير على رعايتهم الطبية. لن تؤثر هذه الدراسة غير التدخلية على اختيار العلاج للمشاركين.
  2. الحصول على موافقة المريض وملء نموذج جمع البيانات.
    ملاحظة: يحصل الزميل المسؤول المعين (FIC) أو المستشار ، جنبا إلى جنب مع الباحث المشارك في الجامعة (URA) ، على الموافقة.
  3. الحصول على الجدول الزمني للمريض لإجراء الخزعة بالإبرة الأساسية والتحقق منه بعد التأكد من مشاركته في الدراسة.
  4. اتخاذ الإجراءات وفقا للإرشادات الموضوعة والمعتمدة من قبل لجنة مجلس الأخلاقيات ولجنة السلامة الحيوية في المؤسسة.

2. إجراء جمع عينة خزعة الثدي

ملاحظة: انظر الشكل 2 للحصول على سير العمل التفصيلي لإجراء خزعة الإبرة الأساسية لمرضى المرحلة الثالثة والرابعة ، مما يوضح توزيع العينات لكل إجراء.

  1. قم بتسمية الأنابيب مسبقا قبل جمع العينات على أنها GB ، مما يعني علم الجينوم - الثدي (الدراسة التي تحتها العينة) ، xxx وهو رقم المشارك ويمكن أن يتراوح من 001 إلى 100 ، أو أكثر ، والأحرف A و C و D. فيما يلي رموز الحروف التي يجب استخدامها في وضع العلامات على الأنابيب:
    A - تعني خزعة الإبرة الأساسية ، أنسجة الورم ، لإرسالها إلى PGC
    C - تعني خزعة الإبرة الأساسية ، أنسجة الورم ، للبنوك الحيوية
    D - تعني خزعة الإبرة الأساسية ، الأنسجة الطبيعية
    1. قم بتعيين العينات المقدمة للتسلسل مع ملصق المختبر: "BC" ورقمين عينتين من رقمين (على سبيل المثال ، BC01 ، BC21). تحتوي كل عينة على رمز "GB" مطابق يرتبط بالشفرة المعينة أثناء جمع العينات.
  2. احصل على ما يصل إلى تسعة نوى أنسجة باستخدام مسدس خزعة إبرة 14 G تحت إشراف الموجات فوق الصوتية ، في عيادة خارجية أو غرفة عمليات أو بيئة معقمة أخرى.
    1. لكل نواة ، احصل على عينة من الثدي بطول 2 سم تقريبا في مركز الورم و 1 سم من الورم للأنسجة الطبيعية المجاورة. اجمع نوعين من العينات من كل مشارك: أنسجة الورم والأنسجة الطبيعية.
    2. سلم كل عينة إلى URA لوضعها في طبق بتري يحتوي على محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS).
      ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم إجراء خزعات الإبرة الأساسية فقط على المرضى الذين يعانون من سرطان الثدي في المرحلة الثالثة والرابعة. بالنسبة لمرضى المرحلة الثالثة ، قدمت خزعات الإبرة الأساسية عينات من الورم الساذج للعلاج الكيميائي. بالنسبة لمرضى المرحلة الرابعة ، كانت الخزعات بالإبرة الأساسية بمثابة عينة الورم الأولية ، حيث لم يتم إجراء استئصال الثدي. بالنسبة للمرضى الذين يعانون من سرطان الثدي في المرحلة الأولى والثانية ، لم يتم إجراء خزعات بالإبرة الأساسية. بدلا من ذلك ، تم الحصول على الورم والأنسجة الطبيعية المجاورة من عينات استئصال الثدي.
  3. قطع عينات الخزعة إلى نصفين لتوزيعها بالتساوي بين الدراسة والتحليل النسيجي المرضي.
    1. بالنسبة لأنسجة الورم ، احصل على ما يصل إلى 9 نوى لكل مريض دراسة باستخدام إبرة 14 جرام.
    2. افصل نوى الورم التي تم الحصول عليها إلى مجموعتين في طبق بتري: عينات لتحليل الحمض النووي الريبي (6 نوى) وعينات للبنوك الحيوي (3 نوى).
    3. قم بتقطيع كل نواة إلى 2 بالطول ، ولكن في الحالات التي يصعب فيها القيام بذلك ، قم بتقطيع النوى إلى 2 بالعرض. استخدم شفرة معقمة لقطع النوى. أرسل نصف نواة الأنسجة لتحليل الحمض النووي الريبي أو قم بتخزينها للبنك الحيوي. أرسل النصف الآخر من قلب الأنسجة إلى علم الأمراض لإجراء التحليل النسيجي المرضي الروتيني.
    4. بالنسبة للأنسجة الطبيعية ، احصل على ما يصل إلى 3 نوى لكل مريض دراسة باستخدام إبرة 14 جراما. استخدم إبرة مختلفة عن تلك المستخدمة للحصول على أنسجة الورم لتجنب التلوث. في الحالات التي لا يكون فيها ذلك ممكنا ، احصل على أنسجة الثدي الطبيعية أولا قبل الحصول على أنسجة الورم.
    5. ضع كل نسيج طبيعي تم الحصول عليه في طبق بتري مشابه لما تم إجراؤه مع أنسجة الورم ، واقطع النوى إلى نصفين. توزيع العينات للدراسة وعلى قسم علم الأمراض لتحليل الأنسجة المرضية.
  4. بعد جمع العينة ، قم بتوزيع العينات بين الأنابيب ، باتباع طريقة وترتيب الأولوية.
    1. ضع نصف النوى في 2 مل من التبريد المعبأ مسبقا ب 1.25 مل من محلول تثبيت الحمض النووي الريبي (جميع النوى لتحليل الحمض النووي الريبي موضوعة معا في قارورة واحدة وجميع النوى للبنوك الحيوي في قارورة منفصلة ، واحتفظ بالعينات في درجة حرارة باردة في جميع الأوقات) وضع النصفين المقابل لهذه النوى في قارورة / أنبوب عينة عادية ومثبتة بفورمالين محايد 10٪ (10٪ NBF) ، لتحليل الأنسجة المرضية. تأكد من أن المجموعتين النصفيتين المقابلتين ، تلك التي تذهب إلى المركز المعين (على سبيل المثال ، العينات المرسلة لتحليل الحمض النووي الريبي) ، وعينة علم الأمراض المقابلة لها نفس رمز العينة.
  5. أكمل نماذج علم الأمراض الجراحية. جنبا إلى جنب مع النماذج ، أرسل عينات علم الأمراض الثابتة بالفورمالين إلى علم الأمراض لعلم الأمراض لعلم الأنسجة الروتيني.
  6. ختم عينات خزعة الإبرة الأساسية المنقوعة في أنابيب تحتوي على محلول تثبيت الحمض النووي الريبي بالبارافيلم (من الناحية المثالية نسبة 5: 1 من المحلول إلى الأنسجة ، لذلك إذا كان 0.25 سم من الأنسجة ، 1.25 مل من محلول تثبيت الحمض النووي الريبي).
  7. قم بتخزين العينات على حرارة 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة ، ثم انقلها في النهاية في الفريزر المنخفض للغاية ، بدرجة حرارة -80 درجة مئوية.
    ملاحظة: ستتم مناقشة دليل حول التخزين في القسم 4 (تخزين العينات وتعبئتها ونقلها).

3. إجراء جمع عينات استئصال الثدي

  1. اتبعي إجراء جمع عينات ما قبل الثدي في القسم 1.
    ملاحظة: سيخضع مرضى المرحلة الأولى والثانية والثالثة المسجلين في الدراسة لاستئصال الثدي في غرفة العمليات (OR). بالنسبة لمرضى المرحلتين الأولى والثانية ، سيتم إجراء استئصال الثدي مقدما ، بينما بالنسبة لمرضى المرحلة الثالثة ، لن يتم إجراء استئصال الثدي إلا عند الانتهاء من 8 دورات من العلاج المساعد الجديد. بالنسبة للمرحلة 4 ، لا يتم جمع عينات من استئصال الثدي. انظر الشكل 3 للحصول على بروتوكول جمع عينات استئصال الثدي التفصيلي الذي يوضح توزيع العينات لكل إجراء.
  2. تنسيق الجدول الزمني مع المتعاونين وقسم علم الأمراض. افعل ذلك قبل يومين على الأقل من التاريخ المستهدف للإجراء. في حالة حدوث تغييرات في الجدول الزمني المحدد ، أبلغ الموظفين المعنيين على الفور لتجنب أي تعارض في الجدول.
  3. قم بتسمية الأنابيب مسبقا قبل جمع العينات على أنها GB ، مما يعني Genomics Breast (الدراسة التي تحتها العينة) ، xxx وهو رقم المشارك ويمكن أن يتراوح من 001 إلى 100 ، أو أكثر ، والأحرف E و F. فيما يلي رموز الحروف التي يجب استخدامها في وضع العلامات على الأنابيب:
    E - يعني استئصال الثدي ، والأنسجة السرطانية ، لإرسالها إلى PGC و IB والبنوك الحيوية
    F - يعني استئصال الثدي ، الأنسجة الطبيعية
    1. قم بتعيين العينات المقدمة للتسلسل مع ملصق المختبر: "BC" ورقم العينة المكون من رقمين (على سبيل المثال ، BC01 ، BC21). تحتوي كل عينة على رمز "GB" مطابق يرتبط بالشفرة المعينة أثناء جمع العينات.
  4. املأ نماذج علم الأمراض الجراحية أثناء الجراحة ، أثناء انتظار العينة. أرسل تحديثات إلى أخصائي علم الأمراض المسؤول لهم لإجراء أي استعدادات ضرورية لجمع العينات.
  5. ضع العينة في كيس بلاستيكي / عينة نظيف مباشرة بعد إزالة عينة الثدي وتوثيقها. تأكد من إحضار عينة استئصال الثدي على الفور إلى قسم علم الأمراض لتقديرها لتقليل الوقت الإقفاري البارد. لا تضع العينة في الفورمالين عند التقديم.
    ملاحظة: يتم عرض صور عينة أثناء استئصال الثدي في الشكل 4 (صور تمثيلية لجمع العينات أثناء إجراء استئصال الثدي).
  6. الحصول على نوعين من العينات من كل عينة عند الإجمالي: أنسجة الورم والأنسجة الطبيعية.
    1. أنسجة الورم
      1. احصل على كتلة واحدة على الأقل (يفضل أكثر) بقياس 1 سم × 1 سم × 1 سم من أنسجة الورم لكل عينة.
      2. قم بقطع كتلة الأنسجة التي تم الحصول عليها إلى قسمين ، مع قياس كل كتلة نصف 1 سم × 0.5 سم × 0.5 سم. سلم أكثر من نصف كتلة الأنسجة إلى URA للبنوك الحيوية والتحليل ، ثم قم بإصلاح النصف الآخر في الفورمالين لعلم الأنسجة المرضي الروتيني.
      3. قم بتقسيم نصف كتلة الأنسجة الطازجة بالتساوي. سيكون هذا مخصصا لتسلسل الحمض النووي الريبي ، والبنوك الحيوية ، والثقافة العضوية.
      4. لتسلسل الحمض النووي الريبي: ضعه على الفور في 5 مل مبردة مسبقا ، وتحمل علامة مسبقة ، مملوءة مسبقا بمحلول تثبيت الحمض النووي الريبي 2.5 مل (لا يتجاوز 30 دقيقة ، يجب أن تبقى باردة في جميع الأوقات).
      5. للبنوك الحيوية: ضعه على الفور في 5 مل من التبريد المبردة مسبقا والمسمية مسبقا والمملوءة مسبقا بمحلول تثبيت الحمض النووي الريبي 2.5 مل (لا يتجاوز 30 دقيقة ، يجب أن يظل باردا في جميع الأوقات).
      6. للاستزراع العضوي: ضعه على الفور في قوارير مخروطية سعة 15 مل مبردة مسبقا ومسبقة التصنيف ومعبأة مسبقا مع 5 مل من محلول تخزين الأنسجة و 0.01 مل بريموسين (لا تتجاوز 30 دقيقة ، يجب أن تبقى باردة في جميع الأوقات). تجمع معا في أنبوب مخروطي واحد ثلث جميع كتل الورم التي تم الحصول عليها من أقسام مختلفة من العينة.
    2. الأنسجة الطبيعية
      1. احصل على كتلة واحدة على الأقل (يفضل أكثر) بقياس 1 سم × 1 سم × 1 سم من أنسجة الثدي الطبيعية لكل عينة.
      2. قم بتقطيع كتلة الأنسجة التي تم الحصول عليها إلى قسمين ، مع قياس كل كتلة نصف 1 سم × 1 سم × 0.5 سم. سلم أكثر من نصف كتلة الأنسجة إلى URA للبنوك الحيوية والتحليل ، ثم قم بإصلاح النصف الآخر في الفورمالين لعلم الأنسجة المرضي الروتيني.
      3. قطع كتلة الأنسجة بالتساوي إلى قسمين للدراسة. ستكون هذه مخصصة لتسلسل الحمض النووي الريبي والبنوك الحيوية.
      4. لتسلسل الحمض النووي الريبي: ضعه على الفور في 5 مل مبردة مسبقا وتحمل علامة مسبقة ، مملوءة مسبقا ب 2.5 مل من cryovials مع محلول تثبيت الحمض النووي الريبي (لا تتجاوز 30 دقيقة ، وحفظها في درجة حرارة باردة في جميع الأوقات).
      5. بالنسبة للبنك الحيوي ، ضعه على الفور في 2.5 مل من التبريد المبردة مسبقا والمسمية مسبقا والمملوءة مسبقا بمحلول تثبيت الحمض النووي الريبي (لا يتجاوز 30 دقيقة ، والحفاظ عليها في درجة حرارة باردة في جميع الأوقات).
        ملاحظة: عادة ما يتم الحصول على عينات الورم المسماة "E" من ثلاثة أقسام مختلفة أو أكثر من العينة. لتجنب الارتباك ، يجب وضع عينات الورم المخصصة لتحليل الحمض النووي الريبي والبنوك الحيوية في أنابيب منفصلة تحمل علامة E1 و E2 و E3 وما إلى ذلك ، بينما يجب وضع عينات الورم المجمعة المخصصة لزراعة الخلايا في أنابيب تحمل علامة E. بالنسبة للعينات المسماة E1 و E2 و E3 ، يجب تسجيل الموضع / الموقع النسبي لكل عينة من الأنسجة فيما يتعلق بالورم (على سبيل المثال ، المركز ، موضع الساعة 10).
  7. ختم الكريوفيالات التي تحتوي على العينات التي تم الحصول عليها من استئصال الثدي بالبارافيلم
  8. قم بتخزين المبردات في 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة ، ثم انقلها في النهاية إلى الفريزر المنخفض للغاية ، بدرجة حرارة -80 درجة مئوية للتخزين طويل الأجل.
  9. قم بتعبئة الأنبوب المخروطي الذي يحتوي على كتل الورم المجمعة وقم بإعداده للنقل. سيتم استخدام كتل الورم هذه لزراعة الخلايا في العضيات.

4. تخزين وتعبئة ونقل العينات

  1. أغلق على الفور باستخدام البارافيلم جميع المواد المبردة التي تحتوي على الورم والأنسجة الطبيعية وقم بتخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة. بعد 24 ساعة ، انقل الأنابيب إلى -20 درجة مئوية لمدة 2-4 ساعات ثم انقلها في النهاية إلى -80 درجة مئوية إلى أجل غير مسمى ، للتخزين طويل الأجل حتى النقل.
  2. تحديث متتبع العينات وقاعدة البيانات قبل نقل العينات لتحليل الحمض النووي الريبي ، بما في ذلك نتائج التشريح المرضي الروتيني ونسب الورم ، للتأكد من هوية العينة.
  3. أنجز بيان النقل لكل عينة قبل النقل. تأكد من أن عملية التعبئة سريعة وأن الأنابيب التي تحتوي على العينات لا تترك في درجة حرارة الغرفة (RT) لفترة طويلة.
    1. أغلق جميع الأغطية المبردة بالبارافيلم لمنع التسرب.
    2. ضع جميع الأنابيب في رف أنبوب الاختبار.
    3. اضبط مسجل درجة الحرارة وضعه فوق الرف بجانب الأنابيب للنقل.
    4. لف الأنابيب بمادة ماصة ، ثم بغلاف فقاعي ، وضع العناصر داخل الكيس القابل لإعادة الإغلاق. تأكد من أن مسجل درجة الحرارة يسجل درجة الحرارة وأن الأنابيب سليمة وموضوعة في وضع مستقيم قبل إغلاق العناصر داخل الكيس.
    5. ضع عبوات الجل في الجزء السفلي من صندوق شحن البوليسترين ، ثم ضع الكيس القابل لإعادة الإغلاق الذي يحتوي على الأنابيب أعلى عبوات الجل. ضع طبقة أخرى من عبوات الجل فوق الكيس. تأكد من وضع الأنابيب بين عبوات الجل لضمان بقاء العينات باردة أثناء النقل.
    6. أغلق صندوق البوليسترين وضعه داخل صندوق شحن من الورق المقوى. إذا لم يكن هناك صندوق كبير من الورق المقوى متاح ، فاستخدم صندوق بوليسترين أكبر. ضع بيان النقل المكتمل داخل كيس زيبلوك وضعه داخل الصندوق. يظهر وضع العناصر داخل الصندوق في الشكل 5.
    7. أغلق صندوق الورق المقوى وضع ملصق الشحن المناسب خارج الصندوق.
  4. أبلغ المستلم بجدول جمع العينات ومتى سيكون إرسال العينات المستهدف.
    1. بالنسبة للثقافة العضوية ، يتم إرسال واستخدام أنسجة الورم المشتقة من استئصال الثدي فقط. تأكد من تسليمها طازجة ، على الثلج الرطب ، وفي غضون 24 ساعة من جمع العينات. بمجرد تعبئة العينات وإغلاق الصندوق ، احجز بسرعة ساعي لنقلها. تأكد من عدم ترك الصناديق في مناطق ذات درجات حرارة عالية لفترات طويلة ، لأن الانخفاض الشديد في درجة الحرارة أو ارتفاعه يمكن أن يضر بصلاحية العينات.
    2. قبل التسليم إلى شركة الشحن ، لاحظ عدد القوارير / الأنابيب التي تم شحنها والوقت الذي غادر فيه الساعي البنك الحيوي. عند وصول الطرد ، تأكد من أن المستلم يحيط علما بما يلي: وقت الوصول والاستلام في المركز المخصص ، ودرجة الحرارة عند الوصول ، وعدد القوارير / الأنابيب المستلمة ، وأي عينة مخترقة
    3. لتحليل الحمض النووي الريبي ، تحقق مما إذا كانت العينات التي سيتم تسليمها تحتوي على نتيجة نسيجية مرضية مقابلة ونسب الورم من قسم علم الأمراض الجراحي ، قبل إرسال عينات لتحليل الحمض النووي الريبي. تحديد وتحديد كتلة الأنسجة التي تحتوي على أعلى نسبة من الورم لكل مريض ليتم تقديمه لاستخراج الحمض النووي الريبي. انقل العينات فقط تلك التي تحتوي على نسب الورم.
    4. أرسل العينات في مجموعات لا تزيد عن 40 لتسهيل معالجة الدفعات. اختر أي مجموعة من أنسجة الورم من خزعة الإبرة الأساسية أو استئصال الثدي والأنسجة الطبيعية من استئصال الثدي. راجع الحالات التالية إذا كان سيتم نقل الأنسجة الطبيعية من خزعة الإبرة الأساسية:
      - مسجل في المرحلة 3 ، لكن نتيجة علم الأنسجة تظهر المرحلة 4
      - مسجل في المرحلة 3 ، لكن نتيجة علم الأنسجة المرضي تظهر تطورا موضعيا إقليميا للمرض.
    5. تأكد من نقل جميع العينات على الثلج الرطب. على غرار البروتوكول الذي يتم اتباعه عند إرسال عينات لزراعة الخلايا ثلاثية الأبعاد ، بمجرد تعبئة العينات وإغلاق الصندوق ، احجز على الفور ساعي للنقل. تجنب ترك الصناديق في مناطق ذات درجة حرارة عالية لفترات طويلة ، لأن التقلبات الكبيرة في درجات الحرارة يمكن أن تضر بصلاحية العينات.
    6. قبل التسليم إلى شركة الشحن ، لاحظ عدد القوارير / الأنابيب التي تم شحنها والوقت الذي غادر فيه الساعي البنك الحيوي. لاحظ ما يلي عند وصول الطرد: وقت الوصول والاستلام في المركز المخصص ، ودرجة الحرارة عند الوصول ، وعدد القوارير / الأنابيب المستلمة ، وأي عينة مخترقة (إن وجدت).
  5. تحديث قاعدة بيانات العينات المرسلة وإدخال جميع المعلومات اللازمة قبل المعالجة الإضافية للعينات. مراقبة وتقييم قاعدة البيانات مرة واحدة في الأسبوع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لجمع العينات أثناء الخزعة بالإبرة الأساسية ، كان لإجراء الإجراء تحت إشراف الموجات فوق الصوتية تأثير كبير على راحة المريض وكفاءة سير العمل ، وكذلك على سلامة الحمض النووي الريبي للعينات. إذا لم يتم ذلك ، فقد لا يتم الحصول على النتائج المتوقعة ، ويجب على المرضى العودة إلى العيادات لتكرار الإجراء ، وبالتالي إطالة جمع العينات ومعالجتها.

بالإضافة إلى ذلك ، يعد تحديد نسب الورم لكل عينة ، والذي قام به أخصائي علم الأمراض المسؤول ، خطوة مهمة لضمان جودة العينات للاستخراج...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لا يعتمد التنفيذ الناجح لهذا البروتوكول على الدقة التقنية فحسب ، بل يعتمد أيضا على تنسيق الفرق السريرية والبحثية لضمان جودة العينة المتسقة وسلامة البيانات. يشتمل هذا البروتوكول على العديد من الإجراءات الرئيسية المصممة لزيادة دقة التشخيص إلى أقصى حد وتوليد عينات حيوية عالية الجودة مناسبة للتحليلات الجزيئية النهائية. تشمل الخطوات الرئيسية خزعة الإبرة الأساسية الموجهة بالموجات فوق الصوتية للحصول على أنسجة الثدي الطبيعية والورمية ، وجمع البيانات حول الاستجابة للعلاج ، وقياس نسبة الورم.

<...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح ، سواء كان ماليا أو شخصيا أو مؤسسيا ، للإفصاح عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم تمويل هذا البحث من قبل قسم العلوم والتكنولوجيا ، المجلس الفلبيني للبحوث والتنمية الصحية (DOST-PCHRD) ، ويتم إجراؤه بالتعاون مع مركز الجينوم الفلبيني (PGC) وجامعة الفلبين ديليمان - معهد الأحياء (UPD-IB). يود المؤلفون أيضا أن يشكروا السيد ليخ هافيل تيزون والسيد كونراد تشونغ والسيدة سوزان فاليبيا على مساعدتهم في تحسين هذا البروتوكول ، بالإضافة إلى المقيمين في علم الأمراض الذين ساهموا في تصوير هذا البروتوكول ، الدكتورة كلاريس فيرونيكا ميرهان والدكتورة باتريشيا فرانكو.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
محلول الفورمالين بنسبة 37٪شركة فيلوسالا يوجديستخدم كمادة حافظة للأنسجة للتحليل النسيجي المرضي
70٪ كحول إيزوبروبيلشركة جرين كروسلا يوجديستخدم كمطهر
طابعة الباركودالحمار الوحشيGC420tلطباعة ملصقات الباركود المستخدمة في أنابيب الموصمات التي تحتوي على العينات
المبيضشركة جرين كروسلا يوجديستخدم كمطهر؛ لتطهير الأدوات الجراحية
أكياس الثلج الزرقاءربرميد1002لحفظ العينات في درجات حرارة منخفضة أثناء النقل
خزعة إبرة النواة بإبرة 14-GباردMN1410أداة جراحية أنبوبية غازية مصممة ليتم توصيلها بقطعة يد مسدس الخزعة لاستخراج عينة صغيرة من نسيج من بنية تشريحية (خزعة)، مع التسبب في تلف طفيف للأنسجة المحيطة، وذلك للفحص/الفحص المرضي للأنسجة.
مسدس خزعة الثدي بالإبرة الأساسيةباردMG1522أداة خزعة النواة القابلة لإعادة الاستخدام المستخدمة في جمع عينات الأنسجة أثناء خزعة إبرة النواة
طبق بترى قابل للاستخدام مرة واحدة بمقاس 90 مم × 15 مممنتجات فينيكس الطبية الحيويةلوت: 20220206يستخدم في جمع عينات خزعة الإبرة الأساسية عند غمر الأنسجة في PBS
محلول دولبيكو الملحي المخزن بالفوسفات (PBS)ثيرمو فيشر العلمي21600010محلول ملحي متوازن يستخدم لمجموعة متنوعة من تطبيقات زراعة الخلايا، مثل غسل الخلايا قبل التفكك، ونقل الخلايا أو الأنسجة، وتخفيف الخلايا للعد، وتحضير الكواشف.
الملقطالمورد المحليلا يوجد
مساحات Kimtech Science KimVapes الحساسة للمشابككيمبرلي كلارك بروفيشنالKC341204.3 × 8.4 بوصة. (11.0 سم × 21.3 سم)؛ 280 قطعة واحدة؛ لتنظيف الأسطح والأجزاء والأدوات والمكاتب الطبية، تنظف هذه المناديل السوائل والغبار والجزيئات الصغيرة بسهولة.
حل تخزين الأنسجة في MACSميلتيني بيوتيك130-100-008محلول تخزين يستخدم للسماح بتخزين مثالي لعينات الأعضاء والأنسجة الطازجة
ميكروبايبتشركة شنغهاي لتقنية الأشنات المحدودة.STEM-GC-3197-Yلنقل السوائل بكميات صغيرة من خلال نقل الماصات
أطراف الميكروبايبتتارسونز521100لنقل السوائل بكميات صغيرة من خلال نقل الماصات
بارافيلمبارافيلم إم5259-04LC PM996لإغلاق الأنابيب بإحكام ومقاومة للرطوبة لمنع التسربات
بريموسين 250 ملغ (5 × 1 مل)إنفيفوجينANT-PM-05يستخدم لحماية الأنسجة من التلوث الميكروبي
الثلاجة (4 ودرجات؛ C)إل جيالطراز: GR-Y331SLZBلتخزين عينات الأنسجة والكواشف
حل RNAlaterثيرمو فيشر العلميAM7021محلول تثبيت الحمض النووي الريبي المستخدم في تخزين وتخزين الأنسجة وتخزينها الحيوي
أنبوب مخروطي معقم بحجم 15 مل؛ثيرمو ساينتفيك339650يستخدم لصنع كميات كبيرة من المواد الكيميائية/الوسائط المستخدمة في تخزين الأنسجة
الكريوفيالات المعقمة بسعة 5 ملثيرمو ساينتفيك5000-1020يستخدم لصنع كميات كبيرة من المواد الكيميائية/الوسائط المستخدمة في تخزين الأنسجة
شفرة مشرط معقمة (#11)سيرجيتكلا يوجدلقطع الورم والأنسجة الطبيعية للثدي
المقص الجراحي (18.5 سم 7 & frac14؛ " str)أولتن إنسترومنتسBO-0125لقطع الورم والأنسجة الطبيعية للثدي
مسجل درجة الحرارةإكستك إنسترومنتس42280لتسجيل درجة الحرارة والرطوبة أثناء نقل العينات
حبر الأنسجةإبريديا3120123لصبغ هوامش العينات الجراحية المستخرجة للتحليل النسيجي المرضي
فريزر فائق الانخفاضهاير الطبية الحيويةDW-86L579للتخزين غير المحدد للأورم والأنسجة الطبيعية للثدي
حاوية عينة البول 60 ملحرس التأكيد0016UCS06PCلتخزين الأنسجة للتحليل النسيجي المرضي
أكياس زيبلوكشركة رينولدز للمنتجات الاستهلاكية ذ.م.ميستخدم في تعبئة العينات للنقل

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wu, T., Lee, J. Promoting breast cancer awareness and screening practices for early detection in low-resource settings. Eur J Breast Health. 15 (1), 18-25 (2018).
  2. De Leon Matsuda, M. L., et al. BRCA1 and BRCA2 mutations among breast cancer patients from the Philippines. Int J Cancer. 98 (4), 596-603 (2002).
  3. Ngelangel, C. A., Wang, E. H. M. Cancer and the Philippine Cancer Control Program. Jpn. J Clin Oncol. 32 Suppl, S52-S61 (2002).
  4. Lee, S., Jung, P. E., Lee, Y. Publicly-funded biobanks and networks in East Asia. SpringerPlus. 5 (1), 1080(2016).
  5. Murtagh, M. J., Demir, I., Harris, J. R., Burton, P. R. Realizing the promise of population biobanks: a new model for translation. Hum Genet. 130, 333-345 (2011).
  6. Coppola, L., et al. Biobanking in health care: evolution and future directions. J Transl Med. 17 (1), 172(2019).
  7. Sajo, M. E. J. V., et al. A pilot cancer-phenome biobanking system in a low-resource Southeast Asian setting: The Philippine general hospital biobank experience. Biopreserv Biobank. 18 (3), 180-188 (2020).
  8. Considerations for RNA Seq Read Length and Coverage. , Illumina Knowledge. https://knowledge.illumina.com/library-preparation/rna-library-prep/library-preparation-rna-library-prep-reference_material-list/000001243 (2024).
  9. Evidence-based clinical practice guidelines for early breast cancer. Phil J Surg Specialties. 68 (2), 41-74 (2013).
  10. Al-Ismaeel, A. H., Nugud, A., Nugud, A., Nugud, S. Ultrasonography-guided core needle biopsy diagnostic value in breast lump assessment: An experience from the Middle East. J Diagn Med Sonogr. 37 (1), 5-11 (2021).
  11. Poontananggoon, S. Accuracy of ultrasound-guided core-needle biopsy on non-palpable breast masses. Srinagarind Med J. 35 (2), 125-128 (2020).
  12. Finak, G., et al. Gene expression signatures of morphologically normal breast tissue identify basal-like tumors. Breast Cancer Res. 8 (5), R58(2006).
  13. Johnson, K. C., et al. Normal breast tissue DNA methylation differences at regulatory elements are associated with the cancer risk factor age. Breast Cancer Res. 19 (1), 81(2017).
  14. Smits, A., et al. The estimation of tumor cell percentage for molecular testing by pathologists is not accurate. Mod Pathol. 27, 168-174 (2014).
  15. Busheri, L., et al. Breast cancer biobank from a single institutional cohort in an urban setting in India: Tumor characteristics and survival outcomes. Cancer Treat Res Commun. 28, 100409(2021).
  16. Pekar, G., et al. Biobanking multifocal breast carcinomas: sample adequacy with regard to histology and DNA content. Histopathology. 68, 411-421 (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Breast Cancer BiobankingCore Needle BiopsyRNA SequencingOrganoid CultureTumor Tissue CollectionNormal Tissue CollectionUltrasound Guided BiopsyCryo Vial StoragePersonalized MedicineThree Dimensional Culture

مقالات ذات صلة