أصبحت الخلايا الدبقية المعوية معروفة بشكل متزايد لأدوارها في التوازن المعوي وعمليات المرض ، بما في ذلك مضاعفات ما بعد الجراحة. يعاني مرضى الخيول الذين يتعافون من شق البطن الاستكشافي الطارئ من مخاطر عالية للإصابة بحالات التهابية بعد الجراحة ، مما يسلط الضوء على أهمية إنشاء ثقافة الخلايا الدبقية الدبقية المعوية المعوية القابلة للتكرار للدراسة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الثقافة الدبقية المعوية للخيول وتطبيقها على دراسة آلية الالتهاب العصبي في مغص الخيول
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
لا تساهم الحالات الالتهابية بعد الجراحة لمغص الخيول (البطن الحاد) في زيادة تكلفة العميل ، وعدم الراحة للمريض ، ووقت الاستشفاء ، ولكن في كثير من الحالات ، تثبت أنها مهددة للحياة. يتم التعرف بشكل متزايد على مجموعة فريدة من الخلايا المعوية ، الخلايا الدبقية المعوية ، لدورها في استشعار بيئة الجهاز الهضمي والتواصل مع أنواع الخلايا المحيطة. قد تكون التفاعلات بين الخلايا الدبقية المعوية والظهارة المعوية حاسمة في تحديد كيف يمكن للدبقية المعوية للخيول تغيير الحاجز المخاطي لتعديل الالتهاب في الصحة والمغص.
لدراسة هذا التفاعل ، نقدم طريقة لإنشاء الثقافات الدبقية المعوية الأولية للخيول من صائم الخيول وتعريض الثقافات لحالات التهابية معروفة بوجودها في المغص. تم الحصول على الثقافات الدبقية المعوية الأولية من الخيول البالغة التي تم قتلها لأسباب لا علاقة لها بالمغص. تم تشريح الزغابات المعوية والصفيحة المخصوصة بشكل دقيق لفضح تحت الغشاء المخاطي. خضع تحت الغشاء المخاطي المعزول للهضم الأنزيمي مع الكولاجيناز والبروتياز وألبومين مصل الأبقار لمدة 2-3 ساعات. بعد ذلك ، أسفر الهضم الميكانيكي الذي يتضمن الطرد المركزي ، والماصات ، ومصافي الخلايا (40-100 ميكرومتر) عن حبيبات تستخدم للطلاء على 0.05 مجم / مل من الآبار المطلية ب poly-L-lysine بتركيز ~ 400,000 خلية / 300 ميكرولتر من الوسائط.
بعد التقاء والمرور الأول ، تعرضت الخلايا الدبقية المعوية بعد ذلك لمؤتلف الخيول IL-1β (0 ، 10 ، 25 نانوغرام) لمدة 24 ساعة. لنمذجة التفاعلات الظهارية الدبقية في وقت المغص ، تمت إضافة الوسط المشروط إما عن طريق التحكم أو الخلايا الدبقية المعوية المعالجة مباشرة إلى الطبقات الأحادية الصائمية للخيول المتجمعة أثناء قياس المقاومة الكهربائية عبر الظهارة (TEER) باستخدام غرفة EndOhm مزدوجة القطب. توضح هذه البيانات واحدا فقط من العديد من التطبيقات المؤثرة المحتملة للثقافة الدبقية المعوية للخيول.
المقدمة
مغص الخيول هو أكثر الشكوى الطبية انتشارا للاستشارة الطارئة1. مع ما يصل إلى 17٪ من تلك الخيول التي تتطلب تصحيحا جراحيا ، يجب أن تكون الجهود المبذولة لزيادة نتائج ما بعد الجراحة في طليعة الأبحاث الطبية للخيول2. حاليا ، يعاني مرضى المغص بعد الجراحة من مخاطر عالية للعديد من الاضطرابات التي تهدد الحياة بما في ذلك الإنتان / صدمة التسمم الداخلي (12.3٪ من المرضى) واللفائص بعد الجراحة (13.7٪ من المرضى)3. على الرغم من التقدم المحرز في علاج مضاعفات ما بعد الجراحة، لا تزال هناك حاجة إلى علاجات متقدمة للوقاية من هذه الحالات أو علاجها.
سلطت الأبحاث الحديثة الضوء على الحالة الالتهابية الموضعية والجهازية لمرضى المغص4. على سبيل المثال ، ثبت أن البروتينات المسببة للالتهابات مثل عامل نخر الورم (TNF) ألفا ، وإنترلوكين 1β (IL-1β) ، وإنترلوكين 6 (IL-6) ، وبروتين الجذب الكيميائي أحادي الخلية -1 ، قد زادت بشكل كبير في التعبير في الغشاء المخاطي للأمعاء المغص مقابل أنسجة الأمعاءالطبيعية 4. من وجهة نظر جهازية ، فقد ثبت أن زيادة عامل نخر الورم ألفا في أنسجة الأمعاء يرتبط بزيادة خطر الإصابة بالارتجاع الأنفي المعدي بعد الجراحة أكبر من 2 لتر ، وهو قياس عام لخلل الحركة بعد الجراحة4. من المعروف أيضا أن إعطاء الإنترلوكين IL-1β و TNF alpha قادر على إحداث علامات سريرية للصدمة الإنتانية5.
التفسير المحتمل للحالة الالتهابية للأنسجة المعوية المغصية وعلاقتها بمضاعفات ما بعد الجراحة هو الحاجز الظهاري المعوي. في الصحة ، توفر مجمعات الوصلات الضيقة التي تربط الطبقة المفردة من الظهارة العمودية التي تبطن الأمعاء حاجزا وظيفيا للحد من المحتوى اللمعي ومكوناته البكتيرية من الوصول إلى الفضاء تحت المخاطي ومجرى الدم. ومع ذلك ، فإن الانتفاخ والضرر الناجم عن انسداد الأمعاء المرتبط بالمغص والتلاعب المعوي أثناء الجراحة قد يعطل وظيفة الحاجز المعوي هذه.
فيما يتعلق بالمكونات الوظيفية لجدار الأمعاء ككل ، فقد ثبت أن الشبكة الدبقية المعوية تحت المخاطية داخل الجهاز العصبي المعوي حاسمة في التطور الفيزيولوجي المرضي لمضاعفات ما بعد الجراحة المرتبطة بالمسارات الالتهابية وقد توفر هدفا علاجيا محددا6،7،8،9. لا توجد الخلايا الدبقية المعوية في جميع أنحاء الجهاز الهضمي بأكمله فحسب ، بل إنها تعمل كأجهزة استشعار للبيئة المعوية ، وتؤثر على الإشارات مع العديد من أنواع الخلايا في جدار الأمعاء ، وتنظم الحاجز المعوي بشكل مباشر6. لذلك ، من المبرر افتراض أن هذه المستشعرات القوية للأمعاء سيتم تنشيطها عن طريق الإصابة والالتهاب ويمكن أن تنتج استجابة حادة مثل التغيرات في نفاذية الحاجز.
هذه الدراسة هي الأولى التي تصف ثقافة الخلايا الدبقية المعوية للخيول ، وبشكل أكثر تحديدا ، دور الخلايا الدبقية المعوية الالتهابية للخيول على وظيفة الحاجز المعوي. هنا ، نقدم طرق الاستزراع الأولي للخلايا الدبقية المعوية تحت المخاطية للخيول واستجابتها للتعرض ل IL-1β الالتهابي ، وتقييم تأثير المنتجات الدبقية المعوية بعد التعرض ل IL-1β على نفاذية الطبقات الأحادية للخلايا المعوية للخيول ، والحصار المحتمل من خلال تطبيق مصل الخيول.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم الحصول على الثقافات الدبقية المعوية للخيول الأولية من ثلاثة خيول قتلت رحيما إنسانيا بجرعة زائدة من الباربيتورات لأسباب لا علاقة لها بهذه الدراسة. كانت الخيول المختارة لدراسات الاستزراع عبارة عن خيول بالغة ليس لها تاريخ حالي من أمراض الجهاز الهضمي.
1. تحت المخاطية الخيول المزرعة الدبقية المعوية الأولية
- قم بزراعة طبقات أحادية ظهارية للخيول من الخبايا الصائمة التي تم الحصول عليها من ثلاثة خيول خيول بالغة منفصلة.
- قم بتغطية الألواح المكونة من 24 بئرا بمحلول الطلاء لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية أو طوال الليل في درجة حرارة الغرفة ، واغسلها مرتين بالماء المعقم ، وقم بتخزينها في درجة حرارة الغرفة حتى تصبح الخلايا جاهزة للطلاء.
- بعد القتل الرحيم الإنساني ، في غضون 60 دقيقة ، قم بإزالة جزء من الصائم وضعه في محلول رينجر البارد على الجليد.
- قم بإزالة جزء 10 سم من الصائم وافتحه عند الحدود المعوية للحفاظ على المناطق غير اللمفاوية في وسط الأنسجة. قم بقص الجزء إلى قسم 7 سم × 7 سم تقريبا. اشطف المنديل جيدا بمحلول رينجر الطازج قبل التشريح.
- قم بتثبيت الأنسجة على طبق بتري مغطى بالسيليكون المطاط الصناعي في محلول Ringer البارد أو الجانب المخاطي PBS لأعلى ، مع تمديد الأنسجة قدر الإمكان (الشكل 1 أ).
- قم بإزالة الزغابات المعوية باستخدام ملقط منحني (الشكل 1 ب) متبوعة بطبقة الصفيحة المخصوصة من المنطقة غير اللمفاوية التي يبلغ حجمها حوالي 5 سم × 5 سم (الشكل 1 ج).
ملاحظة: تنفصل هذه الطبقات بسهولة عن تحت الغشاء المخاطي (الشكل 1 ب). - قم بإزالة الغشاء المخاطي في ورقة واحدة عن طريق تحريره بمقص التشريح المجهري في إحدى الزوايا ولاحظ الفصل الطبيعي أثناء تقشير تحت الغشاء المخاطي بعيدا عن الطبقة العضلية الدائرية الداخلية للصائم (الشكل 1 د).
- قم بفرم الطبقة تحت المخاطية المجمعة إلى قطع 2-5 مم وضعها في أنبوب مخروطي سعة 50 مل يحتوي على 5 مل من "Organo-FBS" (الجدول 1) ، و 0.825 مجم من الكولاجيناز ، و 5 مجم من البروتياز ، و 20 مجم من ألبومين مصل الأبقار. احتضان الأنسجة لمدة 2-3 ساعات عند 37 درجة مئوية للهضم الأنزيمي.
- بعد الحضانة ، أضف 10 مل من درجة حرارة الغرفة "Organo + FBS" لإيقاف عمل الإنزيم. قم بتقطيع خليط الأنسجة لأعلى ولأسفل بمقدار 15 مرة تقريبا باستخدام ماصة مصلية سعة 10 مل لفصل الخلايا عن الأنسجة ثم جهاز طرد مركزي عند 3,000 × جم لمدة 3 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
- تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات ب 10 مل من PBS بدرجة حرارة الغرفة عن طريق سحب العينة لأعلى ولأسفل مرة أخرى حوالي 15 ضعفا باستخدام ماصة مصلية سعة 10 مل لفصل الخلايا عن الأنسجة.
- جهاز الطرد المركزي للأنبوب المخروطي عند 3,000 × جم لمدة 3 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات بمقدار 10 مل من درجة حرارة الغرفة "Organo + FBS" عن طريق سحب العينة لأعلى ولأسفل 15 مرة تقريبا باستخدام ماصة مصلية سعة 10 مل لفصل الخلايا عن الأنسجة.
- قم بتصفية الخلايا بشكل متسلسل من خلال 100 ميكرومتر ، و 70 ميكرومتر ، ثم مصفاة خلية بحجم المسام 40 ميكرومتر.
- الطرد المركزي للخلايا والوسائط المفلترة عند 3,000 × جم لمدة 3 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في 1 مل من "Organo + FBS".
- صبغة باستخدام التريبان الأزرق لتحديد الخلايا الحية وحسابها باستخدام مقياس الدم.
- قم بزرع ما يقرب من 400,000 خلية في 300 ميكرولتر من "Organo + FBS" في كل بئر من صفيحة 24 بئرا وأضف عوامل النمو إلى كل بئر: N2 5 ميكرولتر / بئر ، G5 5 ميكرولتر / بئر ، و B27 10 ميكرولتر / بئر. ضع اللوحة المكونة من 24 بئرا في حاضنة 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 للسماح للخلايا بالالتصاق. بعد أربع وعشرين ساعة ، قم بتغيير الوسائط إلى "وسائط الدبقية" (الجدول 1) مع عوامل النمو المذكورة أعلاه وقم بالتغيير كل 48 ساعة (الشكل 2).
2. علم الخلايا المناعي الفلوري
- قم بتنمية الخلايا الدبقية المعوية من الثقافة الأولية (P0) (الخطوة 2.1.14) إلى 70-80٪ التقاء ومرورها مرة واحدة (P1).
- قم بإصلاح خلايا الثقافة الأولية (P0) في الآبار باستخدام 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 5 دقائق قبل تطبيق أزيد PBS 0.1٪.
- تحضير محلول التشبع الذي يتكون من أزيد PBS ، ومصل حمار 4٪ ، و 0.5٪ Triton-X. أضف 300 ميكرولتر من محلول التشبع إلى الآبار لنفاذية الخلايا لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة.
- أضف الجسم المضاد الأساسي للعلامة الدبقية ، والبروتين الحمضي الليفي الدبقي (GFAP) ، والجسم المضاد الأساسي لعلامة الخلايا الليفية ، أكتين العضلات الملساء ألفا ، عند 1: 1,000 تخفيفات في محلول التشبع للحضانة الليلية عند 4 درجاتمئوية.
- اغسل 3x باستخدام PBS قبل إضافة جسم مضاد ثانوي للحمير المضاد للأرانب IgG Alexa Fluor 594 والماعز المضاد للفأر IgG Alexa Flour 488 عند تخفيف 1: 500 في محلول التشبع لمدة 2-3 ساعات.
- تلطيخ النوى ب 4 '، 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) عند تخفيف 1: 1,000 في PBS لمدة 5 دقائق.
- بعد ثلاث غسلات باستخدام PBS ، قم بتخزين الخلايا في أزيد PBS بنسبة 0.1٪.
3. تحت المخاطية الخيول الدبقية المعوية الأولية التعرض IL-1β
- عندما تصل الخلايا من الممر الأول (P1) إلى التقاء 70-80٪ ، قم بإجراء تجربة التعرض ل IL-1β. تعريض الآبار إلى 0 نانوغرام و 10 نانوغرام و 25 نانوغرام من IL-1β لمدة 24 ساعة. بعد 24 ساعة ، قم بتخزين الوسائط من كل بئر عند -80 درجة مئوية.
4. ثقافة العضوية للخيول لإنتاج الطبقات الأحادية المعوية
ملاحظة: باتباع بروتوكول Stewart et al. المنشور في عام 2018 ، تم توسيع الخبايا المعوية للخيول والبراعم التي تم تبريدها من أجل دراسات معوية ثنائية الأبعاد10.
- استخدم ما يقرب من 700-1,000 براعم / شظايا من الخفب (40,000-50,000 خلية عند تفكيكها إلى خلايا مفردة) لكل إدراج عبر البئر. قم بتغطية إدخالات الورسويل ب 42 ميكرولتر من 0.05٪ Matrigel قبل إضافة الخلايا المعوية. اسمح بتثبيت Matrigel على الملحق عن طريق الحضانة لمدة ساعة واحدة عند 37 درجةمئوية ، قم بشفط الوسط الإضافي واترك الآبار تجف لمدة 30 دقيقة مكشوفة. أضف 200 ميكرولتر من وسط DMEM-F12 إلى كل إدراج عبر البئر وقم بتخزين اللوحة عند 37 درجة مئوية حتى الاستخدام.
- اغسل فطائر Matrigel التي تحتوي على العضيات باستخدام PBS ثم عرضها إلى 500 ميكرولتر من استعادة الخلايا أثناء وجودها على الثلج. قم بتثبيتها بشكل متكرر لضمان الجمع الكامل للخلايا في أنبوب سعة 15 مل.
- الطرد المركزي للأنبوب عند 300 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية ، وقم بإزالة المادة الطافية ، وتعليق حبيبات الخلية في الحجم المستهدف لوسط الخلايا الجذعية الظهارية المعوية (IESC). احسب الحجم المستهدف بضرب العدد المطلوب من الطبقات الأحادية في 200 ميكرولتر من الوسط. (الجدول 1).
- قم بتغطية حقنة سعة 1 مل مسبقا في وسائط IESC واستنشق معلق الخلية من خلال إبرة 16 جراما. استبدل إبرة 16 G بإبرة 28 G وقم بإخراج معلق الخلية من خلالها لتشجيع فصل العضيات.
- ضع 200 ميكرولتر من تعليق الخلية الناتج في الجانب القمي من الآبار المطلية و 500 ميكرولتر من IESC بالإضافة إلى عوامل النمو الموصوفة سابقا على الجانب القاعدي من إدراج البئر10. قم بتغيير الوسائط وعوامل النمو كل 24-48 ساعة حتى يتم الوصول إلى التقاء. حدد الالتقاء على أنه كثافة الخلية المقابلة ل TEER البالغ 1,000 أوم × سم 2,11. للقياس ، انظر الخطوة 5.1.
5. نفاذية أحادية الطبقة للخلايا المعوية للخيول بعد التعرض للسيتوكينات الالتهابية والمنتجات الدبقية المعوية للخيول
- استخدم غرفة قياس TEER مزدوجة القطب لتحديد TEER عبر الطبقات الأحادية وإنشاء قراءة أساسية عبر كل غشاء قابل للاختراق عبر البئر. تأكد من أن وسائط IESC والبئر لديهم 15 دقيقة للوصول إلى درجة حرارة الغرفة قبل إجراء القياسات. املأ كوب الاستزراع ب 1.5 مل من وسائط IESC وتأكد من وجود 200 ميكرولتر من الوسائط بالضبط داخل ملحق الوصلة بحيث تتطابق خطوط السوائل في وقت القياس.
- تعريض الجانب القاعدي الجانبي لإدخالات transwell إما للسيتوكينات الالتهابية من 25 نانوغرام IL-1β و 10 نانوغرام و 25 نانوغرام إنترلوكين 6 (IL-6) لكل بئر ، أو المنتجات الدبقية للثقافات المعرضة ل 10 نانوغرام أو 25 نانوغرام IL-1β. كشف الجانب القاعدي الجانبي لإدخالات الآبار الصلبة للتحكم في الوسائط الدبقية ، ووسائط الدبقية من الثقافات غير المعرضة ل IL-1β.
- قم بقياس TEER لمدة 45 دقيقة على فترات تتراوح من 10 إلى 15 دقيقة عن طريق وضع كل بئر في كوب الاستزراع.
6. الإحصاء
- احسب تغيير الطي ل TEER لكل بئر للنقاط الزمنية: 0 و 10 و 20 و 30 و 45 دقيقة.
- باستخدام البرنامج المفضل (انظر جدول المواد) ، قارن الارتباطات بين انخفاض TEER والتعرض القاعدي الجانبي ل IL-1β (25 نانوغرام) ، IL-6 (10 نانوغرام ، 25 نانوغرام ، و 100 نانوغرام) ، ووسائط الدبقية (المعرضة ل 0 نانوغرام IL-1β ، 10 نانوغرام IL-1β ، و 25 نانوغرام IL-1β) للتحكم في الوسائط باستخدام اختبار t أحادي الذيل غير المزاوج.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يمكن أن ينتج عن التشريح الدقيق لصائم الخيول إلى الطبقة تحت المخاطية (الشكل 1) مع مزيد من الهضم الأنزيمي والميكانيكي ، مزارع خلايا قابلة للحياة من الخلايا الدبقية المعوية للخيول. أظهرت الخلايا تعدد الأشكال مع هيمنة الخلايا على شكل مغزل بما يتوافق مع الخلايا الدبقية المعوية للأنواع الأخرى (الشكل 2 أ). كانت الثقافات إيجابية للعلامة الدبقية الانتقائية ، البروتين الحمضي الليفي الدبقي (GFAP) ، مع تلوث منخفض بالخلايا الليفية (alpha SMA ، الشكل 2 ب<...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
كان الهدف من هذه الدراسة هو تطوير طريقة قابلة للتكرار للثقافة الأولية للخلايا الدبقية المعوية تحت المخاطية للخيول وإثبات تطبيقها على نمذجة التفاعلات الظهارية الدبقية في وقت المغص. أثبتت عزل الخلايا الدبقية المعوية وثقافتها ، وهي جديدة في الحصان ، أنها مفيدة في فهم مسارات الأمراض المعوية في نماذج الخنازير والقوارض وفي البشر6،7،13،14. من المحتمل أن تكون دراسة هذه...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.
شكر وتقدير
يود المؤلفون أن يشكروا مؤسسة موريس للحيوانات على تمويلهم لهذا المشروع.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1 متر عازلة HEPES | Gibco | 15630-080 | |
| 10 ملي مولار HEPES | Life Technologies | 15630-106 | |
| 2 ملي مولار GlutaMAX | Life Technologies | 25050-061 | |
| 4 ' 6-Diaminidino-2-Phenylindol | Invitrogen | D3571 | |
| Advanced DMEM / F12 | Life Technologies | 12634-010 | |
| Alpha العضلات الملساء الأكتين الجسم المضاد | Abcam | 7817 | |
| Amphotericin B | Sigma | AA9529 | 4.4 جم / مل مخزون المخزون ، التركيز النهائي 1.1 & micro ؛ جم / مل |
| مضاد للميكروكات 1x | Gibco | 15240-096 | |
| B27 | Gibco | 12587010 | |
| مصل الأبقار الألبومين | Sigma | AA3311 | |
| BSA 50 مجم / مل محلول مخزون | Sigma | A3311 | |
| CaCL2 | ACROS Organiics | 206791000 | مكون من Equine Ringer ' s Stock 1: يمزج مع المكونات الأخرى ، ثم يضاف 100 مل من هذا المرق إلى أسطوانة متدرجة ويخفف إلى 1 لتر بالماء منزوع الأيونات. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.4 مع 5٪ CO2. امزجه مع Equine Ringer s Stock 2 لإكمال " رنجر الحل". |
| الكولاجيناز | سيجما | 9891 | |
| DMEM-F12 وسائل الإعلام | ثيرمو | فيشر 11320033 | |
| حمار مضاد للأرانب IgG Alexa Fluor 594 | Invitrogen | 21207 | |
| EVOM EndOhm غرفة قياس TEER مزدوجة القطب | EVM-EL-03-01 | ||
| دليل EVOM لقياس TEER | الدقة العالمية | EVM-MT-03-01 | |
| G5 | Gibco | 17503012 | |
| محلول جنتاميسين | Sigma | G1272 | التركيز النهائي 20 & جم / مل |
| الأجسام المضادة GFAP | Abcam | 4674 | |
| الماعز المضادة للفأر IgG Alexa Fluor 488 | Invitrogen | 28175 | |
| IL-1 & beta ؛ ELISA | Thermo Fisher | ESIL1B | |
| KCl | Thermo Fisher | P330-500 | مكون من Equine Ringer s Stock 1: يمزج مع المكونات الأخرى ، ثم يضاف 100 مل من هذا المرق إلى أسطوانة متدرجة ويخفف إلى 1 لتر بالماء منزوع الأيونات. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.4 مع 5٪ CO2. امزجه مع Equine Ringer s Stock 2 لإكمال " رنجر الحل". |
| محلول L-glutamine | Corning | 25-00-Cl | |
| Matrigel | BD Bioscience | 354277 | |
| MgCl2 | Thermo Fisher | M33-500 | مكون من Equine Ringer s Stock 1: يمزج مع المكونات الأخرى ، ثم يضاف 100 مل من هذا المرق إلى أسطوانة متدرجة ويخفف إلى 1 لتر بالماء منزوع الأيونات. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.4 مع 5٪ CO2. امزجه مع Equine Ringer s Stock 2 لإكمال " رنجر الحل". |
| N2 | Gibco | 17502048 | |
| Na2HPO4 | Thermo Fisher | BP332-1 | مكون من جرس الخيول s Stock 2: يمزج مع المكونات الأخرى ، ثم يضاف 100 مل من هذا المرق إلى أسطوانة متدرجة ويخفف إلى 1 لتر بالماء منزوع الأيونات. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.4 مع 5٪ CO2. امزجه مع Equine Ringer s Stock 1 لإكمال " رنجر الحل". |
| NaCl | Thermo Fisher | S271-10 | مكون من Equine Ringer s Stock 1: يمزج مع المكونات الأخرى ، ثم يضاف 100 مل من هذا المرق إلى أسطوانة متدرجة ويخفف إلى 1 لتر بالماء منزوع الأيونات. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.4 مع 5٪ CO2. امزجه مع Equine Ringer s Stock 2 لإكمال " رنجر الحل". |
| NaH2PO4 | ثيرمو فيشر | BP329-500 | مكون من جرس الخيول s Stock 2: يمزج مع المكونات الأخرى ، ثم يضاف 100 مل من هذا المرق إلى أسطوانة متدرجة ويخفف إلى 1 لتر بالماء منزوع الأيونات. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.4 مع 5٪ CO2. امزجه مع Equine Ringer s Stock 1 لإكمال " رنجر الحل". |
| NaHCO3 | Thermo Fisher | S637-212 | مكون من Equine Ringer s Stock 2: يمزج مع المكونات الأخرى ، ثم يضاف 100 مل من هذا المرق إلى أسطوانة متدرجة ويخفف إلى 1 لتر بالماء منزوع الأيونات. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.4 مع 5٪ CO2. امزجه مع Equine Ringer s Stock 1 لإكمال " رنجر الحل". |
| حل القلم / البكتيريا العقدية | الجوزاء | 400-109 | |
| بولي إل ليسين | سيجما | P2636 | 0.5 مجم / مل في 1x عازلة بورات |
| برنامج منشور | GraphPad | ||
| Protease | Sigma | P4630 | |
| محلول بيكربونات الصوديوم | Sigma | S8761 | محلول مخزون 7.5٪ |
المراجع
- Tinker, M. K., et al. Prospective study of equine colic incidence and mortality. Equine Vet J. 29 (6), 448-453 (1997).
- Morton, A. J., Blikslager, A. T. Surgical and postoperative factors influencing short-term survival of horses following small intestinal resection: 92 cases (1994-2001). Equine Vet J. 34 (5), 450-454 (2002).
- French, N. P., Smith, J., Edwards, G. B., Proudman, C. J. Equine surgical colic: risk factors for postoperative complications. Equine Vet J. 34 (5), 444-449 (2002).
- Lisowski, Z. M., Lefevre, L., Mair, T. S., Clark, E. L., Hudson, N. P. H., Hume, D. A., Pirie, R. S. Use of quantitative real-time PCR to determine the local inflammatory response in the intestinal mucosa and muscularis of horses undergoing small intestinal resection. Equine Vet J. 54 (1), 52-62 (2022).
- Sheats, M. K. A comparative review of equine SIRS, sepsis, and neutrophils. Front Vet Sci. 6, 69(2019).
- Mazzotta, E., Villalobos-Hernandez, E. C., Fiorda-Diaz, J., Harzman, A., Christofi, F. L. Postoperative ileus and postoperative gastrointestinal tract dysfunction: pathogenic mechanisms and novel treatment strategies beyond colorectal enhanced recovery after surgery protocols. Front Pharm. 11, 583422(2020).
- Stoffels, B., et al. Postoperative ileus involves interleukin-1 receptor signaling in enteric glia. Gastroenterology. 146 (1), 176-187 (2014).
- Yu, Y. B., Li, Y. Q. Enteric glial cells and their role in the intestinal epithelial barrier. World J Gastroenterol. 20 (32), 11273-11280 (2014).
- Savidge, T. C., et al. Enteric glia regulate intestinal barrier function and inflammation via release of S-nitrosoglutathione. Gastroenterology. 132 (4), 1344-1358 (2007).
- Stewart, A. S., Freund, J. M., Gonzalez, L. M. Advanced three-dimensional culture of equine intestinal epithelial stem cells. Equine Vet J. 50 (2), 241-248 (2018).
- Hellman, S. Generation of equine enteroids and enteroid-derived 2D monolayers that are responsive to microbial mimics. Vet Res. 52 (1), 108(2021).
- Al-Sadi, R., et al. Interleukin-6 modulation of intestinal epithelial tight junction permeability is mediated by JNK pathway activation of claudin-2 gene. PLoS One. 9 (3), e85345(2014).
- Ochoa-Cortes, F., et al. Enteric glial cells: A new frontier in neurogastroenterology and clinical target for inflammatory bowel diseases. Inflamm Bowel Dis. 22 (2), 433-449 (2016).
- Ziegler, A. L., et al. Enteric glial cell network function is required for epithelial barrier restitution following intestinal ischemic injury in the early postnatal period. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 326 (3), G228-G246 (2024).
- Grubišić, V., Gulbransen, B. D. Enteric glia: the most alimentary of all glia. J Physiol. 595 (2), 557-570 (2017).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
