كان بروتوكول الدراسة متوافقا مع إعلان هلسنكي وتمت الموافقة عليه من قبل لجنة الأخلاقيات بجامعة كيبانغسان ماليزيا (الرقم المرجعي: JEP-2022-001).
1. توظيف المشاركين
- من خلال أخذ العينات المريحة، اختر مجموعة الدراسة من البالغين الذين يعيشون في المجتمع المصابين ب KOA الذين تبلغ أعمارهم 50 عاما فما فوق في كوالالمبور وسيلانجور. تم توظيف مشاركين من منظمات كبار السن وعيادات السكري وجراحة العظام.
ملاحظة: يتم تعريف وجود KOA من خلال KOA الذي تم تشخيصه ذاتيا من قبل الطبيب أو تلك التي تفي بمعايير الفحص السريري للكلية الأمريكية لأمراض الروماتيزم (ACR) 16.
- استبعاد كبار السن المودعين في المؤسسات أو الذين يعانون من إعاقة نفسية خطيرة ومرض السكري من النوع 1.
- من خلال الرجوع إلى الأدبيات المنشورة حول الأفواج المقطعية من إعدادات مماثلة ، حدد حجم التأثير ، وهو في هذه الدراسة النسبة الفردية. احسب حجم العينة ، والذي سيوفر قوة 80٪ لرفض الفرضية الصفرية ، باستخدام G * Power 3.117.
- شرح أهداف البحث والحصول على موافقة مستنيرة قبل جمع البيانات.
2. جمع البيانات - الاستبيان
- إدارة الاستبيانات ، والتي تشمل الاستبيانات الاجتماعية الديموغرافية ، KOOS18 ، واستبيان النشاط البدني الدولي (IPAQ) 19.
- احسب إجمالي الدرجات لكل مجال من مجالات KOOS الخمسة المشتقة من 42 عنصرا وقم بتحويل الدرجات إلى مقياس من 0 إلى 100 بالمائة ، مع عدم وجود مشاكل و 100 يشير إلى مشاكل شديدة لكل مجال.
- احسب المكافئ الأيضي للمهمة (MET) لمجالات IPAQ بضرب الوقت المستغرق بالدقائق وعدد الأيام في الأسبوع ، مع مراعاة معيار كل مجال.
ملاحظة: إجمالي مؤشر MET لمستويات النشاط البدني هو 3.3 (نشاط المشي MET) ، + 4 (نشاط MET متوسط الشدة) ، + 8 (MET شديد الشدة).
3. جمع البيانات - الأداء البدني
- قم بقياس الارتفاع باستخدام مقياس الثبات. الحصول على مؤشر وزن الجسم وكتلة الجسم (BMI) باستخدام محلل تكوين الجسم. تأكد من أن المشاركين يخلعون الملابس الثقيلة والإكسسوارات المعدنية والأحذية.
- قم بقياس محيط الخصر والورك والساق باستخدام شريط قياس. سجل القياس بالسنتيمتر على مستوى السرة عند الراحة لمحيط الخصر والقياس على مستوى الحد الأقصى للنتوء الخلفي للأرداف لمحيطالورك 20. قم بقياس محيط ربلة الساق عند أكبر بعد للمحور الطويل مع جلوس المشاركين وظهورهم مستقيمة وكلا القدمين على الأرض21.
- قدم تعليمات للمشاركين حول كيفية إجراء اختبارات الأداء البدني: اختبار قوة قبضة اليد (HGS) 22 ، اختبار التوقيت والذهاب (TUG) 23 ، اختبار المشي لمسافة ستة أمتار24 ، وخمس مرات اختبار الجلوس للوقوف (5STST) 25.
- تأكد من خلو إعداد الأداء من العوائق والمخاطر. اترك 1 دقيقة فترات راحة قياسية بين الاختبارات26.
- قم بإجراء اختبار قوة قبضة اليد.
- اطلب من المشارك الجلوس مع تثبيت الكتفين في الوضع المحايد ، مع ثني الكوع عند 90 درجة.
- أبلغهم بعدم أداء أي حركة ارتعاش أو رجيج سريعة طوال الاختبار.
- قم بقياس القوة القصوى باستخدام مقياس ديناميكية مقبض اليد لكل يد ثلاث مرات وحدد أكبر قياس بالكيلوغرام.
- قم بإجراء اختبار الصعود والذهاب.
- اطلب من المشارك الجلوس بشكل مستقيم مع ملامسة ظهره لظهر الكرسي ، ووضع الذراعين على مساند الذراعين ، ووضع القدمين بشكل مسطح على الأرض.
- باستخدام ساعة توقيت ، سجل الوقت المستغرق للوقوف ، والمشي 3 أمتار ، والانعطاف للخلف ، والعودة إلى الكرسي ، والجلوس مرة أخرى. ابدأ التوقيت عندما يفقد ظهر المشارك الاتصال بظهر الكرسي وتوقف عن التوقيت بمجرد أن يلمس ظهر المشارك ظهر الكرسي.
- كرر مرتين وسجل أقل وقت بالثواني التي تم أخذها كنتيجة نهائية.
- تقييم سرعة المشي.
- قم بقياس ممر بطول 10 أمتار وضع علامات بشريط لاصق على بعد 2 متر من كل طرف من طرفي الممشى للإشارة إلى النقاط التي ستبدأ عندها القياسات وتنتهي.
- اطلب من المشاركين المشي بالسرعة المعتادة على طول ممر بطول 10 أمتار.
- ابدأ المؤقت بمجرد أن يعبر المشارك أول 2 متر وأوقف المؤقت عند خط 8 أمتار.
- احسب سرعة المشي باستخدام صيغة السرعة (م / ث) ، حيث يتم قسمة 6 أمتار على الوقت المستغرق بالثواني.
- قم بإجراء اختبار الجلوس إلى الوقوف خمس مرات.
- اطلب من المشاركين الوقوف والجلوس 5 مرات أسرع قدر الإمكان مع التوازن.
- سجل الوقت المستغرق لإكمال 5 تكرارات وحدد أقل وقت بالثواني من التجارب الثلاث.
4. جمع البيانات - الأشعة السينية للركبة
- حدد موعدا ووقتا للمشاركين لزيارة المستشفى لإجراء فحص شعاعي لكلتا الركبتين باستخدام عرض حامل الوزن الأمامي الخلفي الدائم.
- أرسل الصور الشعاعية إلى أخصائي الأشعة ، الذي سيحدد ويعين درجات Kellgren و Lawrence لكل ركبة27.
ملاحظة: يحتوي نظام التصنيف على درجات من 0 إلى 4 ، مع درجات أعلى تشير إلى زيادة شدة KOA بناء على الميزات: تكوين العظم ، وعظيمات حول المفصل ، والشكل المتغير لنهايات العظام ، وتضييق مساحة المفصل ، والتصلب تحت الغضروف.
- سجل الدرجة المخصصة ، مع التأكد من تعيين النتيجة للركبة الصحيحة.
5. جمع البيانات - جمع الدم الشعري لتقييم حالة نسبة السكر في الدم
- اغسل يديك وارتد قفازات جراحية. نظف إصبع المشارك بقطعة كحول واترك الإصبع يجف في الهواء.
- قم بإعداد جهاز قياس السكر عن طريق إدخال شريط الاختبار.
- حدد جهاز إبرة الوخز وتأكد من أنه غير مستخدم ومحكم الإغلاق.
- اكسر ختم إبرة الوخز وخز الإصبع بجهاز إبرة الوخز الجديد ، واضغط على الإصبع لإنتاج فقاعة صغيرة من الدم ، ولمس قطرة الدم بشريط الاختبار.
- استخدم حلول التحكم لضمان الجودة ، وقم بإسقاط المحلول على شريط الاختبار ، وتحقق مما إذا كان في النطاق المتوقع وفقا للشركة المصنعة.
- سجل مستوى الجلوكوز في الدم الذي يعرضه جهاز قياس السكر. اسأل المشارك عن آخر وجبة له وسجل ما إذا كان قد تم تناوله قبل أكثر من 8 ساعات من وقت أخذ العينة.
ملاحظة: يتطلب سكر الدم الصائم من المشاركين الصيام لمدة 8 ساعات على الأقل قبل هذا الإجراء ، بينما لا يتطلب سكر الدم العشوائي ذلك.
- تخلص من إبرة الوخز بأمان في سلة الأدوات الحادة وزود المشارك بقطعة قطن للضغط على منطقة البزل على الإصبع لضمان الإرقاء.
- اغسل يديك بعد العملية. نظف أي انسكاب دم.
6. جمع البيانات - جمع الدم الوريدي لتقييم التحكم في نسبة السكر في الدم
- اغسل يديك وارتد قفازات جراحية.
- تحديد الوريد المناسب من الحفرة الأمامية اليمنى أو اليسرى. ضع عاصبة على الجزء العلوي من الذراع المحدد وحدد الوريد المناسب عن طريق الجس.
- نظف الجلد حول الوريد المحدد بقطعة كحول واتركه يجف في الهواء.
- اجمع عينات الدم الوريدية بإبرة فراشة 23 جم باستخدام زجاجتين من أنابيب دم عادي سعة 6 مل. قم بتسمية الأنابيب برمز التعريف الفريد للمشارك.
- تخلص من الأدوات الحادة والنفايات السريرية بأمان واغسل اليدين.
- انقل عينات الدم إلى المختبر في مبرد به كيس ثلج. ضع عينات الدم في أنابيب التجميع الخاصة بهم في جهاز طرد مركزي وجهاز طرد مركزي عند 604 × جم لمدة 10 دقائق.
- قم بتقسيم المصل إلى أنابيب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل باستخدام ماصة دقيقة ، وقم بتسمية الأنابيب بالتاريخ ورمز التعريف ونوع العينة قبل تخزينها عند -80 درجة مئوية.
7. اختبار ELISA
- احسب حجم المصل المطلوب لاختبار ELISA بناء على دليل الشركة المصنعة. قم بإجراء اختبار تحسين لتحديد التركيز الأمثل ؛ كرر مع IL-1β و IL-4 و CRP و NF-κB و AGEs على التوالي.
- قم بإذابة المصل وإحضار كواشف ELISA إلى درجة حرارة الغرفة (RT). وفي الوقت نفسه ، قم بتسمية أنابيب الطرد المركزي الدقيقة للمعايير والعينات والفارغة.
- قم بإعداد حلول العمل وفقا لتعليمات الشركة المصنعة للأجسام المضادة المخففة والكشف والركيزة والمخزن المؤقت للغسيل من محاليل المخزون إذا لزم الأمر.
- قم بتشغيل التخفيفات التسلسلية ذات الطي للمعايير مع المخفف القياسي المحدد. المعيار المرجعي لكل علامة: IL-1β = 500 بيكوغرام / مل ، IL-4 = 2000 بيكوغرام / مل ، CRP = 25 نانوغرام / مل ، NF-κB = 10 نانوغرام / مل ، الأعمار = 4800 نانوغرام / لتر. يعمل المخفف القياسي أيضا كفارغ.
- تمييع عينة المصل لتحسين الفحص إذا لزم الأمر.
- بالنسبة لمقايسة IL-1β و IL-4 و NF-κB ELISA ، استخدم عينات مصل أنيقة. بالنسبة إلى CRP ، قم بتخفيفه بمقدار 1000x مع مخفف مرجعي. ماصة 100 ميكرولتر عينات في البئر وتكرار كل منها.
- بالنسبة لمقايسة AGEs ELISA ، استخدم عينة مصل من تخفيف 2x ، وماصة 40 ميكرولتر من العينة في البئر ، وقم بتكرار كل منها.
- قم بتغيير أطراف الماصة بين العينات أو الكواشف المختلفة. استخدم ماصة متعددة القنوات لتجنب تأثيرات الحواف.
- احتضن وفقا للوقت ودرجة الحرارة المقترحين من دليل الشركة المصنعة ، وأغلق اللوحة بغطاء لاصق جديد لكل حضانة.
- بالنسبة لهذه الشطيرة ELISA ، احتضان العينة والمعيار للآبار المطلية مسبقا ، متبوعا بالجسم المضاد للكشف ، والجسم المضاد الثانوي المترافق ، والركيزة ، وأخيرا توقف الحل. أضف كل حل بنفس الترتيب كما كان سابقا.
- صب الآبار وغسلها باستخدام مخزن الغسيل بين الحضانة وفقا لدليل الشركة المصنعة. اضغط على الآبار على ورق ماص نظيف لإزالة مخزن الغسيل ، ولكن تأكد من عدم جفاف الآبار قبل إضافة المحلول التالي.
- اقرأ الآبار باستخدام قارئ صفيحة دقيقة عند 450 نانومتر. سجل واحسب باستخدام منحنى لوجستي رباعي المعلمات (4PL) ، وهي طريقة كمية لرسم وتحديد التركيز من أجهزة المعايرة السيني المتماثلة28. استخدم المتوسط لكل عينة للتحليل.
8. التحليل الإحصائي
ملاحظة: تحليل البيانات باستخدام برنامج تحليل البيانات المناسب (تم استخدام SPSS الإصدار 20 هنا). صنف مجموعة الدراسة إلى مجموعتين: 1) التحكم الجيد في نسبة السكر في الدم ، 2) ضعف التحكم في نسبة السكر في الدم (ضعف نسبة السكر في الدم = سكر الدم الصائم أكثر من 7.0 مليمول / لتر أو سكر الدم العشوائي أعلى من 11.1 مليمول / لتر ؛ ضعف التحكم في نسبة السكر في الدم = HbA1c أعلى من 6.3٪).
- افتح البرنامج لإنشاء متغيرات بناء على التاريخ ورمز تعريف المشاركين والمتغيرات الاجتماعية الديموغرافية وعناصر الاستبيان والمعلمات المقاسة.
- حدد طريقة عرض متغيرة. أدخل في العمود الاسم أو أدخل الوصف أو اسم العرض في العمود التسمية.
- حدد Type > Measure. بالنسبة للمتغيرات الفئوية المشفرة، قم بمطابقة التعليمات البرمجية الرقمية التمثيلية وقيمتها في العمود القيم. حدد موافق.
- أدخل البيانات التي تم جمعها في البرنامج حيث يمثل كل صف مشاركا واحدا.
- حدد عرض البيانات. أدخل الرموز الرقمية التمثيلية في العمود للنوع الرقمي والأسماء أو الأوصاف لنوع السلسلة.
- تحقق من طبيعية المتغيرات المستمرة لتحديد افتراضات الاختبار البارامتري.
- حدد تحليل > الإحصائيات الوصفية > استكشاف. إدراج متغيرات مستمرة في القائمة التابعة للحقل.
- حدد مخططات Plots > Normality مع الاختبارات > متابعة > موافق. للحصول على حجم عينة أكبر من 50 ، راجع القيمة p في اختبار Kolmogorov-Smirnov ؛ ترفض قيمة p المهمة الفرضية الصفرية حيث يتم توزيع البيانات بشكل طبيعي.
- قم بتشغيل اختبار Mann-Whitney U للمتغيرات غير المعلمية لاختبار الاختلافات الدلالية بين المجموعات.
- حدد تحليل > الاختبارات غير المعلمية > الإعدادات > اختر الاختبارات > تخصيص الاختبارات > Mann-Whitney U (عينتان).
- انتقل إلى الحقول وأدخل المتغيرات المستمرة في حقل حقول الاختبار.
- إدراج مجموعة فئوية ل CBG أو HbA1c في الحقل مجموعات > تشغيل.
- قم بإجراء اختبار مربع كاي للمتغيرات الفئوية لاختبار الاختلافات المعنوية بين المجموعات.
- حدد تحليل > الإحصائيات الوصفية > علامات التجزئة المتقاطعة > الإحصائيات > مربع Chi > متابعة.
- حدد عرض الخلايا. حدد تمت ملاحظته في الحقل الأعداد وحدد عمود في الحقل النسبة المئوية. ثم حدد متابعة.
- قم بإدراج متغيرات فئوية في الحقل (الصفوف) والمجموعة الفئوية ل CBG أو HbA1c في الحقل أعمدة (أعمدة) > موافق.
- تحويل المتغيرات التابعة المستمرة إلى مجموعات ثنائية للتحضير للانحدار اللوجستي.
- حدد تحويل > إعادة ترميز إلى متغيرات مختلفة وأدخل متغيرات مستمرة في الحقل متغيرات الإدخال > متغيرات الإخراج.
- أدخل اسم متغير جديد في الحقل اسم. قم بإدراج تسمية جديدة في الحقل تسمية > تغيير > القيم القديمة والجديدة.
- أدخل أسفل قيمة الحد الأدنى لنقطة القطع في الحقل النطاق، الأدنى من خلال القيمة، وإقرانها بصفر في قيمة الحقل للقيمة الجديدة إذا كان هذا يشير إلى نتيجة جيدة.
- حدد إضافة > إدراج نقطة القطع في الحقل النطاق، القيمة على الرغم من HIGH وإقرانها بنقطة واحدة في الحقل قيمة القيمة الجديدة > إضافة > متابعة > موافق.
- نقاط القطع للمتغيرات التابعة:
- مجال الألم KOOS < 86.1٪ ، مجال الأعراض < 85.7٪ ، مجال نشاط الحياة اليومية <86.8٪ ، مجالات الرياضة < 85.0٪ ، مجال جودة الحياة < 87.5٪
- HGS الفقراء: < الذكور 28 كجم ، الإناث < 18 كجم
- البلطجة الفقيرة > 8.00 ثانية
- سرعة المشي الضعيفة < 1.13 مللي ثانية -1
- 5TSTS ضعيف >12.80 ثانية
- انخفاض النشاط البدني ، IPAQ MET < 3000
- مقياس درجات التصوير الشعاعي المعتدل إلى الشديد KOA و Kellgren و Lawrence > 2
- ارتفاع IL-1β > 11.9 بيكوغرام / مل
- IL-4 عالي > 5 بيكوغرام / مل
- CRP عالي > 8 نانوغرام / مل
- العمر العالي > 900 نانوغرام / لتر
- NF-κB عالي > 3 نانوغرام / مل
- قم بتشغيل انحدار لوجستي متعدد للحصول على نسب الاحتمالات. اضبط النموذج اللوجستي بعوامل مربكة بناء على خصائص المشاركين المهمة.
- حدد تحليل > الانحدار > اللوجستيات الثنائية. أدخل متغير تابع ثنائي في الحقل تابع.
- أدخل متغير CBG أو HbA1c في حقل المتغيرات المشتركة.
- حدد الفئوية وانقل المتغيرات الفئوية إلى الحقل المتغيرات المشتركة الفئوية. ثم حدد الفئة المرجعية كأول > التغيير > متابعة.
- حدد خيارات > CI ل exp(B): 95٪ > متابعة > موافق.
- كرر الإجراء للنماذج المعدلة ولكن أضف عوامل مربكة كبيرة في المتغيرات المشتركة في المجال.
- اعرض المتغيرات كمتوسط (انحراف معياري) للمتغيرات المستمرة أو الوسيط (النطاق الربيعي) إذا كنت تستخدم اختبارا غير معلمي، ورقم (نسبة مئوية) للمتغيرات الفئوية. أبلغ عن نسب الفردية (OR) مع فترات ثقة 95٪ (CI) وقم بتصنيف القيمة الفردية أقل من 0.05 على أنها ذات دلالة إحصائية.