مقالة منهجية

الكشف عن الأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA5 باستخدام خلايا HeLa والكيمياء الخلوية المناعية باستخدام المجهر الضوئي

DOI:

10.3791/67575

⸱

أكتوبر 31, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Graduate Institute of Biomedical Sciences, China Medical University, 2College of Medicine, China Medical University, 3Rheumatology and Immunology Center, China Medical University Hospital, 4Rheumatic Diseases Research Center, China Medical University Hospital, 5Drug Development Center, China Medical University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن نقدم منهجية الكيمياء الخلوية المناعية (ICC) خطوة بخطوة للكشف عن مضادات MDA5. يتضمن هذا النهج تثبيت الخلايا ، والنفاذية ، وحضانة الأجسام المضادة ، وتقنيات التصوير ، والتي تسمح بالكشف الدقيق عن الأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA5 ، مما يساعد في تشخيص مرض الرئة الخلالي سريع التقدم لدى مرضى التهاب العضلات.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA5 هي مؤشرات حيوية حاسمة لالتهاب الجلد والعضل (DM) والتهاب الجلد والعضل العاطفي (CADM) والتهاب العضلات (PM) ، لا سيما في تحديد المرضى المعرضين لخطر الإصابة بمرض الرئة الخلالي سريع التطور (RP-ILD). يعد الاكتشاف المبكر لهذه الأجسام المضادة الذاتية أمرا ضروريا لتحسين نتائج المرضى ، حيث يؤدي التشخيص المتأخر غالبا إلى ضعف التكهنات. حاليا ، المقايسة المناعية الإشعاعية هي المعيار الذهبي للكشف عن مضادات MDA5 ، لكن استخدامها محدود بالتكاليف المرتفعة والإجراءات المطولة والحاجة إلى خبرة متخصصة. بالإضافة إلى ذلك ، يظهر اختبار اللطخة ، وهو أداة سريرية مستخدمة على نطاق واسع ، معدلا إيجابيا كاذبا مرتفعا للأجسام المضادة الذاتية MDA5 ، مما قد يضر بدقة التشخيص. لمعالجة هذه القيود ، نقترح طريقة اختبار تأكيدية غير مشعة وحساسة للغاية وموحدة باستخدام الكيمياء الخلوية المناعية (ICC). يتضمن هذا البروتوكول معالجة خلايا HeLa ببنية MDA5 ، واختراق الخلايا باستخدام Triton X-100 لتسهيل ربط الأجسام المضادة الذاتية الأولية المضادة ل MDA5 ، والكشف عن الأجسام المضادة المرتبطة باستخدام الأجسام المضادة الثانوية المقترنة بالإنزيم (على سبيل المثال ، بيروكسيداز الفجل) مع كروموجين DAB للتصوير المجهري. تقدم ICC نهجا عمليا وفعالا من حيث التكلفة وعالي الحساسية لتصور الأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA5 داخل الهياكل الخلوية. من خلال دمج ICC كإجراء تأكيدي تكميلي ، تهدف هذه الدراسة إلى تعزيز موثوقية الكشف عن مضادات MDA5 ، وبالتالي تحسين الاستراتيجيات التشخيصية والتنبؤية ل RP-ILD في مرضى DM و CADM و PM.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

اعتلال عضلي التهابي مجهول السبب (IIM) ، يشار إليه عادة باسم التهاب العضلات ، هو مجموعة غير متجانسة من اضطرابات المناعة الذاتية التي تتميز بالتهاب العضلات المزمن والمظاهر السريرية المتغيرة والنتائج العلاجية المتنوعة. تشمل الأعراض الشائعة ضعف العضلات وانخفاض القدرة على التحمل والألم العضلي1. تشمل الأنواع الفرعية الأساسية ل IIM التهاب العضلات (PM) والتهاب الجلد والعضل (DM) ، بينما يتميز التهاب الجلد والعضل العاطفي سريريا (CADM) بطفح جلدي مميز مشابه لتلك التي تظهر في DM ولكن مع الحد الأدنى من الإصابة بالعضلات أو بدونها. من المضاعفات الرئيسية في PM، و DM، و CADM مرض الرئة الخلالي (ILD)، الذي يصيب ما يقرب من 40٪ من المرضى ويرتبط بزيادة الوفيات2.

يختلف المسار السريري وتشخيص ILD في IIM اختلافا كبيرا. يميل ILD المرتبط ب DM و CADM (DM- / CADM-ILD) إلى أن يكون أكثر مقاومة للعلاج ويحمل تشخيصا أسوأ مقارنة ب ILD المرتبط ب PM. من بين هذه المرض، مرض ILD الحاد أو تحت الحاد، الذي يتطور بسرعة في غضون ثلاثة أشهر3، شديد بشكل خاص، حيث يبلغ معدل البقاء على قيد الحياة لمدة خمس سنوات 52٪ فقط، مقارنة ب 87٪ لمرض ILD المزمن الذي يتطور ببطء أو يظل مستقرا. يتميز ILD سريع التدريجي (RP-ILD) ، وهو نوع فرعي من ILD الحاد / تحت الحاد ، ببداية سريعة لضيق التنفس وتلف السنخية الواسع النطاق المرئي في تصوير الصدر. RP-ILD هي حالة تهدد الحياة مع تشخيص ضعيف ، مما يؤكد الحاجة الملحة للتشخيص المبكر والتدخل الفوري لتحسين نتائج المرضى4،5،6.

ظهرت الأجسام المضادة الذاتية الخاصة بالتهاب العضلات (MSAs) كمؤشرات حيوية حاسمة في ILD المرتبط بالتهاب العضلات ، حيث تلعب الأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA5 دورا مهما بشكل خاص. يتم اكتشاف هذه الأجسام المضادة الذاتية بشكل متكرر في المرضى الذين يعانون من PM- / DM- / CADM-ILD وتعمل كمؤشرات تنبؤية مهمة ل RP-ILD7،8،9. MDA5 (الجين 5 المرتبط بتمايز الورم الميلانيني) هو مستقبل للتعرف على نمط العصارة الخلوية مشفر بواسطة جين محفز للإنترفيرون يكتشف الحمض النووي الريبي الفيروسي والميتوكوندريا مزدوج الشريطة ، مما يبدأ الاستجابات المناعية بوساطة الإنترفيرون10. على الرغم من أن الآليات المسببة للأمراض الدقيقة لا تزال غير واضحة ، يعتقد أن الأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA5 تعطل وظيفة MDA5 ، مما يساهم في التسبب في أمراض المناعة الذاتية.

يعد الكشف في الوقت المناسب عن الأجسام المضادة المضادة ل MDA5 أمرا ضروريا للتحديد المبكر وإدارة RP-ILD. تقليديا ، يعتبر الترسيب المناعي (IP) الذي يحمل علامة إشعاعية باستخدام 35مستخلصا من خلايا K562 المسمى S-methionine المعيار الذهبي للكشف عن الأجسام المضادة المضادة ل MDA511. ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة غير عملية للاستخدام السريري الروتيني نظرا لتكلفتها العالية ، والاعتماد على المعدات المتخصصة والموظفين المدربين ، واللوائح الصارمة للتخلص من النفايات المشعة ، والعمر الافتراضي المحدود للكواشف المشعة. في الممارسة السريرية ، تستخدم فحوصات اللطخة بشكل شائع كبدائل. ومع ذلك ، فهي مرتبطة بمعدل إيجابي كاذب مرتفع للأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA512،13 ، مما يثير مخاوف بشأن دقة التشخيص. وبالتالي ، هناك حاجة ملحة لمقايسة تأكيدية موثوقة وغير مشعة للتحقق من صحة النتائج الإيجابية وتحسين الثقة في التشخيص.

لمعالجة هذه الفجوة ، نقترح استخدام الكيمياء المناعية (ICC) كاختبار تأكيدي تكميلي للأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA5. يتضمن هذا النهج نقل خلايا HeLa ببنية MDA5 ، واحتضان الخلايا ببلازما المريض ، والكشف عن الأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA5 المرتبطة باستخدام الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالإنزيم (على سبيل المثال ، بيروكسيداز الفجل) جنبا إلى جنب مع ركيزة كروموجينية للتصور تحت الفحص المجهري الضوئي. يوفر ICC منصة غير مشعة وحساسة للغاية وموحدة لتصور الأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA5 داخل المقصورات الخلوية. من خلال دمج ICC مع مقايسة اللطخة ، تهدف هذه الطريقة إلى تقليل معدلات الإيجابية الكاذبة ، وتحسين دقة التشخيص ، وفي النهاية تعزيز الإدارة السريرية والنتائج للمرضى.

الهدف من هذه الدراسة هو إنشاء بروتوكول قوي غير مشع للكشف عن الأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA5 ، ومعالجة قيود طرق الكشف الحالية وتزويد الأطباء بأداة عملية وموثوقة للتشخيص المبكر ل RP-ILD في المرضى الذين يعانون من PM, DM, و CADM. في سرد الفيديو المصاحب ، توصف هذه الدورة التي تهدد الحياة بالعامية بأنها "موت سريع". علميا ، يتوافق مع ILD سريع التطور (RP-ILD). يعتمد هذا العمل على الأدلة الموجودة ولديه القدرة على تحسين التقييم التنبؤي واتخاذ القرارات العلاجية بشكل كبير في الممارسة السريرية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. زراعة الخلايا والتعدي

  1. حافظ على خلايا HeLa باستخدام وسط النسر المعدل من Dulbecco الذي يحتوي على 10٪ مصل أبقار جنيني (FBS) و 1٪ مضاد حيوي مضاد للفطريات عند 37 درجة مئوية في جو مرطب بنسبة 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 .
  2. مرر الخلايا كل 2-3 أيام أو عندما تصل الخلايا إلى 90٪ -100٪ التقاء
  3. البذور 7 × 104 خلايا HeLa في كل بئر من صفيحة مكونة من 24 بئرا (1.9 سم2 / بئر) قبل 24 ساعة من التعداء للسماح للخلايا بالوصول إلى ما يقرب من 90٪ من التقاء الهاتف.
  4. تمييع 500 نانوغرام من البلازميد (pENTER-MDA5) و 1.5 ميكرولتر من كاشف تعداء كل في 25 ميكرولتر من وسط المصل المخفض.
  5. أضف الحمض النووي المخفف إلى كاشف تعداء مخفف (نسبة 1: 1). تخلط جيدا وتحتضن لمدة 5 دقائق.
  6. أضف الخليط إلى الخلايا المزروعة قبل يوم واحد وقم بتحريك لخلط مركب الحمض النووي والدهون على الفور. تأكد من أن الخلايا متقاربة بنسبة 80٪ -90٪.
  7. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئويةفي غلاف جوي مرطب بنسبة 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة وتابع إجراء ICC.
    ملاحظة: استخدمنا ناقلا متاحا تجاريا (pEnter-MDA5) ؛ يمكن العثور على مزيد من المعلومات في جدول المواد. فعالية تعداء ~ 50٪.
    يمكن تحديد نجاح تعداء البروتين المستهدف والتعبير عنه عن طريق نقل الخلايا باستخدام بلازميد يعبر عن البروتين الفلوري وإجراء وصمة عار غربية لتصور التعبير عن البروتين المستهدف.

2. تثبيت الخلية

  1. بعد الحضانة ، اغسل الخلايا 2x باستخدام PBS لإزالة أي وسائط متبقية.
    ملاحظة: يمكن إجراء الغسيل عن طريق هز اللوحة على شاكر مداري.
  2. ثبت الخلايا في 4٪ بارافورمالديهايد في برنامج تلفزيوني. اترك الخلايا لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
    تنبيه: بارافورمالديهايد سام. استخدم إرشادات المناولة المناسبة.
  3. استنشق الكاشف المثبت واستخدم PBS لغسل الخلايا 2x.

3. نفاذية الخلية

  1. أضف كاشف Triton X-100 (0.3٪ في PBS) واترك الخلايا لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  2. بعد 10 دقائق ، تخلص من المنظف.
  3. أضف PBS لغسل الخلايا مرة واحدة.

4. حجب الخلايا

  1. قم بإجراء الحجب باستخدام مصل أبقار الجنين بنسبة 10٪ في PBS (1x) واحتضان الخلايا لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
  2. قم بإزالة الكاشف الحاجب ، ثم أضف PBS لغسل الخلايا مرة واحدة.

5. تهجين الجسم المضاد للمريض

  1. أضف بلازما المريض المخففة إلى الخلايا. تأكد من تخفيف عينة المريض (1: 5,000 تخفيف في PBS) في PBS قبل الاستخدام.
    ملاحظة: اضبط التخفيف لتحسين الإشارة أو تقليل الخلفية حسب الحاجة. لضمان نتائج غير متحيزة ، لم يكن لدى الموظفين الذين أجروا الاختبارات أي معرفة بالعينات التي تخص المرضى وأيها من أفراد أصحاء.
  2. احتضان العينة عند 4 درجات مئوية لمدة 12-16 ساعة (بين عشية وضحاها).
  3. بعد فترة الحضانة ، قم بإزالة عينة المريض وغسل الخلايا 3x باستخدام PBS.

6. تهجين الأجسام المضادة الثانوية

  1. عالج الخلايا باستخدام IgG المضاد للإنسان المترافق بالفجل المخفف ب IgG المضاد للإنسان (تخفيف 1: 250 في برنامج تلفزيوني) ، واترك الخلايا لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
  2. بعد ساعة ، تخلص من الأجسام المضادة الثانوية.
  3. اشطفيه باستخدام PBS 3x.

7. تلطيخ الخلية

  1. بعد غسل الخلايا ، قم بتلطيخ الخلايا ب 300 ميكرولتر من محلول العمل DAB / البئر.
    ملاحظة: تم تحضير هذا المحلول عن طريق خلط مركز الكروموجين DAB ومخفف DAB وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  2. بعد تلطيخ الخلايا لمدة 5 دقائق ، قم بإزالة الصبغة ، واشطفها بالماء المقطر منزوع الأيونات ، ورجها لمدة 5 دقائق.

8. تلطيخ الخلية

  1. قم بتلطيخ نواة الخلية بالهيماتوكسيلين المخفف.
    ملاحظة: نستخدم Hematoxylin Gill II في تخفيف 10 أضعاف وننتظر لمدة 5 دقائق لعملية التلوين.
  2. بعد 5 دقائق ، تخلص من الهيماتوكسيلين ، ثم اغسله بالماء المقطر منزوع الأيونات لمدة 2 × 5 دقائق.

9. الملاحظة

  1. راقب نتائج التلوين باستخدام المجهر الضوئي.
    ملاحظة: يظهر الإيجابي الحقيقي تلطيخا بنيا قويا داخل خلايا HeLa تعبر عن MDA5 ؛ هذا يؤكد الأجسام المضادة المضادة ل MDA5 في عينة المريض. تظهر النتيجة السلبية خلايا HeLa بدون تلطيخ بني ، مما يشير إلى عدم وجود أجسام مضادة ذاتية مضادة ل MDA5. تظهر النتيجة الإيجابية الكاذبة تلطيخا بنيا واسعا في جميع الخلايا بغض النظر عن تعبير MDA5. يجب تمييز هذا التلوين غير المحدد ، الذي يظهر في حالات المناعة الذاتية الأخرى ، عن الإيجابية الحقيقية لتجنب التشخيص الخاطئ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تعمية الموظفين الذين أجروا الاختبارات عن هويات العينات ، بما في ذلك المرضى المحددين الذين تم الحصول عليها منهم ، لتقليل التحيز المحتمل في عملية التقييم. ومع ذلك ، في حين أن عينات التحكم الصحية لم تتعرض للعمى ، إلا أنها أسفرت باستمرار عن نتائج واضحة لا لبس فيها.

يوضح الشكل 1 أ التعبير الناجح عن MDA5 في خلايا HeLa المنقولة باستخدام بنية pENTER-MDA5. للتحقق من كفاءة تعداء التعدي ، تم إجراء ICC باستخ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

توفر تقنيتنا القائمة على ICC لتحديد الأجسام المضادة الذاتية المضادة ل MDA5 مزايا كبيرة مقارنة بالطرق التقليدية مثل تحليل لطخة الخط والمقايسة المناعية الإشعاعية. سابقا ، أبلغ Nombel et al. عن قيم حساسية وخصوصية بنسبة 96٪ و 100٪ ، على التوالي ، من خلال مقارنة التألق المناعي غير المباشر (IIF) على الخلايا المنقولة ب MDA5 مع ELISA في مجموعة من 23 مريضا بالتهاب الجلد والعضل الإيجابي ل MDA5 و 22 ضابطا سلبيا مضادا ل MDA514. ومع ذلك ، فإن ELISA هذا غير متاح تجاريا وهو مخصص...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين مصالح متنافسة للإعلان.

تم إنشاء أجزاء من هذه المخطوطة بمساعدة GPT-4 من OpenAI. قام المؤلفون بمراجعة المحتوى وتحريره لضمان الدقة والأصالة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل بمنح من المجلس الوطني للعلوم والتكنولوجيا في تايوان منحت ل Jye-Lin Hsu (NSTC 114-2320-B-039-038 و NSTC 113-2320-B-039-032). تم دعم هذه الدراسة أيضا جزئيا من خلال منح جامعة الصين الطبية والمستشفيات الممنوحة ل Jye-Lin Hsu (CMU113-MF-89 و C1110812016-12).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
ألواح ب 24 بئر (1.9 سم&سكيمتر ²/بئر)كورنينج354541
مضاد حيوي-مضاد للفطرياتجيبكو15240062
الاكواببايركس1000-600
أنابيب مخروطية (15 مل)كورنينج430052
أنابيب مخروطية (50 مل)كورنينج430290
الماء المقطر منزوع الأيوناتيتم إنتاج الماء المقطر منزوع الأيونات لدينا داخليا باستخدام نظام Milli-Q (العمود 1: Quantum TEX, SN: F4EB53476؛ العمود 2: بريباك، رقم الرقم السريع: F1CB11442)
مصل الأبقار الجنيني المميزسيتيفاSH30396.03
أسطوانات متدرجة (50 مل)VITLAB64804
هيماتوكسيلين جيل IIلايكا3801522
هايكلون دولبيكو s Modified Eagle Medium مع مستوى مرتفع من الجلوكوزسيتيفاSH30243.02
كاشف النقل ليبوفكتامين 2000إنفيتروجين11668019كاشف النقل
MDA-5 (D74E4) متال أرانبتقنية الإشارة الخلوية5321
أنابيب الطرد المركزي الدقيق (أنابيب إيبندورف بسعة 1.5 مل)أكسايجن142503
أوبتي-ميم I متوسط مصل مخفضجيبكو31985070
هزاز مداري (اختياري)FIRSTEKS300R
بارافورمالدهيدسيغما-ألدرتش4٪ في 1x PBS
برنامج تلفزيونيبرو تكME222605
pENTER-MDA5شركة فيجين للعلوم البيولوجيةCH863586
بيروكسيداز أفيني Pure Goat Anti-Human IgG (H+L)جاكسون إيمينوريسيرش109-035-003
متحكم الماصةثيرمو ساينتفيك130165
بيبيتيس جيلسون
الماصات ورؤوس الماصات (10 وميكرو؛ L)QSP104-Q
الماصات وأطراف الماصات (200 وميكرو؛ L)QSPT090-Q
الماصات ورؤوس الماصات (1000 وميكرو؛ L)QSP111-Q
الماصات المصلية (5 مل)الاسكتلندي91005
الماصات المصلية (10 مل)الاسكتلندي91010
الماصات المصلية (25 مل)الاسكتلندي91025
مجموعة ركيزة DAB من SignalStainالإشارات الخلوية80590.3٪ في PBS

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mehta, P., Machado, P. M., Gupta, L. Understanding and managing anti-MDA5 dermatomyositis, including potential COVID-19 mimicry. Rheumatol Int. 41 (6), 1021-1036 (2021).
  2. Tansley, S. L., McHugh, N. J., Wedderburn, L. R. Adult and juvenile dermatomyositis: are the distinct clinical features explained by our current understanding of serological subgroups and pathogenic mechanisms. Arthritis Res Ther. 15 (2), 211(2013).
  3. Fujisawa, T. Management of myositis-associated interstitial lung disease. Medicina. 57 (4), 347(2021).
  4. Sasaki, N., et al. Early initiation of plasma exchange therapy for a patient with anti-MDA5 autoantibody-positive dermatomyositis developing rapidly progressive interstitial lung disease. Mod Rheumatol Case Rep. 5 (1), 87-92 (2021).
  5. Go, D. J., et al. Survival benefit associated with early cyclosporine treatment for dermatomyositis-associated interstitial lung disease. Rheumatol Int. 36 (2), 125-132 (2015).
  6. Tsuji, H., et al. Multicenter prospective study of the efficacy and safety of combined immunosuppressive therapy with high-dose glucocorticoid, tacrolimus, and cyclophosphamide in interstitial lung diseases accompanied by anti-melanoma differentiation-associated gene 5-positive dermatomyositis. Arthritis Rheumatol. 72 (3), 488-498 (2020).
  7. Hozumi, H., et al. Comprehensive assessment of myositis-specific autoantibodies in polymyositis/dermatomyositis-associated interstitial lung disease. Respir Med. 122, 1-8 (2016).
  8. Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease. Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).
  9. Koga, T., et al. The diagnostic utility of anti-melanoma differentiation-associated gene 5 antibody testing for predicting the prognosis of Japanese patients with DM. Rheumatology. 51 (7), 1278-1284 (2012).
  10. Fuzzi, E., et al. Anti-MDA5 dermatomyositis: an update from bench to bedside. Curr Opin Rheumatol. 34 (6), 365-373 (2022).
  11. Sato, S., et al. Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis. Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).
  12. Tansley, S. L., Diederichsen, L. P., Zampeli, V. A., McHugh, N. J. The reliability of immunoassays to detect autoantibodies in patients with myositis is dependent on autoantibody specificity. Rheumatology. 59 (5), 1029-1034 (2020).
  13. Chen, Y. L., Li, A. Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy. Muscle Nerve. 69 (3), 345-350 (2024).
  14. Nombel, A., Pin, J. J., Fabien, N., Miossec, P., Coutant, F. Evaluation of the performance of an indirect immunofluorescence assay for the detection of anti-MDA5 antibodies. Biomedicines. 10 (12), 3125(2022).
  15. Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease. Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).
  16. Sato, S., et al. Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis. Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).
  17. Chang, Y. C., Yang, L., Budhram, A. Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy. Muscle Nerve. 69 (5), 626-630 (2024).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Triton X 100 DAB

مقالات ذات صلة