من بين طرق التشخيص العديدة لبكتيريا الملوية البوابية ، يمكن للتألق المناعي للنقطة الكمومية أن يكتب ويكتشف بسرعة هيليكوباكتر بيلوري ، مما يوفر أساسا لقرارات العلاج السريري. تقدم هذه المقالة مقدمة مفصلة عن قيمة تطبيق تقنية النقاط الكمومية في كتابة واكتشاف هيليكوباكتر بيلوري.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الكشف السريع عن ضراوة هيليكوباكتر بيلوري والكتابة باستخدام تقنية وضع العلامات على النقاط الكمومية
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
نقدم طريقة تعتمد على تقنية وضع العلامات على النقاط الكمومية للكشف السريع عن ضراوة هيليكوباكتر بيلوري وإجراء الكتابة ، بهدف التغلب على قيود طرق التشخيص التقليدية وتوفير أساس للعلاج السريري الشخصي. تم تصميم مجموعة باستخدام طريقة شطيرة المستضد المزدوج. تضمن ذلك سلسلة من الخطوات الدقيقة ، بما في ذلك إنشاء أنظمة تفاعل عازلة وإجراء عمليات تنشيط واقتران لتفاعلات المستضد والأجسام المضادة أثناء تحضير المجموعة. بالإضافة إلى ذلك ، كانت هناك إجراءات محددة لعمليات جمع العينات ومعالجتها واختبارها لتحديد حالة العدوى ونوع الفوعة في هيليكوباكتر بيلوري. من خلال إنشاء نماذج بيانات لنتائج مختلفة (سلبية ، من النوع الثاني ، والنوع الأول) ، تم التحقق من فعالية تقنية النقاط الكمومية في اكتشاف الكتابة. وفي حالة العينات السالبة، كانت هناك قيم إشارة ضعيفة أو معدومة في مناطق الكشف ذات الصلة. بالنسبة للعينات من النوع الثاني ، لوحظ نمط محدد من قيم الإشارة الموجبة والسالبة للأجسام المضادة المختلفة ، وبالنسبة للعينات من النوع الأول ، لوحظت مجموعة مميزة من قيم الإشارة الإيجابية المقابلة للأجسام المضادة الرئيسية. علاوة على ذلك ، أظهر تطبيقه في الدراسات المتعلقة بالتهاب المعدة المزمن وسرطان المعدة قيمته في العمل كمؤشر فحص. تتميز الطريقة القائمة على النقاط الكمومية بمزايا مثل تحسين الحساسية والخصوصية مقارنة بطرق التشخيص التقليدية. ومع ذلك ، فإنه يواجه أيضا تحديات مثل التأثيرات المحتملة من وقت تخزين العينات والتكاليف المرتفعة نسبيا. ومع ذلك ، مع الابتكارات التكنولوجية المستمرة ، من المتوقع أن تلعب دورا أكثر أهمية في المجال الطبي الحيوي للكشف عن هيليكوباكتر بيلوري وتشخيص الأمراض ذات الصلة في المستقبل.
المقدمة
هيليكوباكتر بيلوري (H. pylori) هي بكتيريا سالبة الجرام توجد بين الغشاء المخاطي للبواب وتحت الغشاء المخاطي للحيوان المعدي1،2. في عام 1994 ، صنفته منظمة الصحة العالمية / الوكالة الدولية لأبحاث السرطان (WHO / IARC) على أنه مادة مسرطنة من الدرجة الأولى. وفقا لما إذا كانت تعبر عن السموم الخلوية الفجوية A (VacA) والجين A (CagA) المرتبط بالسموم الخلوية ، فإنها تنقسم إلى نوعين: النوع الأول من عدوى الملوية البوابية السلالة الخبيثة: أكثر ضراوة وأكثر ضررا للمرضى. ترتبط عدوى الملوية البوابية من النوع الثاني ارتباطا وثيقا بحدوث قرحة المعدة والاثني عشر وسرطان المعدة ، وتتضمن سلالات منخفضة الفوعة ذات إمراضية ضعيفة ، وتتجلى بشكل عام في شكل عسر هضم خفيف3،4. وجد الباحثون أن معدل الإصابة من النوع الأول أعلى من معدل الإصابة بالنوع الثاني ، حيث تبلغ معدلات الإصابة من النوع الأول والنوع الثاني 72.4٪ و 27.6٪ على التوالي5. يعد الكشف السريع عن أنواع الملوية البوابية ، وخاصة التمييز بين النوع الأول والنوع الثاني ، أمرا بالغ الأهمية للعلاج السريري والوقاية من الأمراض.
يمكن أن يؤدي التهاب المعدة المزمن الناجم عن عدوى الملوية البوابية إلى أمراض الجهاز الهضمي الحادة ، مثل التهاب المعدة الضموري ، ومرض القرحة الهضمية ، والسرطان الغدي المعدي ، وسرطان الغدد الليمفاوية المرتبط بالغشاء المخاطي (MALT) في المرضى المصابين6،7،8. تتوقع دراسة العبء العالمي للأمراض لعام 2014 أنه بدءا من عام 2010 ، سيكون ما يقرب من 3.5 حالة وفاة لكل 100,000 شخص ناتجة عن مرض القرحة الهضمية كل عام9. وجدت التقارير البحثية أن ما يقرب من 800,000 حالة جديدة من سرطان المعدة في جميع أنحاء العالم في عام 2018 كانت مرتبطة بعدوى الملوية البوابية 10. في السنوات الأخيرة ، وجدت الدراسات أن عدوى الملوية البوابية ترتبط ارتباطا وثيقا أيضا بالأمراض العصبية وأمراض القلب والأوعية الدموية والسكري وما إلى ذلك. لذلك ، فإن الكشف الدقيق عن عدوى الملوية البوابية مهم للكشف عن الأمراض ذات الصلة. العلاج أمر بالغ الأهمية ، مما يجعل الكشف الدقيق عن الملوية البوابية نقطة ساخنة للأبحاث.
نظرا لأن معدل الإصابة ببكتيريا الملوية البوابية مرتفع في الصين ، فإن الكشف الدقيق في الوقت المناسب عن عدوى الملوية البوابية مفيد في الكشف المبكر والعلاج وله أهمية إيجابية للوقاية من سرطان المعدة وعلاجه. هناك طرق مختلفة للكشف عن عدوى الملوية البوابية ، بما في ذلك الطرق الغازية مثل اختبار اليورياز السريع (RUT) ، والفحص المجهري الملطخ لأقسام أنسجة الغشاء المخاطي في المعدة ، والتنظير الداخلي ، واختبار تنفس اليوريا C13 أو C14. (UBT) ، اختبار مستضد براز الملوية البوابية (SAT) وطرق أخرى غير جراحية11،12،13. طرق الكشف هذه لها قيود معينة. على سبيل المثال ، قد يعطي الفحص النسيجي نتائج سلبية خاطئة بسبب جودة وحجم عينة الخزعة المختارة في موقع الخزعة. قد يتأثر اختبار التنفس باستخدام المريض مؤخرا للمضادات الحيوية أو مثبطات مضخة البروتون (PPI) وتأثير العوامل المؤثرة المختلفة11،14،15. نظرا لقيود الطرق التقليدية ، مثل الحساسية والخصوصية التي تستغرق وقتا طويلا وغير كافية ، فقد أظهر تطوير طرق التشخيص السريع القائمة على التألق المناعي للنقاط الكمومية (QD-IF) إمكانات تطبيق كبيرة في مجال المقايسات الحيوية16،17. يقدم تحليل QD-IF مجسات الفلورسنت النقطية الكمومية لتحقيق اكتشاف محدد للأهداف الجزيئية من خلال ارتباط محدد بالأهداف الجزيئية18،19.
النقاط الكمومية هي جسيمات نانوية أشباه الموصلات نصف قطرها أصغر من نصف قطر بور إكسيتون أو قريب منه ، بشكل عام من 1 إلى 10 نانومتر. تستخدم النقاط الكمومية كمجسات فلورية. يتم إنشاء إشارات التألق بواسطة نقاط كمومية مثيرة ، ويتم الحصول على البيانات الكمية عن طريق قياس الجهاز. تشمل مزاياها مجموعة واسعة من الأطوال الموجية للإثارة ، والأطوال الموجية الضيقة للانبعاث ، وحجم التألق القابل للتعديل ، والحساسية العالية ، والاستقرار البصري الجيد ، وعمر التألق الطويل ، وتحول ستوكس الكبير ، وكفاءة التألق الكمي العالية. تتغلب النقاط الكمومية على أوجه القصور في العلامات الأخرى ، مثل وقت التلألؤ القصير ، والمتطلبات البيئية الدقيقة ، وضعف التكرار ، وضعف الاستقرار (مثل الأصباغ الفلورية) ، وتعطيل الإنزيم ، والحساسية المنخفضة. يجمع المقايسة المناعية لمضان النقاط الكمومية بين مزايا المقايسة المناعية لمضان النقطة الكمومية والمقايسة المناعية لمضان المؤشرات الحيوية وله مزايا البساطة والسرعة والخصوصية العالية والحساسية العالية20،21.
أدوات التشخيص التقليدية للكشف عن الملوية البوابية ، بما في ذلك الثقافة البكتيرية واختبار تنفس اليوريا والاختبارات المصلية ، لها حدودها الخاصة. تستغرق الاستزراع البكتيري وقتا طويلا وتتطلب ظروفا معملية صارمة ، وغالبا ما تؤدي إلى حساسية منخفضة نسبيا بسبب متطلبات النمو الشديدة للملوية البوابية. قد يؤدي اختبار تنفس اليوريا إلى نتائج سلبية كاذبة في ظل ظروف معينة ، مثل الاستخدام الأخير للمضادات الحيوية أو مثبطات مضخة البروتون22،23،24. يمكن أن تشير الاختبارات المصلية فقط إلى التعرض السابق بدلا من حالة العدوى الحالية في بعض الحالات ، وتفتقر إلى القدرة على التمييز بين أنواع الفوعة المختلفة لمسببات الأمراض.
في المقابل ، برزت تقنية Quantum Dot Immunofluorescence (QD-IF) كبديل واعد. يجمع QD-IF بين الخصائص البصرية الممتازة للنقاط الكمومية ، مثل كثافة التألق العالية ، وأطياف الانبعاث الضيقة ، والثبات الضوئي الجيد ، مع خصوصية التفاعلات المناعية. يتيح ذلك الكشف السريع والحساس عن مستضدات أو الأجسام المضادة في العينات البيولوجية. علاوة على ذلك ، تتمتع بميزة فريدة تتمثل في قدرتها على تحديد نوع ضراوة السلالة المصابة في وقت واحد ، والتي تكافح الطرق التقليدية لتحقيقها. من خلال سد هذه الفجوة في عملية التشخيص ، تمتلك تقنية QD-IF إمكانات كبيرة لإحداث ثورة في الطريقة التي نشخص بها عدوى الملوية البوابية وإدارتها ، مما يسهل تدخلات طبية أكثر تخصيصا وفعالية.
بشكل عام ، هناك حاجة سريرية ملحة لطريقة تشخيصية غير جراحية وفعالة يمكنها الكشف عن عدوى الملوية البوابية وأنواعها الفوعة (النوع الأول والنوع الثاني) في وقت واحد. تهدف هذه المقالة إلى استخدام طريقة QD-IF لتقييم وجود عدوى الملوية البوابية في عينات الأنسجة وبناء طريقة سريعة ودقيقة للكشف عن أنواع عدوى الملوية البوابة . إن الكشف السريع عن عدوى الملوية البوابية وأنواع ضراوتها له أهمية كبيرة لتحقيق الطب الدقيق ، وتحسين آثار العلاج ، وتقليل مخاطر الأمراض ذات الصلة ، والوقاية من سرطان المعدة. يوفر أساسا نظريا علميا للطاقم السريري لاختيار طرق دقيقة للكشف عن عدوى بكتيريا الملوية البوابية .
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم إجراء هذه الدراسة (KY2025-191-01) وفقا لإرشادات لجنة أخلاقيات البحث البشري التابعة لمستشفى مقاطعة قوانغدونغ الشعبية (أكاديمية قوانغدونغ للعلوم الطبية) ، جامعة الطب الجنوبية. تتوافق هذه المادة مع طلب الإعفاء من الموافقة المستنيرة.
ملاحظة: تهدف هذه الدراسة إلى استخدام تقنية النقاط الكمومية لتصميم وتطوير مجموعة لتشخيص ما إذا كانت أنواع دم المشاركين تحتوي على أجسام مضادة من هيليكوباكتر بيلوري يورياز (يورياز) ، والسموم الخلوية الفراغية A (VacA) ، والأجسام المضادة للسموم السيتوكسينية المرتبطة بالسموم الخلوية A (CagA)) لتحديد ما إذا كانت الملوية البوابية مصابة وما إذا كانت السلالة المصابة من النوع الأول أو النوع الثاني. تستخدم هذه المجموعة المصممة طريقة شطيرة مستضد مزدوج لقياس الأجسام المضادة ليورياز الملوية البوابية والأجسام المضادة CagA والأجسام المضادة VacA. عندما تتم إضافة عينة الاختبار التي تحتوي على المادة المستهدفة إلى لوحة العينة ، فإنها تتدفق عبر الوسادة الكمومية والغشاء عبر عمل السيفون ، مما يشكل مركبا للأجسام المضادة للمستضد في المرحلة الصلبة. بعد الاكتشاف ، تتم قراءة خط الكشف والكتلة على التوالي بواسطة المحلل. يتم استخدام قيمة إشارة خط التحكم لتحديد الحالة السلبية والإيجابية للجسم المضاد Urase والجسم المضاد CagA والجسم المضاد VacA بناء على قيم إشارة T / C لكل من الأجسام المضادة الثلاثة. يظهر مخطط التصميم في الشكل 1.
الشكل 1: رسم تخطيطي لبطاقة اختبار كتابة H. pylori. يوضح الشكل هيكل وتكوين بطاقة الاختبار. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
1. إعداد المجموعة
- إنشاء نظام تفاعل عازل لحمض الإيثان سلفونيك (ميس) QDs-2- (n-morphine)
- موازنة حل QDs الأصلي مع درجة حرارة الغرفة (RT). بعد ذلك ، قم بشفط 1000 ميكرولتر وأضف حجما متساويا من محلول MES 2x (كان التركيز النهائي ل MES 10 مليمول / لتر).
- امزج ، يهز ، وصوتنة لمدة 30 ثانية إلى 3 دقائق.
- التنشيط
- أضف 20 مجم / مل 1-إيثيل -3- (3-ثنائي ميثيل أمينوبروبيل) كاربوديميد (EDC) / N-هيدروكسي سوكسينيميد (NHS) في نظام المخزن المؤقت QDs-MES بنسبة 10: 1. امزجها ورجها وصوتيها لمدة 3 دقائق.
- ضع المحلول المحضر في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة وجهاز الطرد المركزي عند 13,000 × جم لمدة 20 دقيقة.
- قم بإزالة المادة الطافية من محلول الطرد المركزي وأعد إذابتها بمحلول MES 1x. انفخ المحلول بشكل متكرر باستخدام ماصة ، ورجها لخلطها بالتساوي ، وصوتنتها لمدة 3 دقائق.
- ضع المحلول أعلاه في حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة وجهاز طرد مركزي عند 13,000 × جم لمدة 20 دقيقة.
- اقتران
- أضف 0.03 مجم من مستضد اليورياز ومستضد CagA ومستضد VacA وIgG المضاد للفأر إلى 1000 ميكرولتر من محلول التنشيط ، وقم بتدوير الطرف بشكل متكرر ، ورجه ، وصوتنة لمدة 3 دقائق.
- ضع المحلول أعلاه في حمام مائي 37 درجة مئوية وتفاعل لمدة 3 ساعات.
- الإغلاق والتخزين
- أضف 100 ميكرولتر من محلول الحجب (الجدول التكميلي 1) واحتضنه لمدة 1 ساعة.
- جهاز الطرد المركزي المحلول المحظور عند 13,000 × جم لمدة 15 دقيقة.
- قم بإزالة المادة الطافية من محلول الطرد المركزي ، وأضف 750 ميكرولتر من محلول إعادة التكوين (الجدول التكميلي 1) ، وقم بالماصة بشكل متكرر ، ورجها ، وصوتنة لمدة 5 دقائق ، ثم قم بتخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية.
2. تحضير الألواح المطلية
- تحضير منصات الكم
- قم بتخفيف مركب مستضد H. pylori المسمى بالنقطة الكمومية 1: 5 مع المخزن المؤقت لتخفيف النقطة الكمومية لتحضير الكمية المطلوبة وفقا لإنتاج الدفعات.
- خذ الوسادة الكمومية ورش بالتساوي كمية معينة من مركب مستضد H. pylori المسمى بالنقطة الكمومية على الوسادة باستخدام بخاخ فيلم وجفف عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
- تحضير الغشاء
- استخدم مخزن الطباعة لتخفيف خط التحكم ومواد طلاء خط الاختبار وإعداد الكمية المطلوبة وفقا لحجم إنتاج الدفعات.
- قم بلصق غشاء النيتروسليلوز على لوح البولي فينيل كلوريد (PVC) ، واستخدم بخاخ الذهب الخدش للفيلم لطلاء خط مراقبة الجودة ومواد خط الاختبار بالتساوي على الغشاء ، وجففه عند 57 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
3. التجميع
- الصق الوسادات الكمومية والعينة على لوحة PVC المطلية بالفيلم بالتسلسل.
4. التقطيع إلى شرائح
- استخدم قاطع الشريط لتقطيع اللوح الكبير المجمع إلى شرائط اختبار.
5. التغليف الداخلي
- أكمل العبوة وفقا لمتطلبات تكوين المجموعة.
ملاحظة: مكونات المجموعة هي كما يلي: (ط) بطاقة الاختبار: تتكون من غلاف شريط اختبار وشريط اختبار. يتكون شريط الاختبار من لوحة PVC ، ولوحة عينة ، ولوحة كمومية (مركب مستضد مصنف بنقاط كمومية ؛ يحتوي المركب على مستضد اليورياز ، ومستضد CagA ، ومستضد VacA ، والفأر IgG) ، وغشاء النيتروسليلوز (يتم إصلاح منطقة الكشف بمستضد VacA ، ومستضد CagA ومستضد يورياز (تعبير حقيقيات النواة المؤتلف) ، ومنطقة مراقبة الجودة مغطاة ب IgG المضاد للفأر (الجسم المضاد بولي للماعز)) ، وورق ماص. مواصفات التغليف المختلفة لها كميات مختلفة من بطاقات الاختبار. مطلوب بطاقة اختبار واحدة لكاشف شخص واحد. (ثانيا) بطاقة SD: 1 قطعة / صندوق. يجب عدم خلط مكونات بطاقة الاختبار والبطاقة الرقمية (SD) الآمنة من دفعات مختلفة من مجموعات الاختبار.
6. معالجة العينة
ملاحظة: لجمع العينات، يرجى الرجوع إلى إجراءات تشغيل المختبرات السريرية الوطنية.
- اجمع الدم في أنبوب جل الفصل. احرص على تجنب انحلال الدم.
- اختبر عينة المصل المنفصلة في غضون 4 ساعات في درجة حرارة الغرفة (RT). إذا تعذر اختباره في الوقت المناسب ، فقم بتخزين العينة عند 2-8 درجة مئوية لمدة 3 أيام. على المدى الطويل (في غضون 1 سنة) ، قم بإغلاقها وتخزينها في درجة حرارة أقل من -20 درجة مئوية.
- أعد العينات إلى RT واخلطها جيدا قبل الاستخدام.
ملاحظة: يجب إذابة العينات المجمدة والمذابة تماما قبل الاستخدام ، ويجب ألا يتجاوز عدد دورات التجميد والذوبان خمسة. قد تتسبب العينات المذابة بالتجميد المتكرر في تدهور المادة التحليلية ويجب تجنبها. ستؤثر عينات التشيل وانحلال الدم الشديدة أيضا على الاختبار ويجب تجنبها.
7. إجراء الاختبار
- أخرج مجموعة الكاشف ومواد مراقبة الجودة للتوازن مع RT.
- تحضير العينة: جهاز الطرد المركزي لعينات الدم الكاملة عند 1467 جم لمدة 10 دقائق.
- تحقق من تطابق رقم دفعة بطاقة SD مع رقم مجموعة الكاشف. أدخل بطاقة SD في الجهاز للمعايرة التلقائية.
- قم بتشغيل الجهاز وكمبيوتر التشغيل. قم بتشغيل البرنامج المعين وحدد وحدة الاختبار . اختر إعدادات التهيئة لتهيئة الأداة وانتظر الانتهاء بنجاح.
- قم بالوصول إلى منطقة كاشف الجهاز وقم بإزالة فتحة بطاقة الاختبار. افتح مجموعة الكاشف وحدد العدد المطلوب من بطاقات الاختبار.
- افتح أكياس القصدير الخاصة ببطاقات الاختبار وضعها في الفتحة وفقا للاتجاه المشار إليه. أعد إدخال فتحة البطاقة في منطقة كاشف الأداة.
- اختبار مراقبة الجودة (QC)
- ضمن الوحدة النمطية اختبار ، حدد الإدخال اليدوي. انقر فوق إدخال المعلومات وأدخل معلومات مواد مراقبة الجودة المحددة. انقر فوق إنشاء. ضع مواد مراقبة الجودة في رف العينة المخصص ، مما يضمن الترتيب والتوجيه الصحيحين.
- انقر فوق بدء الاختبار لبدء اختبار مراقبة الجودة. ستستنشق إبرة عينة الجهاز 80 ميكرولتر من العينة وتوزعها عموديا في العينة جيدا. ستبدأ الأداة في التوقيت تلقائيا بعد توزيع العينة. بعد 15 دقيقة ، ستقوم الأداة بإجراء الكشف وقراءة قيم القياس وإخراج النتائج.
- اختبار العينة: ضمن وحدة الاختبار ، حدد LIS ثنائي الاتجاه. ضع العينات المراد اختبارها في رف العينة المخصص ، مما يضمن الترتيب والتوجيه المناسبين. انقر فوق بدء الاختبار. ستقوم الأداة بالمثل بشفط 80 ميكرولتر من العينة من كل منها ومعالجتها بشكل مماثل لعملية مراقبة الجودة.
- بمجرد اكتمال الاختبار ، قم بإزالة بطاقات الاختبار المستخدمة من الجهاز وتخلص منها كنفايات طبية.
8. مراقبة الجودة
- بكتيريا الملوية البوابية سلبية: تحقق وتأكد من أن نتائج المنتجات المرجعية السلبية لملوية البواب، وهي الجسم المضاد لليورياز والأجسام المضادة CagA والجسم المضاد VacA، كلها سلبية.
- عدوى الملوية البوابية من النوع الثاني: تحقق وتأكد من أن المنتج المرجعي لبكتيريا الملوية البوابية من النوع الثاني ، أي الجسم المضاد لليورياز ، إيجابي ، وأن نتائج الجسم المضاد CagA والأجسام المضادة VacA كلها سلبية.
- عدوى الملوية البوابية من النوع الأول: تحقق وتأكد من أن المنتج المرجعي لبكتيريا الملوية البوابية من النوع الأول ، أي أن الجسم المضاد لليورياز إيجابي ، و / أو الجسم المضاد CagA ، و / أو الجسم المضاد VacA إيجابي.
9. تحليل النتائج
- عدوى من النوع الثاني بسلالات ضعيفة أو غير سامة: عندما تكون قراءة الجسم المضاد لليورياز إيجابية ، وتكون قراءات الجسم المضاد CagA والأجسام المضادة VacA سلبية ، فقم بتفسيرها على أنها عدوى بسلالة الملوية البوابية الضعيفة أو غير السامة.
- عدوى من النوع الأول بسلالات شديدة الإمراض المنتجة للسموم: عندما تكون قراءة الجسم المضاد لليورياز إيجابية ، وتكون قراءة الجسم المضاد CagA أو الأجسام المضادة VacA إيجابية ، أو كلاهما إيجابي ، فقم بتفسيرها على أنها عدوى بسلالة عالية الإمراض تنتج توكسين الملوية البوابية .
- سلبي: عندما تكون قراءات الجسم المضاد Urease والجسم المضاد CagA والجسم المضاد VacA كلها سلبية ، فقم بتفسيرها على أنها عدم وجود عدوى بسلالات الملوية البوابية .
- غير صالح: عندما يحكم الجهاز على النتيجة على أنها غير صالحة، تحقق من التشغيل غير الصحيح أو فشل مجموعة الكاشف وحاول الإجراء مرة أخرى.
10. معايرة محلل التألق
- أولا ، قم بتشغيل المحلل واتركه يسخن لمدة 15 دقيقة تقريبا لتحقيق الاستقرار في أدائه. بعد ذلك، أدخل معيار المعايرة الذي توفره الشركة المصنعة في حامل العينة.
- بعد ذلك ، قم بالوصول إلى وظيفة المعايرة على واجهة المحلل وابدأ العملية. سيكتشف المحلل تلقائيا تألق المعيار ويضبط معلماته الداخلية وفقا لذلك لتتناسب مع القيم المرجعية المحددة مسبقا.
- بعد ذلك ، قم بإزالة معيار المعايرة وأدخل عينة فارغة للتحقق من أن القراءات ضمن النطاق المقبول.
- يساعد تكرار هذه الخطوات بانتظام وفقا للجدول الزمني الموصى به في الحفاظ على دقة المحلل للحصول على قياسات موثوقة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يوضح الشكل 2 مبدأ عمل المحلل المناعي الفلوري للنقاط الكمومية. وهو يتكون بشكل أساسي من مصدر ضوء الإثارة ، ومصدر ضوء استقبال ، ووحدة دائرة تحويل كهروضوئية ، ودائرة معالجة الإشارة ، ودائرة تحويل قيمة AD ، ووحدة حساب معالجة الإشارة. يولد مصدر ضوء الإثارة علامات الفلورسنت. يمتص الضوء أحادي اللون بطول موجي مماثل ، ويضيء الضوء أحادي اللون على نقطة المسح الثابتة لشريط الكاشف (في نافذة الكشف لشريط الكاشف) من خلال مسار ضوء الإثارة. مادة الفلورسنت بالقرب من نقطة المسح (في نافذة الكشف لشريط الكاشف) متحم...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تنقسم طرق التشخيص الحالية لبكتيريا الملوية البوابية بشكل أساسي إلى فئتين: الغازية وغير الغازية26. طرق مثل اختبار اليورياز السريع (RUT) ، وعلم الأنسجة ، والبيولوجيا الجزيئية ، والثقافة البكتيرية لها قيود في الغزو ، والحساسية ، والخصوصية ، وقيود الوقت ، والتكلفة ، ومتطلبات المعدات ، ومعالجة العينات ، والمراقبة في الوقت الفعلي. الأكثر شيوعا هي التشخيص السريع في المختبر باستخدام طرق مثل اختبار تنفس اليوريا ومستضد البراز واختبار الأجسام المضادة المصلي...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم تمويل هذا البحث من قبل مشروع صندوق البحوث الأساسية والتطبيقية في مقاطعة قوانغدونغ (رقم المنحة: 2021A1515220022 ، 2022A1515220023).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1- (3-ثنائي ميثيل أمينوبروبيل) -3-إيثيل كاربوديميد هيدروكلوريد (EDC) | سيجما | 25952-53-8 | 5 جم / زجاجة |
| 2- (ن-مورفين) حمض الإيثان سلفونيك (MES) | سيجما | 145224-94-8 | 100 جم / زجاجة |
| جهاز طرد مركزي | سيجما | 3K15 | |
| محلل مناعي مضان | قوانغتشو Labsim Biotech Co.، Ltd | قوانغدونغ رقم تسجيل الأجهزة الطبية. 2017221743 | |
| مجموعة اختبار الكتابة Helicobacter pylori | تشونغتشينغ iSIA BIO-Technology Co.، Ltd | رقم تسجيل الأجهزة الطبية الوطنية رقم 20203400330 | QDs طريقة التألق المناعي |
| ملح الصوديوم من N-hydroxythiosuccinimide (NHS) | Sigma | 106627-54-7 | 1 جم / زجاجة |
المراجع
- Tacconelli, E., et al. research and development of new antibiotics: WHO priority list of antibioticresistant bacteria and tuberculosis. Lancet Infect Dis. 18 (3), 318-327 (2018).
- Kamboj, A. K., et al. Helicobacter pylori: past, present, and future of treatment. Mayo Clin Proc. 92 (4), 599-604 (2017).
- Yamaoka, Y. Disease mechanisms: Helicobacter pylori virulence factors. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 7 (11), 629-641 (2010).
- Sharndama, H. C., Mba, I. E. Helicobacter pylori: an updated overview on its virulence and pathogenesis. Braz J Microbiol. 53 (1), 33-50 (2022).
- Lin, Y., et al. Infection status of type I and type II Helicobacter pylori in areas with high incidence of gastric cancer and its impact on gastrin and pepsinogen levels. World J Gastroenterol. 26 (25), 3673-3685 (2020).
- Li, Y. H., et al. Global prevalence of Helicobacter pylori infection from 1980 to 2022: a systematic review and metaanalysis. Lancet Gastroenterol Hepatol. 8 (6), 553-564 (2023).
- Karbalaei, M., Keikha, M. Rescue effect of lactobacillicontaining bismuth regimen on Helicobacter pylori treatment failure. New Microbiol New Infect. 42, 100904(2021).
- Malfertheiner, P., et al. Helicobacter pylori infection. Nat Rev Dis Primers. 9 (1), 19(2023).
- Stewart, B., et al. Global burden of disease requiring emergency surgery. Br J Surg. 101 (1), e9-e22 (2014).
- de Martel, C., et al. The global burden of cancer attributable to infection in 2018: a global incidence analysis. Lancet Glob Health. 8 (2), e180-e190 (2020).
- Godbole, G., et al. Review: diagnosis of Helicobacter pylori infection. Helicobacter. 25 (S1), e12735(2020).
- Lee, Y. C., et al. Diagnosis and treatment of Helicobacter pylori infection. Annu Rev Med. 73 (1), 183-195 (2022).
- Fischbach, W., Malfertheiner, P. Helicobacter pylori infection. Ger Int Med J. 115, 429-436 (2018).
- Zhang, C., et al. Survey on the quantitative detection of serum Helicobacter pylori antibodies in clinical laboratories in my country. J Clin Lab Anal. 36 (1), e24069(2021).
- Wan, W. S., et al. Improving the detection rate of Helicobacter pylori in chronic gastritis biopsies: a comparative analysis of H&E, methylene blue, WarthinStarry, immunohistochemistry, and quantum dot immunohistochemistry. Front Oncol. 13, 1229871(2023).
- Bodo, J., et al. Quantitative in situ detection of phosphoproteins in fixed tissues using quantum dot technology. J Histochem Cytochem. 57 (7), 701-708 (2009).
- Chen, C., et al. Quantum dotbased immunofluorescence technology for quantitative determination of HER2 expression in breast cancer. Biomaterials. 30 (15), 2912-2918 (2009).
- Kuang, H., et al. Recent developments in quantum dot analytical applications. TrAC Trends Anal Chem. 30 (10), 1620-1636 (2011).
- Park, Y., et al. Medically transformable quantum dots for biosensing and imaging. J Photochem Photobiol C Photochem Rev. 30, 51-70 (2017).
- SanmartinMatalbobs, J., et al. Semiconductor quantum dots as target analytes: properties, surface chemistry and detection. Chem Detect Nanomaterials. 12 (14), 2501(2022).
- Katan, C., Mercier, N., Even, J. Quantum and dielectric confinement effects in lowerdimensional hybrid perovskite semiconductors. Chem Rev. 119 (5), 3140-3192 (2019).
- Chinese Medical Association Branch of Health Management. Physical examination population 13C expert consensus on technical specifications for urea breath tests. Health Exam Manag. 2 (2), 94-96 (2021).
- National Clinical Medical Research Center for Digestive Diseases. Expert consensus on clinical application of Helicobacter pyloriurea breath test (2020). Chin J Health Manag. 14 (2020), 510-513 (2020).
- Zhang, Y., et al. The influence factors of Helicobacter pylori infection were detected by urea breath test. Chin J Clin Gastroenterol. 32 (3), 197-202 (2020).
- Lin, B., et al. Diagnostic value of gastric function triad and Helicobacter pylori typing in chronic gastritis and gastric cancer. Labeled Immunoassays Clin Med. 30 (1), 74-76 (2023).
- Cardos, A. I., et al. Evolution of diagnostic methods for Helicobacter pylori infection: from traditional tests to hightech, advanced sensitivity and identification tools. Diagnostics. 12 (508), 1-23 (2022).
- Ding, S. Z., et al. Chinese consensus report on familybased Helicobacter pylori infection control and management (2021 edition). Gut. 71 (2), 238-253 (2021).
- Wan, W., et al. Comparison of quantum dot immunofluorescence histochemistry and conventional immunohistochemistry in detecting Helicobacter pylori infection in paraffinembedded tissue of gastric biopsy. J Mol Histol. 52, 461-466 (2021).
- Zhou, Y., et al. Development of a fast and sensitive doubleantigen sandwich lateral flow immunoassay based on quantum dot nanobeads and its clinical performance in detecting SARSCoV2 total antibodies. Sens Actuators B Chem. 343, 130139(2021).
- Liu, H., et al. Consistency analysis of highsensitivity cardiac troponin I in peripheral blood and venous blood using quantum dot immunofluorescence method and its clinical application in acute myocardial infarction. J Chest Dis. 14 (4), 1267-1274 (2022).
- Xirong, W., et al. Development of quantum dotbased lateral flow immunoassay test strips for rapid and sensitive detection of SARSCoV2 neutralizing antibodies. Sci Rep. 13, 22253(2023).
- Purwidyantri, A., et al. Programmable graphenebased microfluidic sensor for DNA detection. Sens Actuators B Chem. 367, 132044(2022).
- Lee, K. S., Wagner, M., Stocker, R. Ramanbased sorting of microbial cells to link functions to their genes. Microb Cell. 7 (3), 62-65 (2020).
- Hu, C., et al. Design and fabrication of carbon dots for energy conversion and storage. Chem Soc Rev. 48 (8), 2315-2337 (2019).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
