هنا ، نقدم بروتوكولا يوضح بالتفصيل نموذجا جراحيا لشراء الكلى في نموذج الخنازير قبل السريرية للتروية أو الزرع الآلي اللاحق.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
هنا ، نقدم بروتوكولا يوضح بالتفصيل نموذجا جراحيا لشراء الكلى في نموذج الخنازير قبل السريرية للتروية أو الزرع الآلي اللاحق.
تطورت التروية الآلية كاستراتيجية قابلة للتطبيق لتقييم الأعضاء خارج الجسم الحي ومراقبتها وعلاجها وتحسينها ، بالإضافة إلى إطالة أوقات الحفظ. كانت النماذج الحيوانية الكبيرة ذات أهمية قصوى لتطوير هذه التقنيات وتحسينها. ومع ذلك ، من أجل ضمان جودة الكسب غير المشروع وقابلية استنساخ البيانات ، يجب اتباع التقنيات الجراحية الموحدة والقابلة للترجمة سريريا لشراء الأعضاء والأنسجة. وبالتالي ، هنا ، نصف بروتوكولا محسنا لشراء الكلى في نموذج الخنازير قبل السريرية. يتم إجراء استعادة الكلى باستخدام خنازير السلالات المختلطة (يوركشاير كروس / ميكس). باختصار ، بعد التطهير المعقم ولفة المجال الجراحي ، يتم إجراء شق كامل في خط الوسط للحصول على الوصول الأمثل إلى كلتا الكليتين. يتم تشريح الحالب والوريد الكلوي والشريان حتى أصلهم من الوريد الأجوف السفلي والشريان الأورطي ، على التوالي. بعد التشريح الكلوي الكامل ، يتم ربط الحالب وقطعه بعيدا. ثم يتم إضفاء الطابع الهباريني على المتبرع بالكامل ب 100 وحدة دولية لكل كيلوغرام / وزن الجسم. بعد ذلك ، يتم تثبيت الشريان الكلوي بالقرب من الشريان الأورطي ، ويتم تثبيت الوريد الكلوي بالقرب من الوريد الأجوف باستخدام مشبك الأوعية الدموية ساتينسكي. ثم يتم استئصال الطعم الكلوي ، ويتم تقشير الشريان الكلوي على الفور على الطاولة الخلفية. سيتم بعد ذلك شطف الكلية بمحلول حفظ مثلج وتخزينها على الثلج حتى يتم التروية أو الزرع. أخيرا ، يتم ربط جذع الشريان الكلوي برباط حريري 2-0 ، ويتم إغلاق الوريد الأجوف بخياطة 6-0 من مادة البولي بروبلين. تستعيد هذه التقنية الكلى وتحاكي إما بيئة متبرع حي (كلية واحدة) أو متبرع متوفى (كلية مزدوجة). يوفر التعافي من الكلى الفردية ميزة إجراء عملية زرع ذاتي لاحقة. في نموذج المتبرع المتوفى ، يمكن جمع الدم قبل القتل الرحيم عن طريق إدخال إبر كيس الدم مباشرة في الشريان الأورطي ، وبالتالي إخراج وتوفير الدم لتروية آلة خارج الجسم الحي .
زراعة الكلى هي العلاج الأمثل لمرض الكلى في المرحلة النهائية (ESRD) ، مما يوفر نوعية حياة محسنة ونتائج طويلة المدى مقارنة بغسيلالكلى 1. على الرغم من التقدم في الحفاظ على الأعضاء ، يموت عشرات الأشخاص كل يوم من ESRD أثناء وجودهم في قائمة الانتظار لزراعة الكلى2. التروية الآلية هي مجال متنام يزيد من أوقات الحفظ ، مما يتيح شبكات المتبرعين الموسعة وتخصيص الأعضاء بشكل أكثر كفاءة. تسمح هذه التقنية أيضا بمراقبة الأعضاء خارج الجسم الحي وتحسينها ، وبالتالي تقليل آثار إصابة نقص التروية وإعادة التروية (IRI). عند مقارنتها بالتخزين البارد الثابت (SCS) ، فقد ثبت أن نضح الماكينة يقلل بشكل كبير من حدوث وظيفة الكسب غير المشروع المتأخرة3،4. أظهر التروية الآلية أيضا تنشيط الطعوم الهامشية ، والتي لم تكن لتفي بمعايير الزرع5. على الرغم من التقدم التكنولوجي ، تظل تقنية الحفظ الأكثر شيوعا SCS على الجليد. يمكن أن تساعد المزيد من التجارب والبيانات قبل السريرية في جعل التروية الآلية الدعامة الأساسية للحفاظ على الكلى.
نموذج الخنازير لزراعة الكلى راسخ وكان جزءا لا يتجزأ من تطوير تقنية الحفاظ على الكلى ، وخاصة نضح الآلة. على عكس الكلى القوارض غير الضاربة ، فإن الخنازير والكلى البشرية كلاهما متعدد الفصوص ، ومتشابهة في الحجم ، ويشتركان في تشريح الشرياني والوريدي والبولالمماثل 6،7. لذلك ، تسهل كلية الخنازير الترجمة المباشرة إلى البيئة السريرية ، خاصة فيما يتعلق بالأجهزة الطبية والعلاجات الدوائية. بالإضافة إلى ذلك ، تظهر كلى الخنازير فيزيولوجيا مرضية مماثلة للكلى البشرية8 ، مما يجعلها مثالية لدراسات الحفاظ على الكلى.
من أجل ضمان جودة الكسب غير المشروع وقابلية تكرار البيانات ، يجب اتباع التقنيات الجراحية الموحدة والقابلة للترجمة سريريا لشراء الأعضاء والأنسجة. وبالتالي ، هنا ، نصف بروتوكولا محسنا لشراء الكلى في نموذج الخنازير قبل السريرية. يسمح هذا البروتوكول باستعادة الكلى ويحاكي إما بيئة متبرع حي (كلية واحدة) أو متبرع متوفى (كلية مزدوجة). يوفر التعافي الكلوي الفردي ميزة إجراء عملية زرع ذاتي لاحقة. في نموذج استعادة الكلى المزدوجة ، يمكن جمع الدم قبل القتل الرحيم عن طريق إدخال إبر كيس الدم مباشرة في الشريان الأورطي ، وبالتالي إخراج وتوفير الدم لتروية آلة خارج الجسم الحي .
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت الموافقة على جميع الإجراءات الموضحة من قبل لجنة الرعاية المؤسسية والاستخدام بجامعة جونز هوبكنز ، وهي مؤسسة مرخصة من وزارة الزراعة الأمريكية (USDA) ، ومكتب رعاية المختبر (OLAW) المضمونة ، وجمعية تقييم واعتماد رعاية المختبر (AAALAC) مؤسسة معتمدة. تم الحفاظ على وفقا لقانون رعاية الصادر عن وزارة الزراعة الأمريكية ، ودليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبر ، وسياسة خدمة الصحة العامة الأمريكية بشأن الرعاية الإنسانية واستخدام المختبر.
1. والسكن
2. إجراء ما قبل الجراحة والتخدير
3. إجراء حصاد الكلى
4. إجراء حصاد الدم
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تتمتع مجموعتنا البحثية بخبرة واسعة تمتد لما يقرب من 15 عاما مع نماذج الخنازير لكل من زراعة الأعضاء الصلبة وزرع الأوعية الدموية المركبة9،10،11،12،13،14،15،16،17. هنا ، نصف نتائج تجارب استعا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
كان نموذج الخنازير لزراعة الكلى أمرا حيويا لتطوير وتحسين تقنية التروية الآلية. بالنظر إلى أوجه التشابه التشريحية والمناعية والفيزيولوجية المرضية مع الكلى البشرية6،7،8 ، تقدم كلى الخنازير ترجمة ميسرة للاختبارات السريرية والممارسة.
يمكن استخدام نموذج شراء كلى الخنازير لمجموعة متنوعة من التجارب قبل السريرية. في نموذج المتبرع الحي ، يمكن استعا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.
يود المؤلفون أن يعرب عن تقديرهم للعديد من الفنيين البيطريين في كلية الطب بجامعة جونز هوبكنز لمساعدتهم الفنية. نود أيضا أن نعرب عن امتناننا للدكتورة جيسيكا إيزي وأماندا ماكسويل ، والعديد من المقيمين البيطريين ، بما في ذلك الدكتورة مالوري براون وجيسيكا بلونكارد وأليكسيس روتش لتزويد حيواناتنا برعاية سريرية ممتازة وإشراف بيطري. أخيرا ، نود أن نتوجه بخالص الشكر إلى جميع أعضاء مختبر زراعة الأوعية الدموية المركبة (VCA) في كلية الطب بجامعة جونز هوبكنز الذين ساعدوا بأي صفة في شراء الكلى أو إجراءات شراء الأعضاء الأخرى التي يتم إجراؤها في مختبرنا. تم دعم هذا العمل من قبل منحة المعهد الوطني للسكري وأمراض الجهاز الهضمي والكلى (NIDDK) R44DK136396.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| محلول الإيثانول بنسبة 70٪ | فيشر ساينتيفك | 04-355-122 | |
| قوة نسيج أدسون A2:D30ps، 4.75"، 1 × 2 أسنان | ويكسلر للجراحة | FL0081.1 | |
| بطانية جسم فوق جسم صحة من Bair Hugger | 3M | 53777 | |
| وحدة تدفئة بير هوغر | 3M | 77500 | |
| مقياس بالفور البطني مع شفرات جانبية ثابتة، عمق 4 إنش، وأقصى امتداد 10 إنش | إم بي إم ميديكال سبلاي | 124-7017 | |
| محلول بيتادين (5٪ بروفيدون-يود) | صحة في MWI | NDC-67618-155-01 | |
| سيفازولين للحقن، ميزة فريدة | صحة في MWI | NDC-63323-237-10 | |
| محلول الكلورهيكسيدين | صحة في MWI | NDC-30798-624-31 | |
| الوصاية حل حفظ الأرغن HTK | الأدوية الأساسية | 25767073545 | |
| ملقط نسيج DeBakey، 7.75"، أطراف 2 مم | ويكسلر للجراحة | FL0789.1 | |
| يوثاسول (الصوديوم البنتوباربيتال والفينيتوين الصوديوم) | فيرباك | NDC-051311-050-01 | |
| حقن الصوديوم بالهيبارين، ميزة فريدة | صحة في MWI | NDC-71288-402-10 | |
| جهاز التحكم في درجة حرارة الهوت دوغ | شركة أوغسطين الجراحية المحدودة | WC71V | |
| مرتبة هوت دوغ البيطرية لتدفئة الجسم | شركة أوغسطين الجراحية المحدودة | V106 | |
| حقيبة عزل Invisishield، 20" × 20" | ميدلاين | DYNJSD1003 | |
| حامل إبر جاكوبسون الدقيق، فك مستقيم، مقبض دائري، 7.25" | ويكسلر للجراحة | NL0729.11 | |
| محلول حقن هيدروكلوريد الكيتامين | نيكسجين للأدوية | NC-0256 | |
| إسفنجة الحضن 18" × 18" | ميدلاين | MDS231318LF | |
| مقص ميتزنباوم للتقسيم، منحني 7 إنش | ويكسلر للجراحة | SL5011.1S | |
| أنبوب شفط غير موصل مع موصلات مموجة، 1/4" × 10' | ميدلاين | DYND50251 | |
| صوديوم بانتوبرازول للحقن | صحة في MWI | NDC-55150-202-00 | |
| قنبلة تروية، تدفق حر، طرف غير حاد بقطر 3 مم | حلول تحالف ميد | PER-3003S | |
| طرف المصباح الصلب يانكاور | ميدلاين | DYND50130 | |
| مشبك ساتينسكي، فك DeBakey غير مصاب بزاوية 30 مم، سيقان منحنية، 10" | ويكسلر للجراحة | AL2150.1 | |
| مقبض المشرط #3 | وورلد بريسيجن إنسترومنتس | 500236 | |
| سيرفاتور B UW (جامعة ويسكونسن) | حلول الزراعة العالمية | JFISERB10A r2 | |
| وحدة جمع واحدة معبأة مسبقا CPDA-1، 450 مل | مختبرات يورغنسن | JO520 | |
| ربطة عنق سوفسيلك سوتر، 2-0، سوداء، 18" | كوفيديين | S-195 | |
| شفرة المشرط الجراحي رقم 10 | وورلد بريسيجن إنسترومنتس | 500239 | |
| غرزة Surgipro II، 6-0، زرقاء، 30"، مزدوجة الذراع، CV-22 إبرة | كوفيديين | VP-733-X | |
| ستائر الجراحة بثلاثة أرباع | ميدلاين | DYNJP2414 | |
| قلم التصوير الكهربائي من فالي لاب مع أقطاب من الفولاذ المقاوم للصدأ | كوفيديين | CVNE2516H | |
| مولد الجراحة الكهربائية Valleylab Force FXc | كوفيديين | MFI-MDT-FORCE-FXC | |
| قطب العودة متعدد الأشكال للمريض البالغ من فالي لاب | كوفيديين | E7507-SD | |
| محلول حقن هيدروكلوريد زيلازين | نيكسجين للأدوية | NC-0334 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.