تصف هذه الدراسة طريقة ربط نايلون معدلة 6-0 لإحداث التهاب دواعم السن في الفئران ، وهي قابلة للتكاثر بدرجة كبيرة وتمثل بديلا للباحثين لدراسة أمراض اللثة من تطورها إلى عواقبها المرضية.
مقالة منهجية
تصف هذه الدراسة طريقة ربط نايلون معدلة 6-0 لإحداث التهاب دواعم السن في الفئران ، وهي قابلة للتكاثر بدرجة كبيرة وتمثل بديلا للباحثين لدراسة أمراض اللثة من تطورها إلى عواقبها المرضية.
أمراض اللثة (PD) هي اضطراب التهابي يصيب الأنسجة الداعمة للأسنان وهي واحدة من أكثر الأمراض انتشارا في جميع أنحاء العالم. يؤدي شكله الحاد ، التهاب دواعم السن ، إلى تدمير الأنسجة الرخوة والأسنان والعظام. تم تطوير نماذج حيوانية لالتهاب دواعم السن باستخدام الرئيسيات والخنازير المصغرة والفئران. من بين هذه ، يوفر نموذج الفأر الناجم عن الرباط مزايا مثل التقدم السريع للمرض ، وقابلية التكاثر ، والقدرة على التنبؤ ، والتكلفة المنخفضة مع تكرار الجوانب الرئيسية لالتهاب دواعم السن البشري بشكل فعال. قدمت نماذج الفئران التي تستخدم الأربطة رؤى قيمة حول البيئات الدقيقة الميكروبيولوجية والمناعية لأنسجة اللثة ، مما يسلط الضوء على الدور الحاسم للأغشية الحيوية في الاستجابات المناعية وارتباطها بالأمراض الجهازية. تقدم هذه الدراسة طريقة ربط نايلون معدلة لإحداث التهاب دواعم السن في الفئران. يتضمن التعديل استخدام خياطة من النايلون بدلا من خياطة الحرير ووضعها أسفل منطقة التلامس بين الأطراف بدلا من تمريرها عبر نقطة الاتصال. يبسط هذا النهج هذه التقنية مع إحداث التهاب دواعم السن بشكل فعال. يتم توضيح المنهجية التفصيلية لوضع الخيط بيانيا ، ويتم توضيح تطور التهاب دواعم السن من خلال التحليلات النسيجية والنسيجية.
أمراض اللثة (PD) هي اضطراب التهابي يصيب الأنسجة الداعمة للأسنان وهي من بين أكثر الأمراض انتشارا في العالم1; تم الإبلاغ عن حدوث مرض باركنسون ليتراوح بين 20٪ -50٪ في جميع أنحاءالعالم 2. مرض باركنسون لديه درجات مختلفة من التقدم. يؤثر شكله الخفيف ، المسمى التهاب اللثة ، على الأنسجة الرخوة فقط ، ويؤثر شكله الحاد ، المسمى التهاب دواعم السن (PT) ، على الأنسجة الصلبة مثل العظام3. نظرا لأن PT مرض التهابي ، يجب اعتباره استجابة مناعية معقدة يمكن تعديلها من خلال العديد من عوامل الخطر التي يمكن أن تغير عملية المرض4 ، مثل داء السكري5 ، وأمراض القلب والأوعية الدموية6 ، والتفاعلات الهرمونية مثل نتائج الحمل السلبية7 أو تسمم الحمل8 ، والأمراض الالتهابية9 ، وحتى تغيرات العين10 أو الخرف11.
لذلك ، لفهم المسببات المرتبطة بتطور أو انتشار PT ، لاختبار استراتيجيات علاجية جديدة أو أكثر فعالية ، أو لتحديد أي علاقة بين الأمراض الجهازية و PT أو الجراثيم اللثوية ، هناك حاجة إلى نماذج حيوانية12.
يعد اختيار طريقة بحث فعالة أمرا بالغ الأهمية لفهم تطور PT والإجابة بشكل مناسب على أسئلة البحث13. على مر السنين ، تم تطوير نماذج حيوانية مختلفة لدراسة PT. ومع ذلك ، فإن نماذج مثل الرئيسيات والأرانب والخنازير المصغرة باهظة الثمن ومعقدة لاستخدامها14،15،16. تتميز نماذج الفئران من PT ، وخاصة نموذج PT الناجم عن الربط ، بالعديد من المزايا ، بما في ذلك التطور السريع ، والاستنساخ ، والقدرة على التنبؤ ، والتكلفة المنخفضة17،18،19.
على الرغم من استخدام عدة طرق للحث على PT ، مثل التلقيح البكتيري عن طريق الفم ، وحقن عديدات السكاريد الدهنية ، وتحريض الرباط10،20 ، ولكل منها مزايا وعيوب17 ، فإن نموذج الفئران ل PT الناجم عن ربط النايلون يشبه الآلية البشرية لتطويره20،21،22،23. يحدث PT من خلال الاحتفاظ بالميكروبات المقيمة ، مما يسبب الالتهاب ويؤدي إلى فقدان الأنسجة. علاوة على ذلك ، يمكن تعديل الفئران وراثيا لدراسة مجموعات الخلايا المختلفة أو الجزيئات ذات الأهمية لدراسة PT.
يمكن إجراء ربط الأسنان باستخدام مواد مختلفة ، مثل أسلاك تقويم الأسنان أو خيوط الحرير24،25 أو خيوط النايلون26. المادة الأكثر شيوعا لتحفيز PT عن طريق الربط في الفئران هي الحرير. تم شرح هذه المنهجية من قبل مؤلفين مختلفين ، مثل Marchesan et al.18 و Abe et al.27 و Chadwick et al.22 ، ولكل منها تعديلاته الخاصة ، وقد تم استخدام كل هذه الأساليب بنجاح من قبل العديد من الباحثين28. ومع ذلك ، فإن وضع خياطة حريرية حول الأضراس العلوية في الفئران يمكن أن يكون معقدا. اقترح Marchesan et al. استخدام "حامل الرباط". وضع Abe et al. و Chadwick et al. الخيط من خلال نقطة الاتصال ، على الرغم من أن تشادويك وآخرون وضعوه حول الأضراس M1 و M2.
تم استخدام خيوط النايلون بسماكات مختلفة لتطوير PT في نماذج حيوانية مختلفة29،30،31. استخدم ليما وآخرون 31 5-0 خيوط نايلون. في الدراسات السابقة ، استخدمنا 6-0 خيوط نايلون بنتائج مماثلة28.
بالمقارنة مع الغرز متعددة الشعيرات ، فإن خيوط النايلون عبارة عن خيوط أحادية غير قابلة للامتصاص وتظهر استجابة أقل للأنسجةالالتهابية 32. بالإضافة إلى ذلك ، تسمح خيوط النايلون أيضا بالتراكم الميكروبي33،34 ، وهناك دليل على التصاق Fusobacterium nucleatum و Porphyromona intermedia35،36 ، جنبا إلى جنب مع البكتيريا اللاهوائية الاختيارية في خيوط النايلون12،14،17،19،24،27،35،37(الجدول 1).
قد تسمح هذه الخصائص بتركيز الاستجابة الالتهابية في الغالب على تراكم البكتيريا بدلا من تراكم المواد. بالإضافة إلى ذلك ، يتمتع النايلون بخصائص ميكانيكية أفضل ، مثل قوة الشد ، من الحرير38.
لذلك ، في هذه الدراسة ، أدت خياطة النايلون 6-0 الموضوعة حول M2 تحت منطقة التلامس بين القربة إلى تطور التهاب دواعم السن في المرحلة المتقدمة في الفأر. يسمح هذا النهج بوضع الأربطة باستخدام ملاقط منتظمة ، وتكون النتائج متسقة. بعد 30 يوما ، يمكن تأكيد تطور PT عن طريق التحليل النسيجي والنسيجي.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم إجراء جميع الإجراءات التي تنطوي على التجارب في امتثال صارم ل "الإطار الأخلاقي للبحوث الطبية الحيوية على المختبر" ، وفقا للمعيار المكسيكي الرسمي NOM-062-ZOO-1999. تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات التابعة لكلية الدراسات العليا في Iztacala (FES-Iztacala) بموجب البروتوكول CE / FESI / 072024/1765. تم إيواء الفئران في غرف حيوانية مع حرية الوصول إلى الطعام والماء في بيئة خالية من مسببات الأمراض في منشأة FES-Iztacala. هذا البروتوكول هو تعديل للطريقة الموصوفة سابقا من قبل آبي وآخرون.27. تم تقسيم إناث الفئران BALB / c التي تتراوح أعمارها بين ستة إلى ثمانية أسابيع (تزن 16 جم) إلى مجموعات التحكم (CTL) والتهاب دواعم السن (PT). تم إحداث التهاب دواعم السن عن طريق وضع خياطة نايلون 6-0 في اليوم 0 لتعزيز الالتصاق البكتيري المستمر وتحفيز تطور المرض المزمن الشديد. بعد 30 يوما ، تم القتل الرحيم لجميع الفئران (باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا) لتقييم تلف الأنسجة وفقدان التعلق (AL) من خلال التحليل النسيجي (الشكل 1). تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.
1. تحضير التخدير
2. تحديد المواقع الحيوانية
3. وضع الرباط
4. استعادة
5. فحص الرباط
6. علم الأنسجة
7. تحليل البيانات
8. التحليل الإحصائي
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تسمح هذه المنهجية للفئران المستحثة بتطوير التهاب دواعم السن (PT) من الأسبوع الثاني فصاعدا. تمت مراقبة الفئران أسبوعيا للتحقق من وجود الرباط. تم إجراء القتل الرحيم في اليوم 30. تم تقييم الخصائص السريرية لجميع المجموعات. حافظت المجموعة الضابطة على الخصائص الطبيعية ، مثل اللون وبنية اللثة الهامشية ، بمرور الوقت. بالمقارنة مع تلك الموجودة في مجموعة CTL ، أظهرت أنسجة مجموعة PT التهابا ونزيفا وتكوين جيب اللثة ، والتي لوحظت عند هامش اللثة في الفئران المستحثة (الشكل 5).
ت...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم استخدام العديد من النماذج الحيوانية لالتهاب دواعم السن لتقييم جوانب مختلفة ، مثل الاستجابات الميكروبيولوجية والمناعية ، ولها بعض أوجه التشابه مع الأمراض البشرية43. تقدم هذه النتائج دليلا على إطار أمراض اللثة ، مثل دور الأغشية الحيوية ، والاستجابة المناعية ، والتفاعلات مع الحالات الجهازية44،45.
النماذج الحيوانية لالتهاب دواعم السن لها تعقيدات وأوجه تشابه مختلفة. على سبيل المثا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح فيما يتعلق بنشر هذه الورقة.
تم تمويل هذا العمل جزئيا من قبل مجلس العلوم والتكنولوجيا في ولاية المكسيك (COMECYT) رقم المنحة [FICDTEM-2021-072] وبرنامج دعم المشاريع البحثية والابتكار التكنولوجي (PAPIIT) - UNAM ، رقم المنحة [IN-217021]. نحن نقدر برنامج التخصص في Endoperiodontología و FES Iztacala و UNAM للمرافق المقدمة لصنع هذا الفيديو و Rosalba Yañez Ortiz ، DDS ، لدعمها في صنع هذا الفيديو. تم إنشاء بعض الأشكال باستخدام برنامج Biorender (رقم الاتفاقية ME282NWCI1).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.9٪ محلول كلوريد الصوديوم | PiSA | شطف الفك العلوي | |
| 6-0 خياطة النايلون | Atramat, Internacional Farmac & eacute; utica | PE1946-N | رباطة التنسيب |
| Amscope 3.7 البرنامج للكاميرا الرقمية | Amscope | x64, 4.11.21973.20230107 | حل EDTA لجمع |
| البيانات | سيجما– Aldrich | E5134 | إزالة الكلسة |
| مقص ناعم | عام | لقطع خياطة النايلون 6-0 | |
| ملقط الأنسجة الدقيقة | عام | 6-0 خياطة النايلون | |
| وسادة شاش | عامة | للحفاظ على درجة حرارة الجسم | |
| GraphPad Prism | GraphPad Prism | الإصدار 8.3.0 | تحليل البيانات |
| هيبروميلوز | عامة | زيوت تشحيم العين | |
| مياه قابلة للحقن | بيزا | تخفيف محلول التخدير | |
| الكيتامين | التخدير ، | الدقيقة للتخدير | |
| بيزا ؛ | Cellpro | 801501 | لاحتواء الأنسجة دورين إزالة الكلس |
| Micropore | 3M | 1533 | لإصلاح الماوس |
| المجهر كاميرا رقمية | Amscope | MU1603 | علم الأنسجة |
| الأنابيب الدقيقة | Axygen | MCT-150-C | مخزن التخدير |
| التخفيف المجهر البصري | UNICO | Serie G380 | Histology |
| الأشرطة المطاطية اللبية | TP Orthodintics, Inc | أزرق | لإبقاء الخطم مفتوحا |
| محلول بارافورمالدهايد | Sigma– Aldrich | 158127 | تثبيت الأنسجة |
| Paraplast | Leica | 39601006 | Histology |
| المجهر الجراحي | Carl Zeiss GmbH Berlin | 6-0 خياطة نايلون | |
| محاقن الأنسولين فائقة الدقة 6 مم U-100 ، 0.3 مل | BD | 326385 | لحقن محلول التخدير ؛ |
| الأربطة المطاطية العالمية | عام | لإبقاء الخطم مفتوحا | |
| المنضدة | العامة | قاعدة خشبية لدعم الفئران ؛ | |
| زيلازين | بورسين ، بيزا | للتخدير |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن