يصف هذا البروتوكول طريقة لتحفيز انسداد الحالب من جانب واحد (UUO) في الفئران لدراسة تطور تليف الأنسجة في اعتلال الكلية الانسدادي. ويشمل الإجراءات الجراحية ورعاية ما بعد الجراحة وطرق تقييم التليف.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج انسداد الحالب من جانب واحد للتحقيق في التليف الخلالي الكلوي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
التليف الكلوي هو النتيجة المرضية النهائية لمرض الكلى المزمن التدريجي (CKD). يستخدم نموذج انسداد الحالب أحادي الجانب (UUO) على نطاق واسع لتوضيح الآليات الجزيئية والخلوية الكامنة وراء التليف الخلالي الكلوي وتحديد الأهداف العلاجية المحتملة. تم إنشاء هذا النموذج في الفئران من خلال الربط الجراحي للحالب من جانب واحد ، وهو إجراء بسيط نسبيا وسهل التنفيذ. ومع ذلك ، من المعروف أن نموذج الفأر UUO يظهر تباينا وتناقضا كبيرين ، يتأثر بعوامل مثل إجهاد الفأر ، والعمر ، والجنس ، ونوع التخدير ، ومدة الجراحة ، ودرجة حرارة الجسم أثناء العملية ، والمهارات الجراحية للمشغل ، وظروف التغذية ، والحالة الصحية العامة للفئران. تساهم الاختلافات في التقنيات الجراحية ووضع الخيط ومدة الانسداد في التباين في النتائج. بالإضافة إلى ذلك ، يؤدي أخذ العينات غير المتسقة من الكلى المسدودة إلى زيادة التباين في تقييم التليف الكلوي. توضح هذه الدراسة عملية تطوير نموذج الفأر UUO وتقييم التليف الخلالي ، وتناقش التحديات التقنية التي تساهم في عدم القدرة على التنبؤ بالنموذج ، وتقترح الحلول المحتملة. تهدف هذه الأفكار إلى إنشاء نهج أكثر توحيدا وقابلية للتطبيق عالميا للتحقيق في التليف الكلوي.
المقدمة
يصيب مرض الكلى المزمن (CKD) أكثر من 10٪ من سكان العالم ، ويتزايد انتشاره1. يمكن أن تؤدي حالات المسالك البولية المختلفة ، بما في ذلك التشوهات التشريحية الخلقية ، وتحصي الكلية ، وتضخم البروستاتا ، وأورام المثانة ، إلى انسداد الحالب². نتيجة لذلك ، يعد نموذج الفأر لانسداد الحالب من جانب واحد (UUO) أداة رئيسية لتحديد الآليات الجديدة للتليف الخلالي الكلوي ، وفهم تطور المرض ، وتقييم استراتيجيات العلاج المحتملة. لقد تم استخدامه على نطاق واسع للتحقيق في أصل الخلايا الليفية العضلية ، والعناقيد الفرعية للأرومات الليفية (myo) ، واستقلاب الخلايا الأنبوبية ، وتوقف دورة الخلية ، والانتقال الجزئي الظهاري الوسيط ، والعمليات الأخرى ذات الصلة3،4،5،6،7،8.
بالإضافة إلى التليف الخلالي الكلوي الناجم عن UUO ، تشمل نماذج القوارض الأخرى شائعة الاستخدام للتليف الخلالي الكلوي النماذج التي يسببها السموم ، مثل تلك التي تستخدم حمض الأريستولوتشيك وحمض الفوليك والأدينين ، بالإضافة إلى النماذج المستحثة جراحيا مثل استئصال الكلية 5/6 وإصابة نقص التروية وإعادة التروية (IRI). يوفر نموذج UUO العديد من المزايا مقارنة بنماذج التليف الكلوي البديلة. على سبيل المثال ، يتطلب التليف الكلوي الناجم عن السموم فترة نمذجة طويلة نسبيا (حوالي 1-2 أشهر) ، ويمكن أن تؤدي آثاره الجانبية السامة على الأعضاء الأخرى إلى تعقيد التحقيق في آليات التليف9،10،11. يمكن أن تؤدي النماذج المستحثة جراحيا ، مثل استئصال الكلية 5/6 ، إلى نزيف كبير في الكلى والعدوى ، مما يزيد من خطر الوفيات بعد الجراحة. بالإضافة إلى ذلك ، يرتبط مدى التليف الخلالي المستحث ارتباطا مباشرا بحجم أنسجة الكلى المقطوعة ، مما يجعل من الصعب إعادة إنتاج نفس درجة التليف باستمرار في كل فأر12.
نموذج IRI الكلوي هو طريقة أساسية لإحداث إصابة الكلى الحادة بمرض الكلى المزمن وله أهمية سريرية كبيرة. يمكن تعديل شدة التليف عن طريق ضبط الوقت الإقفاري ودرجة حرارة الجسم. ومع ذلك ، بالمقارنة مع نموذج UUO ، فهو أكثر تعقيدا من الناحية الجراحية ، ويتطلب تحريض التليف الخلالي مدة أطول13. بالمقارنة مع هذه النماذج ، يتمتع نموذج UUO بالعديد من المزايا ، بما في ذلك مدة النمذجة القصيرة ، والحد الأدنى من التباين ، والتكرار ، وإجراء جراحي بسيط نسبيا. يتم إنشاء نموذج الفأر UUO ، الذي لا يتضمن السموم ، عن طريق ربط حالب واحد ، مما يؤدي إلى اعتلال الكلية الانسدادي في غضون أسبوعين. ينتج عن هذا استسقاء الكلية ، والتوسع الأنبوبي ، والتليف الخلالي ، الذي يشبه إلى حد كبير العملية المرضية التي لوحظت في البشر14. يمكن التحكم في شدة التليف - خفيف أو متوسط أو شديد - عن طريق تعديل مدة التجربة.
على الرغم من أن نموذج الماوس UUO أبسط في الأداء من النماذج الأخرى التي تسببها الإهانات للتحقيق في مرض الكلى المزمن ، إلا أن هناك عدة عوامل يمكن أن تؤثر بشكل كبير على استقراره. تشمل هذه العوامل إجهاد الفأر ، والعمر ، والجنس ، ونوع التخدير ، ومدة الجراحة ، ودرجة حرارة الجسم أثناء الجراحة ، والمهارات الجراحية للمشغل ، وظروف التغذية والحالة الصحية للفئران15،16.
يعد تقليل الإجهاد الجراحي والعدوى أثناء إجراء العملية بطريقة ثابتة ومنظمة تحت التخدير أمرا ضروريا لإنشاء نموذج فأر UUO قابل للتكرار. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن للبحث حول الآليات والأهداف العلاجية المحتملة لمرض الكلى المزمن أن يتعرض للخطر من قبل المشغلين عديمي الخبرة ، مما يؤدي إلى زيادة فقدان الفئران وزيادة عدم تجانس النموذج. لمواجهة هذه التحديات ، يتم تحديد الجوانب الفنية الرئيسية للعملية الجراحية - قبل الإجراء وأثناءه وبعده - ، مع تسليط الضوء على القضايا الحرجة التي تتطلب الاهتمام. علاوة على ذلك ، تم تفصيل منهجية التقييم لنموذج الفأر UUO لتزويد الباحثين بنهج متسق وموثوق.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يتم إجراء جميع الإجراءات الحيوانية وفقا لإرشادات الوكالة ومعتمدة من قبل لجنة أخلاقيات المؤسسية بجامعة نانجينغ الطبية. للقضاء على الاختلافات بين الجنسين والسلالات وضمان مقارنة النتائج ، يتم استخدام ذكور الفئران CD1 فقط الذين تتراوح أعمارهم بين 8-10 أسابيع ووزنهم 22-25 جم. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.
1. إعداد والأدوات
- الأوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية قبل الجراحة.
- قم بوزن الفئران وتخديرها (باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا). قم بتوصيل جهاز التخدير بالاستنشاق بشكل صحيح وضع الفئران في غرفة الحث مع 2٪ من الأيزوفلوران الممزوج بالأكسجين عند 1-2 لتر / دقيقة. ثم ضع أنف الفأر في مخروط الأنف مع إمداد مستمر بالتخدير. تأكد من المستوى المناسب من التخدير من خلال تقييم عدم الاستجابة لقرص إصبع القدم.
ملاحظة: تحقق بانتظام من معدل التنفس وقم بتقييم مستوى التخدير باستخدام منعكس دواسة الفئران. اضبط الأيزوفلوران حسب الاقتضاء. - ضع الماوس على وسادة حرارية إلكترونية في وضع ضعيف مع تمديد الرأس والرقبة لإبقاء مجرى الهواء مفتوحا. قم بتأمين الكفوف بشريط لاصق منخفض.
- استخدم مقياس حرارة لمراقبة درجة الحرارة المحيطة والحفاظ عليها عند 37-38 درجة مئوية. أدخل مسبارا مستقيميا وحافظ على درجة حرارة الجسم الأساسية للفئران حوالي 36.5-37 درجة مئوية أثناء العملية.
- ضع مرهم العين على العينين لمنع إصابة جفاف القرنية.
- حلق الشعر على المنطقة الجراحية باستخدام كريم إزالة الشعر وتطهيره بمحلول البيتادين ثلاث مرات.
2. الإجراء الجراحي
ملاحظة: بمجرد أن تستقر درجة حرارة الجسم عند نقطة الضبط ويكون منعكس قرصة إصبع القدم غائبا ، ابدأ الإجراءات الجراحية التالية.
- استخدم شفرة جراحية لعمل شق جراحي عمودي بطول 1-1.5 سم تقريبا من المثانة إلى الحافة اليسرى السفلية من الأضلاع لكشف تجويف البطن.
- انقل الأمعاء إلى الجانب الأيمن من تجويف البطن باستخدام قطعة قطن مبللة بمحلول ملحي عادي معقم لكشف الكلية اليسرى الموجودة أسفل الجزء الخلفي من الطحال وبجوار العمود الفقري.
- استخدم ملقط القزحية المنحنية لتنظيف الدهون والأنسجة الضامة المحيطة بالحالب الأيسر. بعد عزل لطيف ، اربط الحالب الأيسر بالقرب من العمود السفلي للكلية باستخدام خياطة مضفرة من الحرير 3/0. قم بإجراء ربط ثان للحالب الأيسر بين الربط الأول والمثانة.
ملاحظة: لتقليل التباين بين الفئران ، تأكد من أن موضع الربط يظل ثابتا عبر جميع المواضيع. استخدم الملقط الأيسر لوضع الخيط في أطراف الملقط الأيمن وحرك الخيط للخلف أسفل الحالب17. تجنب تضمين الدهون الزائدة والأنسجة الضامة في الربط ، فقد يؤدي ذلك إلى انسداد الكلى غير المكتمل. تحقق ذلك عن طريق ضرب الحالب برفق باستخدام مسحات قطنية جافة. - أعد وضع الأمعاء بعناية في التجويف البريتوني. خياطة طبقات العضلات والجلد بشكل منفصل باستخدام خياطة مضفرة من الحرير 3/0.
ملاحظة: قد يتسبب خياطة الجلد وطبقات العضلات معا في تمزق الجرح في الخيط وتلف أحشاء البطن. - عند التشغيل على عدة فئران ، قم بتنظيف الأدوات الجراحية بالماء الجاري و 75٪ من الإيثانول قبل الانتقال إلى الماوس التالي.
3. رعاية ومراقبة ما بعد الجراحة
- حقن 0.5 مل من المحلول الملحي العادي الدافئ داخل الصفاق لمنع الجفاف.
- ضع الفئران مرة أخرى في قفص نظيف حتى تستعيد وعيها الكامل.
- تطبيق البوبرينورفين (50 ميكروغرام/كغ) بالحقن تحت الجلد لمدة 3 أيام. راقب الفئران يوميا بحثا عن علامات قلة الاستمالة وانخفاض الأكل والموقف غير الطبيعي.
4. تقييمات ما بعد الجراحة
- علم الأنسجة
- القتل الرحيم للفئران بجرعة زائدة من الأيزوفلوران (باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا). حصاد الكلى المسدودة والمقابلة غير المسدودة18 بعد القتل الرحيم.
- استخدم أكبر مساحة مقطعية لقسم الكلى للفحص النسيجي.
- قم بإصلاح أنسجة الكلى في 4٪ بارافورمالدهيد وقطع العينات التي تم الحصول عليها إلى أقسام 4 ميكرومتر.
- تلطيخ أقسام الكلى بصبغة الحمض الدوري (PAS) ، أو تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان (MTS) ، أو تلطيخ سيريوس الأحمر للكشف عن الإصابة الأنبوبية الكلوية والتليف الكلوي.
- حدد عشرة حقول عشوائية لأقسام الكلى تحت مجهر ضوئي بتكبير 200×.
- احسب نسبة المنطقة الزرقاء موجبة الكولاجين باستخدام برنامج ImageJ.
- لطخة غربية
- استخرج ما يقرب من 20 ملغ من أنسجة الكلى من نفس القطب من الكلى UUO باستخدام المخزن المؤقت لمقايسة الترسيب المناعي المشع (RIPA)18.
- حدد تركيز البروتين باستخدام مقايسة حمض البيسنكونينيك19.
- قم بتحميل كميات متساوية من عينات البروتين على 4٪ -10٪ من المواد الهلامية Bis-Tris للرحلان الكهربائي ونقلها إلى أغشية ثنائي فلوريد البولي فينيلدين (PVDF).
- سد أغشية PVDF بحليب 5٪ في Tween الملحي (TBST) واحتضانها بالأجسام المضادة الأولية طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
- اغسل أغشية PVDF ب TBST واحتضانها بالأجسام المضادة الثانوية في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة.
- اكتشف مستويات البروتين باستخدام طريقة التلألؤ الكيميائي المحسن (ECL) وتحليلها باستخدام برنامج ImageJ ، مع نازعة هيدروجين الجلسرالديهايد 3-فوسفات (GAPDH) كعنصر تحكم في التحميل.
- وظائف الكلى
- تخدير الفئران بالأيزوفلوران المستنشق (انظر الخطوة 1.2).
- جمع عينات الدم بأثر رجعي بعد التخدير.
- عينات دم أجهزة الطرد المركزي عند 3,000 × جم لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
- قم بقياس الكرياتينين في الدم ونيتروجين اليوريا في الدم (BUN) باستخدام محلل كيميائي جاف أوتوماتيكي لمراقبة وظائف الكلى.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
علم الأنسجة
كشف تلطيخ الحمض الشيف الدوري (PAS) عن التمدد الأنبوبي ، وفقدان حدود الفرشاة ، وتكوين القالب ، وتورم الظهارة الأنبوبية. أظهر تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان ولون سيريوس تليف خلالي بعد UUO ، على عكس الأنابيب المدمجة العادية ذات اللومن المميز الذي لوحظ في المجموعة الوهمية. زادت درجة التليف الخلالي الكلوي ، المشار إليها بالمناطق الزرقاء في تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان والمناطق الحمراء في تلطيخ سيريوس الأحمر ، بطريقة تعتمد على الوقت (الشكل 1 أ).
...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يتم توفير إجراء شامل لإنشاء نموذج UUO ، وهو نهج مستخدم على نطاق واسع للتحقيق في التليف الخلالي الكلوي. بالإضافة إلى ذلك ، يتم توضيح تحديد وتقييم النموذج ، بما في ذلك تقييمات وظائف الكلى والتغيرات النسيجية. تتم مناقشة المتغيرات التي تساهم في عدم تجانس النموذج والعوامل الفنية القابلة للتعديل.
تختلف القابلية للإصابة ب UUO بشكل كبير بناء على العمر والجنس وإجهاد الفأر. بالمقارنة مع الفئران C57BL / 6 ، فإن الفئران BALB / c أقل عرضة أو حتى مقاومة ل UUO
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ويعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل منح المؤسسة الوطنية للعلوم الصينية (82370686/2024YFA1107704) ، ومنحة أستاذ جيانغسو المعين خصيصا ، ومشروع نانجينغ للابتكار في العلوم والتكنولوجيا ، وبرنامج تنمية المواهب رفيع المستوى في مستشفى مقاطعة جيانغسو (المرحلة الأولى) (CZ0121002010037) ، ومؤسسة العلوم الطبيعية لمقاطعة جيانغسو (BK20240055) ، وفريق جيانغسو للابتكار الطبي إلى JR ؛ مستشفى مقاطعة جيانغسو (أول مستشفى تابع لجامعة نانجينغ الطبية) مشروع تعزيز القدرات السريرية (JSPH-MA-2023-4) ، وتطوير البرنامج الأكاديمي ذي الأولوية لمؤسسات التعليم العالي في جيانغسو (الصين) والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81970639 / 82151320) إلى HM.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1 مل حقنة | Mingankang | / | |
| 4/0 خياطة جراحية | Jinhuan Medical | F401 | |
| 75٪ إيثانول | ليركون | 6303060031 | |
| مضخة هواء التخدير | RWD Life Science | R510-29 | |
| تحريض التخدير | RWD Life Science | V102-V | |
| ماكينة قص شعر | Jinke | / | |
| محلول البيتادين | ليركون | 6303030036 | |
| بوبرينورفين (مسكن) | RWD علوم | الحياة/ | |
| ملقط القزحية المنحنية | جينكي | / | |
| وسادة حرارية إلكترونية | Reptizoo | AHM23 | |
| ملقط مستقيم ناعم | Jinke | / | |
| علبة فلتر الغاز | RWD علوم الحياة | R510-31-6 | |
| وسادات شاش | الفائز الطبية | 601-026576 | |
| مقص القزحية | Jinke | / | |
| Isoflurane (مخدر) ؛ | RWD Life Science | R510-22-10 | |
| آلة التخدير الحيواني متعددة المخرجات | RWD Life Science | R550IE | |
| حامل إبرة | jinke | / | |
| مرهم العيون | Dechra NDC & nbsp ؛ | 17033-211-38 | |
| مسحة قطنية معقمة | الفائز الطبية | 601-015213 | |
| H20066533 | شمين ملحي معقم |
المراجع
- Bello, A. K., et al. An update on the global disparities in kidney disease burden and care across world countries and regions. Lancet Glob Health. 12 (3), e382-e395 (2024).
- Klahr, S. Obstructive nephropathy. Intern Med. 39 (5), 355-361 (2000).
- Lovisa, S., et al. Epithelial-to-mesenchymal transition induces cell cycle arrest and parenchymal damage in renal fibrosis. Nat Med. 21 (9), 998-1009 (2015).
- Grande, M. T., et al. Snail1-induced partial epithelial-to-mesenchymal transition drives renal fibrosis in mice and can be targeted to reverse established disease. Nat Med. 21 (9), 989-997 (2015).
- Kang, H. M., et al. Defective fatty acid oxidation in renal tubular epithelial cells has a key role in kidney fibrosis development. Nat Med. 21 (1), 37-46 (2015).
- Lebleu, V. S., et al. Origin and function of myofibroblasts in kidney fibrosis. Nat Med. 19 (8), 1047-1053 (2013).
- Yang, L., Besschetnova, T. Y., Brooks, C. R., Shah, J. V., Bonventre, J. V. Epithelial cell cycle arrest in g2/m mediates kidney fibrosis after injury. Nat Med. 16 (5), 535-543 (2010).
- Kuppe, C., et al. Decoding myofibroblast origins in human kidney fibrosis. Nature. 589 (7841), 281-286 (2021).
- Ren, J., et al. The transcription factor twist1 in the distal nephron but not in macrophages propagates aristolochic acid nephropathy. Kidney Int. 97 (1), 119-129 (2020).
- Perales-Quintana, M. M., et al. Metabolomic and biochemical characterization of a new model of the transition of acute kidney injury to chronic kidney disease induced by folic acid. PeerJ. 7, e7113(2019).
- Kim, K., et al. Skeletal myopathy in CKD: A comparison of adenine-induced nephropathy and 5/6 nephrectomy models in mice. Am J Physiol Renal Physiol. 321 (1), F106-F119 (2021).
- Tan, R. Z., et al. An optimized 5/6 nephrectomy mouse model based on unilateral kidney ligation and its application in renal fibrosis research. Ren Fail. 41 (1), 555-566 (2019).
- Fu, Y., Xiang, Y., Wei, Q., Ilatovskaya, D., Dong, Z. Rodent models of aki and AKI-CKD transition: An update in 2024. Am J Physiol Renal Physiol. 326 (4), F563-F583 (2024).
- Kramann, R., Menzel, S. Mouse models of kidney fibrosis. Methods Mol Biol. 2299, 323-338 (2021).
- Chevalier, R. L., Forbes, M. S., Thornhill, B. A. Ureteral obstruction as a model of renal interstitial fibrosis and obstructive nephropathy. Kidney Int. 75 (11), 1145-1152 (2009).
- Nørregaard, R., Mutsaers, H. aM., Frøkiær, J., Kwon, T. H. Obstructive nephropathy and molecular pathophysiology of renal interstitial fibrosis. Physiol Rev. 103 (4), 2827-2872 (2023).
- Thornhill, B. A., Chevalier, R. L. Variable partial unilateral ureteral obstruction and its release in the neonatal and adult mouse. Methods Mol Biol. 886, 381-392 (2012).
- Ren, J., et al. Twist1 in infiltrating macrophages attenuates kidney fibrosis via matrix metallopeptidase 13-mediated matrix degradation. J Am Soc Nephrol. 30 (9), 1674-1685 (2019).
- Smith, P. K., et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal Biochem. 150 (1), 76-85 (1985).
- Puri, T. S., et al. Chronic kidney disease induced in mice by reversible unilateral ureteral obstruction is dependent on genetic background. Am J Physiol Renal Physiol. 298 (4), F1024-F1032 (2010).
- Falke, L. L., et al. Age-dependent shifts in renal response to injury relate to altered BMP6/CTGF expression and signaling. Am J Physiol Renal Physiol. 311 (5), F926-F934 (2016).
- Song, L., Shi, S., Jiang, W., Liu, X., He, Y. Protective role of propofol on the kidney during early unilateral ureteral obstruction through inhibition of epithelial-mesenchymal transition. Am J Transl Res. 8 (2), 460-472 (2016).
- Saad, K. M., et al. Reno-protective effect of protocatechuic acid is independent of sex-related differences in murine model of UUO-induced kidney injury. Pharmacol Rep. 76 (1), 98-111 (2024).
- Goorani, S., Khan, A. H., Mishra, A., El-Meanawy, A., Imig, J. D. Kidney injury by unilateral ureteral obstruction in mice lacks sex differences. Kidney Blood Press Res. 49 (1), 69-80 (2024).
- La Russa, D., Barberio, L., Marrone, A., Perri, A., Pellegrino, D. Caloric restriction mitigates kidney fibrosis in an aged and obese rat model. Antioxidants (Basel). 12 (9), 1778(2023).
- Wei, Q., Dong, Z. Mouse model of ischemic acute kidney injury: Technical notes and tricks. Am J Physiol Renal Physiol. 303 (11), F1487-F1494 (2012).
- Hammad, F. T. The long-term renal effects of short periods of unilateral ureteral obstruction. Int J Physiol Pathophysiol Pharmacol. 14 (2), 60-72 (2022).
- Chevalier, R. L., Thornhill, B. A., Wolstenholme, J. T., Kim, A. Unilateral ureteral obstruction in early development alters renal growth: Dependence on the duration of obstruction. J Urol. 161 (1), 309-313 (1999).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
