مقالة منهجية

التنبؤ بتنظيم إصابة الخلايا البادوية وعلاج أمراض الكلى السكرية والتحقق من صحتها بواسطة Yinhuo Tang

811 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/67939

⸱

يونيو 20, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Nephropathy Department, the Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 2College of Integrated Chinese and Western Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

في هذه المقالة

ملخص

باستخدام علم الأدوية الشبكي والتحقق من الصحة التجريبية ، يكشف هذا البروتوكول عن آلية عمل Yinhuo Tang (YHT) في علاج مرض الكلى السكري (DKD) وكيف يقلل YHT من تلف الخلايا البودوية في فئران DKD من خلال تثبيط مسار إشارات PI3K / AKT / NF-κB.

الملخص

مرض الكلى السكري (DKD) هو مرض مزمن في الكلى يتميز بالبيلة البروتينية الهائلة وانخفاض معدل الترشيح الكبيبي. السمة المرضية الرئيسية ل DKD هي اعتلال الأوعية الكلوية الكلوي ، و ~ 40٪ من مرضى السكري سيصابون بمرض السكري. تلعب البروتينات المرتبطة بالخلايا البودوية CD2AP و WT-1 دورا مهما في الحفاظ على الوظيفة الطبيعية للخلايا البودية وسلامة حاجز الترشيح الكبيبي. عندما تتعطل بنية الخلية البودومية أو وظيفتها - بسبب الالتهاب أو الإجهاد التأكسدي أو الإهانات المرضية الأخرى - يتلف الحجاب الحاجز الشقي والهيكل الخلوي للأكتين ، مما يؤدي إلى زيادة نفاذية حاجز الترشيح الكبيبي ويؤدي إلى البيلة البروتينية. Yinhuo Tang (YHT) هي وصفة طبية للطب الصيني التقليدي لها وظيفة تقليل البيلة البروتينية وتأخير تدهور وظائف الكلى. ومع ذلك ، فإن آلية YHT في علاج DKD غير واضحة. في هذه الورقة ، بناء على علم الأدوية الشبكي والتجارب على ، قمنا بفحص نسبة الجلوكوز في الدم ، ووظائف الكبد ، ووظائف الكلى ، ونسبة الدهون في الدم ، وأمراض الكلى ، ومستويات التعبير عن بروتينات علامات الخلايا البودوية CD2AP و WT-1 ، بالإضافة إلى مسار إشارات PI3K / AKT / NF-κB في الفئران db / dB بعد إعطاء YHT لمدة 8 أسابيع. تظهر نتائجنا أن YHT يقلل من مستويات التعبير عن العوامل الالتهابية عن طريق تثبيط مسار إشارات PI3K / AKT / NF-κB ، وبالتالي تقليل تلف الخلايا البودوية لتلعب دورا في تأخير تطور DKD.

المقدمة

مرض الكلى السكري (DKD) هو أحد المضاعفات السائدة والخطيرة لمرض السكري ، ولا يزال السبب الرئيسي للفشل الكلوي في المرحلة النهائية على مستوىالعالم 1. يتطور المرض من خلال سلسلة من العمليات المرضية المعقدة ، مثل تضخم الكبيبات ، والتمدد المتوسط ، والتليف الخلالي الأنبوبي ، والتراكم المفرط لمكونات المصفوفة خارج الخلية2،3. على الرغم من التحسينات في إدارة مرض السكري ، تهدف العلاجات الحالية بشكل أساسي إلى التحكم في مستويات الجلوكوز في الدم وضغط الدم ، مما يؤدي فقط إلى إبطاء تطور DKD بدلا من عكس التغيرات المرضية الأساسية. هذا يؤكد الحاجة الملحة لخيارات علاج أكثر شمولا وفعالية4،5.

برز الطب الصيني التقليدي (TCM) كعلاج بديل واعد في علاج الأمراض المزمنة مثل DKD6،7،8. وتؤكد الطب الصيني التقليدي على نهج علاجي شامل، يمكن أن يعالج الطبيعة المعقدة والمتعددة الأهداف ل DKD. من بين تركيبات الطب الصيني التقليدي المختلفة ، ثبت أن Yinhuo Tang (YHT) يمتلك وظائف فسيولوجية متعددة ، مثل تغذية الين (لتكملة حجم الدم) ، وتنغيم الكلى (لتعزيز وظائف الكلى) ، وإزالة الحرارة (لقمع الالتهاب) ، وإخضاع يانغ (لخفض ضغط الدم) 9،10،11. ومع ذلك ، لا يزال هناك نقص في فهم شامل للآليات التي يخفف بها YHT من DKD.

البروتين CD2AP المرتبط بالخلايا البودوية هو بروتين رئيسي في الخلايا البودوية ، وهو أمر بالغ الأهمية للحفاظ على سلامة حاجز الترشيح ، بينما يلعب WT-1 دورا مهما في نمو الكلى والتليف12،13،14،15،16. لذلك ، فإن الوظيفة الطبيعية لهذين البروتينين حيوية لوظيفة الترشيح الكبيبي الطبيعية. تشير الأدبيات الحالية إلى أن هذه الأهداف متورطة في تطور DKD ، ونفترض أن المكونات النشطة ل YHT قد تتفاعل مع هذه الأهداف لممارسة تأثيرات علاجية. تهدف هذه الدراسة إلى تأكيد هذه التفاعلات وتقديم رؤى أعمق حول كيفية تعديل YHT لمسارات مرض DKD.

في هذه الدراسة ، نستخدم مزيجا من علم الأدوية الشبكي والتجارب على لاستكشاف الآليات العلاجية ل YHT في DKD. يسمح لنا علم الأدوية الشبكي ، الذي يدمج أدوات المعلوماتية الحيوية لتحليل التفاعلات المعقدة بين المركبات النشطة والأهداف البيولوجية ، باستكشاف الطبيعة متعددة الأهداف والمسارات المتعددة لعمل YHT17،18،19. غالبا ما تؤكد طرق اكتشاف الأدوية التقليدية على التدخلات أحادية الهدف. في المقابل ، يعمل علم الأدوية الشبكي كأداة تنبؤية تساعد في تحديد المسارات المحتملة والأهداف الجزيئية ، وتقديم رؤى أولية حول الآليات المحتملة لعمل العلاجات المعقدة. على الرغم من أنه لا يحل محل الخطوات التجريبية والتنظيمية الصارمة المطلوبة لتطوير الأدوية ، إلا أن علم الأدوية الشبكي يمكن أن يوجه توليد الفرضيات ويبسط البحث في المراحلالمبكرة 20.

في النهاية ، تهدف هذه الدراسة إلى سد الفجوة بين الطب التقليدي والطب الحديث ، وتقديم أدلة علمية على دمج الطب الصيني التقليدي في علاج DKD. قد تساعد نتائج هذا البحث في تطوير استراتيجيات علاج أكثر فعالية وأمانا ل DKD ، مما يوفر بديلا للرعاية القياسية التي غالبا ما تكون محدودة بالآثار الجانبية. من خلال توضيح الآليات الجزيئية ل YHT والتحقق من إمكاناتها العلاجية ، نأمل في إثبات قابلية التطبيق الواسع للطب الصيني التقليدي في علاج DKD.

البروتوكول

تم اختيار ما مجموعه ثلاثين من الذكور الذكور من النوع الثاني من الفئران السكرية البالغة من العمر 6 أسابيع (C57BL / Ksj db / db) وستة ذكور من الفئران غير المصابة بالسكري (db / m) من نفس الخلفية الوراثية لهذه الدراسة. تم إيواء الفئران لمدة أسبوعين في بيئة معقمة من الدرجة SPF في مركز التجارب على بجامعة تشانغتشون للطب الصيني التقليدي (رقم الترخيص: SYXK (JI) 2023-0014). خلال هذه الفترة ، تم تزويدهم بنظام غذائي للصيانة الدورية ومياه معقمة. تم قياس نسبة الجلوكوز في الدم الصائم في الفئران ديسيبل / ديسيبل في بداية ونهاية فترة الأسبوعين ، وتم تضمين التجربة فقط تلك التي تجاوزت نتائجها 11.1 مليمول / لتر في كلا الاختبارين. تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات بجامعة تشانغتشون للطب الصيني التقليدي (رقم الهوية: 2024147).

1. تحضير الدواء

  1. تحضير YHT (الجدول 1)
    1. حدد Rehmannia glutinosa (30 جم) ، Ophiopogon japonicus (10 جم) ، Morindae Officinalis Radix (10 جم) ، Poria cocos (15 جم) ، و Schisandra chinensis (6 جم) ، واشطف الأعشاب بالماء لإزالة الشوائب والغبار من السطح. ثم اخلطي 71 جم من الأعشاب النيئة مع 710 مل من الماء المقطر وانقعيها في أواني خزفية لمدة 60 دقيقة
    2. بعد الغليان عند 100 درجة مئوية ، اخفض درجة حرارة المرق إلى 80 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة ثم قم بتصفية الثمالة من خلال طبقتين من الشاش الطبي. قم بتخزين السائل في الثلاجة على حرارة 4 درجات مئوية.
    3. أضف 710 مل من الماء المقطر إلى الثمالة المذكورة أعلاه ، وكرر النقع من الخطوة 1.1.1 والخطوة 1.1.2 مرة واحدة ؛ قم بتخزين السائل في الثلاجة على حرارة 4 درجات مئوية.
    4. امزج السائلين الطبيين أعلاه من الخطوتين 1.1.2 و 1.1.3 وضعهما في صينية المواد الخاصة بالمجفف بالفراغ. ابدأ تشغيل مضخة التفريغ لإزالة الهواء من غرفة التجفيف بالتجميد ، واضبط درجة الحرارة على -40 درجة مئوية ، واحتفظ بها لمدة 6 ساعات لتجميد الماء في محلول الدواء في حالة صلبة. بعد ذلك ، اضبط درجة الحرارة على -20 درجة مئوية لمدة 36 ساعة لتسامي الماء على شكل بلورات ثلجية إلى غاز. أخيرا ، اضبط درجة الحرارة على 40 درجة مئوية ، واحتفظ بها لمدة 24 ساعة لإزالة الرطوبة المتبقية من محلول الدواء ، وقم بإيقاف تشغيل مضخة التسخين والتفريغ ، وإزالة المسحوق المجفف بالتجميد (مسحوق YHT).
    5. تزن 0.4615 جم و 0.923 جم و 1.846 جم من مسحوق YHT المجفف بالتجميد ، في 1 مل من المحلول الملحي ، وقم بعمل تعليق YHT بتركيزات 0.4615 جم / مل و 0.923 جم / مل و 1.846 جم / مل ، على التوالي.
  2. تحضير فالسارتان
    1. أضف فالسارتان (10.29 مجم) إلى 50 مل من PEG300 ورجه جيدا حتى يذوب تماما.
    2. أضف 50 مل من المحلول الملحي إلى المحلول من الخطوة 1.2.1 ورجه جيدا للتجانس والحصول على محلول فالسارتان بتركيز 10.29 مجم / مل.

2. العلاجات الدوائية

ملاحظة: تم تقسيم التجربة إلى ست مجموعات: المجموعة الضابطة العادية (CON) ، والمجموعة النموذجية (MOD) ، ومجموعة التحكم الإيجابية في فالسارتان (POS) ، ومجموعة الجرعة المنخفضة من YHT (YH-L) ، ومجموعة الجرعة المتوسطة من YHT (YH-M) ، ومجموعة الجرعة العالية من YHT (YH-H). يحتاج البشر البالغون إلى 71 جم YHT يوميا. وفقا لصيغة التحويل للفأر التجريبي وجرعة المخدرات البشرية ، كانت الجرعة اليومية للفأر ~ 9.23 جم / كجم:

الجرعة التجريبية المكافئة للفأر (جم/كغ) = الجرعة البشرية (جم)/وزن الجسم (70 كجم) × 9.1

  1. أمسك الجزء الخلفي من الفئران بإحكام باليد غير المهيمنة بحيث تكون رؤوسها وأعناقها وأجسادها في خط مستقيم (لتجنب المعاناة) ووضع إبرة التزقيم سعة 1 مل بشكل مناسب بزاوية مشابهة للانحناء الفسيولوجي لمريء الفئران. ادفع إبرة التزقيم من خلال زاوية فم الفئران ، واضغط عليها لأسفل على اللسان ، واضغط عليها على الحنك ، وادفعها برفق إلى الداخل في المعدة.
  2. ادفع الدواء ببطء باستخدام السبابة لليد المهيمنة ، واسحب الإبرة عموديا لإكمال عملية التزقيم.
    ملاحظة: كانت جرعة الدواء 10 مل / كجم لمدة 4 أسابيع.
    1. قم بإعطاء 10 مل ∙kg-1∙day-1 محلول ملحي عن طريق التزقيم للفئران CON و MOD.
    2. قم بإدارة 10.29 مجم ∙ كجم -1∙ يوم -1 تعليق فالسارتان عن طريق التزقيم لفئران مجموعة نقاط البيع.
    3. إعطاء الجرعات التالية من YHT عن طريق التزقيم لهذه المجموعات: 4.615 g∙kg-1∙day-1 لمجموعة YH-L; 9.23 جم ∙ كجم -1∙ يوم -1 إلى مجموعة YH-M ؛ 18.46 جم كجم -1 يوم -1 لمجموعة YH-H.

3. تقييم فعالية YHT

  1. الكشف عن المؤشرات الكيميائية الحيوية للدم والبول
    1. بعد 8 أسابيع من إعطاء الدواء المستمر ، اجمع البول لمدة 24 ساعة من الفئران باستخدام قفص استقلابي ، وقم بالطرد المركزي للبول الذي تم جمعه عند 7,992 × جم لمدة 10 دقائق ، وقم بإزالة المادة الطافية ، وقياس مستوى بروتين البول باستخدام مجموعة اختبار البروتين البولي.
    2. أمسك الجزء الخلفي من الماوس باليد غير المهيمنة لإصلاح الماوس واستخدم الإصبع الصغير وإصبع البنصر من نفس اليد غير المهيمنة لإصلاح ذيل الماوس. تعقيم طرف ذيل الفأر بكرات قطنية ببخار اليود. باستخدام اليد المهيمنة ، أمسك إبرة جمع الدم لثقب طرف ذيل الفأر بسرعة ، واضغط من جذر ذيل الفأر إلى طرف الذيل ، وقم بإسقاط الدم على ورقة اختبار جلوكوز الدم.
    3. باستخدام اليد غير المهيمنة ، أمسك ذيل الفأر ، مع تأمين منطقة الكتف بالإبهام والسبابة ، مع التأكد من أن بطن الفأر متجها لأعلى. باليد المهيمنة ، امسك حقنة سعة 1 مل مليئة بالصوديوم الفينوباربيتال. أدخل الإبرة (بعمق 3-5 مم) في تجويف البطن بزاوية 30-45 درجة ، مستهدفا المنطقة الواقعة بين السرة والأطراف الخلفية ، مع توجيه الإبرة نحو الرأس. اسحب مكبس المحقنة ببطء للتحقق من وجود دم ؛ إذا تم شفط الدم ، فقم بإعادة وضع الإبرة وفقا لذلك.
    4. قم بحقن محلول البنتوباربيتال الصوديوم ببطء لضمان الإدارة المتساوية ، واسحب المحقنة بعد اكتمال الحقن. انتظر لمدة 10 دقائق ، ثم باستخدام ملقط في اليد المهيمنة ، اضغط برفق على أصابع الطرف الخلفي للفأر للتحقق من الاستجابة. في حال استمرار ملاحظة الاستجابة، يجب تطبيق جرعة إضافية صغيرة (10 ملغ/كغ) حسب الحاجة.
      ملاحظة: بافتراض أن الفأر يزن 60 جراما وأن محلول الفينوباربيتال هو 1٪ وزن / حجم ، فإن 0.06 مل هي الجرعة الإضافية التي يجب إعطاؤها في حالة حدوث أي استجابة.
    5. استخدم المقص لتقليم الشعيرات والشعر حول عيون الفئران ، باستخدام اليد غير المهيمنة للضغط على الجلد حول العينين التي ستتم إزالة مقل العيون منها حتى تبرز مقل العيون. قم بتعقيم الجلد حول مقل العيون بالإيثانول ، واستخدم الملقط لإخراج مقل العيون بسرعة بحيث يتساقط الدم في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة (1.5-2 مل) ، واحتضان الأنابيب في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق ، والطرد المركزي للأنابيب لمدة 10 دقائق عند 7،992 × جم ، واستخرج المحلول الطافي.
    6. قياس مستويات التعبير عن الكرياتينين في الدم (Scr) ، ونيتروجين اليوريا في الدم (BUN) ، والألبومين (ALB) ، وألانين أمينوترانسفيراز (ALT) ، وأسبارتات أمينوترانسفيراز (AST) ، والدهون الثلاثية (TG) ، والكوليسترول الكلي (TC) في المصل وفقا لتعليمات المجموعة.
  2. فصل الأنسجة الكلوية
    1. بعد أخذ عينات الدم ، قم بتثبيت الفئران على الصفيحة الجراحية في وضع ضعيف ، وقم بقص شعر المنطقة الصدرية الأمامية للفئران ، وقم بتعقيم المنطقة الصدرية الأمامية باستخدام الإيثانول ، وقطع جلد البطن بالمقص ، وادفع الأمعاء الدقيقة والغليظة جانبا لكشف الكلى.
    2. قم بإزالة أنسجة الكلى من الفأر ، واستخدم ملقطا مرقئا لفصل السمحاق بشكل صريح ، ووضع الكلية اليسرى في فريزر -80 درجة مئوية للتخزين والكلية اليمنى في أنبوب سعة 20 مل يحتوي على محلول بارافورمالدهيد 4٪ لإصلاح الكلى.
    3. قم بإزالة الكلى اليمنى من الفورمالديهايد بعد 24 ساعة ، واشطفها لفترة وجيزة بالماء المقطر لمدة 5 دقائق ، وقم بتجفيفها باستخدام تدرج من الإيثانول اللامائي (100٪ → 95٪ → 85٪ → 75٪ ، 5 دقائق لكل منهما) ، قم بشفافية باستخدام الزيلين المتدرج (2 × 10 دقائق) ، وقم بتضمينه في شمع البارافين ، واترك كتل الشمع تتصلب في درجة حرارة الغرفة21. ثم ضعه في الفريزر -20 درجة مئوية طوال الليل.
    4. قم بإزالة كتلة الشمع ، وقم بتقطيعها بسمك 3 ميكرومتر ، وضعها في الماء لتفتح ، ثم قم بصيدها بشريحة ، وضعها في فرن بدرجة حرارة ثابتة عند 40 درجة مئوية لتخبز لمدة 30 دقيقة ثم قم بتخزينها للتحليل اللاحق
  3. التحليل النسيجي المرضي الكلوي
    1. قم بإزالة الكلية اليمنى ، وقم بإزالة الشمع من الزيلين المتدرج وتجفيف الإيثانول اللامائي على النحو الوارد أعلاه (الخطوة 3.2.3) ، واغسلها بالماء المقطر.
    2. قم بإجراء التلوين وفقا لتعليمات صبغة الهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E) ، وصبغة الأحماض الدورية (PAS) ، ومجموعات تلطيخ ماسون.
    3. قم بإجراء تجفيف الإيثانول اللامائي المتدرج وشفافية الزيلين مرة أخرى كما في الخطوة 3.2.3.
    4. بعد التجفيف في درجة حرارة الغرفة ، قم بتركيب أقسام المناديل على الشرائح باستخدام غطاء باستخدام اللثة المحايدة كوسيط تثبيت. راقب الشرائح وقم بتصويرها تحت مجهر ضوئي بتكبير 400 ضعف.
  4. التحليل الكيميائي المناعي للأنسجة الكلوية
    1. قم بإزالة الكلية اليمنى ، وإزالة الشمع وتجفيف الأقسام كما هو موضح في الخطوة 3.2.3 ، وضعها في محلول عازل سترات الصوديوم 10 ملي مولار (درجة الحموضة 6.0) ، وتسخينها (125 درجة مئوية ، 103 كيلو باسكال) لمدة 5 دقائق لإصلاح المستضد. بعد 10 دقائق ، قم بإزالة الأقسام ، واتركها تبرد إلى درجة حرارة الغرفة ، واغسلها 3 × 5 دقائق في 1x PBS.
    2. ضع الأقسام في محلول بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 3٪ لمدة 10 دقائق لمنع البيروكسيديز الداخلي واغسلها 3 × 5 دقائق في PBS.
    3. أضف 10٪ مصل الماعز بالتنقيط إلى الأقسام ، مع التأكد من أن مصل الماعز يغطي القسم بأكمله بالتساوي. ضع الأقسام في صندوق مبلل ، واحتضنها عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة ، واغسلها 3 × 5 دقائق باستخدام PBS.
    4. أضف الأجسام المضادة الأولية COI-I (1: 200) ، α-SMA (1: 200) ، WT-1 (1: 200) ، CD2AP (1: 200) بالتنقيط (انظر جدول المواد) ، واحتضانها في صندوق مبلل عند 4 درجات مئوية في الثلاجة طوال الليل.
    5. قم بإزالة القسم ، واغسله باستخدام PBS 3 × 5 دقائق ، وأضف الجسم المضاد الثانوي (1: 3,000) بالتنقيط ، واحتضن عند 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة ، واغسله باستخدام PBS لمدة 3 × 5 دقائق.
    6. أضف محلول تطوير الألوان 3,3'-diaminobenzidine (DAB) لمدة 10 دقائق ، واغسل محلول تطوير اللون بالماء المقطر ، واحتضنه ب 100 ميكرولتر من الهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة ، واشطفه بالماء المقطر لمدة 5 دقائق.
    7. قم بتجفيف التجفيف والشفافية والختم كما هو موضح في الخطوة 3.2.3 ، وجمع الصور باستخدام المجهر البصري.
  5. تحليل مقايسة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR)
    1. خذ ~ 100 مجم من أنسجة الكلى المجمدة في أنبوب الخالط سعة 10 مل ، وطحنها بمدقة جيدا حتى لا تكون هناك كتلة نسيجية واضحة ، ثم أضف 1 مل من كاشف استخراج الحمض النووي الريبي للتجانس.
    2. أضف 250 ميكرولتر من الكلوروفورم، ورجها في خلاط دوامة لمدة 10 ثوان، واحتضنها على الجليد لمدة 5 دقائق، وقم بالطرد المركزي عند 15,984 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية، ثم قم بإخراج الطور المائي العلوي إلى أنبوب جديد.
    3. أضف 500 ميكرولتر من الأيزوبروبانول إلى المرحلة المائية ، واخلطها جيدا باستخدام خلاط دوامة لمدة 10 ثوان ، واحتضن الخليط على الثلج لمدة 5 دقائق. بعد ذلك ، جهاز الطرد المركزي عند 15,984 × جم لمدة 10 دقائق. قم بإزالة المادة الطافية بعناية ، واغسل حبيبات الحمض النووي الريبي ب 1 مل من 75٪ من الإيثانول. بعد دوامة قصيرة ، جهاز الطرد المركزي مرة أخرى عند 15,984 × جم لمدة 10 دقائق. تخلص من الإيثانول واترك حبيبات الحمض النووي الريبي تجف في الهواء في درجة حرارة الغرفة.
    4. أضف 30 ميكرولتر من ماء ثنائي إيثيل بيروكربونات لإذابة الحمض النووي الريبي ، وقم بقياس امتصاص محلول الحمض النووي الريبي عند 260 نانومتر و 280 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي لحساب تركيز الحمض النووي الريبي.
      ملاحظة: يتم تقييم نقاء الحمض النووي الريبي بنسبةA 260 / A280 . يجب أن تكون نسبة Aالمثالية 260 / A280 بين 1.8 و 2.0 ، مما يشير إلى نقاء الحمض النووي الريبي الجيد. إذا كانت النسبة أقل من 1.8 ، فقد يشير ذلك إلى وجود تلوث بالبروتين أو الفينول ، ويلزم مزيد من التنقية ، مثل إجراء استخراج إضافي للفينول كلوروفورم أو ترسيب الإيثانول لإزالة الملوثات.
    5. امزج 3 ميكروغرام من إجمالي الحمض النووي الريبي ، و 4 ميكرولتر من مزيج ممسحة 4 gDNA ، و ddH2O الخالي من RNase إلى حجم نهائي قدره 16 ميكرولتر ، وجهاز طرد مركزي عند 1،250 × جم لمدة 10 ثوان ، واحتضانه عند 42 درجة مئوية لمدة دقيقتين. أضف 4 ميكرولتر من النسخ العكسي 5x إلى 16 ميكرولتر من المحلول أعلاه، وجهاز الطرد المركزي عند 1,250 × جم لمدة 10 ثوان. قم بتنفيذ برنامج النسخ العكسي عند 50 درجة مئوية (15 دقيقة) → 85 درجة مئوية (5 ثوان) → 4 درجات مئوية (10 دقائق). قم بتخزين (كدنا) المركب عند -20 درجة مئوية.
    6. قم بإزالة محلول (كدنا) من الفريزر وقم بإجراء التمسخ المسبق عند 90 درجة مئوية (10 دقائق) ، متبوعا ب 40 دورة من 94 درجة مئوية (30 ثانية) → 60 درجة مئوية (30 ثانية) → 72 درجة مئوية (24 ثانية) ، وأخيرا ليز في حدود 95 درجة مئوية (15 ثانية) → 60 درجة مئوية (60 ثانية) → 95 درجة مئوية (350 ثانية ، 60 درجة مئوية تزداد تدريجيا إلى 95 درجة مئوية بمعدل 0.1 درجة مئوية / ثانية).
    7. احسب التعبير النسبي ل WT-1 و CD2AP و PI3K و AKT و NF-κB و IL-1β باستخدام طريقة 2-ΔΔCt بناء على قيمة Ct لكل عينة مع Gapdh كمرجع داخلي (ΔΔCt = قيمة Ct للجين المستهدف - قيمة Ct للجين المرجعي الداخلي) (انظر الجدول 2).
  6. تحليل مقايسة اللطخة الغربية (WB)
    1. خذ ~ 100 مجم من أنسجة الكلى المجمدة في أنبوب الخالط سعة 10 مل ، متبوعا ب 500 ميكرولتر من محلول التحلل (مثبط البروتياز: مثبط الفوسفاتيز: RIPA = 1: 1: 100) ، وطحنه بمدقة كافية حتى لا تكون هناك كتلة أنسجة واضحة.
    2. احتضان الأنبوب على الجليد لمدة 30 دقيقة ، وجهاز الطرد المركزي عند 15,984 × جم لمدة 10 دقائق ، واستنشق المادة الطافية.
    3. حدد تركيز البروتين لكل عينة باستخدام مقايسة BCA. بناء على التركيزات المقاسة، تقوم الماصة بتوزيع كميات متساوية من البروتين الكلي (على سبيل المثال، 30 ميكروغرام) من كل مجموعة في أنابيب جديدة وضبط الحجم النهائي باستخدام PBS لضمان الاتساق. بعد ذلك ، أضف 5x من محلول تحميل البروتين ، واغلي على حرارة 100 درجة مئوية لمدة 10 دقائق ، ثم أخرجه واتركه يبرد إلى درجة حرارة الغرفة.
    4. استخدم الرحلان الكهربائي للهلام SDS-PAGE بنسبة 12.5٪ لفصل البروتينات. أولا ، استخدم 80 فولت لجعل العينة تمر عبر هلام التركيز ببطء ، ثم اضبط الجهد على 120 فولت حتى تصل العينة إلى أسفل هلام الفصل ، وقم بإيقاف تشغيل الوحدة.
    5. انقع ورق الترشيح في المخزن المؤقت لنقل الغشاء ، واستخدم الملقط لتثبيت زاوية من غشاء PVDF وغمره في الميثانول لتنشيطه. قم بإزالة الجل ، واستخدم لوحا بلاستيكيا لقطع الجل المركز وقاع هلام الفصل ، وبعد ذلك ، وفقا لهيكل الساندويتش لورق الترشيح / الجل / غشاء PVDF / ورق الترشيح لإعداد جهاز نقل الغشاء (الجل كقطب سالب ، غشاء PVDF كقطب موجب) ، ضع الإعداد في خزان نقل غشاء مملوء بمخزن نقل مبرد مسبقا ، قم بإحاطتها بمكعبات ثلج للحفاظ على درجة حرارة منخفضة ، وقم بإجراء النقل بتيار ثابت يبلغ 200 مللي أمبير.
      ملاحظة: حدد وقت النقل وفقا للوزن الجزيئي للبروتين (كلما زاد الوزن الجزيئي ، زاد وقت النقل).
    6. ضع غشاء PVDF في المخزن المؤقت للحجب ، وقم بهز المخزن المؤقت للحجب لمدة 90 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، واغسله باستخدام TBST (50 مل من 20x TBS و 0.5 مل من Tween-20 لكل لتر من TBST) لمدة 3 × 5 دقائق.
    7. باستخدام الجسم المضاد الأولي المخفف المخفف للأجسام المضادة: WT-1 (1: 1,000) ، CD2AP (1: 1,000) ، P-PI3K (1: 1,000) ، P-AKT (1: 1,000) ، P-NF-κB (1: 1,000) ، و IL-1β (1: 1,000) ، أضف الجسم المضاد الأساسي على غشاء PVDF واحتضانه في صندوق مبلل في ثلاجة 4 درجات مئوية طوال الليل (انظر جدول المواد).
    8. قم بإزالة غشاء PVDF من الثلاجة 4 درجات مئوية ، واغسله باستخدام TBST لمدة 3 × 5 دقائق ، باستخدام الجسم المضاد الثانوي المخفف المخفف للأجسام المضادة الثانوية (1: 10000) ، أضف احتضان الجسم المضاد الثانوي في درجة حرارة الغرفة لمدة 60 دقيقة ، واغسله باستخدام TBST لمدة 3 × 5 دقائق ، ضع غشاء PVDF في جهاز تصوير التلألؤ الكيميائي ، وأضف بشكل موحد سائل مضيء ECL بالتنقيط (أ: ب = 1: 1).

4. تحليل علم الأدوية الشبكي ل YHT لعلاج DKD

  1. فحص المكونات النشطة وأهداف YHT
    1. تحديد المكونات النشطة ل Radix Rehmanniae Praeparata و Morindae Officinalis Radix و Poria و Schisandra Chinensis باستخدام قاعدة بيانات TCMSP (https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php) و Maitake من قاعدة بيانات BATMAN-TCM (http://bionet.ncpsb.org/batmantcm). حدد التوافر البيولوجي عن طريق الفم (OB) ≥ 30٪ والتشابه مع الدواء (DL) ≥ 0.18 كمعيار فحص لتحديد المكونات النشطة.
    2. ابحث في قاعدة بيانات TCMSP (https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php) عن أهداف عمل المكونات النشطة من TCMs المذكورة أعلاه.
    3. قلل من التركيز على أهداف المكونات النشطة المذكورة أعلاه ودمجها في قائمة لمزيد من التحليل. توحيد أسماء الأهداف باستخدام قاعدة بيانات بروتين Uniprot (https://www.uniprot.org).
  2. بناء الشبكة المستهدفة للمكونات النشطة ل YHT
    1. استيراد المكونات النشطة والأهداف المقابلة لها في البرامج: قم بإنشاء شبكة "هدف المكون النشط" عن طريق تحديد ملف | استيراد | الشبكة وتحميل البيانات ذات الصلة.
    2. إجراء تحليل مخطط الشبكة بالانتقال إلى الأدوات | تحليل الشبكة | تحليل الشبكة لتصور العلاقات بين الأدوية والمكونات النشطة والأهداف والأمراض. في تصور الشبكة ، تمثل العقد المكونات النشطة ، وتمثل الحواف التفاعلات بين المكونات النشطة والأهداف.
  3. فحص الأهداف المتعلقة ب DKD
    1. باستخدام مرض الكلى السكري كمصطلح بحث وتعيين الأنواع على أنها بشرية ، قم بفحص الأهداف المتعلقة ب DKD من قواعد البيانات التالية: قاعدة بيانات GeneCards (https://www.genecards.org) ؛ قاعدة بيانات OMIM (http://www.omim.org) ؛ قاعدة بيانات TTD (https://www.ttd.cn)؛ قاعدة بيانات مصرف الأدوية (http://www.drugbank.ca)؛ قاعدة بيانات DisGeNET (http://www.disgenet.org).
    2. بعد الحصول على النتائج من قواعد البيانات الخمس، قم بدمجها في جدول بيانات وإزالة التكرارات باستخدام وظيفة إزالة التكرارات ضمن قائمة البيانات ، مع التأكد من الاحتفاظ بالأسماء الفريدة للأهداف المتعلقة ب DKD فقط.
  4. بناء PPI (تفاعل البروتين والبروتين) وفحص الأهداف الأساسية
    1. استخدم برنامج جداول البيانات لتحديد أهداف تقاطع YHT و DKD عن طريق إدخال قائمة أهداف YHT في عمود واحد وقائمة أهداف DKD في عمود آخر. قم بتطبيق التنسيق الشرطي لتمييز الإدخالات الشائعة في كلا العمودين، وبالتالي تحديد أهداف التقاطع.
    2. افتح موقع قاعدة بيانات السلسلة على الويب (https://cn.string-db.org/)، وحدد إدخال | لصق/تحميل لاستيراد البيانات دفعة واحدة، وتعيين الحد الأدنى درجة ≥ 1 لتصفية الأهداف المجانية (الأهداف بدون تفاعلات) في الشبكة.
    3. حدد ملف | استيراد | قم بالشبكة ، واستيراد أهداف التقاطع التي تمت تصفيتها إلى البرنامج لإنشاء التصور النهائي.
    4. انتقل إلى تحليل الشبكة | تحليل الشبكة، وتصفية الأهداف الأساسية ل YHT-DKD بناء على قيمة الدرجة.
  5. التحليل الوظيفي لعلم الأنطولوجيا الجينية (GO) وموسوعة كيوتو للجينات والجينوم (KEGG) تحليل مسار التخصيب
    1. افتح منصة Metascape من خلال زيارة http://metascape.org/gp/index.html، وحدد بدء التحليل للبدء، والصق قائمة الأهداف ل YHT وDKD في مربع الإدخال في قسم التحليل المخصص ، واضبط الأنواع على Homo sapiens من القائمة المنسدلة، واختر التحليل المخصص، واضبط عتبة P-value على <0.01، وانقر فوق إرسال لتشغيل التحليل.
    2. بعد إرجاع النتائج من Metascape، انتقل إلى http://www.bioinformatics.com.cn/، وحدد أدوات | إثراء مصطلح GO، والصق مصطلحات GO من النتائج، وانقر فوق إرسال لإنشاء مخططات فقاعية. تصور أفضل 10 مصطلحات GO عن طريق فرزها بناء على قيمة P.
    3. قم بفرز مسارات KEGG بناء على قيمة P من نتائج تحليل Metascape. انتقل إلى موقع الويب الخاص بعلم الأحياء الدقيقة نفسه (http://www.bioinformatics.com.cn/)، وحدد إثراء مسار go kegg، والصق أهم 10 مسارات KEGG المحددة، وانقر فوق إرسال لتصور مخططات فقاعة KEGG.

5. التحليل الإحصائي

  1. إذا اتبعت البيانات توزيعا طبيعيا وكانت الفروق متجانسة ، فاستخدم ANOVA أحادي الاتجاه. إذا لم تكن الفروق متجانسة ، فاستخدم اختبار Dunnett's T3 أو اختبار t عينة مستقلة.
  2. بالنسبة للبيانات التي لا تتبع توزيعا عاديا ، استخدم اختبار مجموع الرتبة من الأساليب غير المعلمية.
  3. ضع في اعتبارك P < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

النتائج

تحسن في نسبة الجلوكوز في الدم ووظائف الكبد والكلى واضطرابات التمثيل الغذائي للدهون في الفئران DKD
بعد 8 أسابيع من الإعطاء ، أدت جرعات مختلفة من YHT إلى تقليل مستويات جلوكوز الدم العشوائي بشكل كبير ، و 24 ساعة UTP ، و Scr ، و BUN ، مما أدى إلى تحسين وظائف الكلى (الشكل 1A-D) ؛ زيادة مستوى ALB ؛ خفض مستويات ALT و AST ؛ تعزيز وظائف الكبد (الشكل 1E-G) ؛ خفض مستويات TC و TG ؛ وتحسين تنظيم التمثيل الغذائي للدهون (الشكل 1H ، I). أشارت النتائج المذكورة أعلاه إلى أن YHT كان له تأثيرات وقائية على نسبة الجلوكوز في الدم ووظائف الكبد والكلى وتنظيم الدهون.

تحسين إصابة الأنسجة المرضية الكلوية في الفئران DKD
لاختبار ما إذا كان YHT يمكن أن يحسن إصابة الكلى في فئران DKD ، تم فحص مدى الإصابة المرضية في الأنسجة الكلوية باستخدام تلطيخ H & E و PAS و Masson ، بالإضافة إلى IHC. كشف تلطيخ H & E و PAS عن ضمور الكبيبات ، واتساع منطقة الغلالة البيضاء ، وتورم وانفصال الخلايا الظهارية الأنبوبية ، وتسلل الخلايا الالتهابية الخلالية ، وترسب الجليكوجين الكبيبي الواضح في مجموعة MOD (الشكل 2 أ ، ب). أظهر تلطيخ ماسون زيادة كبيرة في ألياف الكولاجين الأزرق في الكلى من مجموعة MOD مقارنة بمجموعة CON (الشكل 2C ، D). أظهرت IHC أن النسب المئوية للمناطق الإيجابية ل COI-I و α-SMA كانت أعلى بشكل ملحوظ في مجموعة MOD منها في مجموعة CON (الشكل 2E-G). في المقابل ، بعد استخدام YHT و POS ، تم تخفيف الضمور الكبيبي ، واتساع المنطقة المربوطة ، وتورم وتساقط الخلايا الظهارية الأنبوبية ، ودرجة تسلل الخلايا الالتهابية الخلالية ، وترسب الجليكوجين الكبيبي بشكل كبير. تم تقليل مساحة ألياف الكولاجين الأزرق بشكل كبير ؛ وانخفضت النسب المئوية للمناطق الإيجابية ل COI-I و α-SMA بشكل ملحوظ. أشارت النتائج المذكورة أعلاه إلى أن YHT يمكن أن يخفف من الإصابة المرضية الكلوية والتليف الكلوي في الفئران DKD.

توهين إصابة الخلايا البودوية في الفئران DKD
لوحظ تلف خلايا القدم في فئران DKD بواسطة IHC و PCR و WB. أظهرت نتائج IHC أن مستويات التعبير عن بروتينات العلامات الوظيفية لخلية القدم ، CD2AP و WT-1 ، انخفضت بشكل ملحوظ في مجموعة MOD مقارنة بمجموعة CON ، مما يشير إلى تلف خلايا القدم الكلوية. زاد علاج YHT من مستويات التعبير عن CD2AP و WT-1 وقلل من الضرر الذي لحق بخلايا القدم (الشكل 3A-C). أظهرت نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل و WB أن مستويات التعبير النسبي عن mRNA والبروتين لبروتينات العلامات الوظيفية لخلية القدم ، CD2AP و WT-1 ، انخفضت بشكل ملحوظ في مجموعة MOD مقارنة بمجموعة CON ، وزادت مستويات mRNA النسبية وتعبير البروتين ل CD2AP و WT-1 بشكل ملحوظ بعد علاج YHT (الشكل 3D-H). أشارت النتائج المذكورة أعلاه إلى أن YHT يمكن أن يخفف من إصابة الخلايا البودوية في فئران DKD.

توضيح الأهداف المحتملة ومسارات الإشارات المرتبطة بتأثيرات YHT على DKD عبر علم الأدوية الشبكي
تم فحص المكونات النشطة ل YHT (291) من خلال قواعد بيانات TCMSP و BATMAN-TCM ، والتي استوفت 39 مكونا نشطا منها معايير OB ≥ 30٪ و DL ≥ 0.18. تم البحث عن المكونات النشطة في قاعدة البيانات لتحديد أهدافها ، وبعد دمج وحذف القيم المكررة ، تم الحصول على ما مجموعه 303 أهداف (الشكل 4 أ). بعد دمج نتائج خمس قواعد بيانات ، بما في ذلك GeneCards و OMIM و TTD و Drugbank و DisGeNET ، وإزالة القيم المكررة ، تم أخيرا الحصول على 1,867 هدفا متعلقا ب DKD. بعد ذلك ، تم استخدام http://www.bioinformatics.com.cn/ لتقاطع المكونات النشطة ل YHT التي تم فحصها مع أهداف DKD ، مما أدى إلى 84 هدفا متقاطعا (الشكل 4 ب). تم استيراد هذه الأهداف ال 84 إلى برنامج Cytoscape لرسم مخطط شبكة PPI ، وتم تحديد الأهداف الرئيسية المحتملة لعلاج YHT ل DKD ، بما في ذلك AKT و IL-1 β و CASP3 و APOE و JUN (الشكل 4C). أسفر تحليل التخصيب الوظيفي GO عن ما مجموعه 1,246 عنصرا ، مما يشير إلى أن YHT قد يمارس تأثيرات علاجية على DKD من خلال تنظيم العمليات البيولوجية مثل الاستجابة للهرمون ، والوظائف الجزيئية بما في ذلك نشاط تجانس البروتين ونشاط oxidoreductase ، بالإضافة إلى المكونات الخلوية مثل أطواف الغشاء والمجالات الدقيقة الغشائية (الشكل 4D). تم الحصول على ما مجموعه 263 نتيجة تخصيب KEGG ، والتي تشمل بشكل أساسي مسار إشارات AGE-RAGE في مجمعات مرضى السكري ، وأمراض الكبد الكحولية ، ومسار الدهون وتصلب الشرايين. بناء على قيمة P ، تم اختيار أفضل 10 نتائج لرسم مخطط فقاعي تصور KEGG (الشكل 4E). يتم إثراء مسار إشارات AGE-RAGE بشكل كبير بمجمعات مرضى السكري ، ويتم إثراء الأهداف الأساسية المتعددة في PPI ، مثل PI3K و AKT و IL-1β ، في هذا المسار. لذلك ، تم اختيار مسار الإشارات هذا للتحقق لاحقا.

توهين إصابة الخلايا البودوية عن طريق تثبيط مسار إشارات PI3K / AKT / NF-κB
تم فحص مستويات التعبير عن الجينات والبروتينات المتعلقة بمسار إشارات PI3K / AKT / NF-κB بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل و WB. أظهرت نتائج تفاعل البوليميراز المتسلسل أن مستويات التعبير النسبية عن mRNA ل Pi3k و Akt و Nf-κb و Il-1β في مجموعة MOD كانت مرتفعة بشكل ملحوظ مقارنة بمجموعة CON وانخفضت بشكل ملحوظ بعد إعطاء YHT (الشكل 5A-D). أظهرت نتائج WB أن مستويات البروتين النسبية ل P-PI3K و P-AKT و P-NF-κB و IL-1β كانت أيضا مرتفعة بشكل ملحوظ في مجموعة MOD مقارنة بمجموعة CON ، بينما انخفضت بشكل ملحوظ بعد إعطاء YHT (الشكل 5E-I). اقترحت هذه النتائج أيضا أن YHT يمكن أن يثبط مسار إشارات PI3K / AKT / NF-κB عن طريق تخفيف إصابة الخلايا البودوية في فئران DKD.

figure-results-1
الشكل 1: تحسن في نسبة الجلوكوز في الدم ووظائف الكبد والكلى واضطرابات التمثيل الغذائي للدهون في الفئران DKD. آثار YHT على (أ) جلوكوز الدم العشوائي ؛ (B-D) وظائف الكلى ، بما في ذلك بروتين البول لمدة 24 ساعة ، والكرياتينين في الدم ، ونيتروجين اليوريا. (E-G) وظيفة الكبد، بما في ذلك ألبومين المصل وألانين أمينوترانسفيراز وأسبارتات أمينوترانسفيراز. و (H ، I) تنظيم التمثيل الغذائي للدهون ، بما في ذلك الكوليسترول الكلي والدهون الثلاثية. يتم التعبير عن البيانات كوسائل ± الانحرافات المعيارية لست عينات مستقلة ، مقارنة بالمجموعة الفارغة ، * ص < 0.05 ، ** ص < 0.01 ، *** ص < 0.001 ، ومقارنة بمجموعة النموذج ، # p < 0.05 ، # # p < 0.01 ، ### p < 0.001 ، يتم استخدام هذه الرموز الإحصائية باستمرار في جميع الأشكال. الاختصارات: YHT = yinhuo Tang ؛ DKD = مرض الكلى السكري. ALB = الألبومين. ALT = ألانين أمينوترانسفيراز. AST = أسبارتات أمينوترانسفيراز. TC = الكوليسترول الكلي. TG = الدهون الثلاثية. CON = مجموعة التحكم ؛ وزارة الدفاع = مجموعة النموذج ؛ نقاط البيع = فالسارتان مجموعة التحكم الإيجابية. YH-L = مجموعة الجرعات المنخفضة من YHT ؛ YH-M = مجموعة الجرعة المتوسطة من YHT ؛ YH-H = مجموعة الجرعات العالية من YHT. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-2
الشكل 2: تحسين الضرر النسيجي المرضي للكلى في فئران DKD. (أ ، ب) الأنسجة الكلوية عن طريق تلطيخ H & E و PAS (شريط المقياس = 20 ميكرومتر) ؛ (ج) تلطيخ ماسون لمراقبة درجة التليف الكلوي و (د) التحليل شبه الكمي باستخدام برنامج ImageJ ؛ (E-G) تحليل شبه كمي لمستويات التعبير النسبية ل COI-I و α-SMA في الأنسجة الكلوية باستخدام برنامج IHC و ImageJ (شريط المقياس = 20 ميكرومتر). الاختصارات: YHT = yinhuo Tang ؛ DKD = مرض الكلى السكري. H & E = صبغة الهيماتوكسيلين والإيوسين. PAS = صبغة حمض شيف دورية. COI-I = الكولاجين من النوع الأول ؛ α-SMA = أكتين العضلات الملساء α ؛ CON = مجموعة التحكم ؛ وزارة الدفاع = مجموعة النموذج ؛ نقاط البيع = فالسارتان مجموعة التحكم الإيجابية. YH-L = مجموعة الجرعات المنخفضة من YHT ؛ YH-M = مجموعة الجرعة المتوسطة من YHT ؛ YH-H = مجموعة الجرعات العالية من YHT. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-3
الشكل 3: توهين إصابة الخلايا البودوية في فئران DKD. (AC) اكتشفت IHC مستويات التعبير النسبية ل CD2AP و WT-1 في الأنسجة الكلوية (شريط المقياس = 20 ميكرومتر) ؛ (د ، ه) اكتشف تفاعل البوليميراز المتسلسل التعبير النسبي عن mRNA ل CD2AP و WT-1 في الأنسجة الكلوية ، وتم إجراء التحليل شبه الكمي باستخدام برنامج Image J. (ف-ح) اكتشف WB مستويات التعبير النسبي عن البروتين ل CD2AP و WT-1 في الأنسجة الكلوية ، وتم إجراء التحليل شبه الكمي باستخدام برنامج ImageJ. التحليل الكمي باستخدام برنامج Image J. الاختصارات: YHT = yinhuo Tang ؛ DKD = مرض الكلى السكري. IHC = الكيمياء المناعية; WB = النشاف الغربي ؛ CD2AP = البروتين المرتبط ب CD2 ؛ WT-1 = ورم ويلمز 1 ؛ CON = مجموعة التحكم ؛ وزارة الدفاع = مجموعة النموذج ؛ نقاط البيع = فالسارتان مجموعة التحكم الإيجابية. YH-L = مجموعة الجرعات المنخفضة من YHT ؛ YH-M = مجموعة الجرعة المتوسطة من YHT ؛ YH-H = مجموعة الجرعات العالية من YHT. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-4
الشكل 4: التحليل الدوائي الشبكي ل YHT لعلاج DKD. (أ) مخطط المرض النشط المستهدف ل YHT لعلاج DKD. (ب) مخطط Venn للأهداف المتقاطعة ل YHT و DKD. يمثل اللون البرتقالي عدد الأهداف ذات الصلة ب DKD. يمثل اللون الأخضر عدد الأهداف العلاجية للمكونات النشطة YHT ؛ ويمثل الجزء المتقاطع عدد الأهداف المتقاطعة (عدد أهداف YHT ل DKD). (ج) مخطط شبكة PPI للأهداف المتقاطعة ل YHT و DKD. (د) تحليل تخصيب GO لأهم 10 أهداف ل YHT لعلاج DKD. (ه) تحليل تخصيب KEGG لأهم 10 غايات لعلاج YHT ل DKD. الاختصارات: YHT = yinhuo Tang ؛ DKD = مرض الكلى السكري. PPI = تفاعل البروتين والبروتين. GO = علم الوجود الجيني. KEGG = موسوعة كيوتو للجينات والجينوم. CON = مجموعة التحكم ؛ وزارة الدفاع = مجموعة النموذج ؛ نقاط البيع = فالسارتان مجموعة التحكم الإيجابية. YH-L = مجموعة الجرعات المنخفضة من YHT ؛ YH-M = مجموعة الجرعة المتوسطة من YHT ؛ YH-H = مجموعة الجرعات العالية من YHT. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-5
الشكل 5: توهين إصابة الخلايا البودوية عن طريق تثبيط مسار إشارات PI3K / AKT / NF-κB. (أ-د) تفاعل البوليميراز المتسلسل للكشف عن التعبير النسبي عن الحمض النووي الريبي المرسال ل Pi3k و Akt و Nf-κb و Il-1β في الأنسجة الكلوية. (E-I) WB للكشف عن مستويات التعبير النسبي عن البروتين ل P-PI3K و P-AKT و P-NF-κB و IL-1β في الأنسجة الكلوية ، وتم إجراء التحليل شبه الكمي باستخدام برنامج ImageJ. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الجدول 1: تكوين Yinhuo Tang. الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 2: تفاصيل بادئات qRT-PCR. الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

المناقشة

تتمثل إحدى الخطوات الحاسمة في هذا البروتوكول في استخدام علم الأدوية الشبكي لتحديد المكونات النشطة ل YHT والتنبؤ بتفاعلاتها مع الأهداف المتعلقة ب DKD. تتضمن هذه الخطوة تحليل البيانات البيولوجية واسعة النطاق باستخدام أدوات المعلوماتية الحيوية مثل قواعد البيانات (على سبيل المثال ، TCMSP و DrugBank و GeneCards) لرسم المسارات الجزيئية والشبكات البيولوجية المحتملة المتأثرة ب YHT. تبع هذا التنبؤ التحقق التجريبي من خلال النماذج الحيوانية ل DKD ، حيث تم اختبار التأثيرات المفترضة ل YHT على هذه المسارات. يعد دمج التنبؤات الحسابية مع البيانات جانبا مهما من نهجنا ، لأنه يعزز موثوقية النتائج التي توصلنا إليها ويسد الفجوة بين التنبؤات النظرية والنتائج العملية. بالإضافة إلى ذلك ، يعد استخدام النماذج الحيوانية خطوة حاسمة أخرى في التحقق من صحة الآثار العلاجية ل YHT. يحاكي DKD في عن كثب تطور المرض البشري ، مما يسمح بإجراء تقييم فعال لتأثير YHT على كل من التلف الكبيبي والتليف الكلوي. تعد المراقبة الدقيقة لعلامات وظائف الكلى مثل Scr و BUN والبيلة البروتينية ، جنبا إلى جنب مع التقييمات النسيجية المرضية ، أمرا ضروريا لتقييم الفعالية العلاجية ل YHT.

بينما يجمع بروتوكولنا بين الأساليب الحسابية والتجريبية القوية ، إلا أن هناك العديد من القيود. أولا ، يعتمد نهج علم الأدوية الشبكي بشكل كبير على البيانات المتاحة في قواعد البيانات العامة ، وقد تكون هناك تحيزات أو معلومات مفقودة تتعلق بمكونات معينة من YHT أو المسارات المتعلقة ب DKD. على الرغم من أننا قمنا بتحويل قواعد بيانات متعددة للتخفيف من هذه المشكلة ، إلا أنه لا يزال يتم التغاضي عن بعض التفاعلات ذات الصلة. ثانيا ، استكشفت هذه الدراسة فقط آلية YHT في تقليل إصابة الخلايا النباتية على مستوى التجريبية ، وهناك حاجة إلى تجارب خلوية ودراسات سريرية كبيرة للتحقق من صحة النتائج التجريبية. أخيرا ، أظهر علم الأدوية الشبكي أن علاج DKD باستخدام YHT كان مرتبطا أيضا بأمراض الكبد الكحولية ، واستقلاب الدهون وتصلب الشرايين ، وتنظيم تحلل الدهون في الخلايا الشحمية. تحققت هذه الدراسة فقط مما إذا كان تعديل مسار إشارات PI3K / AKT / NF-κB بواسطة YHT يمكن أن يؤخر تقدم DKD. وتحتاج النتائج إلى مزيد من الاستكشاف.

يعد مسار الإشارات PI3K / AKT / NF-κB مسارا مهما للإشارات داخل الخلايا يشارك في تنظيم مجموعة متنوعة من العمليات البيولوجية مثل نمو الخلايا والتكاثر والبقاء على قيد الحياة والاستجابات الالتهابية22. أظهرت الدراسات أنه يلعب دورا مهما في تطور إصابة الخلايا القملية23،24. NF-κB هو مكون مهم في اتجاه مجرى النهر لمسار PI3K / Akt ويشارك في نقل مجموعة متنوعة من الإشارات داخل الخلايا والتعبير عن جينات متعددة. يؤدي تثبيط مسار إشارات PI3K / AKT إلى تدهور البروتين المثبط ل NF-κB IκB ، والذي بدوره يؤدي إلى فسفرة NF-κB ودخوله إلى النواة ، وإنتاج مجموعة متنوعة من الكيموكينات والعوامل الالتهابية ، مما يؤدي إلى إصابة الخلايا البودية والتليف الخلالي الكلوي25. أظهرت بعض الدراسات أن تثبيط تنشيط مسار إشارات PI3K / AKT / NF-κB يمكن أن يثبط بشكل فعال الاستجابات الالتهابية والتليف الكلوي ، وبالتالي يؤخر تطور DKD26.

أظهرت الدراسات أن اضطرابات التمثيل الغذائي للدهون تلعب دورا مهما في ظهور وتطور DKD27،28. غالبا ما يظهر مرضى DKD استقلاب دهني غير طبيعي ، بما في ذلك ارتفاع مستويات LDL و TG وتراكم الأحماض الدهنية. ترتبط هذه التشوهات ارتباطا وثيقا بالتغيرات المرضية مثل تصلب الكبيبات والتليف الأنبوبيالخلالي 29،30. تشير الأبحاث إلى أن اضطرابات التمثيل الغذائي للدهون يمكن أن تعزز تقدم DKD من خلال مسارات إشارات متعددة31،32. أولا ، يعد مسار إشارات mTOR مسارا رئيسيا في تنظيم عملية التمثيل الغذائي للدهون. يؤدي التنشيط المفرط إلى إصابة الخلايا البودوية والبيلة البروتينية33،34. يمكن أن تعزز البيئة الغنية بالدهون تراكم الدهون من خلال محور PI3K / AKT / mTOR ، مما يؤدي إلى موت الخلايا المبرمج للخلايا البودية ويؤدي في النهاية إلى تفاقم تدهور وظائف الكلى35،36،37. ثانيا ، بروتين كيناز المنشط ب AMP (AMPK) ، وهو منظم حاسم لعملية التمثيل الغذائي للطاقة الخلوية ، يحمي الكلى من الاضطرابات الأيضية عن طريق تعزيز أكسدة الأحماض الدهنية ، وتثبيط تخليق الدهون ، وتقليل السمية الدهنية38،39،40. يعتبر تعطيل AMPK آلية مهمة في تقدم DKD. أظهرت منشطات AMPK ، مثل الميتفورمين ، تأثيرات كبيرة وتمثل هدفا علاجيا واعدا لDKD 41.

أخيرا ، أظهرت الدراسات أن المستقبلات المنشطة بانتشار البيروكسيسوم α / γ (PPARα / γ) تلعب دورا أساسيا في تنظيم استقلاب الدهون و DKD42،43. يعزز تنشيط PPARα أكسدة الأحماض الدهنية ويقلل من تراكم الدهون في الكلى ، بينما يحسن PPARγ حساسية الأنسولين ويمارس تأثيرات مضادة للالتهابات44،45. أظهرت ناهضات PPAR ، مثل الفيبرات ، فوائد سريرية محتملة في تقليل البيلة البروتينية لدى مرضى DKD46. في الختام ، تؤثر اضطرابات التمثيل الغذائي للدهون على التقدم المرضي ل DKD من خلال مسارات إشارات متعددة. تشكل التفاعلات بين هذه المسارات شبكة مرضية معقدة. يمكن أن يوفر استهداف استقلاب الدهون استراتيجيات علاجية جديدة ل DKD.

عائلة الكاسباز (CASP) ، وهي عائلة من البروتياز الخاص بالسيستين ، هي مجموعة من البروتياز الموجودة على نطاق واسع في الخلايا وتشارك بشكل أساسي في تنظيم موت الخلايا المبرمج والاستجابات الالتهابية47،48. يشترك أفراد عائلة CASP في أوجه التشابه الهيكلية وعادة ما يتواجدون على شكل زيموجين ، والتي يتم تنشيطها من خلال سلسلة من التفاعلات ، مما يؤدي إلى موت الخلايا المبرمج ، والحمى ، وعمليات موت الخلايا المبرمجةالأخرى 49. من بينها ، CASP3 ، وهو عضو في عائلة الكاسباز (CASP) ذو بنية محفوظة موجودة عادة على شكل زيموجين ، هو بروتياز رئيسي في مرحلة تنفيذ موت الخلايا المبرمج الذي يحفز انقسام بروتينات خلوية معينة ، وبالتالي يلعب دورا مهما في تنظيم نمو الخلايا الطبيعي والحفاظ على التوازن الداخلي50،51. يعمل Caspase-8 كبادئ لشلالات موت الخلايا المبرمج ويشارك في تعديل الاستجابات الالتهابية من خلال تنشيط NPK ، وهو عامل رئيسي في تنظيم النمو الخلوي. يعمل Caspase-8 كبادئ لسلسلة موت الخلايا المبرمج ويشارك أيضا في تنظيم الاستجابة الالتهابية عن طريق تنشيط الحويصلات الالتهابية مثل NLRP1 و NLRP3 ، مما يؤدي إلى الإصابة بالحمى الخلوية52. استنادا إلى الدور المهم لمسار إشارات CASP في التوسط في موت الخلايا المبرمج والحمى في الخلايا المركبة ، هناك ما يبرر إجراء المزيد من الاستكشافات المتعمقة في العلاقة بين YHT و CASP3 / 8 والخلايا المعلوكة و DKD في المستقبل.

بالمقارنة مع مناهج اكتشاف الأدوية التقليدية التي تؤكد عادة على آليات محددة جيدا أحادية الهدف للوضوح التنظيمي والقدرة على التنبؤ ، تسمح استراتيجيتنا القائمة على علم الأدوية الشبكي باستكشاف منهجي للتفاعلات متعددة الأهداف المتأصلة في تركيبات الطب الصيني التقليدي مثل YHT. في حين أن هذا التعقيد يعكس الطبيعة الشاملة للطب الصيني التقليدي واتساع نطاق علاجه المحتمل ، فإنه يؤكد أيضا التحدي المتمثل في التأثيرات غير المقصودة خارج الهدف ، والتي تتطلب التحقق من الصحة والتفسير الدقيقين. من خلال النظر في الطبيعة متعددة الأهداف والمسارات المتعددة لعمل YHT ، نقدم فهما أكثر شمولية لآثاره العلاجية في علاج DKD. علاوة على ذلك ، يسمح علم الأدوية الشبكي بالتنبؤ بالتفاعلات الدوائية المحتملة والآثار الجانبية ، وهو أمر بالغ الأهمية لضمان سلامة وفعالية العلاجات متعددة المكونات. تركز علاجات DKD الحالية إلى حد كبير على إدارة الأعراض أو إبطاء التقدم بدلا من معالجة آليات المرض الأساسية. من خلال دمج أدوات المعلوماتية الحيوية الحديثة مع التحقق التجريبي ، تؤكد هذه الدراسة على أهمية بيولوجيا الأنظمة في تحسين فعالية الطب الصيني التقليدي ، لا سيما في الأمراض المزمنة مثل DKD.

بالنظر إلى المستقبل ، تحمل هذه التقنية وعدا كبيرا لتوسيع نطاق علم الأدوية الشبكي في أبحاث الطب الصيني التقليدي ، لا سيما في علاج الأمراض المعقدة مثل DKD. يمكن تطبيق نهجنا لاستكشاف تركيبات الطب الصيني التقليدي الأخرى أو الأعشاب الفردية لإمكاناتها العلاجية في علاج أمراض الكلى وأمراض القلب والأوعية الدموية واضطرابات التمثيل الغذائي. علاوة على ذلك ، يمكن توسيع هذه المنهجية للتحقيق في إعادة استخدام الأدوية من خلال تحديد الاستخدامات الجديدة للأدوية الموجودة في علاج DKD. يكمن التطبيق المحتمل الآخر لنهجنا في الطب الشخصي. من خلال دمج البيانات الخاصة بالمريض ، يمكن استخدام علم الأدوية الشبكي لتصميم استراتيجيات علاج الطب الصيني التقليدي بناء على الملامح الجزيئية الفردية ، وتعزيز فعالية العلاج وتقليل الآثار الضارة.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة العلوم الطبيعية لمقاطعة جيلين (رقم 20210101201JC).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الإيثانول اللامائيالكاشف الكيميائي للمجموعة الصيدلانية الوطنية الصينية المحدودة10009218
مركز تجاربتشانغتشون للطب الصيني التقليديSYXK (JI) 2023-0014
قاعدة بيانات BATMAN-TCMhttp://bionet.ncpsb.org/batmantcm-
مجموعة فحص البروتين BCASolarbioPC0020
حجب العازلةBeyotimeP0023B
الأواني الخزفيةميدياMD-DG30E103
نظام التصوير الكيميائيهانغتشو شينهوا التكنولوجيا المحدودةSH-523
الكلوروفورمالصين الوطنية الصيدلانية المجموعة الكاشف الكيميائي المحدودة10006818
Cytoscape 3.8.0 البرمجيات----
طقم كاشف DABServicebioG1212-200T
ديسيبل / ديسيبل الفئراننانجينغ الخردة البيولوجية المحدودة شركةSCXK (Su) 2020-009
حل الركيزة ECLتقاربKF8003
وعاء حمام مائي كهربائي بدرجة حرارة ثابتةFisaff Instrument (Hebei) Co.، LtdDK-20000-IIIL
مزود طاقة أداة الرحلان الكهربائيبكين Longfang التكنولوجيا المحدودةLF-600S
الزجاج الخالطSolarbioYA0852
زجاج الشريحةنانتونغ Meiweide علوم الحياة المحدودةPC2-301
الماعز المضادة للأرانب IgG HRP (الجسم المضاد الثانوي)تقاربS00011: 3000 ل IHC ، 1: 10000 ل WB
HematoxylinWuhan Lingsi Biotechnology Co.، LtdG1140
أجهزة الطرد المركزي المبردة عالية السرعة هونان Kecheng أداة المعدات المحدودةH1-16KR
HiScript II Q RT SuperMix ل qPCR (+ ممسحة GDNA)VAZYMER223-01
شاكر أفقيجيانغسو هايمن كيلين بيل لتصنيع الأدوات المحدودةTS-1
نظام التصويرنيكوننيكون DS-U3
التسخين المغناطيسي الرقميالذكي هانغتشو ميو للأدوات المحدودة ، LtdTP-350E +
Isopropanolالوطنية الصيدلانية المجموعة الكاشف الكيميائي المحدودةعلامة 80109218
(20-120KD)GenScriptM00521
طقم تلطيخ ماسونBASOBA4079B
شاش طبيJianerkang Medical-
منصة Metascapehttp://metascape.org/gp/index.html-
الميثانولثيرمو67-56-1
موقع علم الأحياء الدقيقةhttp://www.bioinformatics.com.cn/-
مجهرنيكونECLIPSE Ci
فرن الميكروويفGalanz فرن الميكروويف للأجهزة الكهربائية المحدودةP70D20TL-P4
طاحونة الأنسجة متعددة العيناتشنغهاي Jingxin الصناعية التنمية المحدودةTissuelyser-24L
التوازن الإلكتروني التحليلي متعدد الوظائفتشانغتشو محظوظ المعدات الإلكترونية لعبة الشركةFA1204
الراتنج المحايدووهان Lingsi التكنولوجيا الحيوية المحدودةG8590
الماعز العادي مصلSolarbioSL038
فرن شنغهاي Huitai أداة التصنيع المحدودةDHG-9140A
جهاز طرد مركزي للنخيلووهان Lingsi التكنولوجيا الحيوية المحدودةD1008E
طقم تلطيخPAS BASOBA4114B
قطاعة مرضيةشنغهاي لايكا للأداة المحدودةRM2016
PBSSolarbioP1020
PCR أداةهانغتشو ميو الصك المحدودةPR-96
مسدس الماصةDragonKE0003087 / KA0056573
المخزن المؤقت لتخفيف الأجسام المضادةBeyotimeP0023A
مركب مثبط بروتين الفوسفاتيزMeilunbioMB12707-1
غشاء PVDF (0.22 & mu ؛ م)SolarbioISEQ00010
مخفف سريع للأجسام المضادة الأولية / الثانويةSolarbioA1811
الأرنب المضاد ل CD2APAffinityDF22981: 200 ل IHC ، 1: 1000 ل WB
Rabbit anti-COI-IAffinityDF121491: 200 ل IHC ، 1: 1000 ل WB
Rabbit anti-IL-1 & beta ؛تقاربAF51031: 1000 ل WB
Rabbit anti-P-AKTAffinityAF00161: 1000 ل WB
Rabbit anti-P-NF- & Kappa ؛ بAffinityAF32191: 1000 ل WB
Rabbit anti-P-PI3KAffinityAF32421: 1000 ل WB
Rabbit anti-WT-1AffinityDF63311: 200 ل IHC ، 1: 1000 ل WB
Rabbit anti-&alpha ؛ -SMAAffinityAF10321: 200 ل IHC ، 1: 1000 ل WB
Rabbit anti-& beta ؛ -ActinAffinityAF70181: 1000 ل WB
نظام PCR في الوقت الحقيقيABIQuantStudio 6
RIPA Lysis BufferMeilunbioMA0151
RNase خال من ddH2OSolarbioR1600
عازلة تخفيف الأجسام المضادة الثانويةBeyotimeP0023D
شريحة وغطاء زجاجيJiangsu Shitai Experimental Equipment Co.، Ltd10212432C
SPSS 26.0 البرمجيات----
موقع قاعدة بيانات السلسلة   ؛https://cn.string-db.org/-
أداة المياه النقيةالفائقة Zhiang Instrument (Shanghai) Co.، LtdClever-S15
Taq Plus DNA PolymeraseTIANGENET105-02
TCMSP قاعدة البيانات   ؛https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php-
طاحونة الأنسجةالجدارالجميل MB-96
TrizolAmbion15596-026
Tween 20Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co.، Ltd30189328
مقياس الطيف الضوئي المرئي للأشعة فوق البنفسجية الفائقةHangzhou Miou Instrument Co.، LtdND-100
قاعدة بيانات البروتين Uniprothttps://www.uniprot.org-
مجهر بصري مستقيمنيكونEclipse CI
مجموعة اختبار البروتين البولينانجينغ جيانتشنغ معهد أبحاث الهندسة الحيويةC035-2
مجفف الفراغنينغبو Xinzhi التكنولوجيا الحيوية المحدودة.A01-1-NA0959
خزان الرحلان الكهربائيالعمودي بكين 61 مصنع الأدواتDYCZ-24DN
خلاط دوامةووهان Lingsi التكنولوجيا الحيوية المحدودةMX-F
الغربية حجب العازلةSolarbioSW3010
الزيلينالصين الوطنية الصيدلانية الكاشف الكيميائي المحدودة10023418
Yihongووهان Lingsi التكنولوجيا الحيوية المحدودةE8090
شركة جامعة محرك الصين الأولية National نيكون

المراجع

  1. Naaman, S. C., Bakris, G. L. Diabetic nephropathy: Update on pillars of therapy slowing progression. Diabetes Care. 46 (9), 1574-1586 (2023).
  2. Glastras, S. J., Pollock, C. A. Targeted identification of risk and treatment of diabetic kidney disease. Nat Rev Nephrol. 20 (2), 75-76 (2024).
  3. Gregory, G. A., et al. Global incidence, prevalence, and mortality of type 1 diabetes in 2021 with projection to 2040: a modelling study. Lancet Diabetes Endocrinol. 10 (10), 741-760 (2022).
  4. Rao, B. V., Tan, S. H., Candasamy, M., Bhattamisra, S. K. Diabetic nephropathy: An update on pathogenesis and drug development. Diabetes Metab Syndr. 13 (1), 754-762 (2019).
  5. Guo, M., He, F., Zhang, C. Molecular therapeutics for diabetic kidney disease: An update. Int J Mol Sci. 25 (18), 10051(2024).
  6. Shen, S., et al. Advances in traditional Chinese medicine research in diabetic kidney disease treatment. Pharm Biol. 62 (1), 222-232 (2024).
  7. Han, C., et al. Yi-Shen-Hua-Shi granule ameliorates diabetic kidney disease by the "gut-kidney axis". J Ethnopharmacol. 10 (307), 116257(2023).
  8. Ma, X., et al. Advances in oxidative stress in pathogenesis of diabetic kidney disease and efficacy of TCM intervention. Ren Fail. 45 (1), 2146512(2023).
  9. Liu, M., et al. A systematic review on polysaccharides from Morinda officinalis How: Advances in the preparation, structural characterization and pharmacological activities. J Ethnopharmacol. 28 (328), 118090(2024).
  10. Zhang, X., et al. Network pharmacology-based identification of key pPharmacological mechanism of Shen-qi-di-huang decoction acting on uremia. Altern Ther Health Med. 30 (1), 44-50 (2024).
  11. Linlin, Z., et al. A multi-target and multi-channel mechanism of action for Jiawei Yinhuo Tang in the treatment of social communication disorders in autism: Network pharmacology and molecular docking studies. Evid Based Complement Alternat Med. 8 (2022), 4093138(2022).
  12. Husain, S. Role of podocyte in kidney disease. Front Biosci (Landmark Ed). 29 (7), 250(2024).
  13. Pavenstädt, H., Kriz, W., Kretzler, M. Cell biology of the glomerular podocyte. Physiol Rev. 83 (1), 253-307 (2003).
  14. Torban, E., et al. From podocyte biology to novel cures for glomerular disease. Kidney Int. 96 (4), 850-861 (2019).
  15. Yue, J. I., et al. Acupuncture improve proteinuria in diabetic kidney disease rats by inhibiting ferroptosis and epithelial-mesenchymal transition. Heliyon. 10 (13), e33675(2024).
  16. Liu, X. Q., et al. Wogonin protects glomerular podocytes by targeting Bcl-2-mediated autophagy and apoptosis in diabetic kidney disease. Acta Pharmacol Sin. 43 (1), 96-110 (2022).
  17. Nogales, C., et al. Network pharmacology: curing causal mechanisms instead of treating symptoms. Trends Pharmacol Sci. 43 (2), 136-150 (2022).
  18. Zhang, P., et al. Network pharmacology: towards the artificial intelligence-based precision traditional Chinese medicine. Brief Bioinform. 25 (1), bbad518(2023).
  19. Zhao, L., et al. Network pharmacology, a promising approach to reveal the pharmacology mechanism of Chinese medicine formula. J Ethnopharmacol. 12 (309), 116306(2023).
  20. Meek, R. L., et al. Glomerular cell death and inflammation with high-protein diet and diabetes. Nephrol Dial Transplant. 28 (7), 1711-1720 (2013).
  21. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Paraffin embedding tissue samples for sectioning. CSH Protoc. 2008, (2008).
  22. Yusuf, J. A., et al. Molecular mechanism underlying stress response and adaptation. Prog Brain Res. 291, 81-108 (2025).
  23. Yu, M., et al. Baicalein increases cisplatin sensitivity of A549 lung adenocarcinoma cells via PI3K/Akt/NF-κB pathway. Biomed Pharmacother. 12 (90), 677-685 (2017).
  24. Chen, H., et al. The PI3K/AKT pathway in the pathogenesis of prostate cancer. Front Biosci (Landmark Ed). 21 (5), 1084-1091 (2016).
  25. Wang, J., et al. Critical roles of PI3K/Akt/NF-κB survival axis in angiotensin II-induced podocyte injury. Mol Med Rep. 20 (6), 5134-5144 (2019).
  26. Zhang, S. J., et al. Integrated network pharmacology analysis and experimental validation to elucidate the mechanism of acteoside in treating diabetic kidney disease. Drug Des Devel Ther. 12 (18), 1439-1457 (2024).
  27. Rong, J., et al. Mechanisms of hepatic and renal injury in lipid metabolism disorders in metabolic syndrome. Int J Biol Sci. 20 (12), 4783-4798 (2024).
  28. Bi, Z., et al. Development of a clinical prediction model for diabetic kidney disease with glucose and lipid metabolism disorders based on machine learning and bioinformatics technology. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 28 (3), 863-878 (2024).
  29. Wei, L., Gao, J., Wang, L., Tao, Q., Tu, C. Multi-omics analysis reveals the potential pathogenesis and therapeutic targets of diabetic kidney disease. Hum Mol Genet. 33 (2), 122-137 (2024).
  30. Vartak, T., Godson, C., Brennan, E. Therapeutic potential of pro-resolving mediators in diabetic kidney disease. Adv Drug Deliv Rev. 178 (4), 113965(2021).
  31. Liu, S., et al. Renal tubule ectopic lipid deposition in diabetic kidney disease rat model and in vitro mechanism of leptin intervention. J Physiol Biochem. 78 (2), 389-399 (2022).
  32. Tang, C., et al. Fenofibrate attenuates renal tubular cell apoptosis by up-regulating MCAD in diabetic kidney disease. Drug Des Devel Ther. 17 (2), 1503-1514 (2023).
  33. Lu, H. T., et al. Unraveling DDIT4 in the VDR-mTOR pathway: a novel target for drug discovery in diabetic kidney disease. Front Pharmacol. 15 (10), 1344113(2024).
  34. Tang, G., et al. Clinical efficacies, underlying mechanisms and molecular targets of Chinese medicines for diabetic nephropathy treatment and management. Acta Pharm Sin B. 11 (9), 2749-2767 (2021).
  35. Zhang, P., et al. Huaiqihuang (HQH) protects podocytes from high glucose-induced apoptosis and inflammation response by regulating PI3K/AKT/mTOR pathway. Arch Physiol Biochem. 11 (27), 1-8 (2024).
  36. Zhaoan, G., et al. Qizhi Jiangtang capsule activates podocyte autophagy in diabetic kidney disease by inhibiting phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin pathways. J Tradit Chin Med. 43 (4), 667-675 (2023).
  37. Jin, D., et al. Jiedu Tongluo Baoshen formula enhances podocyte autophagy and reduces proteinuria in diabetic kidney disease by inhibiting PI3K/Akt/mTOR signaling pathway. J Ethnopharmacol. 293 (3), 115246(2022).
  38. Zhou, Y., et al. Metrnl alleviates lipid accumulation by modulating mitochondrial homeostasis in diabetic nephropathy. Diabetes. 72 (5), 611-626 (2023).
  39. Shao, M., et al. Canagliflozin regulates metabolic reprogramming in diabetic kidney disease by inducing fasting-like and aestivation-like metabolic patterns. Diabetologia. 67 (4), 738-754 (2024).
  40. Tian, S., et al. GLP-1 receptor agonists alleviate diabetic kidney injury via β-klotho-mediated ferroptosis inhibition. Adv Sci (Weinh). 12 (4), e2409781(2024).
  41. Song, Y., et al. Identification of circular RNAs and functional competing endogenous RNA networks in human proximal tubular epithelial cells treated with sodium-glucose cotransporter 2 inhibitor dapagliflozin in diabetic kidney disease. Bioengineered. 13 (2), 3911-3929 (2022).
  42. Fan, Y., et al. Identification of potential key lipid metabolism-related genes involved in tubular injury in diabetic kidney disease by bioinformatics analysis. Acta Diabetol. 61 (8), 1053-1068 (2024).
  43. Pan, S., et al. A comprehensive weighted gene co-expression network analysis uncovers potential targets in diabetic kidney disease. J Transl Int Med. 10 (4), 359-368 (2023).
  44. Chen, Y., et al. Curcumin targets CXCL16-mediated podocyte injury and lipid accumulation in diabetic kidney disease treatment. Arch Pharm Res. 47 (12), 924-939 (2024).
  45. Liu, K., et al. Design, synthesis, and biological evaluation of a novel dual peroxisome proliferator-activated receptor alpha/delta agonist for the treatment of diabetic kidney disease through anti-inflammatory mechanisms. Eur J Med Chem. 218 (5), 113388(2021).
  46. Kitada, M., Kanasaki, K., Koya, D. Clinical therapeutic strategies for early stage of diabetic kidney disease. World J Diabetes. 5 (3), 342-356 (2014).
  47. Galluzzi, L., Kepp, O., Kroemer, G. Caspase-3 and prostaglandins signal for tumor regrowth in cancer therapy. Oncogene. 31 (23), 2805-2808 (2012).
  48. Li, L., Wang, S., Zhou, W. Balance cell spoptosis and pyroptosis of caspase-3-activating chemotherapy for better antitumor therapy. Cancers (Basel). 15 (1), 26(2022).
  49. Fan, T. J., et al. Caspase family proteases and apoptosis. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 37 (11), 719-727 (2005).
  50. Asadi, M., et al. Caspase-3: Structure, function, and biotechnological aspects. Biotechnol Appl Biochem. 69 (4), 1633-1645 (2022).
  51. Eskandari, E., Eaves, C. J. Paradoxical roles of caspase-3 in regulating cell survival, proliferation, and tumorigenesis. J Cell Biol. 221 (6), e202201159(2022).
  52. Pang, J., Vince, J. E. The role of caspase-8 in inflammatory signalling and pyroptotic cell death. Semin Immunol. 42 (70), 101832(2023).

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

CD2AP WT 1 PI3K AKT NF B
الفيديو قريباً

مقالات ذات صلة