يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

بناء نموذج الطعم الجيني لسرطان الغدة الدينية في الفئران وتقييم كفاءة مغلي XY من خلال مسار MAPK

588 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/68023

⸱

أبريل 25, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

في هذه المقالة

ملخص

توضح هذه الدراسة أن مغلي XY يمارس تأثيرات علاجية ضد سرطان الرئة الغدي من خلال تنظيم مسار MAPK.

الملخص

يتزايد سرطان الرئة الغدي في جميع أنحاء العالم ، مما يدفع إلى استكشاف وتطوير طرق العلاج الفعالة. في السنوات الأخيرة ، تم التعرف بشكل متزايد على الإمكانات العلاجية للطب الصيني التقليدي لسرطان الرئة الغدي ، مثل مغلي XiaoYi (XY). لا يزال يتم توضيح آلية عمل الطب الصيني التقليدي في علاج سرطان الرئة الغدي. في هذه الدراسة ، تم استخدام النماذج الحيوانية للتحقيق في الآثار العلاجية لمغلي XY في علاج سرطان الرئة. تم فصل المكونات الكيميائية لدخول الدم في مغلي XY في الفئران وتحليلها في كل من الوضعين الأيوني الموجب والسالب باستخدام UHPLC-QE-MS. ثم تم التحقق من صحة النتائج من خلال التجارب في الجسم الحي ، والتي أظهرت انخفاض حجم الورم ، وتحسين التغيرات المرضية ، وزيادة موت الخلايا المبرمج. نتيجة لذلك ، تم تحديد خمسة عشر مكونا يتم امتصاصها في الدم بعد إعطاء مغلي XY: ستاكيوز ، كيرسيتين -3-O-بيتا جلوكوبيرانوسيل-7-O-ألفا-رامنوبيرانوسيد. إمبريالين. سبينوزين ب. بيمين. قاعدة فلافون + 3O ، 2MeO ، O-Hex ؛ بيكروبودوفيلوتوكسين. (2S ، 3R ، 4S ، 5S ، 6R) -2- [(2R ، 3R ، 4S ، 5S ، 6R) -4،5-dihydroxy-2 [[(3S ، 5R ، 8R ، 10R ، 12R ، 13R ، 14R ، 17S) -12-hydroxy-17- (2-hydroxy-6-methylhept-5-en-2-yl) 4،4،8،10،14-pentamethyl-2،3،5،6،7،9،11،12،13،15،16،17-dodecahydro-1H cyclopenta [a] phenanthren-3-yl] oxy] -6- (hydroxymethyl) oxan-3-yl] oxy-6- (hydroxymethyl) oxane-3،4،5-triol; تريسين. جينسينوسيد Rg1 ؛ (20R) - جينسينوسيد Rh1 ؛ Jujuboside B; أوكوبين. جينسينوسيد Rg3 ؛ وحمض بيتا إيليمونيك. أظهرت التجارب التي أجريت على أن مغلي XY يمنع نمو الورم ، ويحسن التغيرات المرضية ، ويعزز موت الخلايا المبرمج للخلايا السرطانية بطريقة تعتمد على الجرعة. قد تكون الآليات المعنية مرتبطة بالتنظيم المعزز لتعبير البروتين p-JNK و p-P38 في مسار MAPK وتقليل تنظيم تعبير بروتين p-ERK في مسار MAPK. في الختام ، فإن مغلي XY لديه القدرة على تنظيم مسار MAPK وممارسة تأثيرات علاجية ضد سرطان الرئة الغدي.

المقدمة

معدل الإصابة بسرطان الرئة آخذ في الارتفاع في جميع أنحاء العالم. وهو يمثل 18٪ من جميع الأورام الخبيثة وهو مسؤول عن عدد كبير من الوفيات المرتبطة بالسرطان1،2. سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة (NSCLC) هو شكل شائع من سرطان الرئة ، مع السرطان الغدي باعتباره النوع المرضيالرئيسي 3. نظرا لأعراضه الخبيثة ، غالبا ما يتم تشخيص NSCLC في مرحلة متقدمة ولديه معدل وفيات مرتفع 4,5. يعاني مرضى المرحلة الرابعة من NSCLC من معدل بقاء لمدة خمس سنوات على قيد الحياة بنسبة 5٪ فقط 6 ، في حين أن معدل بقاء NSCLC في المرحلة المبكرة القابل للاستئصال جراحيا يبلغ معدل البقاء على قيد الحياة لمدة خمس سنوات 50٪ فقط 7.

حاليا ، يشمل علاج سرطان الرئة الغدي الجراحة والعلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي والعلاج المناعي والعلاج الموجه. بالإضافة إلى ذلك ، يتم التعرف على الطب الصيني التقليدي (TCM) لسرطان الرئة الغدي بشكل متزايدوتقييمه 8. الطب الصيني التقليدي له تاريخ طويل وقد استخدم في علاج أمراض الأورام المختلفة بنتائج علاجية فعالة9،10. إنه ينظر إلى جسم الإنسان ككيان كامل ، مع تركيز المبدأ العلاجي على استعادة حركة Qi (يشير Qi إلى الطاقة الحيوية التي تعزز الدورة الدموية وسوائل الجسم ، مما يساهم في تعزيز المناعة وتقليل الالتهاب لدى مرضى NSCLC) في الأعضاء الداخلية لاستعادة التوازن العام وتثبيط تطور السرطان.

لا يعالج الطب الصيني التقليدي أمراض الأورام ذات السمية المنخفضة والأهداف المتعددة والكفاءة العالية11 فحسب ، بل يسهل أيضا إصلاح الأضرار الناجمة عن العلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي ، وبالتالي إطالة فترة البقاءعلى قيد الحياة 12.

تدمج تقنية قياس الطيف الكتلي الكروماتوغرافيا السائلة (LC-MS) الكروماتوغرافيا السائلة مع قياس الطيف الكتلي لتحقيق فصل المكونات والكشف عنها في مخاليط المركبات المعقدة13. يوفر LC-MS دقة عالية وحساسية عالية وخصوصية عالية ، مما يسمح بفصل وتحديد المكونات الكيميائية المختلفة في مغلي الطب الصيني التقليدي (TCM). عند دمجها مع الكيمياء الطبية في الدم ، والتي تفصل وتكتشف المكونات النشطة لدخول الدم بعد تناولها عن طريق الفم14،15 ، يتيح LC-MS التنبؤ بآليات عمل الأدوية المحتملة وتحليلها. يساعد هذا النهج في فهم التركيب الكيميائي والمكونات الدوائية لمغلي الطب الصيني التقليدي ، وتوفير البيانات الأساسية للبحث المتعمق حول آثارها الدوائية وتطبيقاتها السريرية ، مما يجعلها قابلة للتطبيق بشكل كبير في أبحاث الطب الصينيالتقليدي 16،17.

يلعب مسار إشارات MAPK دورا مهما في نشأة سرطان الرئة وتطوره ورم خبيث وغزوه ، مع Erk و p38 و JNK كعائلات فرعية مهمة. لقد ثبت أن مغلي الطب الصيني التقليدي يؤثر على التعبير عن البروتينات في مسار MAPK18. مغلي XiaoYi (XY) مشتق من مغلي YiGuan ويستخدم لعلاج سرطان الرئة الغدي في المستشفى الأول التابع لجامعة تشانغتشون للطب الصيني (الشكل 1) ، مما يدل على الفعالية السريرية الدقيقة. ومع ذلك ، لا تزال آليته العلاجية غير واضحة.

في هذه الدراسة ، تم استخدام الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء إلى جانب قياس الطيف الكتلي Q-Exactive Orbitrap (UHPLC-QE-MS) لتوضيح الآلية العلاجية المحتملة لمغلي XY ضد سرطان الرئة الغدي ، وتم التحقق من صحة آثاره من خلال دراسات في الجسم الحي .

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة أخلاقيات بجامعة تشانغتشون للطب الصيني التقليدي (الأخلاقيات رقم 2024008). أظهرت ذكور الفئران C57BL / 6 البالغة من العمر ستة أسابيع (20 ± 2 جم) ، والتي تم تربيتها في ظل ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF) ، أنماطا نموذجية للنشاط البدني في بيئة خاضعة للرقابة مع درجة حرارة ورطوبة ثابتة. كان لديهم إمكانية الوصول إلى الطعام والماء وتم الاحتفاظ بهم في ظل دورة إضاءة / ظلام مدتها 12 ساعة. وترد تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة في جدول المواد.

1. تحضير مستخلص مائي مغلي XY

  1. ضع Panax ginseng C.A. Mey (Renshen ، 15 جم) ، Chinemys reevesii (رمادي) (Guiban ، 30 جم) ، و Trionyx sinensis Wiegmann (Biejia ، 30 جم) في وعاء مغلي. أضف 1000 مل من الماء منزوع الأيونات وانقعه لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  2. اسلقي الأعشاب الثلاثة من الخطوة 1.1 لمدة ساعة. في نفس الوقت ، نقع Rehmannia glutinosa Libosch (ديهوانغ ، 30 جم) ، Trichosanthes kirilowii Maxim. (تيانهوافن ، 30 جم) ، Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (روماني.) ستابف (Yiyiren ، 20 جم) ، Paeonia lactiflora Pall. (بايشاو ، 30 جم) ، Boswellia carterii Birdw. (Ruxiang ، 7 جم) ، Commiphora myrrha Engl. (Moyao ، 7 جم) ، Agrimonia pilosa Ledeb. (Xianhecao ، 20 جم) ، Alpinia oxyphylla Miq. (Yizhiren ، 20 جم) ، مطحنة Ziziphus jujuba . var. spinosa (Bunge) (Suanzaoren ، 30 جم) ، Melia toosendan Sieb. et Zucc. (Chuanlianzi ، 5 جم) ، Fritillaria thunbergii Miq. (Zhebeimu ، 15 جم) ، Anemarrhena asphodeloides Bge. (Zhimu ، 10 جم) ، Platycodon grandiflorum (Jacq.) (جيجينغ ، 10 جم) ، بوليجالا تينويفوليا ويلد. (Yuanzhi ، 15 جم) ، و Phragmites communis Trin. (لوجين ، 30 جم) في وعاء آخر لمدة 30 دقيقة. بعد النقع ، انقلها إلى وعاء ديكوتيون من الخطوة 1.1.
  3. اسلقي جميع الأعشاب ال 18 من الخطوتين 1.1 والخطوة 1.2 لمدة 30 دقيقة. يسكب السائل العشبي ويضاف 1000 مل من الماء منزوع الأيونات ويغلى لمدة 30 دقيقة أخرى. كرر عملية الغليان هذه ثلاث مرات للحصول على ثلاثة أجزاء من السائل العشبي ، ثم امزجها واخلطها جيدا.
  4. قم بتصفية السائل العشبي المختلط من خلال قطعة قماش 400 شبكة. قم بتركيز المرشح تحت ضغط منخفض ، ثم انقل السائل العشبي المركز إلى معدات التبريد لمزيد من المعالجة.
  5. صب السائل العشبي المركز في صينية تجميد التجفيد وضعه في غرفة التجميد المسبق لجهاز التجميد بالفراغ. بمجرد اكتمال التجميد المسبق ، انقل الدرج إلى غرفة تجفيف التسامي لإزالة الماء.
  6. قم بإزالة أي رطوبة متبقية عند درجة حرارة عالية. قم بسحق المستخلص العشبي المجفف بالتجميد باستخدام مطحن للحصول على مسحوق مغلي XY مجفف بالتجميد (الشكل 2).

2. تحضير المصل المحتوي على الأدوية

  1. قم بتعيين ذكور الفئران C57BL / 6 البالغة من العمر ستة أسابيع (20 ± 2 جم) بشكل عشوائي إما في مجموعة XiaoYi (XY) أو المجموعة الضابطة.
    ملاحظة: تم حساب جرعة الماوس باستخدام عامل التحويل من إنسان إلى فأر:
    الجرعة التجريبية المكافئة للفئران (جم / كجم) = {جرعة بشرية (جم / كجم) / وزن الجسم (70 كجم)} × 9.1
    بناء على هذا الحساب ، تم تحديد جرعة الفئران لتكون 2.6 جم / كجم.
  2. قم بوزن 0.9152 جم من مسحوق مغلي XY المجفف بالتجميد وقم بإذابه في 3.2 مل من الماء المقطر لتحضير محلول الدواء.
    ملاحظة: تم صيام الفئران لمدة 12 ساعة قبل تناوله عن طريق الفم.
  3. قم بإدارة مغلي XY للفئران في مجموعة XY عن طريق التزقيم ، أثناء إدارة المجموعة الضابطة بحجم مكافئ من الماء منزوع الأيونات.
  4. بعد 2 ساعة من تناوله عن طريق الفم ، قم بتخدير الفئران باستخدام الصوديوم البنتوباربيتال (باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا). قم باستئصال مقل العيون باستخدام ملاقط لجمع عينات الدم ، ثم قتل الفئران عن طريق اختناق ثاني أكسيد الكربون2 متبوعا بخلع عنق الرحم باتباع الإرشادات الأخلاقية19.
  5. اترك عينات الدم تستقر في درجة حرارة الغرفة لمدة 90 دقيقة. جهاز طرد مركزي عند 3450 × جم (4 درجات مئوية) لمدة 15 دقيقة لجمع المادة الطافية.

3. تحليل UHPLC-QE-MS

  1. أضف 100 مجم من مسحوق مغلي XY المجفف بالتجميد إلى 500 ميكرولتر من محلول الاستخراج (الميثانول: الماء = 4: 1). تخلط جيدا ، وصوتنة ، وتحتضن في حمام ماء مثلج لمدة 1 ساعة.
  2. يحفظ الخليط عند -40 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة ، ثم جهاز الطرد المركزي عند 13,800 × جم (4 درجات مئوية) لمدة 15 دقيقة. قم بتصفية المادة الطافية من خلال غشاء مرشح 0.22 ميكرومتر ، ثم اجمع 100 ميكرولتر من كل مادة طافية لإنشاء عينات مراقبة الجودة (QC).
  3. بعد إذابة عينات البلازما ، خذ 400 ميكرولتر من عينة بلازما المجموعة الضابطة و 400 ميكرولتر من عينات البلازما من المجموعة XY. أضف 40 ميكرولتر من حمض الهيدروكلوريك (2 مول / لتر) لكل عينة. دوامة لمدة 1 دقيقة واترك الخليط يقف عند 4 درجات مئوية لمدة 15 دقيقة. كرر هذه الخطوة أربع مرات.
  4. أضف 1.6 مل من الأسيتونيتريل والدوامة لمدة 5 دقائق. جهاز طرد مركزي عند 13,800 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. يخضع 1,800 ميكرولتر من المادة الطافية لتجفيف النيتروجين.
  5. أعد تكوين العينات المجففة في 150 ميكرولتر من 80٪ ميثانول تحتوي على 10 ميكروغرام / مل من المعيار الداخلي عن طريق الدوامة لمدة 5 دقائق. جهاز طرد مركزي عند 13،800 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية ، ثم انقل 120 ميكرولتر من المادة الطافية إلى قارورة زجاجية جديدة لتحليل LC-MS (الشكل 3).

4. زراعة الخلايا وإعداد

  1. بذرة 1 مل من خلايا سرطان الرئة لويس في طبق استزراع يحتوي على Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) مع 10٪ مصل بقري جنيني و 1٪ بنسلين / ستربتومايسين. احتضان الخلايا في ظل ظروف خاضعة للرقابة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيدالكربون 2.
  2. عندما تصل الخلايا إلى 80٪ من التقاء ، قم بتمريرها باستخدام 0.25٪ تربسين. استمر في المرور حتى تستقر حالة الخلية ، ثم اضبط تركيز الخلية على 3 × 106 خلايا / مل.
  3. حقن 0.1 مل من معلق الخلية المحضر تحت الجلد في الإبط الأيمن لذكور الفئران C57BL / 6 لإنشاء نموذج سرطان الرئة.
    ملاحظة: يمكن تحسس أنسجة الورم في إبط الفئران بعد 5 أيام من التلقيح.
  4. بعد 5 أيام ، قسم الفئران بشكل عشوائي إلى خمس مجموعات (ن = 6 لكل مجموعة): المجموعة النموذجية (M) - لا علاج ؛ مجموعة الجرعة المنخفضة من مغلي XY (XY-L) - 1.3 جم / كجم ؛ مجموعة الجرعة المتوسطة من مغلي XY (XY-Z) - 2.6 جم / كجم ؛ مجموعة الجرعة العالية من مغلي XY (XY-H) - 5.2 جم / كجم ؛ مجموعة سيسبلاتين (DDP) - تعامل بالسيسبلاتين20.
  5. قم بإذابة مسحوق مغلي XY في 200 ميكرولتر من الماء المقطر بالجرعة المقابلة وقم بإعطائه عن طريق التزقيم. تتلقى مجموعتا M و DDP كمية متساوية من الماء المقطر عن طريق التزقيم.
  6. يعطى سيسبلاتين لمجموعة DDP عن طريق الحقن داخل الصفاق (3 ملغ/كغ) مرة كل 3 أيام. حقن نفس الحجم من المحلول الملحي الفسيولوجي في المجموعات الأخرى.

5. التحليل المرضي لأنسجة الورم

  1. بعد 21 يوما ، قم بالقتل الرحيم لجميع الفئران باستخدام اختناق ثاني أكسيد الكربون 2 متبوعا بخلع عنق الرحم (باتباع الإرشادات الأخلاقية) واستئصال أنسجة الورم21. قياس حجم الورم ووزنه (الشكل 4).
  2. إصلاح أنسجة الورم المستأصلة في 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 24 ساعة). تجفيف الأنسجة باستخدام محاليل الإيثانول المتدرجة.
  3. قم بإزالة كتل الأنسجة المجففة باستخدام الزيلين ، ثم قم بتضمينها في شمع البارافين المذاب. اسمح للشمع بالتصلب في كتلة البارافين. قسم كتلة الأنسجة إلى شرائح بسمك 5 ميكرومتر باستخدام ميكروتوم.
  4. قم بإزالة الشمع من أقسام الأنسجة في الزيلين ، متبوعا بالجفاف في محاليل الإيثانول المتدرجة. تلطخ الأقسام بالهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق ، ثم اشطفها بالماء منزوع الأيونات.
  5. قم بإزالة بقع الأقسام بمحلول يوزين 0.5٪ لمدة 1 دقيقة. راقب الأقسام الملطخة تحت المجهر البصري والتقط الصور لتحليلها.

6. التحليل الكيميائي المناعي لأنسجة الورم

  1. قم بإزالة الشمع وإعادة الجفاف باتباع الإجراءات الموضحة في الخطوات 5.2-5.4.
  2. احتضان الأقسام في مانع بيروكسيداز داخلي المنشأ في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. امنع الارتباط غير المحدد عن طريق احتضان الأقسام بمصل الماعز.
  3. استخدم الأجسام المضادة الأولية: Ki-67 (1: 600) و Caspase-3 (1: 100). احتضان الأقسام طوال الليل عند 4 درجات مئوية. اغسل باستخدام المخزن المؤقت PBS) ، ثم ضع جسما مضادا ثانويا للأغراض العامة (1: 500) واحتضانه عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
  4. قم بتطوير تفاعل اللون عن طريق إضافة محلول DAB. تلاعب بالأقسام بمحلول الهيماتوكسيلين.
  5. قم بإجراء الجفاف والتطهير وختم الأجزاء الملطخة. راقب تعبير البروتين تحت المجهر البصري والتقط الصور للتحليل.

7. تحليل اللطخة الغربية

  1. تجانس أنسجة الورم باستخدام محلل الأنسجة. استخرج البروتين الكلي وحدد تركيزه باستخدام مجموعة مقايسة حمض البيسنشونيك (BCA) (انظر جدول المواد).
  2. قم بإجراء القياس الكمي للبروتين ، متبوعا بالرحلان الكهربائي SDS-PAGE ونقل البروتين إلى الغشاء.
  3. احتضان الغشاء طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية: P38 (1: 2000) ، p-P38 (1: 1000) ، ERK (1: 20000) ، p-ERK (1: 500) ، JNK (1: 2000) ، p-JNK (1: 5000) ، β-actin (1: 200) (انظر جدول المواد).
  4. في اليوم التالي ، احتضان الغشاء بجسم مضاد ثانوي مترافق ببيروكسيداز الفجل الحار (HRP) في درجة حرارة الغرفة لمدة 1.5 ساعة. الكشف عن نطاقات البروتين باستخدام نظام التلألؤ الكيميائي المحسن (ECL).
    ملاحظة: تم قياس كثافة نطاق البروتين باستخدام برنامج ImageJ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم تحليل محلول مسحوق XY وعينات المصل من المجموعة الضابطة ومجموعة XY باستخدام UHPLC-QE-MS ، مما كشف عن قمم منفصلة جيدا. يتم عرض مخططات التأين الإجمالية لأوضاع الأيونات الموجبة والسالبة في الشكل 3. تم تحديد تكوين مغلي XY بناء على وقت الاستبقاء ووضع الاستحواذ وشظايا الطيف الكتلي. تم تحديد خمسة عشر مكونا لدخول الدم من خلال مقارنة مصل مجموعات الإعطاء الفموي الفارغة و XY مع مكونات محلول مسحوق XY (الجدول 1).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يرتفع معدل الإصابة بالسرطان سنويا ، ويجذب اهتماما سريريا وبحثياكبيرا 22،23. أظهرت الدراسات الحديثة فعالية الطب الصيني التقليدي (TCM) في علاج سرطان الرئة24،25،26. على سبيل المثال ، ثبت أن مغلي Maimendong يعزز عدد ونشاط الخلايا القاتلة الطبيعية ، وبالتالي تثبيط ورم خبيث لسرطان الرئة27. وبالمثل ، حقق مغلي Mahuang Fuz...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

وحظي هذا العمل بدعم من البند (YDZJ202301ZYTS459) من خطة تطوير العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة جيلين.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
AcetonitrileCNW Technologies5/8/1975
2-Chloro-L فينيل ألانينشنغهاي Hengbo Biotechnology Co.، Ltd.103616-89-3
محلول هيدروكسيد الأمونيومالصين الوطنية للمجموعة الصيدلانية الكاشف الكيميائي المحدودة# 2028
الأجسام المضادة-&بيتا -الأكتينAbcamab8228
Anti-Erk1 (pT202 / pY204) + Erk2 (pT185 / pY187) الأجسام المضادةAbcamab4819
Anti-ERK1 / ERK2 الأجسام المضادةAbcamab184699
Anti-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) الأجسام المضادةAbcamab76572
Anti-JNK1 / JNK2 / JNK3 الأجسام المضادةAbcamab208035
تقنية إشارات خلاياالأجسام المضادة المضادة ل Ki67GB121141
المضادة ل p38 (phospho T180) الأجسام المضادةAbcamab178867
الأجسام المضادة للجسم المضاد ل p38 alpha / MAPK14Abcamab170099
مجموعة فحص تركيز البروتين BCABoster التكنولوجيا البيولوجية17E17B46
ألبومين مصل الأبقار (BSA)DAKOBIOFROXX
مثبط الفوسفاتيز واسع الطيف (100x)Boster Biological TechnologyAR1183
C57bl / 6 الفئرانLiaoning Changsheng Biotechnology Co.، Ltd.SCXK2021-0006
العمود الكروماتوغرافيWatersACQUITY UPLC BEH C18 1.7 & mu ؛ م 2.1 * 100 مم
سيسبلاتينالصين الوطنية الصيدلانية المجموعة الكاشف الكيميائي المحدودة232120
السترات (درجة الحموضة 6.0) محلول استرجاع المستضدووهان بايكياندو التكنولوجيا الحيوية المحدودةB2010
غطاء زلةجيانغسو شيتاي معدات المختبر المحدودة10212432C
المرحلة المبردةووهان Junjie للإلكترونيات المحدودةJB-L5
DAB طقم كروموجينيكجيانغسو شيتاي معدات المختبر المحدودة2005289
شاكر إزالة اللونبكين ليو يي مصنع الصكWD-9405A
مجففووهان جونجي للإلكترونيات المحدودةJJ-12J
فرن التجفيفشنغهاي Huitai Instrument Manufacturing Co.، Ltd.DHG-9140A
Dulbecco متوسط النسر المعدلGibco8121587
EDTA (درجة الحموضة 8.0) حل استرجاع المستضدWuhan Baiqiandu Biotechnology Co.، Ltd.B2001
EDTA (درجة الحموضة 9.0) محلول استرجاع المستضدووهان بايكياندو التكنولوجيا الحيوية المحدودةB2002
العازلة الكهربائيةNCM التكنولوجيا الحيوية20230801
آلة التضمينووهان Junjie Electronics Co.، Ltd.JB-P5
EosinChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co.، Ltd.212954
الإيثانولالوطنية الصيدلانية المجموعة الكاشف الكيميائي المحدودة493511
مصل الأبقار الجنينيGibco2166090RP
حمض الفورميكSIGMA64-18-6
برنامج GraphPad PrismGraphPad software ، LLCالإصدار 9.0.0
HematoxylinChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co.، Ltd.H3136
كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداءAgilent1260 Infinity II Prime
أجهزة طرد مركزي مبردة عالية السرعةThermo Fisher ScientificLegend Micro 17R
قياس الطيف الكتلي عالي الدقةThermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
HRP الماعز المترافق المضاد للفأرSeraCare5220-0341
الماعز المترافق HRP المضاد للأرانبSeraCare5220-0336
الماعز المترافق HRP المضاد للأرانب / الفأر الجسم المضاد الثانوي العالميDAKOK5007
HRP الماعز المترافق المضاد للفئرانSeraCare5220-0364
HRP أرنب مضاد للماعزSeraCare5220-0362
حمض الهيدروكلوريكالصيدلانية الوطنية الصينية الكاشف الكيميائي المحدودةH9892
بيروكسيد الهيدروجينالصين الوطنية الصيدلانية الكاشف الكيميائي المحدودةB12555
طقم التلألؤ الكيميائي شديد الحساسية ECLNCM BiotechP10300
ImageJ برنامجالمعاهد الوطنية للصحةv1.8.0
نظام التصويرنيكون (اليابان)NIKON DS-U3
خلايا سرطان الرئة لويسالصيدلانية الوطنية الصينية الكاشف الكيميائي المحدودة90020104
شبكة القماشBaijie100110779650
أداة التحكم في درجة حرارة التدفئة المعدنيةBaiwan Electronictechnology Co.، Ltd.HG221-X3
الميثانولعلاءالدين M116118
ماصة دقيقةDlab العلمية المحدودةKE0003087 / KA0056573
مجهر الشريحةجيانغسو شيتاي معدات المختبر المحدودة10212432C
Microtomeشنغهاي لايكا للأدوات المحدودةRM2016
فرن الميكروويفGalanz الميكروويف الأجهزة الكهربائية المحدودةP70D20TL-P4
البلسم المحايدالصين الوطنية الصيدلانية المجموعة الكاشف الكيميائي المحدودة10004160
المجهر البصرينيكون (اليابان)نيكون Eclipse CI
فرنشنغهاي Huitai Instrument Manufacturing Co.، Ltd.DHG-9140A
PAGE طقم التحضير السريع للهلامBiosharpPL566B-5
ParaformaldehydeNational Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co.، Ltd.8.18715
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (1x)Gibco8120485
بروتين ملونة ملونة مسبقا (10-180 كيلو دالتون)Cywin Innovation (بكين) شركة التكنولوجيا الحيوية المحدودة.SW176-02
عازلة تحميل البروتين (5X)Boster Biological TechnologyAR1112
الطاحنShangzhiqiao Co.، Ltd.DFT-100A
PVDF (0.45 & mu; م)Cywin Innovation (بكين) شركة التكنولوجيا الحيوية المحدودةSW120-01
حل نقل الغشاء السريعCywin Innovation (بكين) شركة التكنولوجيا الحيوية المحدودةSW171-02
RIPA lysateBoster Biological Technology Co.، Ltd.AR0105
TBS العازلةNCM Biotech23HA0102
محطة عمل تعويم الأنسجةJinhua Kedi Instrument Equipment Co.، Ltd. ، مقاطعة تشجيانغ.KD-P
عازلة الغشاءNCM Biotech23CA2000
Trypsin (0.25٪ ، 1x)HyCloneJ210045
جهاز تعطيل الخلايا بالموجات فوق الصوتيةنينغبو Xinyi معدات الموجات فوق الصوتية المحدودةJY92-IIDN
مجهر بصري مستقيمنيكون (اليابان)نيكون Eclipse CI
فراغ lyophilizerLanjing Co.، Ltd.HD-LG20D
خلاط دوامةKylin-BellXW-80A
XyleneNational Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co.، Ltd.214736
الصين المجموعة المجموعة China علامة China

المراجع

  1. Ferlay, J., et al. Cancer statistics for the year 2020: An overview. Int J Cancer. 149 (4), 778-789 (2021).
  2. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  3. Ahn, M. J., et al. Asian Thoracic Oncology Research Group (ATORG) expert consensus statement on MET alterations in NSCLC: Diagnostic and therapeutic considerations. Clin Lung Cancer. 23 (8), 670-685 (2022).
  4. Seguin, L., Durandy, M., Feral, C. C. Lung adenocarcinoma tumor origin: A guide for personalized medicine. Cancers (Basel). 14 (7), 1759(2022).
  5. Nasim, F., Sabath, B. F., Eapen, G. A. Lung cancer. Med Clin North Am. 103 (3), 463-473 (2019).
  6. Miller, K. D., et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2022. CA Cancer J Clin. 72 (5), 409-436 (2022).
  7. Torrente, M., et al. Understanding prognosis and survival outcomes in patients with early-stage non-small-cell lung cancer. Clin Med (Lond). 22 (Suppl 4), 38-40 (2022).
  8. Li, Z., Feiyue, Z., Gaofeng, L. Traditional Chinese medicine and lung cancer--From theory to practice. Biomed Pharmacother. 137, 111381(2021).
  9. Wei, Z., et al. Traditional Chinese medicine has great potential as candidate drugs for lung cancer: A review. J Ethnopharmacol. 300, 115748(2023).
  10. Miao, K., et al. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  11. Wang, K., et al. Anticancer activities of TCM and their active components against tumor metastasis. Biomed Pharmacother. 133, 111044(2021).
  12. Chen, S., et al. Efficacy and safety of TCM combined with chemotherapy for SCLC: A systematic review and meta-analysis. J Cancer Res Clin Oncol. 146 (11), 2913-2935 (2020).
  13. Yu, Y., Yao, C., Guo, D. A. Insight into chemical basis of traditional Chinese medicine based on the state-of-the-art techniques of liquid chromatography-mass spectrometry. Acta Pharm Sin B. 11 (6), 1469-1492 (2021).
  14. Wei, J., et al. Integrated serum pharmacochemistry and network pharmacology approach to explore the effective components and potential mechanisms of Menispermi rhizoma against myocardial ischemia. Front Chem. 10, 869972(2022).
  15. Shao, D., et al. Identification of the active compounds and functional mechanisms of Jinshui Huanxian formula in pulmonary fibrosis by integrating serum pharmacochemistry with network pharmacology. Phytomedicine. 102, 154177(2022).
  16. Han, J., et al. Using network pharmacology to explore the mechanism of panax notoginseng in the treatment of myocardial fibrosis. J Diabetes Res. 2022, 8895950(2022).
  17. Wang, Y., et al. Mechanisms underlying the therapeutic effects of Qingfeiyin in treating acute lung injury based on GEO datasets, network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 145, 105454(2022).
  18. Rubio, K., et al. Non-canonical integrin signaling activates EGFR and RAS-MAPK-ERK signaling in small-cell lung cancer. Theranostics. 13 (8), 2384-2407 (2023).
  19. Guo, T. F., Li, W., Xi, B. Animal welfare and slaughter methods of fur animal. J Econ Anim. 15 (2), 112-119 (2011).
  20. Moar, K., et al. Synergistic anticancer activity of resveratrol with cisplatin and carboplatin in A549 lung adenocarcinoma cells. Int J Clin Exp Pathol. 17 (11), 411-420 (2024).
  21. Li, Z., et al. Exploring tumor-suppressive effect and mechanism of action of Zilongjin Tablets combined with icotinib in Lewis tumor-bearing mice based on EGFR/PI3K/Akt signaling pathway. Chin Tradit Herb Drugs. 56 (2), 529-535 (2025).
  22. Mullard, A. Addressing cancer's grand challenges. Nat Rev Drug Discov. 19 (12), 825-826 (2020).
  23. Williams, P. A., Zaidi, S. K., Sengupta, R. AACR cancer disparities progress report 2022. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 31 (7), 1249-1250 (2022).
  24. Zhao, W., et al. Si Jun Zi decoction inhibits the growth of lung cancer by reducing the expression of PD-L1 through TLR4/MyD88/NF-κB pathway. J Ethnopharmacol. 318 (Pt A), 116948(2024).
  25. Ye, Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the effects and mechanisms of Qinghao Biejia decoction and its active compound artemisinin B against non-small-cell lung cancer. Drug Des Devel Ther. 17, 2461-2479 (2023).
  26. Zhang, J., et al. Ze-Qi decoction inhibits non-small cell lung cancer growth and metastasis by modulating the PI3K/Akt/p53 signaling pathway. J Tradit Complement Med. 13 (5), 417-429 (2023).
  27. Zhang, Z., et al. Maimendong decoction inhibits lung cancer metastasis by increasing the proportion and killing activity of NK cells. J Ethnopharmacol. 338 (Pt 3), 119127(2025).
  28. Zhang, W., et al. Explore the mechanism and substance basis of Mahuang FuziXixin decoction for the treatment of lung cancer based on network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 151 (Pt A), 106293(2022).
  29. Lee, J. Y., et al. Picropodophyllotoxin inhibits cell growth and induces apoptosis in gefitinib-resistant non-small lung cancer cells by dual-targeting EGFR and MET. Biomol Ther (Seoul). 31 (2), 200-209 (2023).
  30. Li, J. X., et al. Metabolomics and integrated network pharmacology analysis reveal Tricin as the active anticancer component of Weijing decoction by suppression of PRKCA and sphingolipid signaling. Pharmacol Res. 171, 105574(2021).
  31. Hong, J., Gwon, D., Jang, C. Y. Ginsenoside Rg1 suppresses cancer cell proliferation through perturbing mitotic progression. J Ginseng Res. 46 (3), 481-488 (2022).
  32. Wei, H., et al. Shuangshen granules attenuate lung metastasis by modulating bone marrow differentiation through mTOR signaling inhibition. J Ethnopharmacol. 281, 113305(2021).
  33. Nakhjavani, M., et al. Anti-Angiogenic properties of Ginsenoside Rg3. Molecules. 25 (21), 4905(2020).
  34. Liu, Z., et al. Insights into the antitumor mechanism of ginsenosides Rg3. Mol Biol Rep. 48 (3), 2639-2652 (2021).
  35. Huang, G., et al. Stachyose-induced apoptosis of Caco-2 cells via the caspase-dependent mitochondrial pathway. Food Funct. 6 (3), 765-771 (2015).
  36. Lin, Q., et al. Mechanistic and therapeutic study of novel antitumor function of natural compound imperialine for treating non-small cell lung cancer. J Ethnopharmacol. 247, 112283(2020).
  37. Zhang, T., et al. Peimine-induced apoptosis and inhibition of migration by regulating reactive oxygen species-mediated MAPK/STAT3/NF-κB and Wnt/β-catenin signaling pathways in gastric cancer MKN-45 cells. Drug Dev Res. 83 (7), 1683-1696 (2022).
  38. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  39. Zhang, P., et al. Jujuboside B suppresses angiogenesis and tumor growth via blocking VEGFR2 signaling pathway. Heliyon. 9 (6), e17072(2023).
  40. Guo, L., et al. Jujuboside B inhibits the proliferation of breast cancer cell lines by inducing apoptosis and autophagy. Front Pharmacol. 12, 668887(2021).
  41. Shao, M., et al. Aucubin exerts anticancer activity in breast cancer and regulates intestinal microbiota. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 4534411(2022).
  42. Yang, Z., et al. Jujuboside B reverses CUMS-promoted tumor progression via blocking PI3K/Akt and MAPK/ERK and dephosphorylating CREB signaling. J Immunol Res. 2022, 5211368(2022).
  43. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  44. Shan, X., et al. Ginsenoside Rg3-induced EGFR/MAPK pathway deactivation inhibits melanoma cell proliferation by decreasing FUT4/LeY expression. Int J Oncol. 46 (4), 1667-1676 (2015).
  45. Wang, J., et al. Low toxicity ginsenoside Rg1-carbon nanodots as a potential therapeutic agent for human non-small cell lung cancer. Colloids Surf B Biointerfaces. 246, 114392(2025).
  46. Colic, E., Patel, P. U., Kent, O. A. Aberrant MAPK signaling offers therapeutic potential for treatment of ovarian carcinoma. Onco Targets Ther. 15, 1331-1346 (2022).
  47. Bahar, M. E., Kim, H. J., Kim, D. R. Targeting the RAS/RAF/MAPK pathway for cancer therapy: From mechanism to clinical studies. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 455(2023).
  48. Sugiura, R., Satoh, R., Takasaki, T. ERK: A double-edged sword in cancer. ERK-dependent apoptosis as a potential therapeutic strategy for cancer. Cells. 10 (10), 2509(2021).
  49. Ullah, R., et al. RAF-MEK-ERK pathway in cancer evolution and treatment. Semin Cancer Biol. 85, 123-154 (2022).
  50. Romany, A., et al. Analysis of the ERK pathway cysteinome for targeted covalent inhibition of RAF and MEK kinases. J Chem Inf Model. 63 (8), 2483-2494 (2023).
  51. Ghosh, A. K., et al. Covalent inhibition in drug discovery. ChemMedChem. 14 (9), 889-906 (2019).
  52. Kaoud, T. S., et al. Modulating multi-functional ERK complexes by covalent targeting of a recruitment site in vivo. Nat Commun. 10 (1), 5232(2019).
  53. Qian, X., et al. Qingyihuaji formula promotes apoptosis and autophagy through inhibition of MAPK/ERK and PI3K/Akt/mTOR signaling pathway on pancreatic cancer in vivo and in vitro. J Ethnopharmacol. 307, 116198(2023).
  54. Yue, S. J., et al. A ferulic acid derivative FXS-3 inhibits proliferation and metastasis of human lung cancer A549 cells via positive JNK signaling pathway and negative ERK/p38, AKT/mTOR and MEK/ERK signaling pathways. Molecules. 24 (11), 2165(2019).
  55. Ozgun, G. S., et al. Piperine induces cellular stresses, apoptosis, and cytotoxicity via JNK signaling and has concentration-dependently additive or synergistic effects with sorafenib in hepatocellular carcinoma: An in vitro study. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. , (2024).
  56. Martínez-Limón, A., et al. The p38 pathway: From biology to cancer therapy. Int J Mol Sci. 21 (6), 1913(2020).
  57. Xie, C. Q., et al. Triptolide exerts pro-apoptotic and cell cycle arrest activity on drug-resistant human lung cancer A549/Taxol cells via modulation of MAPK and PI3K/Akt signaling pathways. Oncol Lett. 12 (5), 3586-3590 (2016).
  58. Luo, Y. H., et al. Anticancer effects of baicalein on cervical carcinoma cells through down-regulation of the ERK/p38/MAPK pathway. J Biol Regul Homeost Agents. 35 (3), 945-952 (2021).
  59. Lan, H. Y., et al. Aidi injection induces apoptosis of hepatocellular carcinoma cells through the mitochondrial pathway. J Ethnopharmacol. 274, 114073(2021).
  60. Remnant, L., et al. The intrinsically disorderly story of Ki-67. Open Biol. 11 (8), 210120(2021).
  61. Ma, W., et al. Breast cancer Ki67 expression prediction by DCE-MRI radiomics features. Clin Radiol. 73 (10), 909.e1-909.e5 (2018).
  62. Ahmed, S. T., et al. Proliferative index (Ki67) for prediction in breast duct carcinomas. Asian Pac J Cancer Prev. 19 (4), 955-959 (2018).
  63. Sobecki, M., et al. Cell-cycle regulation accounts for variability in Ki-67 expression levels. Cancer Res. 77 (10), 2722-2734 (2017).
  64. Gown, A. M. The biomarker Ki-67: Promise, potential, and problems in breast cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 31 (7), 478-484 (2023).
  65. Piri, R., et al. Ki-67/MIB-1 as a prognostic marker in cervical cancer - A systematic review with meta-analysis. Asian Pac J Cancer Prev. 16 (16), 6997-7002 (2015).
  66. Pelosi, G., et al. Ki-67 antigen in lung neuroendocrine tumors: Unraveling a role in clinical practice. J Thorac Oncol. 9 (3), 273-284 (2014).
  67. Li, H., et al. A correlation research of Ki67 index, CT features, and risk stratification in gastrointestinal stromal tumor. Cancer Med. 7 (9), 4467-4474 (2018).
  68. Asadi, M., et al. Caspase-3: Structure, function, and biotechnological aspects. Biotechnol Appl Biochem. 69 (4), 1633-1645 (2022).
  69. Eskandari, E., Eaves, C. J. Paradoxical roles of caspase-3 in regulating cell survival, proliferation, and tumorigenesis. J Cell Biol. 221 (6), e202201159(2022).
  70. Jiao, C., et al. Caspase-3/GSDME mediated pyroptosis: A potential pathway for sepsis. Int Immunopharmacol. 124 (Pt B), 111022(2023).
  71. Zhou, M., et al. Caspase-3 regulates the migration, invasion and metastasis of colon cancer cells. Int J Cancer. 143 (4), 921-930 (2018).
  72. Ke, H., et al. Effect of weimaining on apoptosis and Caspase-3 expression in a breast cancer mouse model. J Ethnopharmacol. 264, 113363(2021).
  73. Xu, H., et al. The natural product dehydrocurvularin induces apoptosis of gastric cancer cells by activating PARP-1 and caspase-3. Apoptosis. 28 (3-4), 525-538 (2023).
  74. Huang, Y. L., et al. Expression levels of Caspase-3 and gasdermin E and their involvement in the occurrence and prognosis of lung cancer. Cancer Rep (Hoboken). 5 (9), e1561(2022).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.