مقالة منهجية

علم الأدوية الشبكي والتحقق من صحة آليات مضادات الاكتئاب في Qiangzhifang في نموذج فئران الاكتئاب الناجم عن الإجهاد المزمن

945 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/68198

⸱

يونيو 6, 2025

 ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, 2Innovation Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, 3Office of Shandong College of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

قيمت هذه الدراسة الفعالية المضادة للاكتئاب ل Qiangzhifang في نموذج الفئران للاكتئاب الناجم عن الإجهاد المزمن وأوضحت تأثيره التنظيمي على مسارات HIF-1 و JAK-STAT عن طريق علم الأدوية الشبكي وتحليل الإرساء الجزيئي.

الملخص

الاكتئاب هو اضطراب معقد يشكل تحديات علاجية كبيرة. يوضح Qiangzhifang (QZF) ، وهو مركب يستخدم في الطب الصيني التقليدي ، الفعالية السريرية المحتملة في علاج الاكتئاب. ومع ذلك ، لم يتم توضيح آليات العمل والمكونات النشطة ل QZF بشكل كامل. كان الهدف الأساسي من هذه الدراسة هو توضيح المكونات النشطة الفعالة والآليات الجزيئية المحتملة ل QZF للتخفيف من الاكتئاب من خلال دمج تنبؤات علم الأدوية الشبكي مع عمليات التحقق التجريبية.

اعتمدنا نموذج الفئران لإجهاد ضبط النفس المزمن (CRS) وأجرينا اختبارات سلوكية مثل اختبار المجال المفتوح (OFT) ، واختبار تفضيل السكروز (SPT) ، واختبار السباحة القسري (FST) لتقييم الآثار العلاجية ل QZF على الاكتئاب. فيما يتعلق بالمعلمات السلوكية ، أظهرت مجموعة QZF كتلة جسم أعلى بكثير ، ونسبة تفضيل السكروز ، ووقت الإقامة في المنطقة المركزية مقارنة بالمجموعة النموذجية (P < 0.01 ، P < 0.01 ، P < 0.01) ، وانخفاض كبير في وقت الشلل في اختبار السباحة القسري (P < 0.001). تشير دراسات علم الأدوية الشبكي والالتحام الجزيئي إلى أن QZF قد يكون له تأثيرات مضادة للاكتئاب عن طريق تعديل مسارات HIF-1 و JAK-STAT ، مع الجينات المستهدفة الرئيسية بما في ذلك AKT1 و IL-6 و MTOR و TP53 ، المتورطة في الالتهاب والحماية العصبية وموت الخلايا المبرمج. في الختام ، تقدم هذه الدراسة رؤى جديدة حول تحديث وتطوير مركبات الطب الصيني للعلاج الشامل للاكتئاب.

المقدمة

يتميز الاكتئاب ، وهو تحد صحي عالمي منتشر ، بمزاج منخفض مستمر ، وانخفاض الاهتمام والمتعة ، وإعاقات إدراكية وعصبية1. كما ذكرت منظمة الصحة العالمية ، يؤثر الاكتئاب على ما يقرب من 380 مليون شخص في جميع أنحاء العالم ، ومن المتوقع أن يزيد هذاالرقم 2. باعتباره اضطرابا عقليا معقدا ومتعدد العوامل ، يؤثر الاكتئاب على نوعية حياة المرضى ويشكل عبئا اقتصاديا وطبيا كبيرا على المجتمع ، يتميز بارتفاع معدلات الإصابة والتكرار ومعدلات الإعاقة3.

مسببات الاكتئاب معقدة ، مع الآليات الدقيقة غير المفهومة تماما بعد. مع تقدم البحث في هذا المجال ، حظيت عوامل مثل الالتهاب العصبي والإجهاد التأكسدي وموت الخلايا المبرمج باهتمام كبير. تشير الدراسات إلى أن المرضى الذين يعانون من الاكتئاب يظهرون مستويات مرتفعة من السيتوكينات المؤيدة للالتهابات مثل عامل نخر الورم والإنترلوكين -1β مقارنة بالأفراد الأصحاء ، ويلاحظ انتشار أعلى للاكتئاب لدى أولئك الذين يعانون من حالاتالتهابية 4. في حالة الإجهاد التأكسدي ، يتم الإفراط في إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) استجابة للمنبهات الضارة ، مما يطغى على دفاعات الجسم المضادة للأكسدة ويؤدي إلى اختلال التوازن بين أنظمة الأكسدة ومضادات الأكسدة ، مما يتسبب في تلف الأنسجة. يمكن أن يؤدي الإجهاد التأكسدي المرتفع في الاكتئاب إلى تعزيز بيروكسيد الدهون وتفاقم تلف الجينات والبروتينات الخلوية ، مما يؤثر على وظيفة الخلايا العصبية ويساهم في تنكس الخلايا العصبية ، وموت الخلايا المبرمج ، وضعف اللدونة5. بالإضافة إلى ذلك ، ترتبط التعديلات التي لوحظت في العروض السريرية والعلامات الكيميائية الحيوية وهياكل الدماغ لدى مرضى الاكتئاب بموت الخلايا المبرمج. تكشف دراسات التصوير عن انخفاض حجم الحصين وضمور لدى مرضى الاكتئاب ، حيث يحتمل أن يلعب موت الخلايا المبرمج العصبي دورا محوريا في هذهالتغييرات 6.

حاليا ، العلاج بالعقاقير هو النهج الأساسي لإدارة الاكتئاب ، مع مثبطات امتصاص السيروتونين الانتقائية (SSRIs) ومثبطات امتصاص النورادرينالين (NRIs) التي يتم استخدامها بشكل متكرر في الممارسة السريرية7. ومع ذلك ، فإن هذه الأدوية مصحوبة بآثار ضارة كبيرة. بالإضافة إلى أعراض الجهاز العصبي المركزي مثل الصداع والأرق, معظم مضادات الاكتئاب أيضا عادة ما يحمل الآثار الجانبية المعدية المعوية, بما في ذلك الغثيان والإسهال 8,9. يمكن أن تسبب بعض مضادات الاكتئاب أيضا العجز الجنسي10 ، مما يؤثر بشدة على نتائج العلاج ويقلل من الالتزام بالأدوية بين مرضى الاكتئاب11. علاوة على ذلك ، فإن فعالية هذه الأدوية محدودة بالنسبة لبعض المرضى. أشارت دراسات التمثيل الغذائي الحديثة إلى أن الاختلافات الفردية في ميكروبات الأمعاء قد تؤثر على فعالية الدواء12. لذلك ، يظل تطوير علاجات أكثر أمانا وفعالية محورا حاسما في أبحاث الاكتئاب.

أظهرت تركيبات الطب الصيني التقليدي إمكانات كبيرة في علاج الاكتئاب ، تعزى إلى آثارها التآزرية التي تنطوي على مكونات وأهداف ومسارات متعددة13. يفترض الطب الصيني التقليدي أن يانغ تشي القوي ضروري للحفاظ على حيوية الجسم. لذلك ، اقترح البروفيسور يوان تشينغ دينغ ، مستفيدا من المبادئ الفريدة لتشخيص وعلاج الطب الصيني التقليدي والخبرة السريرية الواسعة ، أن "يانغ يو شين توي" هو التسبب الأساسي للاكتئاب. بناء على هذا المفهوم ، طور Qiangzhifang (QZF) لمعالجة هذا التسبب فيالمرض على وجه التحديد 14. أظهر التطبيق السريري ل QZF في علاج الاكتئاب فعالية كبيرة ، حيث بلغ إجمالي معدل الفعالية 71.43٪ 15. يتكون QZF من العديد من المواد الطبية الصينية التقليدية ، بما في ذلك Ramulus cinnamomi (gui zhi ، GZ) ، Polygala tenuifolia (يوان zhi ، YZ) ، Alpinia oxyphylla miq (يي zhi ren ، YZR) ، Paeonia lactiflora (باي شاو ، BS) ، Fritillariae cirrhosae bulbus (chuan bei mu ، CBM) ، Panax ginseng (رن شين ، RS) ، رهوديولا الوردية L (هونغ جينغ تيان ، HJT) ، وعرق السوس (جان كاو ، GC) (الملف التكميلي 1). وقد أظهرت الدراسات أن بوليغالا تينويفوليا غنية بالصابونين ولها تأثيرات وقائيةللأعصاب 16. وبالمثل ، يوضح زوج عشب Ramulus Cinnamomi-Paeonia lactiflora فعالية محتملة في تخفيف الألم والاكتئاب17. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يقلل إجمالي الصابونين في الجينسنغ من مستويات السيتوكين المسببة للالتهابات في الحصين ، ويحسن السلوك الاكتئابي ، ويخفف من تلف أعصاب الحصين في الفئران18. يحتوي عرق السوس بشكل أساسي على triterpenoids و flavonoids. يمكن أن تلعب مركبات الفلافونويد الكلية لعرق السوس (LF) دورا مضادا للاكتئاب عن طريق تحسين السلوك الاكتئابي ، وتعديل مسار إشارات BDNF / TrkB ، وتعزيز اللدونة المشبكية19. ومع ذلك ، فإن الآليات المحددة الكامنة وراء التأثيرات المضادة للاكتئاب ل QZF لا تزال غير واضحة ، مما يحد من تطبيقه على نطاق واسع.

لذلك ، تهدف دراستنا إلى إنشاء نموذج فئران الاكتئاب CRS ، وإظهار التأثير العلاجي ل QZF على الاكتئاب في الفئران من خلال التجارب السلوكية ، والتقييم المنهجي لآلية مضاد الاكتئاب ل QZF باستخدام علم الأدوية الشبكي وتقنية الإرساء الجزيئي20. من خلال توضيح المكونات النشطة والأهداف المحتملة ل QZF ، يمكن تحديد الأهداف الأساسية للاكتئاب بدقة. نعتقد أنه من خلال الاستكشاف العميق لآلية عمل QZF ، لا يمكننا فقط توفير خيارات علاجية أكثر أمانا وفعالية لمرضى الاكتئاب ولكن أيضا توفير أساس علمي لتطبيق الطب الصيني التقليدي في علاج الاكتئاب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية من قبل لجنة أخلاقيات تجارب بجامعة شاندونغ للطب الصيني التقليدي (رقم الموافقة: YYLW2023000327) وامتثلت لدليل رعاية واستخدام المختبر الصادر عن المعاهد الوطنية للصحة. في هذه التجربة ، استخدمنا 40 من ذكور الوستار الأصحاء ، درجة SPF ، بمتوسط وزن الجسم (140 ± 10) جم (الشكل 1). راجع جدول المواد للحصول على قائمة بجميع المواد والمعدات والبرامج المستخدمة في هذا البروتوكول.

1. نموذج اكتئاب الفئران

  1. إسكان وتجميعها
    1. ادخل إلى غرفة التكاثر مع وقم بترقيمها باستخدام أداة تعليم الذيل.
    2. ضع الفئران بشكل فردي في أقفاص ، مع الحفاظ على درجة حرارة 21 ± 2 درجة مئوية ودورة ضوء / ظلام 12 ساعة / 12 ساعة.
    3. تأقلم الفئران في المختبر لمدة 7 أيام ، مما يوفر الوصول المخصص إلى الغذاء والماء أثناء التعامل معها يوميا للتكيف.
    4. بعد فترة التأقلم ، قم بقياس وزن الجسم ، وإجراء اختبارات تفضيل السكروز (SPT) واختبارات المجال المفتوح (OFT).
    5. بناء على البيانات التجريبية ، قسم الفئران إلى أربع مجموعات ، مع التأكد من أن كل مجموعة تتكون من 10 فئران: مجموعة التحكم (CON) ، ومجموعة النموذج (CRS) ، ومجموعة QZF ، ومجموعة فلوكستين (F).
  2. إنشاء نموذج الفئران لإجهاد ضبط النفس المزمن (CRS)
    1. بناء جهاز تقييد الفئران. حدد أنبوبا بلاستيكيا شفافا بقطر وطول مناسبين لحجم الفئران21 ، مما يسمح للفأر بالوقوف والانعطاف إلى الداخل مع منع الهروب. استخدم مثقاب ثقب لحام كهربائي لإنشاء ثقوب على جانبي الأنبوب البلاستيكي وعلى الغطاء لضمان دوران الهواء المناسب.
    2. ضع الفئران برفق في أجهزة التقييد (باستثناء تلك الموجودة في المجموعة C) بعد ساعة واحدة من تناول الدواء يوميا داخل المعدة ، مع التأكد من أنها في وضع مريح.
    3. حرمان جميع مجموعات الفئران من الطعام والماء خلال فترة التقييد. بعد انتهاء فترة ضبط النفس ، زودهم بالطعام والماء بشكل موحد. قم بإصلاح مدة التقييد اليومية في 6 ساعات (من 9:30 ساعة إلى 15:30 ساعة) وحافظ عليها لمدة 28 يوما متتاليا.

2. التدخل الدوائي

  1. يتم تطبيق الدواء عن طريق التزقيم: 1 مل من المحلول/100 غرام من وزن الجسم، فلوكستين (2.7 ملغ-1·كغ-1·يوم-1) وQZF (2 غ·كغ-1·يوم-1)22. تزويد المجموعتين C و CRS بمحلول ملحي عادي مكافئ للتحكم أحادي المتغير.
    ملاحظة: تم إجراء الإعطاء اليومي للأدوية في الساعة 08:00 ، وبدأ بشكل متزامن مع إنشاء النموذج واستمر طوال فترة النمذجة التي استمرت 28 يوما.

3. اختبار تفضيل السكروز (SPT)

  1. حرمان الفئران من الطعام والماء لمدة 24 ساعة قبل بدء التجربة.
  2. قم بإعداد محلول سكروز مائي بنسبة 1٪ واملأ المحلول والماء النقي في زجاجات الشرب الخاصة بحيوانات التجارب للوزن. قم بقياس استهلاك الماء النقي وماء السكروز عن طريق وزن الزجاجات قبل التجربة وبعدها.
  3. ضع زجاجة واحدة من محلول السكروز وزجاجة واحدة من الماء النقي عند كمية المياه لكل غطاء قفص للفئران ، واحدة على اليسار والأخرى على اليمين ، للوصول المجاني إلى الشرب. لمنع الفئران من تفضيل جانب واحد لتناول الماء ، قم بتبديل مواضع زجاجات المياه على اليسار واليمين بعد 30 دقيقة من التجربة.
  4. بعد 1 ساعة من التجربة ، قم بإزالة جميع زجاجات المياه ، ووزنها على الفور ، وسجل استهلاك محلول السكروز والماء النقي. احسب نسبة تفضيل السكروز الأسبوعية باستخدام الصيغة:
    قيمة تفضيل السكروز = figure-protocol-1 × 100٪

4. قياس وزن الجسم

  1. قم بوزن الفئران أسبوعيا عند دخولها المختبر وحدد الوقت المحدد للوزن في 7:00 صباحا. ضع هذا الجدول الزمني لتسهيل مراقبة تغيرات وزن الجسم.

5. اختبار المجال المفتوح (OFT)

  1. قبل بدء التجربة ، تأقلم الفئران مع الغرفة السلوكية لمدة ساعة واحدة واضبط الإضاءة في صندوق الحقل المفتوح لضمان التوزيع المتساوي. تأكد من أن الفئران مرئية بوضوح في برنامج التتبع.
  2. استخدم نظام تتبع الفيديو وتحليله لتقسيم السطح السفلي لصندوق الحقل المفتوح (50 سم × 50 سم × 50 سم) إلى تسع شبكات مربعة متساوية المساحة. قم بتعيين الشبكات الثمانية المجاورة للجدران كمنطقة طرفية والشبكة المركزية كمنطقة مركزية.
  3. ضع الجرذ في المنطقة المركزية لصندوق الحقل المفتوح. سجل حركة الفئران لمدة 5 دقائق باستخدام نظام تتبع الفيديو.
  4. بعد اختبار كل فأر ، قم بتنظيف الغرفة بنسبة 75٪ من الإيثانول لإزالة الرائحة المتبقية ومنع التداخل مع سلوك الجرذ التالي. أدخل المسافة الإجمالية (مم) لأنشطة المجال المفتوح وعدد الإدخالات في الشبكة المركزية في سجلات OFT.

6. اختبار السباحة القسري (FST)

ملاحظة: تشتمل تجربة السباحة القسرية للفئران على تجربة مسبقة وتجربة رسمية. قم بإجراء التجربة المسبقة قبل 24 ساعة من التجربة الرسمية ، باتباع نفس الإجراء ، مع سباحة الفئران لمدة 15 دقيقة.

  1. انقل التجربة إلى الغرفة السلوكية قبل 30 دقيقة على الأقل من التجربة للسماح لها بالتأقلم مع البيئة.
  2. قم بإعداد أسطوانة ماء زجاجية أسطوانية شفافة (ارتفاع 50 سم وقطر 20 سم) واملأها بالماء عند 23-25 درجة مئوية. اضبط عمق الماء بناء على وزن ، مع التأكد من بقاء ذيل على مسافة معينة من قاع الأسطوانة.
  3. ضع الفئران ببطء في أسطوانة الماء وحافظ على الهدوء طوال التجربة. قم بتنشيط الكاميرا ونظام الحصول على الإشارة. مراقبة وتسجيل مدة الجمود العائم في غضون 300 ثانية. قم بإزالة الفئران على الفور من الماء وجففها في نهاية التجربة.
  4. بعد كل جلسة ، استبدل الماء لمنع أي تأثير على الجرذ التالي.

7. شبكة التنبؤ الدوائي

  1. مجموعة من مركبات QZF والأهداف المفترضة
    1. الوصول إلى قاعدة بيانات علم الأدوية لأنظمة الطب الصيني التقليدي (TCMSP) (https://old.tcmsp-e.com/)23 ، وقاعدة بيانات HERB24 ، وقاعدة بيانات TCMID (https://www.bidd.group/TCMID/). استخدم أسماء الطب الصيني التقليدي الثمانية في QZF ، بما في ذلك GZ و YZ و YZR و BS و CBM و RS و HJT و ZGC ، ككلمات رئيسية للبحث عن المركبات النشطة وأهداف الأعشاب. جمع الأهداف من TCMSP والتنبؤ بالهدف السويسري (http://www.swisstargetprediction.ch/). قم بتعيين قيمة الفلتر إلى الاحتمال* > 0.
      ملاحظة: عادة ، تم تضمين المكونات كمكونات نشطة بناء على خصائصها الدوائية: التوافر البيولوجي عن طريق الفم (OB) ≥ 30٪ والخصائص الشبيهة بالدواء (DL) ≥ 0.1825.
  2. التنبؤ بأهداف المرض
    1. ابحث عن الكلمة الرئيسية "الاكتئاب" في قاعدة بيانات GeneCards (https://www.genecards.org/) ، واحصل على أهداف جينية مرتبطة بالاكتئاب ، وقم بتنزيل جدول البيانات الإلكتروني لأهداف الأمراض ، وقم بتصفية درجات الجينات الأعلى من متوسط القيمة ، وقم بتجميع قائمة بأهداف الاكتئاب26.
  3. الشبكة المستهدفة بالأمراض المكونة الدوائية
    1. أنشئ جدول بيانات جديدا وقم بتعبئته بأهداف متعلقة بالاكتئاب وأهداف الأدوية في العمود نفسه. انقر فوق ابدأ في شريط القائمة | التنسيق الشرطي | قواعد تمييز الخلايا | قيم مكررة. حدد تنسيقا (على سبيل المثال، "تعبئة حمراء فاتحة") في مربع الحوار الذي يظهر27، انقر فوق موافق لعرض النتائج.
    2. قم بتشغيل برنامج تحليل الشبكة واستيراد ملف جدول البيانات بالنقر فوق ملف في شريط القائمة | استيراد | الشبكة. قم بتحسين مظهر الشبكة عن طريق ضبط حجم ولون العقد في لوحة النمط الموجودة في لوحة التحكم اليسرى. قم بإجراء تحليل طوبولوجيا الشبكة بالنقر فوق الأدوات في شريط القائمة | تحليل الشبكة27.
  4. شبكة التفاعل بين البروتين والبروتين (PPI)
    1. قم بالوصول إلى أداة Jvenn (https://jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html) ، وقم بتحميل الأهداف المركبة وأهداف المرض بشكل منفصل ، ورسم الجينات المتداخلة (OGE) بين الأهداف المفترضة المركبة وأهداف المرض. انقر فوق الأرقام الموجودة في الصورة وانسخها في جدول بيانات وقم بتنزيل صورة مخطط Venn.
    2. قم بالوصول إلى قاعدة بيانات STRING (https://stringdb.org/)28، وأدخل OGEs من جدول البيانات في قاعدة البيانات. على وجه التحديد، الصق قائمة الأهداف المتداخلة لمكافحة الاكتئاب QZF في مربع الحوار قائمة الأسماء . حدد الإنسان العاقل في قسم الكائنات الحية وانقر فوق بحث | متابعة. حدد خيار التصدير من شريط العنوان وقم بتنزيل جدول ملخص شبكة PPI في كل من تنسيقات PNG و TSV29.
  5. فحص البروتينات الأساسية
    1. ابدأ تشغيل برنامج تحليل الشبكة (https://cytoscape.org/). ثم ، في شريط القائمة ، انقر فوق ملف | استيراد | الشبكة | ملف لاستيراد ملف تنسيق TSV الذي تم إنشاؤه في الخطوةالسابقة 30.
    2. حدد تحليل الشبكة في شريط القائمة وانقر فوق الزر تحليل . بعد ذلك ، اعرض نتائج التحليل وافهم الخصائص الهيكلية الإجمالية للشبكة ، مثل عدد العقد وعدد الحواف ومتوسط الدرجة.
    3. حدد التطبيقات | مدير التطبيقات في شريط القائمة. ابحث عن MCODE، وقم بتثبيت المكون الإضافي، وقم بتشغيل المكون الإضافي للحصول على هدف المركز. بعد ذلك ، ابحث عن CytoNCA ، وقم بتثبيت المكون الإضافي ، وركز على قيم المعلمات الثلاث للدرجة ومركزية التقارب (CC) ومركزية العلاقة (BC). وفقا لقيم هذه المعلمات ، قم بفحص العقد ذات الدرجة الأعلى و CC و BC ، والتي تعتبر عموما بروتينات أساسية31.
  6. تحليل تخصيب علم الأنطولوجيا الجيني (GO) وموسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG)
    1. افتح منصة المعلوماتية الحيوية (https://www.omicshare.com/). انقر فوق قائمة الأدوات ، وابحث عن أداة تحويل جين المعرف ، وانقر عليها. ثم انقر فوق الزر تحميل الملف ، وحدد الخطوة التي تم إنشاؤها في جوهر الجينات المستهدفة ، وقم بتنزيل قائمة معرف الملف المحول.
    2. في قائمة الأدوات ، انقر فوق أداة تحليل إثراء KEGG الديناميكي . قم بتحميل قائمة معرف الجينات. في خيار الأنواع ، حدد Homo sapiens وانقر فوق الزر إرسال .
    3. في قائمة الأدوات ، انقر فوق أداة تحليل إثراء GO الديناميكي | خيار الجين | خيار تحميل الملف. حدد قائمة معرف الجينات وفي خيار الأنواع ، حدد Homo sapiens. حدد نوع GO للتحليل ، بما في ذلك العملية البيولوجية والوظيفة الجزيئية والمكون الخلوي.
    4. للحصول على نتائج تحليل التخصيب KEGG و GO ، قم بتعيين عتبة الترشيح على أنها p < 0.05. رتب التهم بترتيب تنازلي.

8. التحقق من الإرساء الجزيئي

  1. قم بزيارة موقع PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). أدخل المركبات المستهدفة في شريط البحث. انقر فوق هيكل 2D وقم بتنزيله.
  2. افتح قاعدة بيانات PDB (https://www.Rcsb.org/). حدد الهيكل البلوري بدقة عالية ويحتوي على الترابط الأصلي. قم بتنزيل ملف PDB.
  3. لتحسين بنية البروتين ، افتح برنامج التصور الجزيئي. قم بتحميل ملف PDB الذي تم تنزيله. قم بإزالة جزيئات الماء وحفظ ملف PDB المحسن.
  4. افتح برنامج الإرساء الجزيئي واستورد ملف PDB المحسن. في AutoDockTools ، انقر فوق تحرير | احذف الماء لحذف جزيئات الماء. انقر فوق تحرير | أضف الهيدروجين | أضف لإضافة ذرات الهيدروجين إلى البروتين والترابط29.
  5. في AutoDockTools، قم بتعيين شريط المستقبل إلى receptor.pdbqt وشريط الترابط إلى ligand.pdbqt. افتح pdbqt. لعرض مواقع الربط للبروتين والترابط وتعيين حجم وموضع صندوق الإرساء للتأكد من أنه يمكن أن يحيط تماما ببروتين المستقبل ومركب الترابط. في AutoDockTools ، انقر فوق Grid | حدد مربع الشبكة لتعيين الإحداثيات المركزية وأبعاد الصندوق واستخدام القيم الافتراضية للرسو الجزيئي. سيتم فرز إطارات الإرساء تلقائيا بترتيب تنازلي لطاقات الربط.
  6. افتح ملف النتائج وسجل قيمة طاقة الربط المثلى. تشير طاقات الربط المنخفضة إلى ارتباط أكثر استقرارا. استخدم برنامج التصور الجزيئي لتحميل ملف النتيجة. اضبط العرض واللون لعرض تفاعل الترابط والمستقبلات بوضوح.

9. التحليل الإحصائي

  1. إجراء التحليل الإحصائي في برنامج تحليل البيانات العلمية والتصور وتمثيل جميع البيانات كمتوسط ± SEM. استخدام المقاييس المتكررة ثنائية الاتجاه ANOVA للمقارنات بين المجموعات قبل وبعد إعطاء الدواء. استخدم ANOVA أحادي الاتجاه للمقارنات بين أكثر من مجموعتين.
  2. خذ قيمة P < 0.05 على أنها ذات دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

نتائج الاختبار السلوكي في نموذج اكتئاب الفئران الناجم عن CRS

نتائج اختبار تفضيل السكروز
في خط الأساس، لم يكن هناك فرق في معامل تفضيل السكروز بين المجموعات (P > 0.05). بعد 28 يوما من التدخل ، كان معامل تفضيل السكروز لمجموعة CRS أقل بشكل ملحوظ من مجموعة CON (P < 0.05) ، بينما أظهرت مجموعتا F و QZF معاملات أعلى بشكل ملحوظ مقارنة بمجموعة CRS (كلاهما P < 0.01). أشارت النتائج إلى أن الفئران المجهدة أظهرت أعراضا نموذجية لعدم ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

CRS هي طريقة مستخدمة على نطاق واسع لإنشاء نماذج حيوانية للاكتئاب. يحاكي هذا النموذج الإجهاد النفسي المزمن الذي يواجهه في حياة الإنسان ويحفز سلوكيات شبيهة بالاكتئاب في الفئران35. في هذه الدراسة ، تم بناء أنبوب تقييد الفئران من البلاستيك الشفاف ، مما يضمن سلامة مع تمكين المراقبة الواضحة أثناء التجربة. يبلغ طول الأنبوب الشفاف حوالي 18 سم وقطره 6 سم ويتميز بفتحات تهوية متعددة ، يبلغ قطر كل منها 1 سم ، موزعة بشكل موحد على طول الجانبين والغطاء لتوفير تدفق هواء كاف للفئر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.

شكر وتقدير

تم دعم البحث من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82374311) ، وإدارة الدولة للطب الصيني التقليدي رفيع المستوى (TCM) ، ومشروع بناء الانضباط الرئيسي للنظرية الأساسية (zyyzdxk-2023118) ، ومشروع بناء استوديو خبراء الطب الصيني التقليدي الوطني (الرسالة الوطنية لتعليم الطب الصيني رقم 75) ومؤسسة العلوم الطبيعية لمقاطعة شاندونغ (ZR2022LZY016). تم إعداد حبيبات QZF من قبل قسم المنتجات الصيدلانية ، المستشفى التابع لجامعة شاندونغ للطب الصيني التقليدي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
نظام تحليل سلوكشنغهاي Xinsoft تكنولوجيا المعلومات المحدودةXR-SuperMaze
أدوات أوتودوكمعهد سكريبس للأبحاث
Cytoscape  برمجياتكونسورتيوم Cytoscapeالإصدار 3.7.2
لحام الحديد الكهربائي ثقب المثقابنانجينغ Naiwei التكنولوجيا المحدودة
فلوكستينليلي سوتشو الصيدلانية المحدودة
نظام تجريبي مفتوح المجالشنغهاي Xinsoft تكنولوجيا المعلومات المحدودةXR-XZ301
بيمولSchr & ouml; دينغر
Qiangzhifang المستشفى التابع لجامعة شاندونغ للطب الصيني التقليدي ، جينان ، الصين
أنبوب بلاستيكي شفاف   ؛نانتونغ بايانج للمنتجات البلاستيكية المحدودة ؛

المراجع

  1. Wu, C., Mu, Q., Gao, W., Lu, S. The characteristics of anhedonia in depression: A review from a clinically oriented perspective. Transl Psychiatry. 15 (1), 90(2025).
  2. Moitra, M., et al. Global mental health: Where we are and where we are going. Curr Psychiatry Rep. 25 (7), 301-311 (2023).
  3. Rong, J., Cheng, P., Li, D., Wang, X., Zhao, D. Global, regional, and national temporal trends in prevalence for depressive disorders in older adults, 1990-2019: An age-period-cohort analysis based on the global burden of disease study 2019. Ageing Res Rev. 100, 102443(2024).
  4. Liu, F., et al. Impacts of inflammatory cytokines on depression: A cohort study. BMC Psychiatry. 24 (1), 195(2024).
  5. Correia, A. S., Cardoso, A., Vale, N. Oxidative stress in depression: The link with the stress response, neuroinflammation, serotonin, neurogenesis and synaptic plasticity. Antioxidants (Basel). 12 (2), 470(2023).
  6. Xu, D. H., et al. Upregulation of KLK8 contributes to CUMS-induced hippocampal neuronal apoptosis by cleaving NCAM1. Cell Death Dis. 14 (4), 278(2023).
  7. Kovich, H., Kim, W., Quaste, A. M. Pharmacologic treatment of depression. Am Fam Physician. 107 (2), 173-181 (2023).
  8. Braund, T. A., et al. Antidepressant side effects and their impact on treatment outcome in people with major depressive disorder: An iSPOT-D report. Transl Psychiatry. 11 (1), 417(2021).
  9. Oliva, V., et al. Gastrointestinal side effects associated with antidepressant treatments in patients with major depressive disorder: A systematic review and meta-analysis. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 109, 110266(2021).
  10. Rothmore, J. Antidepressant-induced sexual dysfunction. Med J Aust. 212 (7), 329-334 (2020).
  11. Niarchou, E., Roberts, L. H., Naughton, B. D. What is the impact of antidepressant side effects on medication adherence among adult patients diagnosed with depressive disorder: A systematic review. J Psychopharmacol. 38 (2), 127-136 (2024).
  12. Wang, Y., et al. Multi-omics reveal microbial determinants impacting the treatment outcome of antidepressants in major depressive disorder. Microbiome. 11 (1), 195(2023).
  13. Yang, J., et al. Analysis of medication rule of traditional Chinese medicine in treating depression based on data mining. Heliyon. 10 (20), e39245(2024).
  14. Liu, X. Study on the mechanism of qiangzhifang's remodeling of hippocampal neural structure in depression model rats based on the pathogenesis of "yang yu shen tui". , https://link.cnki.net/doi/10.27282/d.cnki.gsdzu.2020.000110 (2020).
  15. Zhou, M. The effect of qiangzhifang on camp-pka-creb signaling pathway in hippocampus of depression emotion model rats based on "yang yu shen tui" pathogenesis. , https://link.cnki.net/doi/10.27282/d.cnki.gsdzu.2019.000030 (2019).
  16. Chen, Z., Yang, Y., Han, Y., Wang, X. Neuroprotective effects and mechanisms of senegenin, an effective compound originated from the roots of polygala tenuifolia. Front Pharmacol. 13, 937333(2022).
  17. Pan, H. T., Xi, Z. Q., Wei, X. Q., Wang, K. A network pharmacology approach to predict potential targets and mechanisms of "Ramulus cinnamomi (Cassiae) - Paeonia lactiflora" herb pair in the treatment of chronic pain with comorbid anxiety and depression. Ann Med. 54 (1), 413-425 (2022).
  18. Qin, M., et al. Total saponins of panax ginseng via the CX3CL1/CX3CR1 axis attenuates neuroinflammation and exerted antidepressant-like effects in chronic unpredictable mild stress in rats. Phytother Res. 37 (5), 1823-1838 (2023).
  19. Wang, R., et al. Antidepressant effect of licorice total flavonoids and liquiritin: A review. Heliyon. 9 (11), e22251(2023).
  20. Xiao, Y. G., Wu, H. B., Chen, J. S., Li, X., Qiu, Z. K. Exploring the potential antidepressant mechanisms of pinellia by using the network pharmacology and molecular docking. Metab Brain Dis. 37 (4), 1071-1094 (2022).
  21. Seewoo, B. J., et al. Validation of chronic restraint stress model in young adult rats for the study of depression using longitudinal multimodal mr imaging. eNeuro. 7 (4), (2020).
  22. Wei, Y. Discussion on "yang yu shen tui"mechanism of depression. , https://link.cnki.net/doi/10.27282/d.cnki.gsdzu.2022.000933 (2022).
  23. Ru, J., et al. TCMSP: A database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminform. 6, 13(2014).
  24. Fang, S., et al. A high-throughput experiment- and reference-guided database of traditional Chinese medicine. Nucleic Acids Res. 49 (D1), D1197-D1206 (2021).
  25. Zou, J., et al. Network pharmacology-based approach to research the effect and mechanism of Si-Miao-Yong-An decoction against thromboangiitis obliterans. Ann Med. 55 (1), 2218105(2023).
  26. Safran, M., et al. Genecards version 3: The human gene integrator. Database (Oxford). 2010, baq020(2010).
  27. Zhao, X. Y., Yang, Y. Y., Feng, J. L., Feng, C. L. Network pharmacology prediction and experimental validation of Trichosanthes-fritillaria thunbergii action mechanism against lung adenocarcinoma. J Vis Exp. (193), e64847(2023).
  28. Szklarczyk, D., et al. The string database in 2023: Protein-protein association networks and functional enrichment analyses for any sequenced genome of interest. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D638-D646 (2023).
  29. Zeng, B., et al. Network pharmacology prediction and metabolomics validation of the mechanism of fructus phyllanthi against hyperlipidemia. J Vis Exp. (194), e65071(2023).
  30. Shannon, P., et al. Cytoscape: A software environment for integrated models of biomolecular interaction networks. Genome Res. 13 (11), 2498-2504 (2003).
  31. Huang, S. P., et al. Evaluation of the mechanism of jiedu huazhuo quyu formula in treating Wilson's disease-associated liver fibrosis by network pharmacology analysis and molecular dynamics simulation. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 9363131(2022).
  32. Zhou, W., et al. Huangqin qingre qubi capsule inhibits RA pathology by binding FZD8 and further inhibiting the activity of Wnt/β-catenin signaling pathway. J Ethnopharmacol. 302 (Pt A), 115886(2023).
  33. Tan, X., et al. Cinnamaldehyde ameliorates dextran sulfate sodium-induced colitis in mice by modulating TLR4/NF-κB signaling pathway and NLRP3 inflammasome activation. Chem Biodivers. 20 (2), e202200089(2023).
  34. Que, W., et al. Molecular mechanism of Gelsemium elegans (gardner and champ.) benth. against neuropathic pain based on network pharmacology and experimental evidence. Front Pharmacol. 12, 792932(2021).
  35. Tzeng, H. T., Chyuan, I. T., Lai, J. H. Targeting the JAK-STAT pathway in autoimmune diseases and cancers: A focus on molecular mechanisms and therapeutic potential. Biochem Pharmacol. 193, 114760(2021).
  36. Chen, H., et al. The potential role of hypoxia-inducible factor-1 in the progression and therapy of central nervous system diseases. Curr Neuropharmacol. 20 (9), 1651-1666 (2022).
  37. Xie, X., et al. Scutellarin attenuates oxidative stress and neuroinflammation in cerebral ischemia/reperfusion injury through PI3K/AKT-mediated Nrf2 signaling pathways. Eur J Pharmacol. 957, 175979(2023).
  38. Semenza, G. L. Hypoxia-inducible factors in physiology and medicine. Cell. 148 (3), 399-408 (2012).
  39. Amin, N., et al. Hif-1α ablation reduces the efficiency of NeuroD1 gene-based therapy and aggravates the brain damage following ischemic stroke. Expert Opin Drug Deliv. 22 (1), 121-138 (2025).
  40. Bergeron, M., et al. Role of hypoxia-inducible factor-1 in hypoxia-induced ischemic tolerance in neonatal rat brain. Ann Neurol. 48 (3), 285-296 (2000).
  41. Zhang, Y., et al. Lactate modulates microglial inflammatory responses through Hif-1α-mediated CCL7 signaling after cerebral ischemia in mice. Int Immunopharmacol. 146, 113801(2025).
  42. Moresi, V., Adamo, S., Berghella, L. The JAK/STAT pathway in skeletal muscle pathophysiology. Front Physiol. 10, 500(2019).
  43. Fei, S., Li, W., Xiang, L., Xie, X., Zhang, L. Protective effect of alprostadil on acute pancreatitis in rats via inhibiting janus kinase 2 (JAK2)/STAT3 signal transduction pathway. Med Sci Monit. 25, 7694-7701 (2019).
  44. Sarapultsev, A., et al. JAK-STAT signaling in inflammation and stress-related diseases: Implications for therapeutic interventions. Mol Biomed. 4 (1), 40(2023).
  45. Dowlati, Y., et al. A meta-analysis of cytokines in major depression. Biol Psychiatry. 67 (5), 446-457 (2010).
  46. Li, J., et al. The JAK/STAT/NF-κB signaling pathway can be regulated by rosemary essential oil, thereby providing a potential treatment for DNCB-induced in mice. Biomed Pharmacother. 168, 115727(2023).
  47. Heinrich, P. C., Behrmann, I., Müller-Newen, G., Schaper, F., Graeve, L. Interleukin-6-type cytokine signalling through the gp130/Jak/STAT pathway. Biochem J. 334 (Pt 2), 297-314 (1998).
  48. Nguyen, T. L. L., Huynh, D. T. N., Jin, Y., Jeon, H., Heo, K. S. Protective effects of ginsenoside-Rg2 and -Rh1 on liver function through inhibiting TAK1 and STAT3-mediated inflammatory activity and Nrf2/ARE-mediated antioxidant signaling pathway. Arch Pharm Res. 44 (2), 241-252 (2021).
  49. Croce, C. M., et al. The BCL-2 protein family: From discovery to drug development. Cell Death Differ. , (2025).
  50. Fakhri, S., et al. Natural products attenuate PI3K/AKT/mTOR signaling pathway: A promising strategy in regulating neurodegeneration. Phytomedicine. 91, 153664(2021).
  51. Huang, Z., Jin, G. Licochalcone B induced apoptosis and autophagy in osteosarcoma tumor cells via the inactivation of PI3K/AKT/mTOR pathway. Biol Pharm Bull. 45 (6), 730-737 (2022).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

HIF 1 JAK STAT

مقالات ذات صلة