في هذه الدراسة ، تم تطوير تقنية الكشف عن الساندويتشات القائمة على الأجسام المضادة المزدوجة للكشف السريع عن مستضدات البراز المصابة ب Helicobacter pylori.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
في هذه الدراسة ، تم تطوير تقنية الكشف عن الساندويتشات القائمة على الأجسام المضادة المزدوجة للكشف السريع عن مستضدات البراز المصابة ب Helicobacter pylori.
يمكن أن تكون هيليكوباكتر بيلوري طفيلية في الغشاء المخاطي في المعدة ، والتي يمكن أن تسبب سلسلة من أمراض الجهاز الهضمي بعد الإصابة وترتبط ارتباطا وثيقا بالتهاب المعدة وقرحة المعدة وسرطان المعدة. ولا يزال الانتشار المرتفع لعدوى الملوية البوابية في المناطق ذات البنية التحتية الطبية الضعيفة ومناطق الصرف الصحي غير الملائمة يشكل مصدر قلق كبير للصحة العمومية. وبالتالي، فإن تطوير طرق تحري سريعة وبسيطة وفعالة من حيث التكلفة للكشف عن بكتيريا الملوية البوابية في البيئات المحدودة الموارد أمر بالغ الأهمية.
في هذه الدراسة ، أجرينا فحصا مجتمعيا في قرية شيتان بمقاطعة قوانغدونغ ، وهي منطقة نائية ومتخلفة تتميز بسكان دائمين يبلغ حوالي 300 من السكان مع تحصيل تعليمي منخفض بشكل عام. استخدمنا مقايسة شطيرة مزدوجة للأجسام المضادة للكشف عن مستضد براز الملوية البوابية ، وهي طريقة تم اختيارها لقابليتها للتطبيق المحتمل في البيئات منخفضة الموارد. تم تسجيل ما مجموعه 261 مشاركا من القرية ، وتم تحليل عينات برازهم باستخدام هذه التقنية. للتحقق المقارن ، خضعت نفس العينات لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR). بالمقارنة مع نتائج qPCR ، كانت حساسية وخصوصية الكشف عن مستضد الملوية البوابية في البراز 60.24٪ و 80.08٪. أظهرت النتائج اتفاقا قويا بين طريقة الكشف عن مستضد البراز و qPCR (Kappa = 0.630). أوضحت هذه الدراسة بشكل منهجي المبادئ والإجراءات والمنهجيات والتطبيقات السريرية للكشف عن مستضد البراز لعدوى الملوية البوابية ، بهدف استكشاف تقنية ساندويتش الأجسام المضادة المزدوجة القائمة على اللاتكس ووضع استراتيجيات جديدة ومبادئ توجيهية عملية لتشخيصها المساعد.
هيليكوباكتر بيلوري (H. pylori ، Hp) هي بكتيريا ميكروية ، حلزونية الشكل ، سالبة الجرام1. نظرا لقدرته على استعمار معدة الإنسان وإصابة مزمنة2 ، فقد تم تحديد هذا العامل المسبب للأمراض كعامل مسبب رئيسي في تطور سرطان المعدةالغدي 3،4. في عام 2015 ، عانى ~ 4.4 مليار شخص في العالم من عدوى الملوية البوابية 5. يظهر انتشار عدوى الملوية البوابية تباينا جغرافيا كبيرا ، حيث تشهد البلدان النامية معدلات أعلى بكثير مقارنة بالدول المتقدمة. والجدير بالذكر أنه في البلدان منخفضة الدخل وبين بعض الفئات السكانية الضعيفة، يمكن أن يصل معدل الإصابة إلى 75٪6.
على الرغم من أن طرق الكشف التقليدية مثل تنظير المعدة دقيقة ، إلا أن تطبيقها في الفحص على نطاق واسع والمتابعة الروتينية محدود بسبب غزوها وتكلفتها العالية وانخفاض قبول المريض7. لذلك ، أصبح البحث عن طرق التشخيص غير الغازية والبسيطة والسريعة اتجاها مهما لأبحاث الطب السريري الحديثة. الغرض الرئيسي من التشخيص غير الجراحي للملوية البوابية هو الكشف بدقة وأمان وسهولة عما إذا كان المريض مصابا ببكتيريا الملوية البوابية دون الفحص بالمنظار. اختبار تنفس اليوريا (UBT) ، اختبار مستضد البراز الملوية البوابية (FAT) 8 ، والاختبار المصلي9 هي تقنيات غير جراحية شائعة.
من بين هؤلاء ، يعد UBT هو الإجراء الأقل تدخلا والأكثر دقة المتاح10. حساسية وخصوصية UBT أعلى من 95٪ 11. من بين طرق التشخيص غير الغازية المتاحة ، ثبت أن UBT هو الأكثر دقة وموثوقية ، كما رأينا في دراسة التحقق التي أجريت في العراق ، قد يوصى ب UBT كخيار أول نظرا لأدائه العالي مقارنة بالطرق الأخرى12. ومع ذلك ، فإن UBT له أيضا عيوبه ، مثل تكلفته العالية وحاجته إلى تحليل طيفي الكتلة ، مما يحد من التطبيق في الإعدادات البعيدة أو محدودة الموارد13.
هناك حاجة ماسة إلى تطوير طريقة تشخيصية سريعة وغير جراحية وفعالة من حيث التكلفة للكشف عن عدوى الملوية البوابية ، لا سيما في المناطق المحدودة الموارد. في هذه الدراسة ، قمنا بتطوير تقنية الكشف السريع عن مستضد براز الملوية البوابية بناء على تقنية الكشف عن شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة ، والتي يمكنها اكتشاف مستضد الملوية البوابية في عينات البراز بسرعة وفعالية وبتكلفة منخفضة. توفر هذه التقنية مزايا كبيرة ، بما في ذلك القدرة على تحمل التكاليف ، وعدم التدخل الجراحي ، وسهولة الاستخدام ، والقدرة على التكيف مع المناطق النائية. نفترض أن طريقة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة للكشف عن مستضد براز الملوية البوابية ستظهر حساسية وخصوصية مماثلة ل qPCR ، مما يضعها كأداة قابلة للتطبيق للتشخيص السريري غير الجراحي.
قمنا بتفصيل المبادئ والإجراءات ونقاط القوة المنهجية وقابلية التطبيق السريري للكشف عن مستضد البراز لعدوى الملوية البوابية . للتحقق من عمليتها ، أجرينا تحقيقا وبائيا وفحصا في قرية شيتان ، مدينة تشينغيوان ، مقاطعة قوانغدونغ ، الصين ، وهي منطقة نائية ومتخلفة يبلغ عدد سكانها الدائمين حوالي 400 نسمة وتحصيل تعليمي محدود. توضح نتائجنا أن تقنية الكشف السريع عن مستضد الملوية البوابية في البراز المصممة هنا يمكن إكمالها في غضون 20 دقيقة. ويتضح من أن الكشف السريع عن مستضد الملوية البوابية في البراز هو أداة محتملة وواعدة للتشخيص السريع والموثوق لعدوى الملوية البوابية في المناطق النائية والمتخلفة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت الموافقة على هذه الدراسة المقطعية من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى الشعب بمقاطعة قوانغدونغ (رقم الموافقة: KY2024-445-01) ، وكانت البيانات الشخصية لجميع الأشخاص الخاضعين للدراسة سرية للغاية أثناء الدراسة. وقع جميع المشاركين على موافقة خطية مستنيرة قبل التجارب. تم اختيار سكان قرية شيتان في مدينة تشينغيوان بمقاطعة قوانغدونغ في عام 2024 كموضوعات بحثية ، ولم تكن هناك قيود على العمر والجنس. تم إجراء مقايسة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة (تجربة نوعية) الموضحة أدناه من قبل طاقم طبي وتقني محترف وفقا للتعليمات. تم اختيار جميع السكان الدائمين في القرية لهذه الدراسة ، بغض النظر عما إذا كانوا يتمتعون بصحة جيدة أو لديهم أعراض أو أي أمراض موجودة تتعلق بأمراض الجهاز الهضمي.
1. اختيار المريض
2. إجراء الكشف عن مستضد عدوى الملوية البوابية البرازية
ملاحظة: تم تصميم خوارزمية اختبار مستضد براز الملوية البوابية لضمان دقة وموثوقية النتائج ، مع مراعاة البساطة والنظافة. تنقسم العملية برمتها إلى خمس خطوات: جمع العينات ، ومعالجة العينات ، وتخزين العينات ، والكشف ، وتفسير النتائج. يظهر مخطط تدفق العمل والرسم التخطيطي لاكتشاف العينة في الشكل 1 والشكل 2.
3. استخراج الحمض النووي
4. qPCR للكشف عن الملوية البوابية ومقاومة المضادات الحيوية
ملاحظة: أجرينا qPCR للكشف عن عدوى الملوية البوابية عن طريق تضخيم جين اليوريا . جميع منتجات مراقبة الجودة السلبية هي مياه معقمة ونقاية. منتج مراقبة الجودة الإيجابي في مجموعة الكشف عن الحمض النووي H. pylori هو حبات قياسية من H. pylori (ATCC 43504). يعتبر CT ≤ 30 مع منحنى نموذجي على شكل حرف S موجبا.
5. التحليل الإحصائي
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
مسح الاستبيان
تم تسجيل ما مجموعه 261 مشاركا في الدراسة ، من بينهم 144 أنثى و 117 ذكرا ، تتراوح أعمارهم بين 4 و 99 عاما. كان متوسط عمر الأشخاص 48.30 ± 17.61 سنة. كان هناك 17 قاصرا (0-17 سنة) و 202 بالغا (18-64 سنة) و 42 مشاركا مسنا (>64 عاما). نتائج الاستبيان موضحة في الجدول 1. اعتقدت غالبية الأشخاص (90.8٪) أنه من الضروري إجراء فحص بكتيريا الملوية البوابية .
نتائج فحص الكشف عن مستضد الملوية البوابية البرازية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمثل الملوية البوابية واحدة من أكثر أنواع العدوى البكتيرية انتشارا في جميع أنحاء العالم15. كشفت نتائج الاستبيان أن 55.2٪ من السكان يفتقرون إلى الوعي بالملوية البوابية ، بينما يعتقد 90.8٪ أن فحص الملوية البوابية ضروري. تؤكد هذه النتائج على أهمية تنفيذ برامج فحص بكتيريا الملوية البوابية في المناطق المحرومة اقتصاديا والنائية16. على الرغم من أن اختبار تنفس اليوريا (UBT) هو طريقة تشخيصية شائعة ، إلا أن تكلفته ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| طقم استخراج الحمض النووي | جيانغسو الخلد التكنولوجيا الحيوية المحدودة | 20230223 | اي |
| H. pylori < / em> مجموعة الكشف عن مستضد البراز | هانغتشو نوهوي التكنولوجيا الصحية المحدودة | 20213401126 | اي |
| h. طقم الكشف عن الحمض النووي < أنا > | جيانغسو الخلد التكنولوجيا الحيوية المحدودة | 20230226 | اي |
| تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي | شنغهاي Hongshi تكنولوجيا العلاج الطبي المحدودة | 20183221659 | اي |
| حلول المنتجات والخدمات الإحصائية | شركة IBM | اي | اي |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.