مقالة بحثية

التقييم متعدد الوسائط للتأثير الوقائي ل Gentiopicroside في إصابة خلايا HepG2 التي يسببها CDCA

DOI:

10.3791/68320

⸱

يوليو 25, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Internal Medicine of Traditional Chinese Medicine, Traditional Chinese Medicine Hospital of Meishan, 4Institute of High Altitude Multimorbidity/TCM-Integrated High Altitude Medicine Center, Hospital of Chengdu University of TCM, 5Chengdu Tianxing Zhiyuan Biotechnology Co., Ltd.

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أظهرت هذه الدراسة أن جنتيوبيكروسيد يمكن أن يعالج إصابة الكبد الصفراوية عن طريق التحكم في إنتاج واستقلاب الأحماض الصفراوية والدهون ومنع الإجهاد التأكسدي والاستجابات الالتهابية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ثبت أن المكون النشط الأساسي ل Swertia chirayita ، gentiopicroside (GPS) ، يحمي الكبد في حالات الركود الصفراوي. من أجل توضيح آلية حماية نظام تحديد المواقع العالمي (GPS) على إصابة الكبد الصفراوية ، تمت معالجة خلايا HepG2 بحمض تشينوديوكسيكوليك (CDCA) لمحاكاة بيئة ركود صفراوي في المختبر ، وتم استخدام طريقة CCK-8 لتحديد التأثير الوقائي لنظام تحديد المواقع العالمي (GPS) على خلايا HepG2. باستخدام مجموعة بيولوجية ، تم الكشف عن محتويات TBA و T-CHO و TG و ALP و ALT و AST و GSH و IL-1β و IL-6 و TNF-α و SOD و MDA. تم استخدام الفحص المجهري بالليزر متحد البؤر لتأكيد مستوى ROS. تم تقييم تعبيرات خلايا HepG2 عن SHP-2 و Tgr5 و CYP7A1 و NTCP باستخدام التألق المناعي وتحليل اللطخة الغربية. ثم تم استخدام برنامج Autodock للتحقق من الإرساء الجزيئي لمكوناته النشطة الرئيسية. أظهرت النتائج أن نظام تحديد المواقع العالمي (GPS) منع بشكل كبير الضرر الذي تسببه CDCA لخلايا HepG2. قد يكون هذا التأثير الوقائي قد تحقق من خلال التحكم في إنتاج واستقلاب الأحماض الصفراوية والدهون داخل الخلية ومنع الإجهاد التأكسدي والاستجابات الالتهابية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

موقع التمثيل الغذائي للجهاز الهضمي في الجسم هو الكبد. إفراز الصفراء هو آلية رئيسية في عملية تقويض الدهون في الجهاز الكبدي. المكونات الأساسية للصفراء ، الأحماض الصفراوية ، تطلقها خلايا الكبد وهي ضرورية للحفاظ على توازن التمثيل الغذائي للدهون. بالنسبة لكل من الأفراد الأصحاء والحالات المرضية ، تعتمد العمليات الفسيولوجية والمرضية للكبد على توازن الأحماض الصفراوية الحرة والمترافقة في الكبد. إذا كان هذا التوازن مضطربا ، فلن تعمل الدورة الدموية في حمض الصفراء بشكل طبيعي ، مما قد يؤدي إلى ركود صفراوي داخل الكبد وتلف الكبد اللاحق1. وفقا للبحث الذي تم إجراؤه بالفعل ، فإن إصابة الكبد الصفراوية (CLI) هي حالة مرتبطة باضطرابات التمثيل الغذائي ، وعدم توازن الجراثيم المعوية ، ونخر خلايا الكبد2. يحدث بسبب إعاقة تدفق الصفراء وتراكم الأحماض الصفراوية في خلايا الكبد من أجل CLI. يمكن أن تتطور الحالات الشديدة من CLI إلى تليف الكبد وتليف الكبد وفشل الكبد3. في الوقت الحالي ، لا تزال الآلية الكامنة وراء CLI غير واضحة ومعقدة إلى حد ما ، ويتلقى غالبية المرضى فعالية منخفضة من العلاج الدوائي4 إلى جانب آثار جانبية كبيرة5. نتيجة لذلك ، فإن واحدة من أكثر القضايا إلحاحا التي تواجه المجتمع الطبي اليوم هي البحث عن أدوية CLI فعالة.

أظهرت الأبحاث الحالية أهمية عدد قليل من المستقبلات النووية في استقلاب الحمضالصفراوي 6. من بين هؤلاء ، يعد مستقبل الحمض الصفراوي مستقبلا تنظيميا مهما للحمض الصفراوي الذي قد يرتبط ب BAs وينشط بروتين فوسفاتيز التيروزين (SHP) 7. من ناحية أخرى ، فإن التراكم المفرط ل BAs في خلايا الكبد الذي ينتج عنه ركود صفراوي من شأنه أن يثبط سلبا مستقبلات SHP وينشط مستقبلات CYP7A1 (السيتوكروم P450 7A1) ، مما سيؤدي إلى إنتاج حمض الصفراء8. بالإضافة إلى ذلك ، فقد منع مستقبل حمض الصفراء المقترن ببروتين G TGR5 من إفراز BAs وحفز مستقبلات بولي ببتيد النقل المشترك للتوروكولات الصوديوم (NTCP) لنقل BAs. يتسبب في تراكم الأحماض الصفراوية في خلايا الكبد ، مما يؤدي إلى تلف الكبد9. وبالتالي ، قد يلقي البحث الإضافي في هذه الآلية الضوء على خيارات علاج CLI الأكثر قابلية للتطبيق.

مع تاريخ طويل من الاستخدام في الطب ، Swertia chirayita هو دواء تبتي صيني تقليدي. يعتبر أفضل Tida ويستخدمه السكان المحليون بشكل متكرر لعلاج أمراض المرارة والكبد10. كثيرا ما يستخدم لعلاج حصوات المرارة والتهاب المرارة وتليف الكبد والتهاب الكبد وأمراض الكبد الأخرى11. كشفت الأبحاث الحديثة أن بعض المكونات الكيميائية القزحية في Swertia ، بالإضافة إلى مكوناتها النشطة ، لها تأثير علاجي جيد على أمراض الكبد مثل تليف الكبد وإصابات الكبد الحادة12،13،14. تخفف المكونات النشطة ل Swertia chirayita من أمراض الكبد عن طريق تقليل الالتهاب15 وخصائصه المضادة للأكسدة16. أظهر بحثنا الأولي أن تركيبة مركب الطب التبتي مع Swertia chirayita كمكون رئيسي تظهر تأثيرا علاجيا إيجابيا على CLI ، مما يشير إلى أن Swertia chirayita لديه إمكانات كعلاج ل CLI17. العنصر النشط الأساسي الذي يتم استخراجه وتنقيته من Swertia chirayita هو GPS (Gentiopicroside) 18 ، والذي يحتوي على عدد من الإجراءات الدوائية ، مثل حماية الكبد19 ، وتنظيم استقلاب الجلوكوز20 ، وتحسين ميكروبيوم الأمعاء21 ، والخصائص المضادةللورم 22. أظهرت الأبحاث السابقة أن نظام تحديد المواقع العالمي (GPS) يحسن تلف الكبد في حالات صفراوية ويقلل من ركود صفراوي داخل الكبد عن طريق تنظيم التعبير عن ناقلات الأحماض الصفراوية23،24. على غرار هذا ، أظهرت الأبحاث التي أجريت في كل من الجسم الحي وفي المختبر أن نظام تحديد المواقع العالمي (GPS) يمكن أن يقلل من تلف الكبد عن طريق تعزيز التمثيل الغذائي للدهون ، وتقليل الالتهاب ، وتقليل الإجهاد التأكسدي25،26.

كثيرا ما تستخدم خلايا HepG2 في الدراسات المختبرية لأمراض الكبد لأنها تظهر نشاط إنزيم التمثيل الغذائي لخلايا الكبد27. في غضون ذلك ، يمكن أن تفرز خلايا الكبد المزيد من الصفراء عند تعرضها لأحد الأشكال الأربعة للأحماض الصفراوية الحرة ، والتي تشمل CDCA28. نتيجة لذلك ، يمكن استخدام CDCA لإنشاء نموذج خلوي لإصابة الكبد الصفراوية ومحاكاة البيئة الصفراوية في المختبر. بالنظر إلى أن إصابة خلايا الكبد التي يسببها CDCA يتم التوسط فيها بشكل حاسم عن طريق الإجهاد التأكسدي والمسارات الالتهابية وبالنظر إلى التأثيرات الموثقة المضادة للأكسدة والمضادة للالتهابات لنظام تحديد المواقع العالمي (GPS) في سياقات الكبد الأخرى26 ، فإننا نفترض أن نظام تحديد المواقع العالمي (GPS) قد يمنح الحماية ضد إصابة الكبد الصفراوية عن طريق التخفيف من السمية الخلوية التي يسببها CDCA في خلايا HepG2. حقق هذا العمل في التأثير الوقائي لنظام تحديد المواقع العالمي (GPS) على CLI وآليته الجزيئية باستخدام نموذج للضرر الناجم عن CDCA لخلايا HepG2.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

زراعة الخلايا وعلاجها
تم شراء خلايا HepG2 ووسائط MEM من بائع تجاري. نمت خلايا HepG2 في وسائط MEM مكملة بنسبة 10٪ FBS و 1٪ 100 وحدة / مل بنسلين و 100 وحدة / مل من الستربتومايسين ، عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 في الغلاف الجوي. بعد التصاق الخلية ، تم تغيير وسائط الاستزراع. تمت زراعة الخلايا بنسبة 1: 3 بعد 2-3 أيام ، وتم استخدامها في التجربة بمجرد أن حققت زراعة الخلايا التقاء 80٪.

مقايسة بقاء الخلية
في اليوم الأول ، تم زرع الخلايا في 2 × 104 خلايا HepG2 (2 × 105 خلايا / مل ، 100 ميكرولتر لكل بئر) في صفيحة 96 بئرا في ستة مكررات29. في اليوم 2 ، بعد 24 ساعة من التلقيح ، عولجت الخلايا ب CDCA بتركيزات مختلفة من CDCA (0 ، 20 ، 40 ، 60 ، 80 ، 100 ميكرومتر) لمدة 12 ساعة. تم الكشف عن بقاء الخلية بطريقة CCK-8. بعد 24 ساعة من البذر الأولي للخلايا ، تمت معالجة الخلايا ب CDCA بتركيزات مختلفة من GPS (0 و 25 و 50 و 100 و 200 و 400 و 800 ميكرومتر) لمدة 24 ساعة. في اليوم 3 ، تم الكشف عن صلاحية الخلية بطريقة CCK-8. في اليوم 4 ، تم زرع خلايا 2 × 104 HepG2 (2 × 105 خلايا / مل ، 100 ميكرولتر لكل بئر) في صفيحة مكونة من 96 بئرا في ستة مكررات لمدة 24 ساعة. في اليوم 5 ، يتم تقسيم الخلايا إلى ست مجموعات: التحكم ، والنموذج ، وحمض Ursodeoxycholic (UDCA) ، و GPS: 25 ميكرومتر ، 50 ميكرومتر ، و 100 ميكرومتر. باستثناء المجموعة الضابطة ، تمت إضافة محلول CDCA 60 ميكرومتر إلى جميع المجموعات لمدة 12 ساعة. ثم تمت إضافة محلول UDCA (60 ميكرومتر) وحل GPS (25 ميكرومتر و 50 ميكرومتر و 100 ميكرومتر) لمدة 24 ساعة ، إلى UDCA و 3 مجموعات GPS ، على التوالي. في اليوم 6 ، تم الكشف عن صلاحية الخلية بطريقة CCK-8.

فحص السيتوكين
وفقا للأدبيات المبلغ عنها ، تم استخدام مجموعات TNF-α و IL-6 و IL-1β للكشف عن مستويات العوامل الالتهابية في خلايا HepG2 بعد علاجات مختلفة30. بعد 24 ساعة من تدخل CDCA أو CDCA + GPS ، تخلص من وسط المزرعة واشطفه باستخدام PBS. قم بالطرد المركزي لتعليق الخلية عند 69 × جم لمدة 10 دقائق ، وتخلص من المادة الطافية وخذ راسب الخلية. أضف محلول PBS وقم بتجانس تحت ظروف حمام الماء المثلج لتحضير مجانسات الخلايا. بعد 10 دقائق من الطرد المركزي عند 10,005 × جم و 4 درجات مئوية ، تمت إزالة المادة الطافية ، واستخدمت تقنية BCA لقياس البروتين الكلي في محتويات الخلية. وفقا لتعليمات الشركة المصنعة ، تم تحديد مستويات TNF-α و IL-6 و IL-1β في الطاف الخلوي بواسطة ELISA. تم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة متعدد الوظائف.

الكشف عن TBA و TG و T-CHO
تم استخدام اختبارات TBA و TG و T-CHO وفقا لتعليمات المجموعة لتحديد الأحماض الصفراوية واستقلاب الدهون لخلايا HepG231. تم شراء TBA و TG و T-CHO تجاريا. بعد تفكيك رواسب الخلية بالموجات فوق الصوتية في حمام ماء مثلج ، تم تحضير تجانس الخلية عن طريق إضافة RIPA المحللة لمدة 30 دقيقة. تم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة متعدد الوظائف. بعد إضافة محاليل عمل BCA لكل بئر وتجانس الخلايا ، تم قياس الامتصاص عند 562 نانومتر باستخدام مادة إنزيمولتر ، وكانت فترة الحضانة 30 دقيقة تم استخدام امتصاص المنتج القياسي لبناء المنحنى القياسي ، وتم استخدام الصيغة التالية للحصول على قيمة الامتصاص:
محتوى TBA (ميكرومول / gprot) = (عينة -A فارغة) / (معيار -A فارغ) ×معايرة C / CPR
T-CHO ، TG المحتوى (مليمول / gprot) = (عينة - Aفارغة) / (معيار Aفارغ) ×معيار C / CPR

تقييم وظائف الكبد
تم تقييم وظائف الكبد باستخدام ALT و AST و ALP. تم شراء ALT و AST و ALP تجاريا. بعد جولتين من تنظيف المخزن المؤقت PBS على الخلايا التي تم جمعها ، تم طرد الخلايا لمدة 10 دقائق عند 69 × جم ، وتمت إزالة المادة الطافية ، وتم ترسيب الخلايا ، وإضافة المخزن المؤقت PBS ، وتم إنشاء التجانس عن طريق التكسير بالموجات فوق الصوتية في حمام ماء مثلج. ثم تم تعيين فتحات الاختبار والتحكم. تم اتباع طاولة العمليات أثناء إضافة الكاشف ، وهز وخلط لوحة الثقب برفق ، وتركها في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. تم تحديد قيمة OD لكل ثقب باستخدام إنزيموليتر بطول موجي 505 نانومتر. ثم أدخلت قيمة OD المطلقة في المنحنى المعياري وأجريت تحليل كمي إضافي باستخدام الصيغة.

تحديد أنشطة SOD و MDA و GSH
تم تقييم نشاط SOD ومحتوى MDA ومحتوى GSH وفقا لتعليمات الشركة المصنعة ، على التوالي. تم شراء SOD و MDA و GSH تجاريا. باختصار ، تم استخدام صفيحة من ستة آبار لتلقيح الخلايا. بعد العلاج ، خضعت الخلايا للمعالجة المسبقة (الجمع والكسر) وفقا للتعليمات التجريبية للمجموعة. ثم تم سكب حلول العمل المناسبة على لوحة الكشف عن الخلية بعد إنشاء ثقوب فارغة وثقوب قياسية وفتحات قياس وفقا لخطوات التشغيل الواردة في التعليمات. بعد ذلك ، يتم زراعة الخلايا في درجة الحرارة والمدة المذكورة في تعليمات المجموعة. ثم تم استخدام مجموعة أدوات الكشف عن BCA لتحديد محتوى البروتين. في النهاية ، تم تحديد الامتصاص عند الطول الموجي المناسب ، وتم إجراء تحليل كمي أكثر شمولا لمؤشر الإجهاد التأكسدي.

الكشف عن التغيرات في ROS في خلايا HepG2 باستخدام مسبار DCFH-DA
تم إجراء استزراع روتيني لتعداد الخلايا. تم تلقيح خلايا HepG2 بكثافة 1 × 105 خلايا / مل في أطباق ذات قاع زجاجي بسعة 1.5 مل لكل منها ، وتم زراعتها وفقا للطريقة المذكورة أعلاه. بعد الثقافة ، تم التخلص من الوسيط وغسل الخلايا باستخدام PBS. تم تخفيف DCFH-DA إلى تركيز 1: 1000 ، ويضاف 1.5 مل مخفف لكل بئر ، واحتضانه لمدة 20 دقيقة. بعد الحضانة ، تم شطف الخلايا 3 مرات بمحلول مزرعة MEM الأساسي. بعد ذلك ، تمت إضافة 100 ميكرولتر من وسط التركيب المضاد للبهتان مع DAPI إلى كل طبق. تم استخدام مجهر متحد البؤر الفلوري لعرض الصور والتقاط الصور عند 488 نانومتر للإثارة و 525 نانومتر للانبعاث32.

التصوير المناعي الفلوري
تم غسل الخلايا 3x باستخدام المخزن المؤقت PBS بعد الحضانة. بعد تثبيتها لمدة 30 دقيقة باستخدام 4٪ بارافورمالدهايد ، تم تنظيف الخلايا باستخدام المخزن المؤقت PBS على طاولة الاهتزاز. تمت إضافة المخفف ، ثم تبريده عند 4 درجات مئوية بعيدا عن الضوء طوال الليل. بعد ذلك ، تم طلاء الخلايا بمخفف الفلورسنت واحتضانها بعيدا عن الضوء لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. بعد الحضانة ، تم غسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام المخزن المؤقت PBS. بعد التثبيت بنسبة 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 30 دقيقة ، تم شطف الخلايا باستخدام المخزن المؤقت PBS على شاكر دوار. بعد ذلك ، تمت إضافة 150 ميكرولتر من مخفف الأجسام المضادة الأولية واحتضانها طوال الليل عند 4 درجات مئوية في ظل ظروف محمية من الضوء. تم استرداد مخفف الجسم المضاد الأولي ، متبوعا بإضافة حجم كاف من المخزن المؤقت PBS والاهتزاز لمدة 5 دقائق ؛ تكرر إجراء الغسيل هذا ثلاث مرات. ثم تلقى كل طبق 150 ميكرولتر من مخفف الأجسام المضادة الثانوية الفلورية وتم تحضنه عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة في حاضنة محمية بالضوء. تمت إضافة حجم مناسب من المخزن المؤقت PBS إلى كل طبق وغسله على شاكر دوار لمدة 8 دقائق ، وتكرر لمدة ثلاث دورات. أخيرا ، تمت تغطية الخلايا بمحلول تلطيخ DAPI كاف لمدة 10 دقائق ، وتم تركيبها بوسيط تركيب مضاد للبهتان ، وتم تصويرها باستخدام نظام تصوير فائق الدقة33.

تحليل اللطخة الغربية
بعد علاجات مختلفة ، تم استخراج البروتين الكامل لخلايا HepG2 باستخدام RIPA lysate ، وتم التأكد من تركيز البروتين باستخدام تقنية BCA. بعد عزل البروتين المستهدف باستخدام 10٪ SDS-PAGE ، تم نقله إلى غشاء PVDF 0.45 ميكرومتر. بعد ذلك ، تم إغلاق الغشاء لمدة 1.5 ساعة عند 25 درجة مئوية باستخدام 5٪ BSA. تم احتضان الأجسام المضادة الأولية ضد SHP-2 (1: 1000) و CYP7A1 (1: 1000) و Tgr5 (1: 1000) و NTCP (1: 1000) و β-actin (1: 1000) بين عشية وضحاها عند 4 درجات مئوية. بعد ذلك ، تم تحضين الغشاء بالجسم المضاد المضاد للجلوبولين المناعي G المضاد للأرانب (1: 10000) مترافق مع بيروكسيداز الفجل الحار لمدة ساعتين عند 25 درجة مئوية. ثم شوهدت العصابات المطلية بالبيروكسيداز باستخدام محلول كيميائي عالي الحساسية ECL ، وتم التقاط الصور باستخدام نظام التصوير34.

الإرساء الجزيئي
كما ورد ، تم تنفيذ عملية الإرساء الجزيئي وفقا للإجراءات التالية35. تم تنزيل هيكل الجزيء الصغير للدواء من منصة ChemicalBook ، وتم تنزيل بنية بروتين الترابط .sdf من منصات Uniprot و RCSBPDB. تمت إزالة جزيئات الترابط والماء بواسطة برنامج Pymol ، وتم استيراد بروتين الترابط إلى برنامج AutoDock للهدرجة والكشف. الإخراج النهائي بتنسيق .pdbqt. تم إجراء تحليل صندوق الإرساء وRunAutoGrid وRunAutoDock وAutoDock في برنامج AutoDock ، وتم حفظ الحد الأدنى من طاقة الربط لكل مجموعة من نتائج الإرساء. تم اختيار التشكل بأقل طاقة ربط حرة لكل مجموعة ، وتم تصور شكل مستقبلات الترابط بواسطة برنامج Pymol.

التحليل الإحصائي
تم فرز البيانات المذكورة أعلاه إحصائيا باستخدام GraphPad Prism 9.2 ، وتم الإبلاغ عن جميع النتائج التجريبية على أنها Mean ± SD. من أجل مقارنة البيانات إحصائيا بين المجموعات ، تم استخدام ANOVA أحادي الاتجاه. واعتبر الفرق بين المجموعتين ذا دلالة كبيرة عندما< 0.05 ص.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم ضبط تركيز CDCA على 0 ميكرومتر ، 20 ميكرومتر ، 40 ميكرومتر ، 60 ميكرومتر ، 80 ميكرومتر ، و 100 ميكرومتر تدرج تركيز للتجارب. عندما كان تركيز CDCA 60 ميكرومتر ، كان نشاط الخلية مختلفا بشكل كبير عن نشاط المجموعة الضابطة ، وأخيرا تم استخدام 60 ميكرومتر كتركيز CDCA (الشكل 1 أ). أظهرت النتائج أنه بعد الحضانة لمدة 24 ساعة بعد إعطاء الدواء ، لم يكن هناك فرق كبير في نشاط الخلية بين كل مجموعة والمجموعة الضابطة (الشكل 1 ب) ، مما يشير إلى أن نظام تحديد المواقع العالمي (GP...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CLI هو مرض في الكبد ناتج عن انسداد تكوين الصفراء أو إفرازها أو إفرازها. يتجلى سريريا في شكل حكة وهشاشة العظام ، بل ويتطور إلى تليف الكبد وتليف الكبد وأمراض أخرى ، مما يعرض الحياة والصحة للخطربشكل خطير 36،37،38. يعرف UDCA بأنه الدواء الأكثر استخداما في علاج CLI39. ومع ذلك ، نظرا للعدد الكبير من المرضى الذين يعانون من ضعف الاستجابة ل UDCA في الممارسة السريرية ، فقد تم تطوير...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة العلوم الطبيعية لمقاطعة سيتشوان (2024NSFSC0697) ، مشروع صندوق الابتكار المشترك لجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (LH202402015).

مساهمة المؤلف:
كايتونغ وو: المنهجية ، والتحليل الرسمي ، وتنظيم البيانات ، وكتابة المسودة الأصلية ، والكتابة والتحرير. يانغ شياو: التصور والتحقيق والتصور والتحقق من الصحة. Fuhan Fan: التحقق من الصحة والتحرير. Zhangli Lei و Xianhua Zhou و Xianli Meng: التحرير والترجمة. يونغ تسنغ ، هو يا وبينغ شين: التصور ، والمنهجية ، والتحقق ، والتحقيق ، ومراجعة المسودة وتصحيحها ، والإشراف.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
ALPنانجينغ جيانتشنغ معهد الهندسة الحيويةA059-2-2
ALTمعهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةC009-2-1
ASTمعهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةC010-2-1
BCAبوستر التكنولوجيا البيولوجية المحدودةAR0146
CDCAتشنغدو ميديشنغ التكنولوجيا المحدودة474-25-9
مجموعة عد الخلايا -8شركة بوستر للتكنولوجيا البيولوجية المحدودةAR1160-500
السيتوكروم P450 7A1 الأجسام المضادةAbmart Shanghai Co.، Ltd.TD2612S
DAPIBeyotime BiotechnologyC1005
DMSOBoster Biological Technology Co. ، LtdPYG0040
الماعز المضادة للأرانب IgG (H & amp; amp; ل)شركة تشنغدو زين بيوساينس المحدودة511202
الماعز المضادة للأرانب IgG AF488Abmart Shanghai Co.، Ltd.M21012M
GPSChengdu Medesheng Technology Co. ، LtdRP210717
GSHNanjing Jiancheng معهد الهندسة الحيويةA006-2-1
خلايا HepG2Procell Life Science & amp التكنولوجيا المحدودةCL-0103
HRP الماعز المضادة للأرانب IgGووهان & nbsp ؛ أباستيلي  التكنولوجيا الحيوية المحدودة AS014
IL-1 وبيتا ؛Elabscience التكنولوجيا الحيوية المحدودةE-EL-H0149c
IL-6Elabscience التكنولوجيا الحيوية المحدودةE-EL-H6156
MDAمعهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةA003-1-2
MEM قاعدة متوسطةProcell Life Science & شركة التكنولوجيا المحدودةPM150410
PBSBoster Biological Technology Co.، LtdPYG0021
عازلة النقل السريع (20 مرة)NCM BiotechWB4600
RIPABoster Biological Technology Co.، LtdBL651A
ROSBeyotime BiotechnologyS0033S
SHP2 Rabbit pAbWuhan & nbsp ؛ أباستيلي  التكنولوجيا الحيوية المحدودة A12486
SLC10A1 الأجسام المضادةAbmart شنغهاي المحدودةPU276166S
SODمعهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةA001-3-1
TBAمعهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةE003-2-1
T-CHOمعهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةA111-1-1
TGمعهد نانجينغ جيانتشنغ للهندسة الحيويةA110-1-1
TGR5 الأجسام المضادة متعددة النسيلةشركة ImmunoWay للتكنولوجيا الحيويةYT4636
TNF- & alpha ؛Elabscience Biotechnology Co., LtdE-EL-H0109c
حل التربسين (0.25٪)Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co.، Ltd40126ES60
UDCAChengdu Lemetian Medical Technology Co., LtdDSTDX007601
β-Actin Rabbit mAbWuhan   أباستيلي  التكنولوجيا الحيوية المحدودة تيار متردد 026

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Li, T., Hasan, M. N., Gu, L. Bile acids regulation of cellular stress responses in liver physiology and diseases. eGastroenterology. 2 (2), e100074(2024).
  2. Lin, S., et al. A systemic combined nontargeted and targeted LC-MS based metabolomic strategy of plasma and liver on pathology exploration of alpha-naphthylisothiocyanate induced cholestatic liver injury in mice. J Pharma Biomed Anal. 171, 180-192 (2019).
  3. Pouwels, S., et al. Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD): a review of pathophysiology, clinical management and effects of weight loss. BMC Endocr Disord. 22 (1), 63(2022).
  4. Wagner, M., Fickert, P. Drug Therapies for Chronic Cholestatic Liver Diseases. Ann Rev Pharmacol Toxicol. 60, 503-527 (2020).
  5. Nasr, P., Ignatova, S., Kechagias, S., Ekstedt, M. Natural history of nonalcoholic fatty liver disease: A prospective follow-up study with serial biopsies. Hepatol Commun. 2 (2), 199-210 (2017).
  6. Halilbasic, E., Claudel, T., Trauner, M. Bile acid transporters and regulatory nuclear receptors in the liver and beyond. J Hepatol. 58 (1), 155-168 (2013).
  7. Katafuchi, T., Makishima, M. Molecular Basis of Bile Acid-FXR-FGF15/19 Signaling Axis. Int J Mol Sci. 23 (11), 6046(2022).
  8. Ding, L., Yang, L., Wang, Z., Huang, W. Bile acid nuclear receptor FXR and digestive system diseases. Acta Pharma Sinica. B. 5 (2), 135-144 (2015).
  9. Wei, S., et al. The contribution of small heterodimer partner to the occurrence and progression of cholestatic liver injury. J Gastroenterol Hepatol. 39 (6), 1134-1144 (2024).
  10. Bhatt, A., Rawal, R. S., Dhar, U. Ecological features of a critically rare medicinal plant, Swertia chirayita in Himalaya. Plant Species Biol. 21, 49-52 (2006).
  11. Swati, K., Bhatt, V., Sendri, N., Bhatt, P., Bhandari, P. Swertia chirayita: A comprehensive review on traditional uses, phytochemistry, quality assessment and pharmacology. J Ethnopharmacol. 300, 115714(2023).
  12. Yong, Q., et al. Gentiopicroside improves NASH and liver fibrosis by suppressing TLR4 and NLRP3 signaling pathways. Biomed Pharmacother. 177, 116952(2024).
  13. Shi, M., Tang, J., Zhang, T., Han, H. Swertiamarin, an active iridoid glycoside from Swertia pseudochinensis H. Hara, protects against alpha-naphthylisothiocyanate-induced cholestasis by activating the farnesoid X receptor and bile acid excretion pathway. J Ethnopharmacol. 291, 115164(2022).
  14. He, X., et al. Swertia bimaculata moderated liver damage in mice by regulating intestine microbiota. Ecotoxicol Environ Saf. 263, 115223(2023).
  15. Lad, H., Bhatnagar, D. Amelioration of oxidative and inflammatory changes by Swertia chirayita leaves in experimental arthritis. Inflammopharmacology. 24 (6), 363-375 (2016).
  16. Chen, Y., et al. In vitro and in vivo antioxidant effects of the ethanolic extract of Swertia chirayita. J Ethnopharmacol. 136 (2), 309-315 (2011).
  17. Qin, J., et al. Determination of the pharmacodynamic substances and mechanism of Shiwuwei Saierdou Pills against cholestatic hepatitis through chemical profile identification and network pharmacology analysis. Arabian J Chem. 17 (2), 105504(2024).
  18. Guo, S., et al. Swertia L.: A comprehensive review of its genetic relationship, chemical compositions, pharmacological effects, toxicities, and applications. Phytother Res. 37 (6), 2605-2643 (2023).
  19. Zhang, Y., Pan, S., Yi, S., Sun, J., Wang, H. Gentiopicroside ameliorates CCl4-induced liver injury in mice by regulating the PPAR-γ/Nrf2 and NF-κB/IκB signaling pathways. J Int Med Res. 51 (10), 3000605231204501(2023).
  20. Xiao, H., et al. Gentiopicroside targets PAQR3 to activate the PI3K/AKT signaling pathway and ameliorate disordered glucose and lipid metabolism. Acta Pharma Sinica. B. 12 (6), 2887-2904 (2022).
  21. Wang, L., et al. Gentiopicroside improves high-fat diet-induced NAFLD in association with modulation of host serum metabolome and gut microbiome in mice. Front Microbiol. 14, 1145430(2023).
  22. Chen, Q., et al. Gentiopicroside inhibits the progression of gastric cancer through modulating EGFR/PI3K/AKT signaling pathway. Euro J Med Res. 29 (1), 47(2024).
  23. Tang, X., et al. Target profiling analyses of bile acids in the evaluation of hepatoprotective effect of gentiopicroside on ANIT-induced cholestatic liver injury in mice. J Ethnopharmacol. 194, 63-71 (2016).
  24. Han, H., Xu, L., Xiong, K., Zhang, T., Wang, Z. Exploration of Hepatoprotective Effect of Gentiopicroside on Alpha-Naphthylisothiocyanate-Induced Cholestatic Liver Injury in Rats by Comprehensive Proteomic and Metabolomic Signatures. Cell Physiol Biochem Int J Exp Cell Physiol Biochem Pharmacol. 49 (4), 1304-1319 (2018).
  25. Jin, M., et al. Gentiopicroside Ameliorates Oxidative Stress and Lipid Accumulation through Nuclear Factor Erythroid 2-Related Factor 2 Activation. Oxid Med Cell Longev. 2020, 2940746(2020).
  26. Huang, C., et al. Gentiopicroside improves non-alcoholic steatohepatitis by activating PPARα and suppressing HIF1. Front Pharmacol. 15, 1335814(2024).
  27. Choi, J. M., et al. HepG2 cells as an in vitro model for evaluation of cytochrome P450 induction by xenobiotics. Arch Pharma Res. 38 (5), 691-704 (2015).
  28. Labib, P. L., Goodchild, G., Pereira, S. P. Molecular Pathogenesis of Cholangiocarcinoma. BMC Cancer. 19 (1), 185(2019).
  29. Bai, J., et al. The enhanced mitochondrial dysfunction by cantleyoside confines inflammatory response and promotes apoptosis of human HFLS-RA cell line via AMPK/Sirt 1/NF-κB pathway activation. Biomed Pharmacother. 149, 112847(2022).
  30. Xie, N., et al. Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation. Phytomed Int J Phytother Phytopharmacol. 103, 154240(2022).
  31. Liu, Y. H., Guo, Y., Xu, H., Feng, H., Chen, D. Y. Impact of Non-Alcoholic Simple Fatty Liver Disease on Antituberculosis Drug-Induced Liver Injury. Infect Drug Resist. 14, 3667-3671 (2021).
  32. Fu, Q., Jiang, Z. Z., Zhang, L. Y. Impairment of triptolide on liver mitochondria in isolated liver mitochondria and HL7702 cell line. Chinese J Integrat Med. 19 (9), 683-688 (2013).
  33. Tang, Y., et al. Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection. Eur J Pharmacol. 912, 174617(2021).
  34. Wang, X., et al. Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1α/microRNA 210/ISCU1/2(COX10) signaling pathway. J Ethnopharmacol. 241, 111801(2019).
  35. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomed Int J Phytother Phytopharmacol. 109, 154568(2023).
  36. Yu, H., Wangensteen, K., Deng, T., Li, Y., Luo, W. MRGPRX4 in Cholestatic Pruritus. Semin Liver Dis. 41 (3), 358-367 (2021).
  37. Rini, S. S., Wibawa, I. D. N. Evaluation and Management of Chronic Cholestatic Liver Diseases. Middle East J Digest Dis. 15 (3), 148-155 (2023).
  38. Srivastava, A. Progressive familial intrahepatic cholestasis. J Clin Exp Hepatol. 4 (1), 25-36 (2014).
  39. Samant, H., et al. Cholestatic liver diseases: An era of emerging therapies. World J Clin Cases. 7 (13), 1571-1581 (2019).
  40. Younossi, Z. M., et al. Obeticholic acid for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis: interim analysis from a multicentre, randomised, placebo-controlled phase 3 trial. Lancet. 394 (10215), 2184-2196 (2019).
  41. Trauner, M., et al. Safety and Sustained Efficacy of the Farnesoid X Receptor (FXR) Agonist Cilofexor Over a 96-Week Open-label Extension in Patients With PSC. Clin Gastroenterol Hepatol. 21 (6), 1552-1560.e2 (2023).
  42. Sanyal, A. J., et al. Potent suppression of hydrophobic bile acids by aldafermin, an FGF19 analogue, across metabolic and cholestatic liver diseases. JHEP Rep Innovat Hepatol. 3 (3), 100255(2021).
  43. Iracheta-Vellve, A., et al. FXR and TGR5 Agonists Ameliorate Liver Injury, Steatosis, and Inflammation After Binge or Prolonged Alcohol Feeding in Mice. Hepatol Commun. 2 (11), 1379-1391 (2018).
  44. Han, H., Xu, L., Xiong, K., Zhang, T., Wang, Z. Exploration of Hepatoprotective Effect of Gentiopicroside on Alpha-Naphthylisothiocyanate-Induced Cholestatic Liver Injury in Rats by Comprehensive Proteomic and Metabolomic Signatures. Cell Physiol Biochem. 49 (4), 1304-1319 (2018).
  45. Lai, Q., et al. Mechanisms for Bile Acids CDCA- and DCA-Stimulated Hepatic Spexin Expression. Cells. 11 (14), 2159(2022).
  46. Li, X., et al. UDCA and CDCA alleviate 17α-ethinylestradiol-induced cholestasis through PKA-AMPK pathways in rats. Toxicol Appl Pharmacol. 311, 12-25 (2016).
  47. Sonne, D. P., et al. Postprandial Plasma Concentrations of Individual Bile Acids and FGF-19 in Patients With Type 2 Diabetes. J Clin Endocrinol Metabol. 101 (8), 3002-3009 (2016).
  48. Tang, X., et al. Target profiling analyses of bile acids in the evaluation of hepatoprotective effect of gentiopicroside on ANIT-induced cholestatic liver injury in mice. J Ethnopharmacol. 194, 63-71 (2016).
  49. Hao, J., et al. Gentiopicroside Ameliorated Ductular Reaction and Inflammatory Response in DDC-induced Murine Cholangiopathies Model. Curr Mol Pharmacol. , (2023).
  50. Han, S., et al. Probiotic Pediococcus pentosaceus Li05 Improves Cholestasis through the FXR-SHP and FXR-FGF15 Pathways. Nutrients. 15 (23), 4864(2023).
  51. Yan, M., et al. Diosgenin alleviates nonalcoholic steatohepatitis through affecting liver-gut circulation. Pharmacol Res. 187, 106621(2023).
  52. Huang, C., et al. Gentiopicroside improves non-alcoholic steatohepatitis by activating PPARα and suppressing HIF1. Front Pharmacol. 15, 1335814(2024).
  53. Xie, X., et al. Therapeutic effects of gentiopicroside on adjuvant-induced arthritis by inhibiting inflammation and oxidative stress in rats. Int Immunopharmacol. 76, 105840(2019).
  54. Peiseler, M., et al. Immune mechanisms linking metabolic injury to inflammation and fibrosis in fatty liver disease - novel insights into cellular communication circuits. J Hepatol. 77 (4), 1136-1160 (2022).
  55. Ren, G., et al. Synthesis and Biological Evaluation of Gentiopicroside Derivatives as Novel Cyclooxygenase-2 Inhibitors with Anti-Inflammatory Activity. Drug Des Devel Ther. 17, 919-935 (2023).
  56. Zhang, Y., Pan, S., Yi, S., Sun, J., Wang, H. Gentiopicroside ameliorates CCl4-induced liver injury in mice by regulating the PPAR-γ/Nrf2 and NF-κB/IκB signaling pathways. J Int Med Res. 51 (10), 3000605231204501(2023).
  57. Wu, L., et al. Lactobacillus acidophilus ameliorates cholestatic liver injury through inhibiting bile acid synthesis and promoting bile acid excretion. Gut microbes. 16 (1), 2390176(2024).
  58. Zhang, L., et al. Isoastragaloside I attenuates cholestatic liver diseases by ameliorating liver injury, regulating bile acid metabolism and restoring intestinal barrier. J Ethnopharmacol. 335, 118649(2024).
  59. Ma, X., et al. Paeoniflorin inhibited GSDMD to alleviate ANIT-induced cholestasis via pyroptosis signaling pathway. Phytomedicine. 134, 156021(2024).
  60. Zhang, Z., et al. Biliary NIK promotes ductular reaction and liver injury and fibrosis in mice. Nat Commun. 13 (1), 5111(2022).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

الفيديو قريباً

مقالات ذات صلة