يصف البروتوكول طريقة لإنشاء نموذج عضوي مشتق من سرطان القولون والمستقيم (CRC) مشتق من المريض مع الخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs) لدراسة تفاعلاتها وإمكاناتها العلاجية. يوفر هذا النموذج منصة قبل السريرية لاستكشاف الاستجابات المناعية في البيئة المكروية للورم والتنبؤ بفعالية العلاج القائم على TIL لعلاج CRC المخصص.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إنشاء نظام زراعة مشتركة للعضيات السرطانية المشتقة من المريض في أورام القولون والمستقيم والخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs)
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
سرطان القولون والمستقيم (CRC) هو ثالث أكثر أنواع السرطان شيوعا في جميع أنحاء العالم. تم تحديد الخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs) كعلامة تنبؤية مهمة في CRC. أظهر التطبيق العلاجي ل TILs بالفعل نتائج واعدة في سرطان الجلد وسرطان عنق الرحم. ومع ذلك ، فإن استخدامها في علاج CRC لا يزال في مرحلة استكشافية. لا يتوفر حاليا نموذج مناسب في المختبر لتقييم فعالية TIL ، مما يعيق المزيد من التقدم في هذا المجال. توفر النماذج العضوية المشتقة من المريض (PDO) ، والتي تحتفظ عن كثب بخصائص أنسجة الورم الأصلية وتعكس عدم التجانس بين المرضى ، منصة ممتازة لدراسة التفاعل بين CRC و TILs. في هذه الدراسة ، تم وصف طريقة لإنشاء نموذج عضوي CRC مشتق من المريض من أنسجة الورم المقطوعة حديثا ، متبوعا بعزل وتوسيع TILs. يسمح هذا النظام بالزراعة المشتركة لعضويات CRC و TILs ، مما يتيح تقييم السمية الخلوية والاستجابات المناعية بوساطة TIL. من خلال تحليل فعالية قتل TIL على العضيات ، يمكن التنبؤ بالنتائج المحتملة للعلاج المناعي القائم على TIL لعلاج CRC الشخصي. علاوة على ذلك ، قد تعزز الهندسة الإضافية ل TILs فعاليتها المضادة للأورام ، مما يوفر استراتيجية واعدة لتطوير علاجات خلوية أكثر فعالية. يوفر نموذج الزراعة المشتركة PDO-TIL أداة قوية للتقييم قبل السريري لعلاجات TIL واستراتيجيات العلاج الشخصية في CRC.
المقدمة
يعد سرطان القولون والمستقيم (CRC) أحد أكثر أنواع السرطان انتشارا وفتكا على مستوى العالم ، ويمثل تحديا كبيرا للصحة العامة1. على الرغم من التقدم في طرق العلاج ، بما في ذلك الجراحة والعلاج الكيميائي والعلاج المناعي ، إلا أن تشخيص مرضى CRC - خاصة أولئك الذين يعانون من مرض نقيلي - لا يزال ضعيفا. تلعب البيئة المكروية للورم (TME) دورا حيويا في تشكيل تطور السرطان واستجابات العلاج ، حيث تظهر الخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs) كمكون رئيسي يؤثر على الاستجابة المناعية ضدالسرطان 2. تم تحديد TILs ، وهي مجموعة متنوعة من الخلايا المناعية الموجودة داخل الأورام ، كعلامات تنبؤية مهمة في CRC ، مع مستو....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت جميع التجارب التي تنطوي على مواد مشتقة من الإنسان وفقا لإعلان هلسنكي وتمت الموافقة عليها مسبقا من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى تشونغشان التابعة لجامعة داليان (أرقام الموافقة: KY2023-206-1). تم الحصول على موافقة خطية مستنيرة من جميع المرضى الذين قدموا عينات سريرية لهذه الدراسة. الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.
تضمنت معايير الاشتمال أنسجة سرطان القولون والمستقيم الأولية المؤكدة مرضيا ، وحجم عينة كاف (≥1 سم3) ، وعدم وجود تاريخ للعلاج المساعد الجديد (العلاج الكيميائي أو العلاج الموجه) ، والموافقة المستنيرة الموقعة. تضمنت معايير الاستبعاد جودة الع....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
إنشاء وتوصيف منظمات تسوية المنازعات في اتفاقية حقوق الطفل
تم الحصول على عينات الورم من مرضى CRC. تم استخدام أنسجة ورم CRC التي تم استئصالها حديثا لإنشاء PDOs و TILs ، والتي تم استخدامها لاحقا في تجارب الزراعة المشتركة PDO-TIL (الشكل 1).
الشكل 1: تخطيطي لسير العمل التجريبي الكلي.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تستخدم هذه الدراسة أنسجة CRC المشتقة من المريض للحصول على كل من الخلايا السرطانية و TILs ، والتي يتم من خلالها إنشاء PDOs وتوسيع TILs. ثم يتم فحص التفاعل بين هذين المكونين من خلال نظام الزراعة المشتركة.
في الدراسات السابقة ، تم استخراج TILs باستخدام أجهزة معقدة19 أو مباشرة من معلقات الأنسجةالسرطانية 20. ومع ذلك ، غالبا ما تفشل هذه الطرق في توليد عدد كاف من TILs خلال إطار زمني قصير من عينات الورم المحدودة ، مما يح.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين [82172822]؛ برنامج دعم ابتكار المواهب رفيع المستوى التابع لمكتب داليان للعلوم والتكنولوجيا [2021RD02] ؛ الخطة المشتركة لبرنامج العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة لياونينغ [2024JH2 / 102600067]؛ مشروع التعاون الدولي للعلوم والتكنولوجيا في مقاطعة لياونينغ [2024JH2 / 101900006].
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| متقدم DMEM / F-12 | جيبكو | 12634028 | |
| 2-ميركابتوإيثانول | سيغما | 63689 | |
| 4٪ بارافورمالديهايد | بي بي آي | E672002-0100 | |
| 7-AAD | بيوليجند | 420403 | |
| أ 83-01 | توكريس | 2939 | |
| ملحق B27 | جيبكو | 17504-44 | |
| CD107a-PE-سيانين 7 | بيوليجند | 328618 | |
| CD279-PE | بيوليجند | 329906 | |
| جسم مضاد أحادي النسيلة CD3 (OKT3) | إنفيتروجين | 14-0037-82 | |
| CD3-FITC | بيوليجند | 300406 | |
| CD45 (المجال داخل الخلايا) (D9M8I) ؛ | CST | 13917ه | |
| CD4-APC / سيانين 7 | بيوليجند | 300518 | |
| CD8-APC | بيوليجند | 344722 | |
| سي دي إكس -2 | إم إكس بي | ريم إيه -0631 | |
| كوك20 | إم إكس بي | طقم 0025 | |
| CK7 | إم إكس بي | طقم 0021 | |
| Dylight 488 ، الماعز المضاد للأرانب IgG | أبكين | طائفة A23220 | |
| Dylight 549 ، ماعز مضاد للفأر IgG | أبكين | طالع 23310 | |
| اي.ج.ف | بيبروتك | AF-100-15 | |
| إيككام | CST | 36746ت | |
| مصل الأبقار الجنينية (FBS) | سيلماكس | س211.02 | |
| إف جي إف 10 | بيبروتك | 100-26 | |
| جاسترين (إنسان) | توكريس | 3006 | |
| جلوتا ماكس 100x | جيبكو | 35050-061 | |
| هيبس | سيغما | إتش4034 | |
| HEPES | سيغما | إتش4034 | |
| طقم فصل الخلايا CD3 + البشري (RUO) | RWD | ك 1201-10 | |
| بروتين IFN-gamma المؤتلف البشري | بيبروتك | 300-02-20UG | |
| كي 67 | CST | 9449 ثانية | |
| ماتريجل | كورنينج | 354234 | |
| ن-أستيل سيستين | سيغما | أ 9165 | |
| نيكوتيناميد | سيغما | رقم 0636 | |
| نيفولوماب (مضاد PD-1) | البائع | A2002 | |
| البنسلين / الستربتومايسين | سيغما | V900929 | |
| البنسلين - الستربتومايسين | إن سي إم للتكنولوجيا الحيوية | ج100 ج5 | |
| بريموسين | إنفيفوجين | نملة pm-1 | |
| RBC تحلل المخزن المؤقت | التغذية الحرارية | 00-4300-54 | |
| IL-2 البشري المؤتلف (خال من الناقل) | بيوليجند | 589104 | |
| RPMI 1640 | جيبكو | ||
| SB202190 | البائع | ط1077 | |
| صبغة تريبان بلو 0.4٪ | التغذية الحرارية | تي 10282 | |
| الأجسام المضادة CD28 المنقاة المضادة للإنسان Ultra-LEAF | بيوليجند | 302934 | |
| الجسم المضاد CD3 المضاد للإنسان Ultra-LEAF | بيوليجند | 317325 | |
| واي -27632 | البائع | س 1049 |
المراجع
- Eng, C., et al. Colorectal cancer. Lancet. 404 (10449), 294-310 (2024).
- Sarnaik, A. A., Hwu, P., Mulé, J. J., Pilon-Thomas, S. Tumor-infiltrating lymphocytes: A new hope. Cancer Cell. 42 (8), 1315-1318 (2024).
- Paijens, S. T., Vledder, A., De Bruyn, M., Nijman, H. W.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
