يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إنشاء نظام زراعة مشتركة للعضيات السرطانية المشتقة من المريض في أورام القولون والمستقيم والخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs)

3.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68346

⸱

يونيو 27, 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1The Key Laboratory of biomarker high throughput screening and target translation of breast and gastrointestinal tumor, Affiliated Zhongshan Hospital of Dalian University, 2Department of General Surgery, Affiliated Zhongshan Hospital of Dalian University

في هذه المقالة

ملخص

يصف البروتوكول طريقة لإنشاء نموذج عضوي مشتق من سرطان القولون والمستقيم (CRC) مشتق من المريض مع الخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs) لدراسة تفاعلاتها وإمكاناتها العلاجية. يوفر هذا النموذج منصة قبل السريرية لاستكشاف الاستجابات المناعية في البيئة المكروية للورم والتنبؤ بفعالية العلاج القائم على TIL لعلاج CRC المخصص.

الملخص

سرطان القولون والمستقيم (CRC) هو ثالث أكثر أنواع السرطان شيوعا في جميع أنحاء العالم. تم تحديد الخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs) كعلامة تنبؤية مهمة في CRC. أظهر التطبيق العلاجي ل TILs بالفعل نتائج واعدة في سرطان الجلد وسرطان عنق الرحم. ومع ذلك ، فإن استخدامها في علاج CRC لا يزال في مرحلة استكشافية. لا يتوفر حاليا نموذج مناسب في المختبر لتقييم فعالية TIL ، مما يعيق المزيد من التقدم في هذا المجال. توفر النماذج العضوية المشتقة من المريض (PDO) ، والتي تحتفظ عن كثب بخصائص أنسجة الورم الأصلية وتعكس عدم التجانس بين المرضى ، منصة ممتازة لدراسة التفاعل بين CRC و TILs. في هذه الدراسة ، تم وصف طريقة لإنشاء نموذج عضوي CRC مشتق من المريض من أنسجة الورم المقطوعة حديثا ، متبوعا بعزل وتوسيع TILs. يسمح هذا النظام بالزراعة المشتركة لعضويات CRC و TILs ، مما يتيح تقييم السمية الخلوية والاستجابات المناعية بوساطة TIL. من خلال تحليل فعالية قتل TIL على العضيات ، يمكن التنبؤ بالنتائج المحتملة للعلاج المناعي القائم على TIL لعلاج CRC الشخصي. علاوة على ذلك ، قد تعزز الهندسة الإضافية ل TILs فعاليتها المضادة للأورام ، مما يوفر استراتيجية واعدة لتطوير علاجات خلوية أكثر فعالية. يوفر نموذج الزراعة المشتركة PDO-TIL أداة قوية للتقييم قبل السريري لعلاجات TIL واستراتيجيات العلاج الشخصية في CRC.

المقدمة

يعد سرطان القولون والمستقيم (CRC) أحد أكثر أنواع السرطان انتشارا وفتكا على مستوى العالم ، ويمثل تحديا كبيرا للصحة العامة1. على الرغم من التقدم في طرق العلاج ، بما في ذلك الجراحة والعلاج الكيميائي والعلاج المناعي ، إلا أن تشخيص مرضى CRC - خاصة أولئك الذين يعانون من مرض نقيلي - لا يزال ضعيفا. تلعب البيئة المكروية للورم (TME) دورا حيويا في تشكيل تطور السرطان واستجابات العلاج ، حيث تظهر الخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs) كمكون رئيسي يؤثر على الاستجابة المناعية ضدالسرطان 2. تم تحديد TILs ، وهي مجموعة متنوعة من الخلايا المناعية الموجودة داخل الأورام ، كعلامات تنبؤية مهمة في CRC ، مع مستويات عالية من تسلل TIL غالبا ما ترتبط بنتائج سريرية أفضل3. سلطت الدراسات الحديثة الضوء أيضا على الإمكانات العلاجية ل TILs في أنواع السرطان الأخرى ، مثل سرطان الجلد4 وسرطان عنقالرحم 5 ، حيث أظهر العلاج المناعي القائم على TIL فعالية واعدة.

ومع ذلك ، على الرغم من نجاح TILs في بعض أنواع السرطان ، إلا أن تطبيقها في CRC لا يزال مجالا للتحقيق المستمر. يمثل تعقيد وعدم تجانس CRC ، إلى جانب البيئة المكروية للورم المثبط للمناعة ، تحديات للعلاج المناعي الفعال القائم على TIL6. غالبا ما تظهر أورام سرطان الخلايا القلبية (CRC) مادة TME7 شديدة المثبطة للمناعة ، وتتميز بوجود الخلايا التائية التنظيمية (Tregs) ، والخلايا المثبطة المشتقة من النخاع (MDSCs) ، والضامة المرتبطة بالورم (TAMs) ، وكلها تمنع وظيفة TIL بنشاط. علاوة على ذلك ، تعبر خلايا CRC بشكل متكرر عن جزيئات نقاط التفتيش المناعية ، مثل PD-L1 ، والتي يمكن أن تعيق قتل8 بوساطة TIL. بالإضافة إلى ذلك ، فإن عدم التجانس الجيني لأورام سرطان الخلايا السرطانية ، إلى جانب السدى المثبط للمناعة ، يعقد قدرة TILs على استهداف الخلايا السرطانية والقضاء عليها بشكل فعال ، مما يجعل من الصعب تحقيق نفس المستوى من النجاح الذي شوهد في سرطان الجلد وسرطان عنقالرحم 9. تتمثل الفجوة الحرجة في البحث الحالي في عدم وجود نماذج مناسبة في المختبر يمكنها محاكاة التفاعلات بين CRC و TILs بدقة. هذه النماذج ضرورية لتقييم إمكانات TILs في علاج CRC وتحسين تطبيقها لاستراتيجيات العلاج الشخصية.

ظهرت العضيات المشتقة من المريض (PDOs) كأداة قوية لنمذجة السرطانات البشرية10. تحاكي هذه الثقافات ثلاثية الأبعاد ، المشتقة من أنسجة ورم المريض ، عن كثب الخصائص النسيجية والوراثية للأورام الأصلية ، مما يوفر تمثيلا أكثر دقة لبيولوجيا الورم مقارنة بخطوط الخلايا ثنائية الأبعاد التقليدية. تحتفظ نماذج PDO أيضا بعدم التجانس بين المرضى ، مما يجعلها مثالية لنهج الطب الشخصي11. في CRC ، تم استخدام PDOs لفحص الأدوية ودراسة بيولوجيا الورم12 ، لكن استخدامها في تقييم الاستجابات المناعية - خاصة في سياق TILs - لا يزال محدودا. يجب أن يوازن تصميم نموذج الزراعة المشتركة للخلايا المناعية PDO بين تعقيد البيئة المكروية وإمكانية التحكم التجريبي. على الرغم من أن مكونات مثل الضامة والخلايا المتغصنة يمكن أن تعزز التقليد الحيوي ، إلا أن خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMCs) أصبحت الخيار السائد نظرا لإمكانية الوصول إليها. ومع ذلك ، تحتوي PBMCs على نسبة منخفضة من الخلايا التائية الخاصة بالورم ، وقد تتداخل المجموعات السكانية الفرعية للخلايا الوحيدة مع الاستقرار البيئيالجزئي 13. في المقابل ، تثري TILs بشكل طبيعي المستنسخة التفاعلية للورم وتحمل نمطا ظاهريا للإرهاق في الموقع ، مما يجعلها نموذجا متفوقا للتحليل الدقيق لآليات التهرب المناعي في سرطان القولون والمستقيم.

الهدف من هذه الدراسة هو تطوير منصة جديدة في المختبر لتقييم الاستجابات المضادة للأورام بوساطة TIL في CRC من خلال إنشاء نظام زراعة مشتركة ل CRC PDOs و TILs. يتيح هذا النموذج التقييم المباشر للسمية الخلوية TIL ضد PDOs CRC وتحليل الاستجابات المناعية في سياق خاص بالمريض. قد يوفر استخدام هذا النظام رؤى أعمق حول إمكانات العلاجات المناعية القائمة على TIL ل CRC ويدعم استكشاف الاستراتيجيات لتعزيز فعالية TIL من خلال الأساليب الهندسية. كانت الطرق السابقة محدودة بسبب قلة عدد TILs14. في معظم الحالات ، تم استزراع PBMCs أولا مع PDOs لمدة أسبوعين ، وبعد ذلك يمكن توسيع TILs الخاصة بالورم من PBMCs ثم استزراعها بشكل مشترك مع PDOs لمراقبة التأثيرات السامةللخلايا 15. ومع ذلك ، يعاني هذا النهج أيضا من وقت النمذجة الممتد والعائد الإجمالي المنخفض. في المقابل ، تسمح الطريقة الموصوفة بعزل وإنشاء PDOs و TILs من عينات الأنسجة السرطانية الأصغر ، والتي يمكن بعد ذلك استزراعها بشكل مباشر. وقد يوفر هذا النهج مزيدا من الراحة من حيث المنهجية والكفاءة. في النهاية ، يهدف هذا النظام إلى توفير أداة قوية للتقييم قبل السريري لعلاجات TIL ، مما يمهد الطريق لاستراتيجيات العلاج الشخصية التي قد تحسن النتائج لمرضى CRC.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت جميع التجارب التي تنطوي على مواد مشتقة من الإنسان وفقا لإعلان هلسنكي وتمت الموافقة عليها مسبقا من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى تشونغشان التابعة لجامعة داليان (أرقام الموافقة: KY2023-206-1). تم الحصول على موافقة خطية مستنيرة من جميع المرضى الذين قدموا عينات سريرية لهذه الدراسة. الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.

تضمنت معايير الاشتمال أنسجة سرطان القولون والمستقيم الأولية المؤكدة مرضيا ، وحجم عينة كاف (≥1 سم3) ، وعدم وجود تاريخ للعلاج المساعد الجديد (العلاج الكيميائي أو العلاج الموجه) ، والموافقة المستنيرة الموقعة. تضمنت معايير الاستبعاد جودة العينة الرديئة مع نخر أو تليف يتجاوز 50٪ ، ووجود عدوى شديدة متزامنة أو مرض مناعي ذاتي ، وتاريخ من الأورام الخبيثة الأخرى ، ورفض المريض المشاركة.

1. تحضير كاشف ثقافة الخلية

  1. وسيط ثقافة ل CRC PDOs: قم بإعداد وسيط كامل ل CRC PDOs وفقا للتكوين الموضح في الجدول 1.
  2. الوسط الكامل (سم) ل TILs16: المكملات RPMI1640 المتوسطة مع 10٪ FBS ، 1٪ بنسلين ستربتومايسين ، HEPES ، 2-ميركابتو إيثانول ، و 3000 وحدة دولية / مل IL-2.
  3. وسط تمدد TILs (EM): مكمل غذائي RPMI1640 متوسط يحتوي على 10٪ FBS و 1٪ بنسلين ستربتومايسين و HEPES و 600 وحدة دولية / مل IL-2.
  4. AdDMEM ++++: مكمل DMEM المتقدم مع 1٪ بنسلين ستربتومايسين ، 1٪ HEPES ، 1٪ جلوتامين ، و 5 ملي مولار Y-27632.
  5. المخزن المؤقت للهضم CRC: أضف 50 ميكرولتر من الكولاجيناز من النوع الرابع و 10 ميكرولتر من محلول البنسلين والستربتومايسين والأمفوتريسين B إلى AdDMEM ++++.
  6. محلول غسيل الأنسجة: أضف 2٪ بنسلين ستربتومايسين إلى PBS.

2. معالجة الأنسجة المشتقة من المريض

  1. استئصال أنسجة ورم سرطان القولون والمستقيم الأولية (التي يتم إجراؤها من قبل جراحين ذوي خبرة). بعد الجمع ، قسم الأنسجة إلى قسمين. ضع جزءا واحدا في AdDMEM ++++ في صندوق ثلج وانقله إلى المختبر لتفكك الخلايا السرطانية وثقافتها. ضع الجزء الآخر في 4٪ بارافورمالدهيد لتحليل الأنسجةالمرضية 17.
  2. قم بإذابة الثلج ببطء في ثلاجة 4 درجات مئوية. عازلة تحلل كريات الدم الحمراء الدافئة مسبقا لدرجة حرارة الغرفة. تحضير مقص المناديل ، والملقط ، ووسط AdDMEM ++++ ، ومخزن هضم CRC.
  3. انقل الأنسجة إلى طبق بتري واشطفها ثلاث مرات باستخدام 5 مل PBS. استبدلها بطبق جديد واشطفها ثلاث مرات بمحلول غسيل مناديل سعة 5 مل لتقليل التلوث.
  4. افرم المنديل بالمقص ، وانقله إلى عازلة الهضم ، واحتضنه في حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة حتى التفكك الكامل.
  5. قطع الأنسجة بمقص الأنسجة ونقلها إلى محلول هضم الأنسجة. هضم الأنسجة في حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية وراقب حتى يكتمل تفكك الأنسجة.
  6. أضف حجما متساويا من AdDMEM++++ لتحييد عملية الهضم. جهاز طرد مركزي عند 380 × جم لمدة 5 دقائق عند 25 درجة مئوية.
  7. تخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة. راقب عدد كريات الدم الحمراء في الحبيبات. أضف 1-3 مل من محللة كريات الدم الحمراء واحتضانها لمدة 10 دقائق عند 25 درجة مئوية.
    1. إنهاء التحلل بحجم متساو من AdDMEM ++++. جهاز طرد مركزي عند 380 × جم لمدة 5 دقائق عند حوالي 25 درجة مئوية.
  8. تخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة وأعد تعليق حبيبات الخلية بحجم مناسب من AdDMEM++++.
  9. حدد الخلايا القابلة للحياة باستخدام استبعاد التريبان الأزرق للحصول على تعليق أحادي الخلية لأنسجة الورم.

3. إنشاء نموذج تنمية نفط عمان وثقافة TILs

  1. قسم معلق الخلية المفردة لأنسجة الورم إلى جزأين: استخدم أحدهما لإنشاء نموذج PDO والآخر لثقافة TILs.
  2. بعد عد الخلايا ، قم بخلط 80,000 خلية لكل بئر من تعليق الخلية مع Matrigel بنسبة 1: 1 لإنشاء نموذج PDO.
  3. أعد تعليق معلق الخلية المتبقي في CM في صفيحة 24 بئرا بتركيز 1 × 106 خلايا / مل لثقافة TILs.
  4. راقب يوميا. التقط صورا لتسجيل حالة PDOs و TILs. قم بتغيير الوسيط كل يومين.

4. تنقية وتوسيع TILs

  1. استزراع TILs لمدة 10-20 يوما قبل التنقية.
  2. اجمع TILs في أنبوب الطرد المركزي. شطف لوحة البئر بوسط جديد وجمع أي خلايا متبقية من لوحة البئر.
  3. جهاز طرد مركزي عند 125 × جم لمدة 5 دقائق عند حوالي 25 درجة مئوية.
  4. تخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة. يغسل ب 2 مل PBS وجهاز طرد مركزي مرة أخرى عند 125 × جم لمدة 5 دقائق عند 25 درجة مئوية تقريبا.
  5. إجراء عد الخلايا.
  6. استخدم حبات CD3 + المغناطيسية للفرز لعزل خلايا CD3 + T18.
  7. احتضان الجسم المضاد بتعليق الخلية عند 4 درجات مئوية لمدة 10-15 دقيقة.
  8. احتضان الخرزات المغناطيسية بتعليق خلية الجسم المضاد عند 4 درجات مئوية لمدة 10-15 دقيقة.
  9. ضع عمود الفرز في مغناطيس الفرز. أضف تعليق الخلية إلى العمود واسمح فقط بالاحتفاظ بالخلايا الموجبة المسماة بالخرزة المغناطيسية في عمود الفرز.
  10. قم بإزالة عمود الفرز من المجال المغناطيسي. أضف محلول مخزن مؤقت لمسح الخلايا الموجبة المحتجزة في العمود. أعد تعليق الخلايا في 2 مل من PBS وأجهزة الطرد المركزي عند 195 × جم لمدة 5 دقائق عند حوالي 25 درجة مئوية.
  11. تخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة. أعد تعليق الخلايا في صفيحة 12 بئرا مع وسط EM طازج بتركيز 1 × 106 خلايا / مل. أضف 5 ميكروغرام / مل الجسم المضاد CD3. قم بتمرير الخلايا إلى قوارير ثقافة جديدة كل 3 أيام.

5. الأنسجة وتوصيف IHC ل PDOs

  1. استنشق وسط الثقافة بعد أن تنمو العضيات إلى حجم 50 ميكرومتر.
  2. قم بإصلاح المجالات العضوية مباشرة في 4٪ بارافورمالدهايد. شفط العضيات ، وجهاز الطرد المركزي عند 195 × جم لمدة 5 دقائق عند حوالي 25 درجة مئوية ، وتضمينه في 2٪ agarose ، والسماح بالعلاج ، ونقله إلى 4٪ بارافورمالدهيد للتثبيت طوال الليل.
  3. في اليوم التالي ، قم بإجراء الجفاف المتدرج. قم بإعداد كتل الشمع ، وقطع أقسام 4 ميكرومتر ، وإعادة الترطيب باستخدام تدرج ، وإجراء تلطيخ كيميائي مناعي باستخدام الأجسام المضادة CK7 و CK20 و Ki-67 و CDX-2.

6. توصيف TILs

  1. قم بتنقية TILs ، وزرعها حتى يتم الوصول إلى عدد كاف ، واستخرج جزءا للتوصيف.
  2. قم بتمييز خلايا التعليق باستخدام طريقة التقشر. اضبط سرعة دوران التقشير على 343 × جم لمدة 4 دقائق عند 25 درجة مئوية تقريبا.
  3. عد الخلايا وبذرها في 1 × 104 لكل شريحة.
  4. قم بإرفاق الخلايا بإحكام بالشرائح عن طريق الطرد المركزي.
  5. قم بإصلاح الخلايا بنسبة 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 15 دقيقة واغسلها ثلاث مرات باستخدام PBS.
  6. احتضان بمحلول حجب (PBS يحتوي على 2٪ FBS) لمدة 1 ساعة.
  7. احتضان بالأجسام المضادة الأولية (CD45 ، CD3 ، EpCAM) لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. يغسل ثلاث مرات باستخدام PBS.
  8. تحضير واحتضان الجسم المضاد الثانوي وفقا للتركيز الموصى به من الشركة المصنعة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. يغسل ثلاث مرات باستخدام PBS.
    ملاحظة: انتبه إلى تماثل الأجسام المضادة.
  9. احتضن مع DAPI لمدة 15 دقيقة عند 25 درجة مئوية تقريبا.
  10. راقب الخلايا الملطخة تحت المجهر الفلوري.

7. نظام الزراعة المشتركة PDOs و TILs

  1. أضف IFN-γ إلى الوسط العضوي لتعزيز عرض المستضد. احتضان عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 لمدة 24 ساعة15.
  2. تمييع الجسم المضاد ل CD28 باستخدام PBS. قم بتغطية صفيحة سعة 96 بئرا بإضافة 50 ميكرولتر من محلول الجسم المضاد لكل بئر. أغلق اللوحة بغشاء مانع للتسرب واحتضنه عند 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة.
  3. بعد 24 ساعة ، قم بفصل العضيات إلى خلايا مفردة باستخدام TrypLE. عد الخلايا واغسلها مرتين باستخدام PBS.
  4. اجمع TIL المقترنة ، وعد الخلايا ، واغسلها مرتين باستخدام PBS.
  5. تلقيح العضيات في 1 × 104 خلايا لكل بئر وتلقيح TILs عند 1 × 105 خلايا لكل بئر لتحقيق نسبة مستجيب إلى هدف (E: T) تبلغ 10: 1 للزراعة المشتركة.
  6. إجراء استزراع مشترك في وسط RPMI 1640 المكمل ب 10٪ FBS و1٪ بنسلين ستربتومايسين و3000 وحدة / مل IL-2 و20 ميكروغرام / مل من الجسم المضاد المضاد المضاد ل PD-1. احتضن لمدة 3 أيام والتقط الصور للمراقبة والتوثيق.
    ملاحظة: قم بإعداد العضيات بدون TILs كمجموعة تحكم.

8. الفحص الوظيفي ل TILs عن طريق قياس التدفق الخلوي

  1. جمع PDOs و TILs في نهاية فترة الاستزراع المشترك.
  2. اغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS عن طريق الطرد المركزي عند 300 × جم لمدة 5 دقائق في كل مرة. تخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة.
  3. تحضير كوكتيل الأجسام المضادة التي تحتوي على CD3-FITC و CD4-APC / Cyanine7 و CD8-APC و CD107a-PE-Cyanine7 و CD279-PE و 7-AAD.
  4. أعد تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من كوكتيل الأجسام المضادة واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة ، محمية من الضوء.
  5. أضف 1 مل PBS لغسل الخلايا. جهاز طرد مركزي عند 300 × جم لمدة 5 دقائق وتخلص من المادة الطافية باستخدام ماصة.
  6. أعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر PBS.
  7. إجراء تحليل قياس التدفق الخلوي. راجع الشكل التكميلي 1 للحصول على استراتيجية التحليل التفصيلي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

إنشاء وتوصيف منظمات تسوية المنازعات في اتفاقية حقوق الطفل
تم الحصول على عينات الورم من مرضى CRC. تم استخدام أنسجة ورم CRC التي تم استئصالها حديثا لإنشاء PDOs و TILs ، والتي تم استخدامها لاحقا في تجارب الزراعة المشتركة PDO-TIL (الشكل 1).

figure-results-1
الشكل 1: تخطيطي لسير العمل التجريبي الكلي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تستخدم هذه الدراسة أنسجة CRC المشتقة من المريض للحصول على كل من الخلايا السرطانية و TILs ، والتي يتم من خلالها إنشاء PDOs وتوسيع TILs. ثم يتم فحص التفاعل بين هذين المكونين من خلال نظام الزراعة المشتركة.

في الدراسات السابقة ، تم استخراج TILs باستخدام أجهزة معقدة19 أو مباشرة من معلقات الأنسجةالسرطانية 20. ومع ذلك ، غالبا ما تفشل هذه الطرق في توليد عدد كاف من TILs خلال إطار زمني قصير من عينات الورم المحدودة ، مما يح...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين [82172822]؛ برنامج دعم ابتكار المواهب رفيع المستوى التابع لمكتب داليان للعلوم والتكنولوجيا [2021RD02] ؛ الخطة المشتركة لبرنامج العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة لياونينغ [2024JH2 / 102600067]؛ مشروع التعاون الدولي للعلوم والتكنولوجيا في مقاطعة لياونينغ [2024JH2 / 101900006].

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
متقدم DMEM / F-12جيبكو12634028
2-ميركابتوإيثانولسيغما63689
4٪ بارافورمالديهايدبي بي آيE672002-0100
7-AADبيوليجند420403
أ 83-01توكريس2939
ملحق B27جيبكو17504-44
CD107a-PE-سيانين 7بيوليجند328618
CD279-PEبيوليجند329906
جسم مضاد أحادي النسيلة CD3 (OKT3)إنفيتروجين14-0037-82
CD3-FITCبيوليجند300406
CD45 (المجال داخل الخلايا) (D9M8I)   ؛CST13917ه
CD4-APC / سيانين 7بيوليجند300518
CD8-APCبيوليجند344722
سي دي إكس -2إم إكس بيريم إيه -0631
كوك20إم إكس بيطقم 0025
CK7إم إكس بيطقم 0021
Dylight 488 ، الماعز المضاد للأرانب IgGأبكينطائفة A23220
Dylight 549 ، ماعز مضاد للفأر IgGأبكينطالع 23310
اي.ج.فبيبروتكAF-100-15
إيككامCST36746ت
مصل الأبقار الجنينية (FBS)سيلماكسس211.02
إف جي إف 10بيبروتك100-26
جاسترين (إنسان)توكريس3006
جلوتا ماكس 100xجيبكو35050-061
هيبسسيغماإتش4034
HEPESسيغماإتش4034
طقم فصل الخلايا CD3 + البشري (RUO)RWDك 1201-10
بروتين IFN-gamma المؤتلف البشريبيبروتك300-02-20UG
كي 67CST9449 ثانية
ماتريجلكورنينج354234
ن-أستيل سيستينسيغماأ 9165
نيكوتيناميدسيغمارقم 0636
نيفولوماب (مضاد PD-1)البائعA2002 
البنسلين / الستربتومايسينسيغماV900929
البنسلين - الستربتومايسينإن سي إم للتكنولوجيا الحيويةج100 ج5
بريموسينإنفيفوجيننملة pm-1
RBC تحلل المخزن المؤقتالتغذية الحرارية00-4300-54
IL-2 البشري المؤتلف (خال من الناقل)بيوليجند589104
RPMI 1640جيبكو
SB202190البائعط1077
صبغة تريبان بلو 0.4٪التغذية الحراريةتي 10282
الأجسام المضادة CD28 المنقاة المضادة للإنسان Ultra-LEAFبيوليجند302934
الجسم المضاد CD3 المضاد للإنسان Ultra-LEAFبيوليجند317325
واي -27632البائعس 1049

المراجع

  1. Eng, C., et al. Colorectal cancer. Lancet. 404 (10449), 294-310 (2024).
  2. Sarnaik, A. A., Hwu, P., Mulé, J. J., Pilon-Thomas, S. Tumor-infiltrating lymphocytes: A new hope. Cancer Cell. 42 (8), 1315-1318 (2024).
  3. Paijens, S. T., Vledder, A., De Bruyn, M., Nijman, H. W. Tumor-infiltrating lymphocytes in the immunotherapy era. Cell Mol Immunol. 18 (4), 842-859 (2021).
  4. Betof Warner, A., Corrie, P. G., Hamid, O. Tumor-infiltrating lymphocyte therapy in melanoma: Facts to the future. Clin Cancer Res. 29 (10), 1835-1854 (2023).
  5. Huang, H., et al. Phase I study of adjuvant immunotherapy with autologous tumor-infiltrating lymphocytes in locally advanced cervical cancer. J Clin Invest. 132 (15), e157726(2022).
  6. Mengus, C., et al. In vitro modeling of tumor-immune system interaction. ACS Biomater Sci Eng. 4 (2), 314-323 (2018).
  7. Wang, H., Tian, T., Zhang, J. Tumor-associated macrophages (tams) in colorectal cancer (crc): From mechanism to therapy and prognosis. Int J Mol Sci. 22 (16), 8470(2021).
  8. Rasyid, N. R., et al. The potential of PD-1 and PD-L1 as prognostic and predictive biomarkers in colorectal adenocarcinoma based on TILs grading. Curr Oncol. 31 (12), 7476-7493 (2024).
  9. Chen, E., Zeng, Z., Zhou, W. The key role of matrix stiffness in colorectal cancer immunotherapy: Mechanisms and therapeutic strategies. Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 1879 (6), 189198(2024).
  10. Xu, H., Jiao, D., Liu, A., Wu, K. Tumor organoids: Applications in cancer modeling and potentials in precision medicine. J Hematol Oncol. 15 (1), 58(2022).
  11. Lv, J., et al. Construction of tumor organoids and their application to cancer research and therapy. Theranostics. 14 (3), 1101-1125 (2024).
  12. Ooft, S. N., et al. Patient-derived organoids can predict response to chemotherapy in metastatic colorectal cancer patients. Sci Transl Med. 11 (513), eaay2574(2019).
  13. Magré, L., et al. Emerging organoid-immune co-culture models for cancer research: From oncoimmunology to personalized immunotherapies. J Immunother Cancer. 11 (5), e006290(2023).
  14. Matsueda, S., Chen, L., Li, H., Yao, H., Yu, F. Recent clinical researches and technological development in til therapy. Cancer Immunol Immunother. 73 (11), 232(2024).
  15. Cattaneo, C. M., et al. Tumor organoid-t-cell co-culture systems. Nat Protoc. 15 (1), 15-39 (2020).
  16. Itzhaki, O., et al. Establishment and large-scale expansion of minimally cultured "young" tumor infiltrating lymphocytes for adoptive transfer therapy. J Immunother. 34 (2), 212-220 (2011).
  17. Yao, Y., et al. Patient-derived organoids predict chemoradiation responses of locally advanced rectal cancer. Cell Stem Cell. 26 (1), 17-26.e16 (2020).
  18. Moore, D. K., Motaung, B., Du Plessis, N., Shabangu, A. N., Loxton, A. G. Isolation of b-cells using miltenyi macs bead isolation kits. PLoS One. 14 (3), e0213832(2019).
  19. Albrecht, H. C., et al. Generation of colon cancer-derived tumor-infiltrating t cells (tils) for adoptive cell therapy. Cytotherapy. 25 (5), 537-547 (2023).
  20. Tan, Y. S., Lei, Y. L. Isolation of tumor-infiltrating lymphocytes by ficoll-paque density gradient centrifugation. Methods Mol Biol. 1960, 93-99 (2019).
  21. Ou, L., et al. Patient-derived melanoma organoid models facilitate the assessment of immunotherapies. EBioMedicine. 92, 104614(2023).
  22. Huang, H., et al. Patient-derived organoids as personalized avatars and a potential immunotherapy model in cervical cancer. iScience. 26 (11), 108198(2023).
  23. Parikh, A. Y., et al. Using patient-derived tumor organoids from common epithelial cancers to analyze personalized T-cell responses to neoantigens. Cancer Immunol Immunother. 72 (10), 3149-3162 (2023).
  24. Wherry, E. J. T cell exhaustion. Nat Immunol. 12 (6), 492-499 (2011).
  25. Xu, Y., et al. An engineered IL-15 cytokine mutein fused to an anti-PD1 improves intratumoral T-cell function and antitumor immunity. Cancer Immunol Res. 9 (10), 1141-1157 (2021).
  26. Chang, C. H., et al. Posttranscriptional control of T cell effector function by aerobic glycolysis. Cell. 153 (6), 1239-1251 (2013).
  27. Trefny, M. P., et al. Deletion of Snx9 alleviates CD8 T cell exhaustion for effective cellular cancer immunotherapy. Nat Commun. 14 (1), 86(2023).
  28. Sarnaik, A. A., et al. Lifileucel, a tumor-infiltrating lymphocyte therapy, in metastatic melanoma. J Clin Oncol. 39 (24), 2656-2666 (2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

عضوانيات سرطان القول والمستقيمالزراعة المشتركة للعضوانياتالعضوانيات المشتقة من المرضىتوسيع الخلايا اللمفاوية المتسللة إلى الورمحبيبات CD3 المغناطيسيةقياس التدفق الخلويعزل الخلايا المناعيةتقييم السمية الخلويةصبغ التألق المناعي
إنشاء نظام زراعة مشتركة للعضيات السرطانية المشتقة من المريض في أورام القولون والمستقيم والخلايا الليمفاوية المتسللة للورم (TILs)
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.