تقنيات فعالة لأخذ عينات شاملة من الأنسجة التي يمكن الوصول إليها في Xenopus البالغين

Summary

هذا هو الجزء الأول من بروتوكول أخذ عينات Xenopus الشامل. الأنسجة التي تم أخذ عينات منها هي بطين القلب ، والجذع الشرياني ، وفص الكبد الأيسر ، والمرارة ، والرئة ، والبنكرياس ، والطحال ، والحنجرة ، والمريء ، والمعدة ، والأمعاء ، والخصيتين ، والأجسام الدهنية ، وقناة البيض ، والكلى المزدوجة ، والضفيرة الوركي ، والجلد ، والغدة الصعترية ، والعين الكاملة.

Abstract

لطالما كان Xenopus كائنا نموذجيا محوريا للتحقيق في تطور الفقاريات وأمراضها ، مما يوفر رؤى عميقة حول العمليات الخلوية ووظيفة الجينات. على الرغم من ثروة المعلومات حول Xenopus الجنيني ، لا تزال هناك فجوة كبيرة في الطرق الموحدة لأخذ عينات الأنسجة البالغة ، خاصة بالنسبة للأساليب الحديثة مثل البروتينات الكمية. تقدم هذه الدراسة بروتوكولا شاملا لأخذ عينات سريعة ودقيقة وفعالة من أنسجة متعددة في Xenopus البالغين. يعالج البروتوكول التحديات المرتبطة بالاختلافات التشريحية الدقيقة مقارنة بالأنوران الأخرى ، مما يضمن قابلية التكاثر حتى بالنسبة لأولئك الذين لديهم خبرة محدودة في تشريح الضفادع. تم تحسين هذا البروتوكول للتحليلات الكيميائية الحيوية عالية الجودة من خلال إعطاء الأولوية لنضارة العينة. نحن نسهل الجمع السريع لما يصل إلى 18 نسيجا في غضون ساعة. بالإضافة إلى ذلك ، تنطبق الطرق على الظروف المنفوخة وغير المنفخة ، مما يوفر المرونة لمجموعة من الاحتياجات التجريبية. لا يملأ هذا العمل فجوة منهجية حرجة ل Xenopus laevis و tropicalis فحسب ، بل يعمل أيضا كمورد قيم للباحثين الذين يتكيفون مع التقنيات مع نماذج البرمائيات المماثلة ، وبالتالي تعزيز نطاق وموثوقية الدراسات البيولوجية والتطورية المقارنة.

Introduction

يقدم Xenopus مزايا فريدة على الفئران وأسماك الزرد والكائنات الحية النموذجية الأخرى لدراسة الأمراض البشرية ، لا سيما في السياقات التنموية والتطورية. يتيح نموها الجنيني الخارجي والأجنة الكبيرة التي يمكن التلاعب بها بسهولة المراقبة في الوقت الفعلي والتدخلات التجريبية (على سبيل المثال ، تطعيم الأنسجة ، وتحرير الجينات) التي تمثل تحديا في الفئران ، والتي تتطور داخليا وتتطلب إجراءات جراحية. بالإضافة إلى ذلك ، توفر أطراف القلب ورباعية الأرجل المكونة من ثلاث غرف في Xenopus جسرا تطوريا مباشرا لدراسة العيوب الخلقية¹ ، وتجديد الأطراف² ، وتطور القلب³. على عكس....

Protocol

تمت الموافقة على جميع التجارب وإجراؤها وفقا لقواعد ولوائح كلية الطب بجامعة هارفارد IACUC (لجنة رعاية المؤسسية واستخدامها IS 00001365_3). إذا تم اتباع بروتوكول التروية¹³ قبل أخذ العينات، فانتقل إلى الخطوة 2.3.

1. التحضير (بدون نضح)

1. تأكد من أن مؤسسة البحث قد وافقت على تقنية القتل الرحيم الموضحة في هذا البروتوكول.
2. تحضير محلول 5 جم / لتر MS-222 (ثلاثيين ميثان سولفونات) و 5 جم / لتر بيكربونات الصوديوم (انظر جدول المواد). تحقق من الرقم الهيدروجيني للتأكد من أنه ≥7.
   ملاحظة: يجب أن يكون الحجم أكبر من الحجم المطلوب لتغطية التي يتم قتلها الرحيم بالكامل....

Results

باتباع جميع خطوات هذا البروتوكول ، تم استئصال بطين القلب ، والجذع الشرياني ، وفص الكبد الأيسر ، والمرارة ، والرئة ، والبنكرياس ، والطحال ، والحنجرة ، والمريء ، والمعدة ، والأمعاء ، والخصيتين ، والأجسام الدهنية ، وقناة البيض ، والكلى المزدوجة ، والضفيرة الوركي ، والجلد ، والغدة الصعترية ، والعين بأكملها في غضون ساعة من القتل الرحيم (انظر الشكل 1 ، الشكل 2 ، الشكل 3 ، الشكل 4

Discussion

تم تصميم البروتوكول المقدم هنا لتوفير المرونة للمستخدمين على مستويات الخبرة المختلفة مع ضمان جمع الأنسجة الأساسية في الوقت المناسب وبطريقة فعالة. ينصح المستخدمون الجدد باتباع كل خطوة في البروتوكول كما هو موضح لضمان الجمع المنهجي للأنسجة. ومع ذلك ، قد يختار المستخدمون الأكثر خبرة تخطي خطوات معينة وأخذ عينات فقط من الأنسجة التي يحتاجونها. على سبيل المثال ، يمكن الوصول إلى الطحال ، الموجود خلف المساريق ، دون أخذ عينات من البنكرياس ببساطة عن طريق تحريك المعدة. تسمح هذه القدرة على التكيف بتخص.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS & nbsp ؛	Corning	21-040-CV
5x عدسة مكبرة مع ضوء LED وحامل	amazon.com		ينتج B08QJ6J8P1 ضوء الحرارة
ماصات نقل يمكن التخلص	منها VWR	414004-036
تشريح ملقط مدبب ناعم	فيشر ساينتفيك	08-875
تشريح مقص حاد ، مستقيم 6.5 بوصة	VWR	76457-374
تشريح	فيشر Scientific	14-370-284	صفائح الستايروفوم هي حاوية بديلة مقبولة
للقتل الرحيم	حاوية البلاستيك الأمريكي   ؛	العنصر  2860	حاويات غير شفافة بديلة مقبولة
غطاء حاوية القتل الرحيم	Plastic   ؛	العنصر  مقص قزحية القزحية 3047
6 "	VWR	470018-938	مقص القزحية هو بديل مقبول
MS-222: سينكاين (tricaine سابقا)	ملقط أنسجة أسنان الفئران Pentair AES	TRS1
5.5 بوصة ، الفولاذ المقاوم للصدأ	فيشر Scientific	S08100
بيكربونات الصوديوم ، مسحوق ، USP	Fisher Scientific	18-606-333
ملقط العينة ،	VWR	82027-442
لتشريح	Fisher Scinetific	S99385