مقالة منهجية

إعطاء Δ 9-رباعي هيدروكانابينول (THC) في الفئران المراهقة والبالغة

1.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68358

⸱

أغسطس 1, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Anatomy and Neurobiology, University of California, Irvine, 2Department of Biological Chemistry, University of California, Irvine, 3Department of Pharmaceutical Sciences, University of California, Irvine

في هذه المقالة

ملخص

Δ 9-tetrahydrocannabinol (THC) هو المكون المسكر في القنب ومادة خاضعة للرقابة في الولايات المتحدة. توضح هذه المقالة الإجراءات القياسية للحصول على THC وتخزينه وإدارته للفئران المتوافقة مع اللوائح القانونية الحالية وتقدم بإيجاز طريقة لتقييم التأثيرات الدوائية الأساسية ل THC في القوارض.

الملخص

Δ9-رباعي هيدروكانابينول (THC) مسؤول عن الآثار المسكرة (المؤثرات العقلية) للقنب والمنتجات المشتقة من القنب المتوفرة حاليا في الأسواق القانونية وغير القانونية. يتم إنتاج المؤثرات العقلية ل THC عن طريق تنشيط مستقبلات القنب CB1 في الدماغ ، والتي عادة ما يتم تشغيلها بواسطة مواد القنب الذاتية (endocannabinoid). خارج الدماغ ، يساهم THC في تنظيم مجموعة واسعة من العمليات الفسيولوجية عن طريق تنشيط مستقبلات CB1 و CB2 . تتغير الوظائف الفسيولوجية التي تخدمها مواد endocannabinoid ومستقبلات القنب - المعروفة مجتمعة باسم نظام endocannabinoid - بشكل كبير طوال العمر ، حيث تكون فترة المراهقة فترة من الحساسية المتزايدة لمساهمات مركب الإشارات هذا. توضح هذه المقالة بروتوكولا لإعداد THC للإعطاء بالحقن وتقييم آثاره الدوائية الحادة في الفئران من كلا الجنسين في مرحلتين من مراحل النمو: المراهقة والشباب. مع التركيز على ثلاث جرعات تستخدم على نطاق واسع في الأدبيات (1 و 5 و 10 مجم / كجم) والطريق داخل الصفاق ، يتم توضيح التأثيرات المعروفة لتحريض THC-catalepsy ، وتثبيط النشاط الحركي ، وقمع الألم. علاوة على ذلك ، نظرا لوضع THC كمادة خاضعة للرقابة في الولايات المتحدة ، يتم تحديد إجراءات الحصول عليها وتخزينها وفقا للتشريعات الحالية بإيجاز.

المقدمة

ارتفع انتشار استخدام القنب بين السكان البالغين في الولايات المتحدة بشكل مستمر في العقود الماضية وظل مرتفعا في عام 2023. بين البالغين الذين تتراوح أعمارهم بين 19 و 30 عاما ، أبلغ حوالي 42٪ عن تعاطي القنب في العام الماضي ، و 29٪ في الشهر الماضي ، و 10٪ أبلغوا عن الاستخدام اليومي أو شبه اليومي (20 مرة أو أكثر في الأيام ال 30 الماضية)1. بالنسبة للبالغين الذين تتراوح أعمارهم بين 35 و 50 عاما ، فإن الأرقام هي 29٪ و 19٪ و 8٪ على التوالي. على الرغم من أن هذه التقديرات لا تختلف إحصائيا عن تلك التي تم الحصول عليها في عام 2022 ، إلا أنها تشير إلى زيادات على مدى السنوات الخمس و 10 الماضية لكلتا المجموعتين الديموغرافية1. الأهم من ذلك ، تشير الأدلة الحالية إلى أن ما يقرب من 9٪ من الأشخاص الذين يتعاطون القنب يطورون التسامح والاعتماد على الدواء - وهي حالة تعرف باسم اضطراب استخدام القنب (SUD) 2 ومصدر قلق صحيمحتمل 3.

كما هو الحال مع العقاقير الأخرى ذات التأثير النفساني ، يبدأ تعاطي القنب عادة في سنوات المراهقة المبكرة ويزداد تدريجيا طوال فترة المراهقة. في عام 2023 ، أفاد 8٪ منطلاب الصف الثامن في الولايات المتحدة ، و 18٪ منطلاب الصف العاشر ، و 29٪ منطلاب الصف الثاني عشر أنهم استخدموا الدواء مرة واحدة على الأقل4. على الرغم من أنها مستقرة نسبيا خلال السنوات القليلة الماضية ، حتى في مواجهة انخفاض إدراك المخاطر5،6 ، إلا أن هذه الأرقام لا تزال مرتفعة للغاية. بالإضافة إلى استخدامه غير الطبي على نطاق واسع ، أظهر القنب إمكانات علاجية عبر مجموعة من الحالات الطبية7،8. تم استخدام شكل اصطناعي من مكوناته المسكرة (المؤثرات العقلية) ، Δ 9-tetrahydrocannabinol (THC) (الشكل 1) ، لأكثر من 40 عاما كدواء بوصفة طبية لعلاج الغثيان وفقدان الشهية لدى مرضى فيروس نقص المناعة البشرية والسرطان الذين يخضعون للعلاج الكيميائي9،10. كل من THC والكانابيديول التناظري (CBD) (الشكل 1) ، وهو ليس مؤثرا عقليا ، متورطون في إدارة الألم والالتهابات والاضطرابات العصبية المختلفة11،12. لذلك ، فإن الانتشار السريع للمنتجات الطبية المشتقة من القنب - على سبيل المثال ، في الصرع والتوحد في مرحلة الطفولة - يدخل أيضا مجموعات جديدة من الشباب إلى المخدرات. هذه التطورات مثيرة للقلق بشكل خاص في سياق اجتماعي حيث تغذي التغييرات التشريعية والقبول الواسع المصالح المالية التي يمكن أن تتجاوز مخاوف الصحة والسلامةالعامة 13.

يتم استهلاك القنب المحتوي على THC ("الماريجوانا") بأشكال مختلفة ، بما في ذلك التدخين والتبخير والمواد الغذائية والصبغات والزيوت. بمجرد تناوله ، ينتشر THC في جميع أنحاء الجسم ويدخل الدماغ ، حيث ينتج النشوة والاسترخاء وتغير الإدراك الحسي وزيادة الشهية ، على الرغم من أنه يمكن أن يسبب أيضا القلق والبارانويا لدى بعض الأفراد14،15. يتفاعل THC مع نظام endocannabinoid (ECB) عن طريق تنشيط نوعين من مستقبلات القنب (CB) الموجودة داخل وخارج الدماغ15،16. في الدماغ ، حيث تكون مستقبلات CB1 أكثر وفرة ، يؤثر تنشيطها على الحالة المزاجية وإدراك الألم والشهية والإدراك ، من بين وظائف أخرى. ينشط THC أيضا مستقبلات CB1 و CB2 في الأعضاء الطرفية ، مما يؤثر على استقلاب الطاقة الجهازية - بما في ذلك تناول العناصر الغذائية وامتصاصها وتخزينها - بالإضافة إلى بدء الألم والالتهاب والمناعة17،18.

يمارس THC تأثيرات حادة ومستمرة ، ولا تزال هناك حاجة إلى مزيد من الأبحاث قبل السريرية والسريرية حول العواقب طويلة المدى لاستخدام القنب. يجب التركيز بشكل خاص على ردود الفعل السلبية المحتملة لجرعة عالية من THC ، مع الأخذ في الاعتبار أن متوسط تركيز THC في القنب المباع في الولايات المتحدة قد زاد على مدى العقود الماضية من 8.9٪ في عام 2008 إلى 17.1٪ في عام 201719 وحتى أعلى في السنوات الأخيرة. "منتجات القنب عالية الفعالية" (المنتجات التي تحتوي على تركيزات عالية من THC) شائعة في العديد من الأسواق القانونية في جميع أنحاء الولايات المتحدة ، حيث يبلغ متوسط محتوى THC في زهرة القنب 20-35٪ ، مع وصول بعض المنتجات الاستخراجية إلى 90٪ THC. في هذه الجرعات العالية ، قد يكون ل THC تأثيرات مختلفة نوعيا عن تلك التي ينتجها "القنب منخفض الفعالية" التقليدي المستخدم في السبعينيات والثمانينيات ، والذي يحتوي على 6٪ THC أو أقلمن 20. وبالتالي ، فإن فهم علم الأدوية لمنتجات القنب عالية الفعالية أمر بالغ الأهمية لإبلاغ الاستراتيجيات الوقائية وتوجيه السياسة التنظيمية والمالية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن فهم كيفية تأثير عوامل مثل العمر والوراثة والظروف الموجودة مسبقا على الاستجابات الفردية ل THC يمكن أن يساعد في تكييف الوقاية والعلاج لمجموعات سكانية معينة. على وجه الخصوص ، يجب إجراء مزيد من التحقيق في عواقب تعاطي القنب من قبل المراهقين والأمهات الحوامل أو المرضعات لأن التعرض للقنب خلال فترات ما قبل الولادة / الفترة المحيطة بالولادة والمراهقة ، حيث يلعب نظام البنك المركزي الأوروبي دورا رئيسيا في النمو العصبي ، يمكن أن يؤدي إلى عواقب سلبيةمستمرة 21. أيضا ، هناك حاجة إلى مزيد من البحث لفهم كيفية تفاعل THC مع الأدوية أو المواد الأخرى. يمكن للبيانات الشاملة حول سلامة وفعالية THC أن تفيد القرارات التنظيمية وسياسات الصحة العامة ، مما يضمن الاستخدام الآمن في كل من السياقات الطبية وغير الطبية.

هنا ، نحدد الإجراءات القياسية للحصول على THC وتخزينه وإدارته في بيئة معملية وفقا لتشريعات الولايات المتحدة الحالية (قانون المواد الخاضعة للرقابة لعام 1971). مع التركيز على ثلاث جرعات من THC المستخدمة على نطاق واسع في الأدبيات العلمية (1 و 5 و 10 مجم / كجم) 22 وطريق الإعطاء داخل الصفاق (IP) ، تم توضيح ثلاثة تأثيرات كلاسيكية على THC: تحريض القلل ، وتثبيط النشاط الحركي ، ومنع الألم. يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول بعد حقن THC المتعددة لدراسة عواقب الاستخدام المزمن ل THC ، مما يؤدي إلى التسامح ومجموعة من عواقب الصحة العقلية التي لا يتم ملاحظتها عادة مع تناولها الحاد في البشر.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الإجراءات من قبل IACUC بجامعة كاليفورنيا ، إيرفين ، وتم تنفيذها وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية للصحة (NIH) لرعاية واستخدام التجارب.

1. إجراءات الحصول على THC وتخزينه

ملاحظة: في الولايات المتحدة ، يتطلب استخدام THC في بيئة بحثية أكاديمية اتباع عدة خطوات يتطلبها الوضع القانوني للقنب. يتم تصنيف كل من القنب و THC المشتق من القنب على أنهما مواد خاضعة للرقابة في الجدول الأول. لهذا السبب ، قبل شراء القنب أو THC ، يجب على الباحثين الحصول على ترخيص من إدارة مكافحة المخدرات (DEA). فيما يلي نظرة عامة على هذه العملية، والتي قد تستغرق ما يصل إلى 6 أشهر أو أكثر.

  1. تحديد نطاق البحث: حدد الغرض من عملية البحث وأهدافها وحدد سبب ضرورة THC. قم بتطوير بروتوكول بحث يوضح بالتفصيل كميات THC المطلوبة ومصدرها التجاري وكيفية التعامل معها وتخزينها. قم بتضمين أكبر قدر ممكن من التفاصيل ذات الصلة.
  2. الحصول على الموافقة التنظيمية المؤسسية: تقديم مقترح البحث إلى لجنة رعاية واستخدامه في المؤسسة المحلية (للعمل قبل السريري) أو مجلس المراجعة المؤسسية (IRB) (للعمل السريري). تحمي خطوة المراجعة هذه حقوق الأشخاص الخاضعين للبحث وتضمن امتثال الدراسة للمعايير الأخلاقية.
  3. الامتثال للوائح الولاية: ضع في اعتبارك أي لوائح خاصة بالولاية فيما يتعلق بأبحاث القنب ، حيث يمكن أن تختلف اختلافا كبيرا. على سبيل المثال ، في كاليفورنيا ، احصل على موافقة من اللجنة الاستشارية للأبحاث في كاليفورنيا (RAPC) 23.
  4. الحصول على THC: شراء القنب و THC من المزارعين أو الشركات المصنعة المرخصة لهذا الغرض.
    ملاحظة: تتوفر قائمة بالمزارعين المعتمدين على موقع إدارة مكافحة المخدرات. يوفر المعهد الوطني لتعاطي المخدرات (NIDA) THC من خلال برنامج NIDA لتوريد المخدرات24. للتقدم لهذا البرنامج ، يجب تقديم معلومات حول المؤسسة ، وبروتوكول بحث مفصل ، وتوثيق اللوائح المؤسسية مثل IACUC أو خطابات الموافقة IRB. مطلوب إكمال نموذج إدارة مكافحة المخدرات 222 ، وهو نموذج من صفحة واحدة مخصص خصيصا لكل رقم تسجيل لإدارة مكافحة المخدرات ، لشراء أو نقل المواد الخاضعة للرقابة في الجدول 1.
  5. تلقي وتخزين THC
    1. قم بتخزين THC في خزنة أو قبو مغلق بإحكام يتبع تصميما معتمدا من إدارة مكافحة المخدرات. يجب التحكم في الوصول إلى منطقة البحث (على سبيل المثال ، يجب إغلاق أبواب المبنى و / أو المختبر). يجب أن يتمكن الموظفون المصرح لهم فقط من الوصول إلى THC.
    2. قم بإعداد وتعيين قائمة بالأفراد المسموح لهم بالوصول إليها ، وحافظ على تحديث القائمة. قم بتسمية حاويات THC بوضوح بالاسم والتركيز وتاريخ الاستلام وتحذيرات المخاطر.
    3. اتبع إجراءات التخلص المعمول بها ، والتي تتطلب وثائق محددة والالتزام باللوائح الفيدرالية والولائية. حافظ على THC عند -20 درجة مئوية أو أقل.
  6. إدارة المخزون:
    1. قم بتنفيذ نظام جرد قوي لتتبع كمية THC واستخدامه وموقعه. قم بإعداد رابط المواد الخاضعة للرقابة ، والذي يتضمن ترخيص الجدول 1 ، ومعلومات الموظفين المصرح لهم ، وسجلات جميع الإيصالات ، والتصرف ، وأي استخدام للمواد (الشكل 2).
    2. إجراء عمليات تدقيق منتظمة لممارسات المخزون والتخزين من خلال استكمال سجل الجرد نصف السنوي لضمان الامتثال للمتطلبات التنظيمية. تحقق من سجلات الوصول وسجلات المخزون بشكل دوري.
  7. التدريب والبروتوكولات: يجب توفير التدريب لجميع الموظفين الذين يتعاملون مع THC. يجب وضع بروتوكولات واضحة لتخزين الدواء والتعامل معه والتخلص منه.
    ملاحظة: من خلال تنفيذ هذه الممارسات ، يمكن للمختبرات الأكاديمية التأكد من امتثالها للمتطلبات القانونية والحفاظ على بيئة بحثية آمنة.

2. إجراءات إعطاء THC للفئران عن طريق حقن IP.

ملاحظة: عند التعامل مع THC ، من الضروري التحكم في درجة الحرارة وحماية المركب من الضوء للحفاظ على ثباته. THC حساس للحرارة ويجب تخزينه عند -20 درجة مئوية أو أقل للتخزين طويل الأجل. للتخزين قصير الأجل ، يمكن حفظ THC في درجة حرارة الغرفة أو تبريده عند 4 درجات مئوية لعدة ساعات. THC حساس أيضا للأشعة فوق البنفسجية (UV) والضوء المرئي ، مما قد يسبب التدهور من خلال الأكسدة. لمنع ذلك ، يجب تخزين THC في حاويات زجاجية كهرمانية محكمة الإغلاق أو حاويات شفافة ملفوفة بورق الألمنيوم وتخزينها في الظلام. يوصى بتسمية جميع العينات بالتواريخ وظروف التخزين لضمان التتبع والاستقرار المناسبين.

  1. المواد
    1. تحضير جميع المحاليل باستخدام الماء عالي النقاء والكواشف التحليلية. احصل على THC من Cayman Chemical (Ann Arbor ، MI) أو RTI International (Research Triangle Park ، NC) أو من خلال برنامج NIDA Drug SupplyProgram 24.
  2. المعدات واللوازم
    1. تأكد من أن العناصر المدرجة في جدول المواد جاهزة قبل البدء في الإجراء.
      ملاحظة: من الضروري استخدام قوارير زجاجية (8 مل أو ما شابه) والحاويات عند العمل مع THC. يمكن أن يتفاعل البلاستيك مع الجزيئات الكارهة للماء أو تمتصها مثل THC ، مما قد يؤدي إلى فقدان العينة أو تركيزات غير متسقة. الزجاج مستقر كيميائيا وغير متفاعل ، مما يساعد على منع التفاعلات غير المرغوب فيها مع الجزيئات الكارهة للماء.
  3. إجراءات إعطاء THC في الفئران
    1. قم بإزالة حاوية THC من خزانة الأمان في الفريزر.
    2. احتفظ بالحاوية على الجليد ، اسحب حجما مناسبا من THC باستخدام ماصة وأضفها بعناية إلى قاع قارورة زجاجية سعة 8 مل. احسب الحجم بناء على الجرعة (ملغ / كجم) ووزن جسم الفئران (جم).
    3. انقل القارورة إلى غطاء الدخان الكيميائي وتبخر المذيب برفق حتى يجف بتيار لطيف من غاز النيتروجين. احرص على عدم رش المحلول المحتوي على رباعي هيدروكانابينول على جوانب القارورة ، لأن ذلك سيؤدي إلى خسارة شديدة. تستغرق هذه العملية حوالي 5-10 دقائق.
    4. سجل في سجل استخدام المادة الخاضعة للرقابة I في رابط المواد الخاضعة للرقابة مقدار THC الذي تم أخذه من القارورة المستخدمة حاليا.
    5. عندما يجف المذيب تماما ، أضف حجما مناسبا من Tween-80. هذا هو حجم Tween-80 المطلوب للحصول على تركيز نهائي بنسبة 5٪ من Tween-80 في محلول ملحي ، كما هو موضح في الخطوة 2.3.8.
    6. قم بتسخين القارورة في دورق يحتوي على ماء ساخن عند أو أقل من 60 درجة مئوية. دوامة القارورة لإذابة THC تماما وكرر حسب الحاجة.
    7. أضف المحلول الملحي المعقم تدريجيا بزيادات صغيرة: على سبيل المثال ، 200 ميكرولتر ، 300 ميكرولتر ، 500 ميكرولتر ، و 1 مل. دوامة وتسخين.
    8. كرر الخطوتين 2.3.6 و 2.3.7 حتى تتم إضافة الحجم الإجمالي للمحلول الملحي المطلوب لعمل محلول THC نهائي في محلول ملحي بنسبة 5٪ Tween-80 و 95٪ محلول ملحي ويتم إذابة المحلول بالكامل.
    9. (اختياري) قم بضبط القارورة في حمام مائي بالموجات فوق الصوتية على طاقة 100٪ تقريبا عند 40 كيلو هرتز و 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. تحقق من أن المحلول واضح وخالي من أي مادة غير مذابة. قد يختلف لون السائل حسب السيارة المستخدمة.
    10. قم بوزن الماوس وحدد الكمية المناسبة للحقن. يجب أن يكون حجم الحقن 10 مل / كجم لكل فأر.
    11. المضي قدما في الحقن داخل الصفاق (IP). تأكد من تحضير محاليل THC طازجة في يوم الاستخدام.

3. إجراءات تقييم التأثيرات الدوائية ل THC

    1. استخدم الفئران من كلا الجنسين لهذه الدراسة.
      ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم استخدام الفئران المراهقة (يوم ما بعد الولادة ، PND ، 30-35) والبالغين (PND 70-75) C57BL / 6J من كلا الجنسين من مختبرات جاكسون (فارمنجتون ، كونيتيكت).
      ينطبق الإجراء على سلالات الماوس الأخرى.
    2. ضع الفئران في أقفاص جيدة التهوية (4-5 لكل قفص) مع توفر الطعام والماء بشكل خاص. تعيين العمر- المطابقة للوزن بشكل عشوائي لمجموعات العلاج والسماح لها بالتأقلم لمدة أسبوع واحد على الأقل قبل التجارب.
    3. حافظ على غرف السكن في دورة إضاءة مدتها 12 ساعة / 12 ساعة مظلمة (الأضواء مضاءة في الساعة 6:30 صباحا) مع درجة حرارة ثابتة (20 ± 2 درجة مئوية) ورطوبة نسبية (55٪ -60٪).
  2. المجموعات التجريبية
    1. قسم كل مجموعة عمرية وجنسية إلى أربع مجموعات علاجية: مجموعة تحكم واحدة في السيارة وثلاث مجموعات علاج THC لجرعات 1 و 5 و 10 مجم / كجم.
  3. إدارة الأدوية
    1. قم بإعداد THC طازجا كما هو موضح أعلاه في مركبة من محلول ملحي بنسبة 95٪ مع 5٪ Tween-80 ويتم إعطاؤها عن طريق حقن IP.
  4. الاختبار السلوكي
    ملاحظة: في هذا المثال ، خضع كل للاختبارات الموضحة أدناه لتتبع تأثيرات THC22. تم إجراء الاختبارات السلوكية الثلاثة على التوالي على نفس المجموعة من. كان ترتيب الإجراءات: الحركة (30 دقيقة بعد THC) ، والقسط (45 دقيقة بعد THC) ، وغمر الذيل (60 و 180 و 300 دقيقة بعد THC) (الشكل 3). بالنسبة لتجارب الإناث المراهقات ، قمنا بإعادة استخدام نفس المجموعة المعالجة بالمركبات ثم قمنا بإعطاء إما 1 مجم / كجم أو 10 مجم / كجم من THC لنفس المجموعة من أجل إجراء اختبارات الغمر في الذيل. سمح لنا هذا النهج بالوصول إلى قوة إحصائية كافية مع تقليل عدد المستخدمة ، وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية. تم تسجيل السلوك باستخدام كاميرا فيديو ، وتم تحليل ملفات الأفلام باستخدام برنامج تتبع السلوك.
    1. اختبار Catalepsy
      ملاحظة: القدس في الفئران هو حالة فسيولوجية (مرضية) تتميز بنقص الحركة الإرادية ، وصلابة الموقف ، ومقاومة التغيرات المستحثة خارجيا في وضع الجسم. يعتبر أحد التأثيرات القياسية الأربعة ل THC ، جنبا إلى جنب مع التثبيط الحركي ، ومنع الألم ، وانخفاض درجة حرارة الجسم. في هذا المثال ، تم تقييم السلوك التحفيزي بناء على الإجراءاتالمعمول بها 22 ، كما هو مفصل أدناه:
      1. الإعداد: قم بإعداد قضيب أفقي (بطول 7 سم) مرتفعا بمقدار 4 سم فوق سطح مقعد مختبر نظيف مع إضاءة محيطة عادية (160 لوكس). ضع مؤقتا إلكترونيا في مكان قريب جاهز للاستخدام.
      2. انقل الماوس من مرافق السكن إلى مختبر الاختبار وتأقلمه داخل القفص لمدة 60 دقيقة قبل الاختبار. ارتد معطف مختبر نظيف وبدون عطر.
      3. باستخدام قفازات اللاتكس النظيفة ، قم بإزالة الماوس برفق من قفصه ، وقم بإدارة كمية مناسبة من THC أو السيارة بأمان ، ثم ضعه مرة أخرى في القفص.
      4. في الوقت المناسب بعد حقن THC (45 دقيقة في هذه الحالة) ، أخرج الماوس من القفص وضع كفوفه الأمامية برفق على الشريط الأفقي.
      5. سجل وقت الجمود باستخدام المؤقت الإلكتروني.
        ملاحظة: يتم تعريف وقت الجمود على أنه الوقت الذي يمر من وقت وضع الماوس على الشريط إلى اللحظة التي يزيل فيها أحد الكفوف أو كليهما.
      6. أوقف المؤقت عندما يزيل الماوس أحد مخالبه أو كليهما من الشريط أو عند الوصول إلى وقت القطع البالغ 10 ثوان.
      7. كرر الاختبار مرتين لكل فأرة، مع فاصل راحة مدته دقيقتان بين التجارب.
      8. استخدم متوسط مرتي الجمود لتحليل البيانات النهائي.
      9. مقياس النتيجة: استخدم وقت الجمود (بالثواني) كمؤشر على القلل.
    2. اختبار المجال المفتوح (النشاط الحركي في بيئة جديدة)
      ملاحظة: يتم تقييم نقص الحركة الناجم عن THC باستخدام اختبار المجال المفتوح واتباع بروتوكولمعمول به 25.
      1. الإعداد: استخدم ساحة مفتوحة المجال مزودة بمعدات تتبع الفيديو لهذا الاختبار. تأكد من أن ساحة الملعب المفتوح نظيفة وخالية من إشارات الروائح من التجارب السابقة.
        ملاحظة: يمكن إجراء التنظيف الفعال باستخدام المنتجات المتاحة تجاريا الموضحة في جدول المواد.
      2. انقل الماوس من مرافق السكن إلى مختبر الاختبار وتأقلمه داخل قفصه لمدة 60 دقيقة قبل الاختبار. تأكد من أن غرفة الاختبار بها إضاءة منخفضة الكثافة (10 لوكس)25. ارتد معطفا نظيفا ولا تستخدم العطور.
      3. باستخدام قفازات نظيفة ، قم بإزالة الماوس برفق من قفصه ، وقم بإدارة كمية مناسبة من THC أو السيارة بأمان ، ثم ضع الماوس مرة أخرى في القفص.
      4. في الوقت المناسب بعد حقن THC (30 دقيقة في هذه الحالة) ، ضع الماوس برفق في وسط الساحة ، مع الحرص على تقليل إجهاد المناولة.
      5. سجل جلسات مدتها 10 دقائق باستخدام كاميرا فيديو وبرنامج تتبع السلوك.
      6. بعد الاختبار ، أعد الماوس إلى قفصه المنزلي ونظف الساحة جيدا باستخدام محلول التنظيف الموضح أعلاه.
      7. مقياس النتيجة: احسب المسافة الإجمالية المقطوعة ، المقاسة بالأمتار ، كمعلمة أساسية لتحديد النشاط الحركي.
    3. اختبار غمر الذيل (عتبات الشعور بالألم ، يشار إليها أيضا باسم اختبار سحب ذيل الماء الساخن)
      ملاحظة: يتم تقييم الألم باستخدام اختبار غمر الذيل ، كما هو موضحسابقا 26. يستخدم هذا الاختبار لتقييم فعالية المسكنات المحتملة وتقييم تحمل آثارها. أثناء الاختبار ، يتم تطبيق الحرارة على ذيل الفأر كمحفز مؤلم ، ويتم قياس وقت سحب الذيل بعيدا عن مصدر الحرارة.
      1. الإعداد: قم بإعداد حمام مائي يتم الحفاظ عليه عند 54 درجة مئوية تحت الإضاءة المحيطة العادية (160 لوكس). ضع مؤقتا إلكترونيا في مكان قريب جاهز للاستخدام.
      2. قم بتقييد الماوس برفق باستخدام جيب مناديل ناعمة مصنوع باستخدام وسادات تدريب الأليفة (Glad) ، مما يضمن بقاء الذيل في متناول اليد.
      3. اغمر ثلث الذيل البعيد في الحمام المائي وابدأ المؤقت في وقت واحد.
      4. سجل زمن الوصول إلى سحب الذيل (بالثواني) ، والذي يعرف بأنه النقر الانعكاسي للذيل.
      5. حدد الحد الأقصى لوقت القطع 10 ثوان لمنع تلف الأنسجة وعدم الراحة.
      6. كرر القياس مرتين لكل فأر في كل نقطة زمنية (في هذه الحالة ، 60 و 180 و 300 دقيقة بعد حقن THC) ، مع فاصل زمني مدته 5 دقائق بين التجارب.
      7. متوسط قياسي زمن الانتقال لتحليل البيانات.
      8. مقياس النتيجة: احسب زمن الوصول لانسحاب الذيل ، المقاس بالثواني ، كمتغير النتيجة الأولية لتقييم التأثيرات المضادة للألم.
  5. التحليلات الإحصائية
    1. عبر عن النتائج كوسيلة ± SEM. حدد الأهمية باستخدام تحليل التباين ثنائي الاتجاه (ANOVA) متبوعا باختبار المقارنات المتعددة ل Šídák أو ANOVA ثلاثي الاتجاهات متبوعا باختبار المقارنات المتعددة ل Tukey. ضع في اعتبارك الاختلافات ذات دلالة إذا < P 0.05.
      ملاحظة: تم استخدام الإصدار 10.4 من GraphPad Prism لإجراء التحليل.

النتائج

لتوضيح البروتوكول الموضح أعلاه ، نقدم نتائج حول التأثيرات الدوائية الحادة ل THC. تم إعطاء أربع مجموعات من الفئران (8 لكل مجموعة) ، والمراهقين الذكور ، والذكور البالغين ، والمراهقات ، والإناث البالغات ، ثلاث جرعات من THC - 1 و 5 و 10 مجم / كجم - جنبا إلى جنب مع السيارة كعنصر تحكم. بعد ذلك ، تم تقييم القسط والنشاط الحركي والشعور بالألم ، مع التركيز على اعتماد الجرعة للتأثيرات والاختلافات بين الجنسين والأعمار.

أولا ، بالنسبة للتأثيرات التحفيزية الحادة ، أنتجت THC قسط الدماغ المعتمد على الجرعة في الفئران الذكور المراهقة والبالغة (الشكل 4 أ والجدول 1). كانت مدة الاستجابة تعتمد على الجرعة (P<0.0001 ، ANOVA ثنائي الاتجاه) ، حيث أنتجت 5 و 10 مجم / كجم تأثيرات ذات دلالة إحصائية في كلتا الفئتين العمريتين ، مقارنة بضوابط المركبات في كل مجموعة (P < 0.0001 بواسطة اختبار المقارنات المتعددة لشيداك). بجرعة 10 مجم / كجم ، أنتجت THC قسط في كل من إناث الفئران المراهقة والبالغة (الشكل 4 ب والجدول 2) ، حيث أظهرت الإناث البالغات استجابة أقل وضوحا مقارنة بالإناث المراهقات (P < 0.0001 بواسطة اختبار المقارنات المتعددة ل Šídák). تم تحليل مجموعات البيانات بشكل أكبر لتحديد ما إذا كان الجنس يؤثر على قسط الدم الناجم عن THC. لوحظت استجابة متواضعة ولكن كبيرة ثنائية الشكل جنسيا لدى المراهقات مقارنة بالذكور (ص = 0.0204) (الشكل 4 ج والجدول 3). تم العثور على تأثير أقوى بكثير للجنس في الإناث البالغات ، اللواتي كن أقل حساسية بشكل ملحوظ للتأثيرات التحفيزية ل THC مقارنة بذكور الفئران البالغة (P < 0.0001) (الشكل 4D والجدول 4).

ثانيا ، بالنسبة للتأثيرات الحركية الحادة ، قلل THC من النشاط الحركي لدى ذكور الفئران (الشكل 5 أ والجدول 5). كان هذا التأثير يعتمد على جرعة THC وعمر (P < 0.0001 و P = 0.0042 ، على التوالي) ، حيث كانت الفئران المراهقة أكثر حساسية لتأثير THC مقارنة بالفئران البالغة. أشارت اختبارات المقارنة المتعددة اللاحقة إلى أنه عند جرعة 5 مجم / كجم من THC ، تحركت الفئران المراهقة بشكل أقل بكثير من الفئران البالغة (P < 0.0001). قلل THC من النشاط الحركي أيضا في إناث الفئران (الشكل 5 ب والجدول 6). أظهر ANOVA ثنائي الاتجاه تأثيرات كبيرة لكل من الجرعة والعمر أيضا في إناث الفئران (P < 0.0001 و P = 0.0103 ، على التوالي) (الشكل 5 ب والجدول 6). ومع ذلك ، لم تكشف اختبارات المقارنة المتعددة اللاحقة عن اختلافات ذات دلالة إحصائية بين إناث الفئران المراهقة والبالغة إما بجرعات 0 أو 10 مجم / كجم من THC (الشكل 5 ب). تم تحليل مجموعات البيانات هذه بشكل أكبر لتحديد ما إذا كان الجنس يؤثر على نقص الحركة الناجم عن THC. لم يلاحظ إزدواج الشكل الجنسي في الفئران المراهقة (الشكل 5 ج والجدول 7). ومع ذلك ، أظهرت الفئران البالغة إزدواج الشكل الجنسي ذي الدلالة الإحصائية (P = 0.0046) ، حيث أظهرت الإناث البالغات حركة أعلى بكثير مقارنة بالذكور البالغين. ومع ذلك ، لم تكشف اختبارات المقارنة المتعددة اللاحقة عن اختلافات ذات دلالة إحصائية بين الجنسين عند جرعات 0 أو 10 مجم / كجم من THC (الشكل 5D والجدول 8).

ثالثا ، بالنسبة للتأثيرات الحادة المضادة للألم ، قلل THC من الشعور بالألم في الذيل عند ذكور الفئران (المراهقون ، الشكل 6 أ والجدول 9 ؛ البالغون ، الشكل 6 ج والجدول 11). في الذكور المراهقين ، أنتج THC تأثيرات كبيرة مضادة للألم عند 5 و 10 مجم / كجم ، تم اختبارها في 60 و 180 و 360 دقيقة بعد تناولها (P < 0.0001 بواسطة اختبار المقارنات المتعددة ل Šídák ، بالنسبة إلى زمن انتقال نفض الغبار الذيل لفئران التحكم في المركبات) (الشكل 6 أ والجدول 9). أكد ANOVA ثنائي الاتجاه التأثيرات القوية لجرعة THC على زمن انتقال نفض الغبار في الذيل (P < 0.0001) وأظهر انخفاضا يعتمد على الوقت في التأثيرات المضادة للألم ، خاصة عند أعلى جرعة (P = 0.0133) (الشكل 6 أ والجدول 9). لوحظ تأثير مماثل يعتمد على جرعة THC ، ولكن ليس تأثير الوقت ، في إناث الفئران المراهقة (P < 0.0001 و P = 0.9923 ، على التوالي) (الشكل 6 ب والجدول 10). في الذكور البالغين ، أنتج THC تأثيرات كبيرة مضادة للألم فقط عند أعلى جرعة (10 مجم / كجم) وأقرب نقطة زمنية (60 دقيقة بعد الإعطاء) (P < 0.0001 بواسطة اختبار المقارنات المتعددة ل Šídák ، مقارنة بضوابط المركبات) (الشكل 6C والجدول 11). أظهر ANOVA ثنائي الاتجاه تأثيرا معتدا به لكل من الجرعة والوقت (الجرعة ، P < 0.0001 ؛ الوقت ، P = 0.0007) (الجدول 11). في الإناث البالغات ، لوحظ تأثير كبير مضاد للألم فقط عند أعلى جرعة (10 مجم / كجم) وأقرب نقطة زمنية (60 دقيقة بعد الإعطاء) (P < 0.0012 بواسطة اختبار المقارنات المتعددة ل Šídák ، بالنسبة لضوابط المركبات) (الشكل 6 د والجدول 12). فيما يتعلق بتأثيرات الجنس والعمر على مقاومة الألم الناجمة عن THC ، كشف ANOVA ثنائي الاتجاه أن تأثيرات THC على زمن انتقال نفض الغبار قد تأثرت بكل من العمر والجنس (الشكل 6E و F والجدول 13 والجدول 14). لوحظ أقوى تأثير في الذكور المراهقين بعد 60 دقيقة من إعطاء THC ، على الرغم من أن جميع مجموعات الفئران الأربع أظهرت مقاومة كبيرة للألم الناجم عن THC عند مقارنتها بضوابط السيارة المناسبة في هذه المرحلة الزمنية (الشكل 6E). ومن المثير للاهتمام ، أنه لوحظ تأثير كبير للجنس في الفئران المراهقة ولكن ليس البالغة في 60 دقيقة بعد النقطة الزمنية بعد THC (المراهقون ، P = 0.0083 ؛ البالغون ، P = 0.9919 بواسطة اختبار المقارنات المتعددة ل Šídák) (الشكل 6E والجدول 13). في 300 دقيقة بعد THC ، تم العثور على تأثيرات كبيرة مضادة للألم فقط في الفئران المراهقة ، من الذكور والإناث ، ولكن ليس في الفئران البالغة (الشكل 6F والجدول 14). اختبر ANOVA ثلاثي الاتجاهات المتغيرات الثلاثة ، الجرعة والعمر والجنس ، في وقت واحد وكشف عن تأثيرات كبيرة لكل من الوقت والجرعة (P = 0.0007 و P < 0.0001 ، على التوالي) والتفاعل الكبير بين الوقت والجرعة (P = 0.0022) (الجدول 15).

figure-results-1
الشكل 1: الهياكل الكيميائية للنباتات النباتية ، و THC و CBD ، و endocannabinoids ، و anandamide ، و 2-AG. يتم إنتاج Delta-9-tetrahydrocannabinol (THC) في الإزهار من نبات القنب الأنثوي وهو مسؤول عن آثاره العقلية. يعمل THC عن طريق الارتباط بمستقبلات CB1 و CB2 المقترنة ببروتين G في الدماغ وأنسجة الجسم الأخرى. الكانابيديول (CBD) هو قنب غير مؤثرات عقلية له خصائص مضادة للصرع وربما مضادة للذهان ومضادة للالتهابات. اثنان من المنشطات الداخلية الرئيسية لمستقبلات CB ، anandamide و 2-arachidonoyl-sn-glycerol (2-AG) ، هما رسل مشتق من الدهون في الدماغ والأنسجة الطرفية ، ويتم إنتاجه عند الطلب ، ويشاركان في العديد من عمليات الإشارات قصيرة المدى مثل ضبط اللدونة المشبكية في الجهاز العصبي المركزي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-2
الشكل 2: مثال على سجل استخدام المادة الخاضعة للرقابة I. يجب تسجيل أي استخدام ل THC في سجل استخدام المواد الخاضعة للرقابة الأول ، والذي يتم الاحتفاظ به في رابط المواد الخاضعة للرقابة المخزن في خزانة مغلقة أو مساحة مكتبية آمنة. يجب أن يتضمن هذا النموذج اسم وانتماء الباحث الرئيسي الذي يجب أن يكون مسجلا للحصول على ترخيص الجدول 1 ، ومعلومات عن الدواء المجدول والدفعة الدقيقة ، ورقم البروتوكول ، والشخص المصرح له الذي يستخدم الدواء مع الكمية والرصيد لكل استخدام. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-3
الشكل 3: تخطيطي يوضح ترتيب تجارب الاختبار السلوكي. كان ترتيب الإجراءات: الحركة (30 دقيقة بعد THC) ، والقسط (45 دقيقة بعد THC) ، وغمر الذيل (60 و 180 و 300 دقيقة بعد THC). الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-4
الشكل 4: الخدم الحاد الناجم عن THC في الفئران. ينتج THC قسط في المراهقين والبالغين (أ) ذكور و (ب) إناث الفئران. تم تقييم الاستجابة باستخدام اختبار الشريط بعد حقن IPC بالجرعة المحددة. تم تحليل نفس مجموعة البيانات لتأثيرات الجنس على القمص الناجم عن THC في الفئران البالغة من الذكور والإناث (C) في سن المراهقة و (D). يتم التعبير عن النتائج كوسيلة ± SEM. تم تحديد الأهمية باستخدام ANOVA ثنائي الاتجاه متبوعا باختبار المقارنات المتعددة لسيداك. واعتبرت الفروق ذات دلالة وبالد إذا كان P < 0.05. P < 0.0001 مقارنة بالتحكم في السيارة ، # # P < 0.01 ، و #### P < 0.0001 مقارنة بمجموعة المراهقين 10 مجم / كجم في اللوحة B أو مجموعة الذكور 10 مجم / كجم في اللوحات C و D. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-5
الشكل 5: نقص الحركة الحاد الناجم عن THC في الفئران. يقلل THC من النشاط الحركي التلقائي لدى المراهقين والبالغين (أ) من الذكور و (ب) الإناث. تم تقييم الاستجابة باستخدام اختبار المجال المفتوح بعد حقن IPC من THC بالجرعة المحددة. تم تحليل نفس مجموعة البيانات لتأثيرات الجنس على الحركة الخفيفة التي يسببها THC في (C) المراهقين و (D) الفئران البالغة من الذكور والإناث يتم التعبير عن النتائج كوسيلة ± SEM. تم تحديد الأهمية باستخدام ANOVA ثنائي الاتجاه متبوعا باختبار المقارنات المتعددة لسيداك. واعتبرت الفروق ذات دلالة وبالد إذا كان P < 0.05. *P < 0.05 و ** P < 0.01 و ***P < 0.001 و ****P < 0.0001 مقارنة بالتحكم في السيارة ، و #### P < 0.0001 مقارنة بمجموعة المراهقين 5 مجم / كجم في اللوحة A. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-6
الشكل 6: التسكين الحاد الناجم عن THC في الفئران. تم قياس التأثيرات الحادة المضادة للألم ل THC باستخدام اختبار غمر الذيل في (أ) المراهق ، (ب) الإناث المراهقة ، (ج) الذكور البالغين ، و (د) الإناث البالغات بعد 60 أو 180 أو 300 دقيقة من حقن THC بالجرعة المحددة. تم تحليل نفس مجموعة البيانات لتأثيرات العمر والجنس على مضادات الألم الناجمة عن THC بعد (E) 60 دقيقة أو (F) 300 دقيقة من إدارة THC. يتم التعبير عن النتائج كوسيلة ± SEM. تم تحديد الأهمية باستخدام ANOVA ثنائي الاتجاه متبوعا باختبار المقارنات المتعددة لسيداك. واعتبرت الفروق ذات دلالة وبالد إذا كان P < 0.05. *P < 0.05 و ***P < 0.001 و **** P < 0.0001 مقارنة بالتحكم في السيارة ، و ## P < 0.01 بين مجموعة المراهقين والمراهقات 10 ملغ / كجم ، و @ P < 0.05 و @ @ P < 0.01 مقارنة بمجموعة الذكور البالغين والإناث البالغات 10 مجم / كجم ، على التوالي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الجدول 1: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه على التأثيرات الحادة ل THC في إنتاج القسط في الفئران الذكور المراهقة والبالغة (المتعلقة بالشكل 4 أ) (ن = 7-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 2: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه على التأثيرات الحادة ل THC في إنتاج catalepsy في إناث الفئران المراهقة والبالغة (المتعلقة بالشكل 4 ب) (ن = 5-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 3: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه حول التأثيرات الحادة ل THC في إنتاج catalepsy في الفئران المراهقة من الذكور والإناث (مرتبط بالشكل 4C) (ن = 5-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 4: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه على التأثيرات الحادة ل THC في إنتاج القسط في الفئران البالغة من الذكور والإناث (مرتبط بالشكل 4D) (ن = 7-10 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 5: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه حول التأثيرات الحادة ل THC على الحركة في الفئران الذكور المراهقة والبالغة (المتعلقة بالشكل 5 أ) (ن = 7-9 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 6: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه حول التأثيرات الحادة ل THC على الحركة في الفئران المراهقة والبالغة (المتعلقة بالشكل 5 ب) (ن = 5-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 7: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه حول التأثيرات الحادة ل THC على الحركة لدى الفئران المراهقة من الذكور والإناث (المتعلقة بالشكل 5C) (ن = 5-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 8: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه حول التأثيرات الحادة ل THC على الحركة في الفئران البالغة من الذكور والإناث (مرتبط بالشكل 5 د) (ن = 7-9 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 9: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه على التأثيرات المسكنة الحادة ل THC في الفئران الذكور المراهقة (المتعلقة بالشكل 6 أ) (ن = 7-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 10: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه على التأثيرات المسكنة الحادة ل THC في الفئران الإناث المراهقة (المتعلقة بالشكل 6 ب) (ن = 5-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 11: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه على التأثيرات المسكنة الحادة ل THC في الفئران الذكور البالغة (المتعلقة بالشكل 6C) (ن = 6-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 12: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه على التأثيرات المسكنة الحادة ل THC في إناث الفئران البالغة (المتعلقة بالشكل 6 د) (ن = 7-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 13: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه على التأثيرات المسكنة الحادة ل THC في الفئران المراهقة والبالغة والذكور والإناث ، تم اختباره بعد 60 دقيقة من حقن 10 مجم / كجم من THC (يتعلق بالشكل 6E) (ن = 5-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 14: تحليل ANOVA ثنائي الاتجاه على التأثيرات المسكنة الحادة ل THC في الفئران المراهقة والبالغة والذكور والإناث ، تم اختبارها بعد 300 دقيقة من حقن 10 مجم / كجم من THC (متعلق بالشكل 6F) (ن = 5-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

الجدول 15: تحليل ANOVA ثلاثي الاتجاهات على التأثيرات المسكنة الحادة ل THC في الفئران المراهقة والبالغة والذكور والإناث ، تم اختبارها بعد 60 و 180 و 300 دقيقة من حقن 10 مجم / كجم من THC (المتعلقة بالشكل 6E و 6F) (ن = 7-8 لكل مجموعة). الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الجدول.

المناقشة

تقدم هذه المقالة نظرة عامة على إجراءات الحصول على THC وتخزينه وفقا للوائح الأمريكية الحالية وتحدد بروتوكولا لإعداد THC للحقن داخل الصفاق وإعطائه للمراهقين (PND 30-35) والفئران البالغة الصغيرة (PND 70-75). من الأهمية بمكان الحصول على THC من مصدر شرعي والامتثال لجميع اللوائح المعمول بها. في الولايات المتحدة ، يجب على الباحثين تلبية المتطلبات التنظيمية الفيدرالية والولائية ، حتى في الولايات التي يكون فيها القنب قانونيا للاستخدام الطبي وغير الطبي. يضمن استخدام مصدر معتمد الوصول إلى THC من الدرجة البحثية ، والذي يتم تصنيعه تحت رقابة صارمة لضمان قوة ونقاء ثابتين. في المقابل ، فإن استخدام مصدر غير منظم أو غير مصرح به يضر بالنزاهة العلمية ، ويؤدي إلى خطر التحويل ، ويعرض الباحثين لعواقب قانونية.

قمنا بفحص ثلاث استجابات دوائية قياسية ل THC - catalepsy ، وانخفاض الحركة ، والتسكين. قمنا بإعادة إنتاج بيانات الأدبيات الشاملة (انظر ، على سبيل المثال ، المراجع27،28،29) التي تظهر أن THC يؤثر على هذه الاستجابات بطريقة تعتمد على الجرعة. تستخدم هذه الاختبارات في الأبحاث قبل السريرية لتقييم الخصائص الدوائية لناهضات مستقبلات القنب ، على الرغم من أن صلتها بالتجربة البشرية يمكن أن تختلف. يشير Catalepsy إلى الحالة التي يعاني فيها الشخص من انخفاض القدرة على الحركة أو الانخراط في الوظائف الحركية العادية. يتجلى هذا في شكل شلل جسدي أو صلابة ، حيث يحمل الشخص وضعيات غير عادية. يشير انخفاض الحركة (أو نقص الحركة) إلى انخفاض في المستوى العام للنشاط الحركي الأفقي ، والذي يتجلى في حركة بطيئة أو أقل تكرارا. يمكن أن يكون هذا بسبب التخدير أو الضعف الحركي أو ببساطة نقص الدافع للتحرك. في الدراسات التي أجريت على ، غالبا ما يلاحظ هذا على أنه انخفاض في السلوك الاستكشافي أو مستويات النشاط العام في بيئة جديدة. يشير الاختبار الثالث ، منع الألم ، إلى قدرة THC على زيادة زمن انتقال سحب الذيل في اختبار غمر الذيل. في النماذج الحيوانية - حيث يتطلب تقييم المكون الذاتي للمسكن اختبارات متخصصة - يوفر مانع الألم الغمر في الذيل رؤية مفيدة ، وإن كانت محدودة ، لكيفية تأثير الأدوية على وظيفة الألم.

تظهر النتائج المعروضة هنا أن THC يعتمد على الجرعة يحفز التللي بغض النظر عن الجنس والعمر ، لا سيما بجرعات 5 مجم / كجم و 10 مجم / كجم. لوحظ تأثير خاص بالعمر والجنس في إناث الفئران البالغة ، والتي أظهرت انخفاضا كبيرا في إنتاج القسط مقارنة بالفئران من الذكور أو المراهقات. كانت الحركة الخفيفة التي يسببها THC في بيئة جديدة أقوى في الفئران المراهقة مقارنة بالفئران البالغة ، بغض النظر عن الجنس. كان هذا الاختلاف المرتبط بالعمر مميزا عن التأثيرات الحركية الانتقائية للبالغين ل THC في قفص منزلهم ، وهي بيئة مألوفة30. فيما يتعلق بالإجراءات الحادة المضادة للألم ل THC ، تم العثور على تأثيرات ذات دلالة إحصائية عند جرعات 5 مجم / كجم و 10 مجم / كجم في الفئران الذكور المراهقة ، ولكن في الفئران الذكور البالغة ، كانت جرعة 10 مجم / كجم فقط فعالة. من بين النقاط الزمنية الثلاث التي تم اختبارها هنا ، كانت التأثيرات المضادة للألم ل THC هي الأعلى في 60 دقيقة بعد THC وتحللت بعد ذلك. كان الذكور المراهقون هم الأكثر حساسية للتأثيرات المضادة للألم ل THC بين الفئات العمرية والجنس الأربع ، ولوحظ اختلاف كبير بين الجنسين في مجموعات الفئران المراهقة بعد 60 دقيقة من حقن 10 مجم / كجم من THC. بعد 300 دقيقة من إعطاء THC ، تم العثور على تأثير واضح للعمر لوحظت فيه تأثيرات كبيرة مضادة للألم لدى المراهقين ولكن ليس في الفئران البالغة ، بغض النظر عن الجنس. بشكل عام ، أظهرت الفئران المراهقة حساسية متزايدة تجاه THC مقارنة بالبالغين ، لا سيما في مقاييس الحركة والشعور بالألم. بشكل عام ، تشير هذه النتائج إلى أن المراهقة هي فترة حساسة للتأثيرات الدوائية الحادة ل THC ، على الرغم من أن هذا قد يعتمد على الاختبار30. تحدد النتائج هنا أيضا تأثير كل من العمر والجنس في تأثيرات THC ، مما يشير إلى أن الإناث البالغات هن الأقل حساسية ل THC.

يمكن أن يؤدي التعرض ل THC خلال فترة المراهقة - خاصة عندما يكون متكررا وبجرعات عالية - إلى تعطيل وظيفة نظام endocannabinoid في جميع أنحاء الجسم ، بما في ذلك الدماغ31. قد يؤدي هذا الاضطراب إلى آثار طويلة الأمد على كل من الصحة العقلية والجسدية32،33،34. أظهرت الدراسات الوبائية على مدى العقود الثلاثة الماضية باستمرار وجود ارتباطات بين تعاطي القنب لدى المراهقين والإعاقات طويلة الأمد في الإدراك والمزاج والأداء النفسي والاجتماعي ، مع احتمال أن تمتد هذه التأثيرات إلى مرحلة البلوغ ، حتى بعد التوقف عن الاستخدام32،33،34،35،36. بالإضافة إلى ذلك ، تم الإبلاغ عن تغييرات طويلة المدى في وزن الجسم والتمثيل الغذائي ووظيفة المناعة. على الرغم من أن هذه الارتباطات موثقة جيدا ، إلا أنه من الأهمية بمكان إقامة علاقة سببية بين استخدام القنب وآثاره الصحية المحتملة. يمكن استخدام طرق مختلفة ، بما في ذلك تحليل التوائم المتنافرة ، والتوزيع العشوائي المندلي ، والتدخلات شبه التجريبية ، لتقييم السببية في البشر. ومع ذلك ، تلعب التجارب على المعملية أيضا دورا حيويا في توضيح السببية37. النتائج التي توصل إليها مختبرنا ، بتمويل من المعهد الوطني لتعاطي المخدرات ، باستخدام نموذج القوارض للتعرض المعتدل ولكن المتكرر ل THC خلال فترة المراهقة ، تدعم الفرضية القائلة بأن المراهقة هي فترة ضعيفة للتعرض ل THC17،18،25،38،39،40. حتى الجرعات المعتدلة من الدواء خلال هذه النافذة التنموية الحرجة يمكن أن يكون لها تأثيرات دائمة على المكونات المختلفة لنظام endocannabinoid للبالغين. ترتبط هذه التأثيرات بالتغيرات السلوكية العصبية ، بالإضافة إلى ضعف الاستجابات المناعية والقدرة على التعامل مع الإجهاد النفسي والاجتماعي. كشف بحثنا السابق أيضا عن تغييرات غير متوقعة في وظيفة الأنسجة الدهنية ، مما يوفر تفسيرا جزيئيا محتملا للتغيرات الأيضية طويلة المدى التي شوهدت في مستخدمي القنب العاديين18. من خلال تنشيط مستقبلات CB1 بشكل غير لائق في الدماغ خلال فترات النمو العصبي المهمة مثل المراهقة ، قد يعطل THC التوازن المطلوب لنضج الدماغ ، مما يؤدي إلى تغييرات هيكلية ووظيفية يمكن أن تستمر حتى مرحلة البلوغ.

في البشر ، يعد التدخين والتبخير الإلكتروني أكثر الطرق شيوعا لاستهلاك القنب في جميع الفئات العمرية. يحدد بروتوكولنا الحالي إدارة THC عبر الطريق داخل الصفاق (IP) ، وهو أمر عملي وقابل للتكرار وينتج استجابات دوائية وديناميكية دوائية في القوارض التي تشبه ، في عدة نواحي ، تلك التي لوحظت في مستخدمي القنب البشري. على سبيل المثال ، ثبت أن جرعة IPA البالغة 5 مجم / كجم من رباعي هيدروكانابينول في الفئران الذكور المراهقة والبالغة تنتج تركيزات ذروة في الدم مماثلة لتلك التي تم الإبلاغ عنها في المستخدمين البالغين. يتم استكشاف توصيل الهباء الجوي ل THC (يشار إليه بالعامية باسم "البخار") كمكمل لحقن IP. يعتمد هذا النهج على فرضية أن الاستنشاق السلبي ل THC الهباء الجوي ، مثل التدخين أو التدخين الإلكتروني ، يؤدي إلى امتصاص الرئة ، مما يؤدي إلى ظهور أسرع للتأثيرات ، وتقليل التمثيل الغذائي للكبد ، ونتائج ذات تأثير مميز محتمل مقارنة بالإدارة بالحقن. والجدير بالذكر أن الدراسات السابقة أظهرت أن الفئران تدير بنفسها مستخلصات القنب البخاخ أو مخاليط THC / الكانابيديول في النماذج السلوكية الفعالة ، مما يسلط الضوء على إمكانات هذه الطريقة لدراسة خصائص التعزيز ل THC.

في الختام ، يعتمد هذا البروتوكول على الأساليب المعمول بها لتقييم السلوكيات الرباعية التي يسببها القنب41،42 ، والتي تعتمد على تنشيط مستقبلات CB1 العصبية43 ، من خلال تقديم العديد من التحديثات والتحسينات الرئيسية. أولا ، نصف الإجراءات التي تتوافق مع إدارة مكافحة المخدرات الحالية واللوائح المؤسسية للحصول على الاعتبارات الحرجة ل THC والتعامل معها وإدارتها لأي شخص ليس لديه خبرة عملية. ثانيا ، نطبق نموذج رباعي على الفئران المراهقة (PND 30-35) والشباب (PND 70-75) ، وهما مرحلتان تنمويتان مرتبطتان ارتباطا وثيقا بالتعرض للقنب في وقت مبكر من الحياة والبالغين الناشئين ومع ذلك لا يزالان ممثلين تمثيلا ناقصا في الأبحاث قبل السريرية. تلخص نتائج هذه الدراسة التأثيرات المعروفة المعتمدة على الجرعة ل THC على التسكين والحركة والتسكين مع الكشف عن زيادة الحساسية ل THC في الفئران المراهقة ، لا سيما في المجالات التي تعاني من الألم والحركة. هذه الرؤية الخاصة بالعمر والمواءمة التنظيمية تجعل هذا البروتوكول ذا قيمة خاصة للوافدين الجدد في أبحاث القنب وللباحثين الذين يحققون في التأثير التنموي للقنب.

الإفصاحات

أبلغ المؤلفون عن عدم وجود مصالح مالية طبية حيوية أو تضارب محتمل في المصالح.

شكر وتقدير

وحظي هذا العمل بدعم من المعاهد الوطنية المعنية بتعاطي المخدرات (المنحة رقم 2P50DA044118 [إلى DP]).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1 مل من المحاقن TBدينار بحريني309659200 / حالة ؛ معقم ، للاستخدام مرة واحدة.
قوارير زجاجية سعة 8 ملفيشر العلمي W224584144 / حالة ، تستخدم لتحضير محلول حقن THC.
برنامج ANY-MAZEأي متاهة6000تستخدم لتسجيل مقاطع فيديو للاختبارات السلوكية وتحديد عناصر الاختبارات لتحليل البيانات.
C57BL / 6J الفئرانمختبرات جاكسون#000664الفئران من النوع البري المستخدمة في جميع التجارب. يمكن تحديد العمر والجنس المطلوب بالضبط.
مقياس البوصلة CXأوهاوسCR221تستخدم لوزن الفئران لتحديد كمية THC للحقن. 220 جم كحد أقصى ، د = 0.1 جم.
كورنينج بيروسيرام لوح ساخنفيشر العلمية11500151تستخدم لتسخين الحمام المائي لاختبار Tail Flick.
دلتا -9-رباعي هيدروكانابينولكايمان للكيماويات  12068مخزنة في خزنة مغلقة بإحكام للجدول 1 المخدرات في -30 º C الفريزر.
قفازات النتريل فيشربراندفيشر العلمية19-181-610100 / حزمة ؛ قفازات خالية من اللاتكس تستخدم لمعدات الحماية الشخصية المناسبة للاستخدام مرة واحدة.
GraphPad Prism v10.4GraphPadغير متاحبرنامج التحليل الإحصائي المستخدم لتحليل البيانات التجريبية وإجراء الاختبارات الإحصائية.
دورق شديد التحملفيشر العلميةط81280تستخدم لحمل الماء الساخن لاختبار Tail Flick.
غاز النيتروجين عالي النقاءايرغازرقم 1066  تستخدم لتبخير الإيثانول من محلول مخزون THC.
كاميرا ويب لوجيتك C920لوجيتك960-001055تستخدم لتسجيل الاختبارات السلوكية للحيوانات. كارل زايس 1080 بكسل / 30 إطارا في الثانية HD USB.
صندوق الحقل المفتوحشركة Stoelting60101صندوق ذو جوانب غير شفافة لإجراء اختبارات المجال المفتوح ؛ الجوانب قابلة للإزالة بسهولة للتنظيف.
منصات تدريب الأليفةمسرورB088G1N2H885 / حزمة ؛ 22 بوصة. &حاد; 22 بوصة ؛ تستخدم للف وعقد الفئران لاختبار Tail Flick.
إبر PrecisionGlideدينار بحريني305109100 / حالة ؛ 0.4 مم وحاد. 13 مم معقم ، للاستخدام مرة واحدة.
ملحفيشر العلمية (سيتيفا)Z1377زجاجات سعة 1 لتر ، درجة معقمة USP.
سكو 1xبيوفوجآر إس كيمحلول التنظيف يستخدم لتنظيف مواد الاختبار السلوكية.
توين -80سيجما ألدريتشP8074-500 ملBioXtra ، سائل لزج. CAS # 9005-65-6.
حمام مائي بالموجات فوق الصوتيةفيشر العلمية (برانسون)CPX2800التحكم في درجة الحرارة منظف رقمي بالموجات فوق الصوتية.
خلاط دوامةفيشر العلمية2215365يستخدم لخلط محتويات محلول حقن THC أثناء تحضيره.

المراجع

  1. Patrick, M. E., Miech, R. A., Johnston, L. D., O'Malley, P. M. Monitoring the future panel study annual report: National data on substance use among adults ages 19 to 65, 1976-2023. , At. https://monitoringthefuture.org/wp-content/uploads/2024/07/mtfpanel2024.pdf (2024).
  2. Lopez-Quintero, C., et al. Probability and predictors of transition from first use to dependence on nicotine, alcohol, cannabis, and cocaine: Results of the National Epidemiologic Survey on Alcohol and Related Conditions (NESARC). Drug Alcohol Depend. 115 (1-2), 120-130 (2011).
  3. Cerda, M., et al. Association between recreational marijuana legalization in the United States and changes in marijuana use and cannabis use disorder from 2008 to 2016. JAMA Psychiatry. 77 (2), 165-171 (2020).
  4. Miech, R. A., et al. Monitoring the future national survey results on drug use, 1975-2023: Secondary school students. , https://archive.org/details/mtf2023 (2023).
  5. Pacek, L. R., Mauro, P. M., Martins, S. S. Perceived risk of regular cannabis use in the United States from 2002 to 2012: Differences by sex, age, and race/ethnicity. Drug Alcohol Depend. 149, 232-244 (2015).
  6. Hammond, C. J., Chaney, A., Hendrickson, B., Sharma, P. Cannabis use among U.S. adolescents in the era of marijuana legalization: A review of changing use patterns, comorbidity, and health correlates. Int Rev Psychiatry. 32 (3), 221-234 (2020).
  7. National Academies of Sciences, Engineering, and Medicine. The health effects of cannabis and cannabinoids: The current state of evidence and recommendations for research. , Natl Acad Press. (2017).
  8. Health effects of cannabis and cannabinoids and barriers to research: Report to Congress pursuant to requirements of the Medical Marijuana and Cannabidiol Research Expansion Act. Dept Health Hum Serv. , National Institutes of Health. (2023).
  9. Maccarrone, M., et al. Goods and bads of the endocannabinoid system as a therapeutic target: Lessons learned after 30 years. Pharmacol Rev. 75 (5), 885-958 (2023).
  10. Whiting, P. F., et al. Cannabinoids for medical use: A systematic review and meta-analysis. JAMA. 313 (24), 2456-2473 (2015).
  11. Montagner, P., et al. Charting the therapeutic landscape: A comprehensive evidence map on medical cannabis for health outcomes. Front Pharmacol. 15, 1494492(2024).
  12. Manzoni, O. J., Manduca, A., Trezza, V. Therapeutic potential of cannabidiol polypharmacology in neuropsychiatric disorders. Trends Pharmacol Sci. 46 (2), 145-162 (2025).
  13. Kalant, H. Cannabis control policy: No rational basis yet for legalization. Clin Pharmacol Ther. 97 (6), 538-540 (2015).
  14. Huestis, M. A. Pharmacokinetics and metabolism of the plant cannabinoids, delta9-tetrahydrocannabinol, cannabidiol and cannabinol. Handb Exp Pharmacol. 168, 657-690 (2005).
  15. Grotenhermen, F. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of cannabinoids. Clin Pharmacokinet. 42 (4), 327-360 (2003).
  16. Jung, K. M., Piomelli, D. Cannabinoids and Endocannabinoids. Neuroscience in the 21st Century. , Springer. New York. (2016).
  17. Jung, K. M., Lin, L., Piomelli, D. Overactivation of the endocannabinoid system in adolescence disrupts adult adipose organ function in mice. Cells. 13 (5), 461(2024).
  18. Lin, L., et al. Adolescent exposure to low-dose THC disrupts energy balance and adipose organ homeostasis in adulthood. Cell Metab. 35 (7), 1227-1241.e7 (2023).
  19. Chandra, S., et al. New trends in cannabis potency in USA and Europe during the last decade (2008-2017). Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci. 269 (1), 5-15 (2019).
  20. Petrilli, K., et al. Association of cannabis potency with mental ill health and addiction: A systematic review. Lancet Psychiatry. 9 (9), 736-750 (2022).
  21. Bara, A., et al. Cannabis and synaptic reprogramming of the developing brain. Nat Rev Neurosci. 22 (7), 423-438 (2021).
  22. Mabou Tagne, A., et al. Delta(9)-tetrahydrocannabinol alleviates hyperalgesia in a humanized mouse model of sickle cell disease. J Pharmacol Exp Ther. 391 (9), 174-181 (2024).
  23. Research advisory panel. , Office of the Attorney General, State of California. At https://oag.ca.gov/research (2024).
  24. NIDA drug supply program. , National Institute on Drug Abuse. At https://nida.nih.gov/research/research-data-measures-resources/nida-drug-supply-program (2024).
  25. Lee, H. L., et al. Frequent low-impact exposure to THC during adolescence causes persistent sexually dimorphic alterations in the response to viral infection in mice. Pharmacol Res. 199, 107049(2024).
  26. Mabou Tagne, A., et al. Persistent exposure to delta(9)-tetrahydrocannabinol during adolescence does not affect nociceptive responding in adult mice. J Pharmacol Exp Ther. 378 (3), 215-221 (2021).
  27. Martin, B. R., et al. molecular modeling evaluations of cannabinoid analogs. Pharmacol Biochem Behav. 40 (3), 471-478 (1991).
  28. Fride, E., Mechoulam, R. Pharmacological activity of the cannabinoid receptor agonist, anandamide, a brain constituent. Eur J Pharmacol. 231 (2), 313-314 (1993).
  29. Pertwee, R. G. The central neuropharmacology of psychotropic cannabinoids. Pharmacol Ther. 36 (2-3), 189-261 (1988).
  30. Torrens, A., et al. Comparative pharmacokinetics of delta(9)-tetrahydrocannabinol in adolescent and adult male mice. J Pharmacol Exp Ther. 374 (1), 151-160 (2020).
  31. Rubino, T., Parolaro, D. Long lasting consequences of cannabis exposure in adolescence. Mol Cell Endocrinol. 286 (1-2 Suppl 1), S108-S113 (2008).
  32. Schneider, M. Puberty as a highly vulnerable developmental period for the consequences of cannabis exposure. Addict Biol. 13 (2), 253-263 (2008).
  33. Chadwick, B., Miller, M. L., Hurd, Y. L. Cannabis use during adolescent development: Susceptibility to psychiatric illness. Front Psychiatry. 4, 129(2013).
  34. Renard, J., et al. Long-term consequences of adolescent cannabinoid exposure in adult psychopathology. Front Neurosci. 8, 361(2014).
  35. Albaugh, M. D., et al. Association of cannabis use during adolescence with neurodevelopment. JAMA Psychiatry. 78 (9), 1-11 (2021).
  36. Schweinsburg, A. D., Brown, S. A., Tapert, S. F. The influence of marijuana use on neurocognitive functioning in adolescents. Curr Drug Abuse Rev. 1 (1), 99-111 (2008).
  37. Rubino, T., Parolaro, D. The impact of exposure to cannabinoids in adolescence: Insights from animal models. Biol Psychiatry. 79 (7), 578-585 (2016).
  38. Lee, H. L., et al. Frequent low-dose delta(9)-tetrahydrocannabinol in adolescence disrupts microglia homeostasis and disables responses to microbial infection and social stress in young adulthood. Biol Psychiatry. 92 (11), 845-860 (2022).
  39. Lim, J., et al. Adolescent exposure to low-dose delta9-tetrahydrocannabinol depletes the ovarian reserve in female mice. Toxicol Sci. 193 (1), 31-47 (2023).
  40. Torrens, A., et al. Comparative pharmacokinetics of delta9-tetrahydrocannabinol in adolescent and adult female mice. Cannabis Cannabinoid Res. 9 (6), 1537-1542 (2024).
  41. Fride, E., et al. Behavioral methods in cannabinoid research. Methods Mol Med. 123, 269-290 (2006).
  42. Metna-Laurent, M., et al. Cannabinoid-induced tetrad in mice. Curr Protoc Neurosci. 80, 9.59.1-9.59.10 (2017).
  43. Monory, K., et al. Genetic dissection of behavioural and autonomic effects of delta(9)-tetrahydrocannabinol in mice. PLoS Biol. 5 (9), e269(2007).

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

THC
إعطاء Δ 9-رباعي هيدروكانابينول (THC) في الفئران المراهقة والبالغة
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.