مقالة منهجية

تقنية العقدة الحية المزدوجة طفيفة التوغل لنمذجة إصابات نقص تروية عضلة القلب في الفئران

789 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/68430

⸱

يوليو 25, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Shaanxi Key Laboratory of Chinese Medicine Fundamentals and New Drugs Research, School of Pharmacy, Shaanxi University of Chinese Medicine, 2People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region, Ningxia Medical University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نقترح مخططا للحث على إصابة نقص تروية عضلة القلب عن طريق ربط ملف العقدة النشطة المزدوجة المستهدفة للشريان التاجي الأمامي الأمامي الأيسر (LAD) ، والتي يمكن إطلاقها في المختبر لإعادة التروية عند الطلب دون بضع الصدر الثانوي وهي طفيفة التوغل.

الملخص

يعتبر نموذج إصابات نقص تروية عضلة القلب (MI / RI) ذا أهمية كبيرة في استكشاف الآليات الفيزيولوجية المرضية لاحتشاء عضلة القلب وتسهيل تطوير الأدوية ذات الصلة. ومع ذلك ، من بين طرق النمذجة الشائعة الاستخدام ، فإن طريقة ربط الشريان التاجي التقليدية بمساعدة أنبوب البولي إيثيلين لها عيوب كبيرة. يتطلب إعادة فتح الصندوق لفك الرباط ، وهو أمر لا يستغرق وقتا طويلا فحسب ، بل يتسبب أيضا في أضرار جسيمة لحيوانات التجارب ويمكن أن يؤدي بسهولة إلى وفاتها. الهدف من هذه الدراسة هو إدخال طريقة محسنة لإعداد النماذج. في هذه الطريقة ، يتم ربط الشريان التاجي الأمامي الأيسر الهابط (LAD) باستخدام ملف مزدوج للعقدة الحية ، ويمكن فتح العقدة الحية في المختبر لتحقيق إعادة التروية ، وبالتالي تجنب إجراء جراحي ثان. أظهرت طرق التقييم مثل مراقبة مخطط كهربية القلب (ECG) ، وتحديد تخطيط صدى القلب في الوضع M (ME) ، و Evans Blue و 2،3،5-triphenyte-trazoliumchloride (EB-TTC) أن هذه الطريقة يمكن أن تحفز MI / RI مستقر. يتميز مخطط نموذج MI / RI المحسن هذا ببساطته وسرعته ، ومعدل نجاح النمذجة مرض للغاية. بشكل عام ، يقدم إرشادات عملية وقيمة للباحثين المشاركين في مجال أبحاث MI / RI.

المقدمة

وفقا لمنظمة الصحة العالمية ، تحتل أمراض القلب التاجية مكانة مهمة في العبء العالمي لأمراض القلب والأوعية الدموية ، والتي تتميز بارتفاع معدل الإصابة والوفيات العالية وارتفاع معدل المضاعفات. علاوة على ذلك ، يظهر المرض اتجاها أصغر سنا بشكل متزايد. تشير الإحصاءات من بعض البلدان المتقدمة إلى أن الإصابة بأمراض القلب التاجية في الفئة العمرية 35 إلى 40 عاما قد زادت بنحو 15٪ -20٪ خلال العقد الماضي. طرق إعادة التروية مثل انحلال الخثرة الدوائية والعلاج التداخلي وتطعيم مجازة الشريان التاجي آمنة وفعالة ومستخدمة على نطاق واسع. ومع ذلك ، فإن الاستعادة المفاجئة لتدفق الدم تؤدي في كثير من الأحيان إلى تفاقم الضرر الهيكلي والوظيفي لعضلة القلب الإقفارية ، مما يؤدي إلى سلسلة من النتائج السلبية. وتشمل هذه الخلايا المبرمج والنخر لخلايا عضلة القلب ، وعدم انتظام ضربات القلب ، والخلل الانقباضي ، وبلغت ذروتها في النهاية في إصابة نقص تروية عضلة القلب (MI / RI) 1،2. يصل معدل حدوث إصابة MI / RI إلى 25٪ -30٪ ، ولم يتم توضيح آليتها بشكل كامل3. لذلك ، أصبح استكشاف استراتيجيات الوقاية والعلاج الفعالة قضية رئيسية يجب معالجتها في مجال القلب والأوعية الدموية.

النماذج الحيوانية لها أهمية قصوى في أبحاث أمراض القلب والأوعية الدموية. إنها بمثابة أدوات لا غنى عنها لتوضيح الآليات المرضية ل MI / RI ولتطوير استراتيجيات علاجية جديدة4. تؤثر موثوقية واستقرار نموذج إصابة نقص تروية عضلة القلب بشكل مباشر على الترجمة الناجحة وتطبيق استراتيجيات العلاج في الممارسة السريرية. الشريان التاجي الأمامي الأيسر الهابط (LAD) هو وعاء شائع يصاب بإقفار عضلة القلب5. يشبه نموذج MI / RI الذي تم إنشاؤه عن طريق ربط LAD إلى حد كبير التسبب في المرض والعملية المرضية لإصابة نقص تروية عضلة القلب البشرية6. من بين هذه النماذج ، تم استخدام طريقة ربط الشريان التاجي التقليدية بمساعدة أنبوب البولي إيثيلين على نطاق واسع في الدراسات السابقة. يمكن أن يعزى استخدامه على نطاق واسع إلى مزايا مثل التوزيع المنتظم لقوة الربط ودرجة الحماية لبطانة الأوعيةالدموية 7. ومع ذلك ، على الرغم من مزاياها العديدة ، لا تزال التفاصيل التشغيلية محور نقاش بين العديد من الباحثين.

بالنسبة لطريقة ربط الشريان التاجي التقليدية بمساعدة أنبوب البولي إيثيلين ، يجب إعادة فتح الصدر لفك الرباط أثناء إعادة التروية. حاليا ، هناك طريقتان رئيسيتان للعملية: طريقة ربط بضع الصدر الكلاسيكية وطريقة الربط طفيفة التوغل المعدلة. تتطلب طريقة ربط بضع الصدر الكلاسيكية شقا واسع النطاق في الصدر لكشف القلب بالكامل للربط6. تستخدم طريقة الربط طفيفة التوغل المعدلة أدوات خاصة لإكمال الربط من خلال شق أصغر8. في مرحلة إعادة التروية ، تتطلب طريقة ربط بضع الصدر الكلاسيكية إعادة فتح الصدر لفك الرباط ، وهو أمر لا يستغرق وقتا طويلا فحسب ، بل يسبب أيضا صدمة شديدة لحيوانات التجربة ومن المحتمل أن يؤدي إلى وفاتها. بالإضافة إلى ذلك ، قد يؤدي بضع الصدر المتكرر إلى مضاعفات مثل العدوى ، مما يتداخل مع دقة النتائج التجريبية7،9. علاوة على ذلك ، نظرا لأنه من الصعب أن تكون درجة كل عملية بضع الصدر متسقة تماما ، فإنها ستزيد من تباين البيانات التجريبية. فيما يتعلق بتطبيق طريقة الربط طفيفة التوغل المعدلة ، على الرغم من شقها الأصغر ، فإن الإجراء يطرح تحديات فنية كبيرة. يتطلب من المجربين امتلاك كفاءة تقنية متقدمة للغاية والاعتماد على أدوات عالية الدقة ، مثل المجهر المجسم. عند محاولة إلحاق الضرر في مكان ضيق دون مساعدة مثل هذه الأدوات ، هناك خطر متزايد من إتلاف الأنسجة المحيطة عن غير قصد. وهذا بدوره يمكن أن يقوض استقرار وموثوقية النتائج التجريبية.

وبالتالي ، هناك حاجة ملحة إلى نهج الإعداد المعزز للنموذج لمواجهة هذه التحديات. تقدم هذه الدراسة طريقة محسنة لنمذجة MI / RI. تتضمن الطريقة استخدام ملف عقدة مزدوجة حية لربط LAD وتمكن من إطلاق العقدة الحية في المختبر لتحقيق إعادة التروية ، وبالتالي تجنب الحاجة إلى بضع الصدر الثاني. تتميز هذه الطريقة ببساطة تشغيلها وسهولة إتقانها ، ويمكن أن تحفز باستمرار إصابة نقص تروية عضلة القلب وإعادة تروية ، مما يوفر مرجعا قيما وإلهاما للباحثين في مجال MI / RI.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم إجراء البروتوكول التجريبي وفقا لإرشادات لجنة استخدام المختبر ورعاية المؤسسية واستخدامها في جامعة شنشي للطب الصيني التقليدي (رقم السجل: SUCML20240820006). تم توثيق جميع بيانات الأبحاث على باتباع إرشادات ARRIVE (أبحاث: الإبلاغ عن التجارب في الجسم الحي ). تم استخدام ذكور فئران Sprague Dawley (SD) التي تزن 250 جراما ± 20 جراما وتتراوح أعمارها بين 6-8 أسابيع لهذه الدراسة. التفاصيل المتعلقة بالحيوانات والكواشف والمعدات المستخدمة مذكورة في جدول المواد.

1. التحضير قبل الجراحة

  1. 1.1 أداء الصيام: أخضع الفئران لفترة صيام مدتها 8 ساعات مع حرية الوصول إلى الماء
  2. المعايرة والوزن: قم بقياس وزن الجسم بدقة باستخدام ميزان إلكتروني (دقة 0.1 جم) لحساب جرعة التخدير.
  3. تحفيز التخدير: يتم تطبيق محلول يوريثان 20٪ عن طريق الحقن داخل الصفاق بجرعة 0.4 مل لكل 100 غرام من وزن الجسم باستخدام حقنة معقمة سعة 2.5 مل ؛ حقن 1 سم جانبيا لخط الوسط البطني.
  4. تأكيد التخدير: قم بتثبيت المخلب الخلفي بملقط معقم. يؤكد عدم وجود منعكس انسحاب الأطراف التخدير العميق.

2. مراقبة مخطط كهربية القلب (ECG) (الشكل 1 ، الخطوة 1)

  1. شل حركة الجرذ في وضع ضعيف: قم بتأمين الجذع والأطراف في "وضعية ممتدة للأطراف" باستخدام شريط لاصق طبي على طاولة الجراحة.
  2. توصيل الأقطاب الكهربائية: أدخل تحت الجلد إبر القطب الكهربائي المعقمة بالتسلسل التالي: الطرف الأمامي الأيمن (متصل بالقطب الأبيض) ، والطرف الخلفي الأيمن (متصل بالقطب الأسود) ، والطرف الخلفي الأيسر (متصل بالقطب الأحمر). بعد ذلك ، قم بتوصيل هذه الأقطاب الكهربائية بشاشة تخطيط القلب Lead II. تأكد من إنشاء خط أساس مستقر وأن مجمعات QRS مرئية بوضوح على الشاشة.
    ملاحظة: حافظ على المراقبة المستمرة لتخطيط القلب طوال العملية. تقييم عمق التخدير وحالة الفئران في الوقت الفعلي من خلال تشوهات شكل الموجة.

3. إزالة الشعر والتطهير في الموقع الجراحي (الشكل 1 ، الخطوة 2)

  1. إزالة الشعر الميكانيكية: استخدمي ماكينة قص كهربائية لإزالة الفراء من الرقبة والصدر الأيسر (الطول المتبقي ≤0.5 مم).
    ملاحظة: أمسك الشفرة بزاوية 30 درجة وتحرك عكس اتجاه نمو الشعر.
  2. إزالة الشعر الكيميائية: ضعي كريم إزالة الشعر بالتساوي على البشرة المكشوفة لمدة دقيقتين. قم بإزالته جيدا باستخدام مكشطة معقمة ، متبوعا بالتنظيف النبضي باستخدام حقنة سعة 2.5 مل مع محلول ملحي 37 درجة مئوية. كرر 3 مرات حتى تختفي البقايا.
  3. التطهير المتدرج: تطهير الجلد ثلاث مرات في دوائر متحدة المركز (من الداخل إلى الخارج) بمزيج 75٪ من الإيثانول واليودوفور (1: 1) باستخدام كرات قطنية معقمة.

4. إعداد معلمة جهاز التنفس الصناعي

  1. فحص معدات ما قبل الجراحة: قم بتوصيل دائرة جهاز التنفس الصناعي بمحول أنبوب القصبة الهوائية على شكل حرف Y.
  2. اضبط المعلمات ( الشكل 1 ، الخطوة 3): قم بتعيين المعلمات الخاصة بالأنواع: حجم المد والجزر 3.0 مل ، ومعدل التنفس 80 نفسا / دقيقة ، ونسبة الزفير إلى الزفير (I: E) 2: 1.
  3. تحقق من سالكية الدائرة: قم بتنشيط جهاز التنفس الصناعي واغمر طرف الدائرة في محلول ملحي. راقب تكوين الفقاعة الإيقاعية. في حالة غياب، تحقق بشكل منهجي من عدم وجود تسريبات واستكشاف الأخطاء وإصلاحها.

5. التنبيب الرغامي

  1. وضع الشق: ثنى المجال الجراحي بقطعة قماش معقمة. ارفع جلد الغضروف تحت الغدة الدرقية بملقط حاد وقم بعمل شق طولي 2.5 سم على طول القصبة الهوائية باستخدام مقص مستقيم.
  2. تشريح طبقة تلو الأخرى: اسحب الجلد بالملقط المعقم (اليد اليسرى) وقم بإجراء تشريح تدريجي سطحي باستخدام مقص دقيق (اليد اليمنى).
    ملاحظة: قصر الطبقة الأولى على البشرة والأدمة. تجنب تلف طبقة العضلات.
  3. التعرض للقصبة الهوائية (الشكل 1 ، الخطوة 4): استخدم ملقط مرقئ للتشريح الحاد لعضلات البلاتيزما والحزام لكشف 4-5 غضاريف القصبة الهوائية. قم بتعبئة القصبة الهوائية بالملقط وضع أنبوب سيليكون تحتها لتحقيق التثبيت.
    ملاحظة: يمكن رؤية الشريان السباتي والعصب المبهم على جانبي القصبة الهوائية ، لذا تجنب إتلاف هذه الهياكل أثناء التشغيل.
  4. التنبيب الرغامي ( الشكل 1 ، الخطوة 5): قم بإنشاء شق عرضي على شكل Ω (حوالي 1/3 محيط) بين حلقات الغضروف الرغامي 3 و 4 باستخدام مقص دقيق. أدخل أنبوب القصبة الهوائية المصنوع من السيليكون 14 جم بسرعة ، مع محاذاة علامة العمق مع حافة الشق.
    ملاحظة: بعد التنبيب ، قم بمزامنة حركة الصدر مع إيقاع جهاز التنفس الصناعي. مراقبة ضغط مجرى الهواء وتردد الجهاز التنفسي بحثا عن التشوهات. اضبط إعدادات جهاز التنفس الصناعي أو تحقق من سالكية الأنبوب في حالة حدوث انحرافات.

6. تحضير الشق الوربي

  1. ضع علامة على موقع الشق: استخدم علامة جراحية معقمة لتحديد الحدود القصية اليسرى في الفضاء الوربي 3-4 (تم تحديده عن طريق ملامسة نقطة النبضة القمية القصوى). ارسم خطا طوليا 3.0 سم.
  2. تشريح طبقة تلو الأخرى: ارفع الجلد بالملقط المعقم وشق على طول الخط المحدد باستخدام مقص معقم. أدخل ملقط مرقئ تحت الجلد بزاوية 30 درجة وقم بإجراء تشريح حاد بالتوازي مع المساحة الوربية لفصل طبقة العضلات.
  3. قطع الضلع: تقاطع الأضلاع 3 و 4 والعضلات الوربية باستخدام مقص دقيق. ملاحظة: في حالة حدوث نزيف في الشريان الوربي ، ضع على الفور قطعة قطن معقمة بضغط ثابت لمدة 60 ثانية لتحقيق الإرقاء10.

7. توطين الشريان الهابط الأمامي الأيسر (LAD) وربطه

  1. تأكيد موقع الربط (الشكل 1 ، الخطوة 6): قم بتوسيع المساحة الوربية إلى 4 سم باستخدام ضام قصي لكشف القلب. قم بتشريح التامور برفق (حدد الأنسجة الصعترية على أنها البنية البيضاء فوق القلب). حدد موقع LAD 2 مم أدنى من نقطة منتصف "V" التي شكلها المخروط الرئوي (نتوء مخروطي الأذن الأيمن) والأذن اليسرى (هيكل الصمامات الثلاثي).
  2. معايرة الإبرة (الشكل 1 ، الخطوة 7-1): قم بتثبيت خياطة 6-0 من مادة البولي بروبيلين (بإبرة) باستخدام ملقط صغير. أدخل عضلة القلب 1 مم جانبيا إلى تقاطع LAD المنتصف البعيد بزاوية 15 درجة بالنسبة لسطح عضلة القلب (العمق: 1 مم ؛ العرض: 2 مم) ، متقدما من اليمين إلى اليسار.
  3. تقنية العقدة الانزلاقية المزدوجة (الشكل 1 ، الخطوة 7-1 - 7-5): بعد تمرير خيط الرباط عبر عضلة القلب ، قم بلف أحد طرفي خيط الرباط بطرف الإبرة في ملف باستخدام ملقط مجهري ، وقم بربط الطرف الآخر في الملف واسحبه برفق لتشديد التثبيت. قم بربط الطرف الآخر من خيط الرباط مرة أخرى عن طريق تكرار العملية المذكورة أعلاه لتشكيل هيكل مزدوج العقدة ، والتأكد من ترك طرفي خيط الرباط موازيين لبعضهما البعض خارج التجويف الصدري.
    ملاحظة: أثناء عملية الشد ، تم استخدام الملقط الدقيق للشد تدريجيا بقوة لطيفة ومتساوية ، بينما لوحظت تغيرات في لون عضلة القلب لتحديد درجة نقص التروية ، وذلك لتجنب الإفراط في المجهود الذي يؤدي إلى تمزق الأوعية الدموية أو الربط غير الآمن. تم تأكيد التأسيس الناجح للنموذج من خلال مراقبة الشحوب الإقفاري للجدار الأمامي / المنطقة القمية للبطين الأيسر والارتفاع المستمر للجزء ST ≥ 0.2 مللي فولت على مخطط كهربية القلب ، وبدأ المؤقت الإقفاري لمدة 30 دقيقة فور تأكيد الربط الناجح.

8. خياطة واستعادة الضغط السلبي الصدري

  1. إغلاق الضلع: قم بإزالة الضام القصي. أغلق العضلات الوربية حول الأضلاع 3-4 باستخدام خياطة قابلة للامتصاص 4-0 في نمط قفل مستمر (فترات غرزة 2 مم).
    ملاحظة: تجنب ملامسة خياطة الربط وخيوط الإغلاق لمنع التداخل مع إعادة التروية.
  2. إغلاق طبقة العضلات وإخلاء الهواء: تقريب العضلات الصدرية السطحية الكبرى والصغرى بخياطة 4-0. قبل الشد النهائي ، أدخل حقنة خالية من الإبر سعة 2.5 مل في فتحة الغرز الأخيرة لشفط الهواء داخل الصدر بينما يقوم المساعد بتأمين الخياطة.
    ملاحظة: راقب حركة الصدر للتنفس التلقائي (كما يتضح من الإيقاع غير المتزامن بالنسبة لجهاز التنفس الصناعي).
  3. إغلاق الجلد وتطهيره: خياطة الجلد باستمرار باستخدام خياطة 4-0. قم بالتطهير ثلاث مرات باتباع إرشادات البروتوكول 3.3.

9. فك تعشيق جهاز التنفس الصناعي

  1. نزع الأنبوب: اسحب الأنبوب الرغامي ببطء مع مراقبة التنفس التلقائي.
  2. إغلاق القصبة الهوائية والعضلات: حلقات الغضروف الرغامي بالخياطة طوليا باستخدام خياطة 4-0 لضمان إحكام الإغلاق. إعادة تقريب عضلات الرقبة.
  3. إغلاق الجلد وتطهيره (الشكل 1 ، الخطوة 8): أغلق جلد الرقبة بخياطة 4-0. تطهير باستخدام مسحات معقمة مبللة بالإيثانول والبوفيدون واليود. قم بإزالة الستائر وانقل الجرذ إلى وسادة تسخين 38 درجة مئوية لإعادة التروية.
    ملاحظة: في حالة فشل التنفس التلقائي ، أعد إدخال الأنبوب الرغامي وكرر الخطوات 8.1-8.3 قبل إعادة محاولة نزع الأنبوب.

10. تروية الدم

  1. قم بفك الرباط (الشكل 1 ، الخطوة 9): بعد 30 دقيقة من نقص التروية ، قم بفك العقدة الأولى عن طريق السحب أفقيا على سلك الرباط في أحد طرفي إبرة النطاقات ، ثم قم بفك العقدة الثانية عن طريق سحب سلك الرباط في الطرف الآخر ، ثم السحب أفقيا من جانب إلى آخر للتأكد من عدم وجود مقاومة تثبت أن العقدة المزدوجة قد تم فكها بنجاح.
    ملاحظة: إذا كانت الصباغة المزدوجة EB-TTC مطلوبة ، فلا يمكن سحب خط الرباط.
  2. التحقق من صحة إعادة التروية: تأكيد دقة الجزء ST على مخطط كهربية القلب كدليل على نجاح إعادة التروية12.

11. تحديد تخطيط صدى القلب في الوضع M (ME) 10

  1. التحضير قبل الإجراء: بعد ساعتين من إعادة التروية ، قم بتقييم عمق التخدير والمكملات إذا لزم الأمر. شل حركة الفئران ضعيفة وتطبيق 2 مم من هلام الموجات فوق الصوتية 37 درجة مئوية على المنطقة السرطانية.
  2. الحصول على البيانات: تشغيل نظام الموجات فوق الصوتية. حدد البروتوكول المحدد مسبقا ، واضبط مسبار MX250 على 18 ميجاهرتز ، وسجل صور الوضع M لحركة البطين الأيسر. احفظ الصور بشكل مناسب.
  3. تحليل البيانات: احسب الكسر القذفي للبطين الأيسر (LVEF) ، والتقصير الجزئي (LVFS) ، والقطر الانقباضي النهائي (LVIDs) ، والقطر الانبساطي النهائي (LVIDd) ، وحجم السكتة الدماغية (SV) باستخدام برنامج متكامل للنظام.
    ملاحظة: التقاط البيانات من ≥3 دورات قلبية متتالية. الإبلاغ عن متوسط القيم للدقة الإحصائية.

12. تلطيخ إيفانز الأزرق و 2،3،5-Triphenyte-trazoliumchloride (EB-TTC)

  1. إعادة التنبيب: إزالة الغرز بالتتابع من جلد الرقبة والعضلات والقصبة الهوائية. أدخل أنبوبا قصغاميا وقم بتوصيله بجهاز التنفس الصناعي للحفاظ على التنفس.
  2. إعادة بضع الصدر: إزالة الغرز من جلد الصدر والعضلات والأضلاع. استخدم ضام صدري لتوسيع المساحة الوربية وفضح القلب بالكامل.
  3. Religate the LAD الشريان: إعادة ربط الشريان LAD. تأكيد الربط الناجح من خلال مراقبة الشحوب القمي والارتفاع المستمر للجزء ST على تخطيط القلب.
  4. حقن EB: باستخدام حقنة أنسولين سعة 0.5 مل ، قم بشفط 0.3 مل من محلول إيفانز الأزرق 1.5٪. بعد ذلك ، قم بتشريح قوس الأبهر بسرعة ، وأدخل إبرة المحقنة في الشريان الأورطي ، وقم بتثبيتها بمشبك مرقئ دقيق. بعد ذلك ، قم بحقن محلول إيفانز الأزرق وراقب القلب بحثا عن تلطيخ أزرق موحد.
  5. استئصال القلب: بعد 30 ثانية من الحقن ، استئصال القلب بمقص معقم. اغمره على الفور في محلول ملحي واشطفه بشكل متكرر لإزالة الدم المتبقي و Evans Blue. تجميد القلب عند -80 درجة مئوية.
  6. قسم القلب: بعد 20 دقيقة من التجميد ، قم بإزالة القلب. باستخدام شفرة جراحية ، قم بقطع خمس شرائح عرضية بسمك 1 مم عموديا على المحور الطويل للقلب من القمة إلى القاعدة.
  7. وصمة عار مع TTC: اترك الشرائح تتوازن مع درجة حرارة الغرفة. انقلها إلى أنبوب طرد مركزي كهرماني سعة 50 مل يحتوي على محلول TTC بنسبة 1.5٪. احتضان الأنبوب في شاكر ثرموستاتي مسخن مسبقا عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة في ظل ظروف محمية من الضوء.
  8. الحصول على الصور وتحليلها: بعد التلوين ، قم بإصلاح الشرائح في بارافورمالدهيد لمدة 12 ساعة. التقط صورا عالية الدقة وحدد منطقة الاحتشاء (IA) والمنطقة المعرضة للخطر (AAR) ومنطقة البطين الأيسر الكلية (LV) باستخدام برنامج Image J. احسب نسبة احتشاء عضلة القلب ك IA / (AAR + IA) ونسبة خطر نقص التروية ك (AAR + IA) / LV ، باتباع المنهجية التي وصفها Cai et al12.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تخطيط القلب
تم تسجيل مخطط كهربية القلب طوال العملية من قبل ربط قلب الفئران إلى 120 دقيقة بعد نقص تروية التروية. تظهر تغييرات مخطط كهربية القلب في الشكل 2 أ. أثناء نقص التروية ، أظهر الجزء ST ارتفاعا مقوسا لأعلى ، وكانت الموجة T طويلة وبلغت ذروتها. بعد إعادة التروية ، انخفض ارتفاع الجزء ST تدريجيا.

أنا
بعد إصابة نقص تروية عضلة القلب وإعادة التروية ، يحدث تمدد ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ربط الشريان التاجي ، وهو طريقة كلاسيكية لإنشاء نموذج إصابة نقص تروية عضلة القلب - إعادة تروية ، له أهمية كبيرة في أبحاث أمراض القلب والأوعيةالدموية 12. منذ الثمانينيات ، تم اعتماد طريقة ربط الشريان التاجي بمساعدة أنبوب البولي إيثيلين ، التي ابتكرها ياماموتو وآخرون ، على نطاق واسع في مختبرات البحث العلمي في جميع أنحاء العالم. توفر هذه الطريقة العديد من المزايا ، بما في ذلك قوة الربط التي يمكن التحكم فيها ، والتشغيل المرئي ، والتنظيم الدقيق لوقت نقص التروية. وقد وفر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل برنامج المواهب المبتكرة للعلوم والتكنولوجيا التابع لجامعة شنشي للطب الصيني (رقم 2024-CXTD-03) ، إدارة مقاطعة شنشي لمشاريع أبحاث الطب الصيني التقليدي (رقم. SZY-KJCYC-2025-JC-043) ، وبرنامج البحث والتطوير التابع لإدارة العلوم والتكنولوجيا بمقاطعة شنشي (رقم 2024CY-JJQ-36).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.5 مل حقنة الأنسولين شركة Wuxi Yushou للمعدات الطبيةhttps://e.tb.cn/h.6NJ9o4dBdpXt4bT?tk=YobMVflhtgI .تستخدم لامتصاص البرج والحقن من خلال قوس الأبهر  
2،3،5-triphenyte-trazoliumchlorideشنغهاي Yuanye التكنولوجيا الحيوية المحدودةS19026لتلطيخ القلب 
2.5 مل حقنة معقمة يمكن التخلص منهاقوية بينغ آن التكنولوجيا الطبية المحدودة20231230يستخدم لشفط التخدير وتخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق ؛ يستخدم لاستخراج الهواء من التجويف الصدري للفئران أثناء عمليات الصدر المغلقة.
4 ٪ paraformaldehydeقوانغتشو Viggs التكنولوجيا الحيوية المحدودةSW002تستخدم لإصلاح القلب بعد تلطيخ
4-0 خياطةشاندونغ هايديك للمنتجات الطبية المحدودة.لخياطة الأضلاع والعضلات والجلد 
6-0 خياطةجيانغسو Beiyueshen الأجهزة الطبية المحدودةhttps://e.tb.cn/h.6NKQ9XNVD1J56np?tk=R8NKVfPJIUMلربط LAD 
إبرة الوخز بالإبر شركة بكين لويا شانتشوان للمعدات الطبيةhttps://e.tb.cn/h.6NQZzrSfBLQ9OYZ?tk=yW5aVfPuXP3تستخدم لثقب جلد أطراف الفئران وتوصيل خط قطب مخطط كهربية القلب.
مزيل شعرJinyun مفهوم جديد للمنتجات المنزلية المحدودةhttps://e.tb.cn/h.6NJe67IEMgxPfUt?tk=9boIVflb6mm .لإزالة الشعر 
كريم مزيل الشعرقوانغتشو Miyanshe إدارة العلامة التجارية المحدودةhttps://3.cn/2fP-knZw .لإزالة الشعر العميق
الإيثانولتيانجين تيانلي الكاشف الكيميائي المحدودةhttps://e.tb.cn/h.6NnxsK8EAvBV1Zu?tk=ja1XVflVhfM .للتطهير  
إيفانز بلوسيجماE2129لتلطيخ القلب 
ملقط مرقئ شنغهاي مساعد شركة الأدوات الطبيةhttps://e.tb.cn/h.6NQkHWD25dxnsv4?tk=xA1VVflTXjWتستخدم لإصلاح حقنة الأنسولين وإيقاف دم قوس الأبهر   ؛
مقص طبي صغيرنانجينغ جي شياوباو للتجارةhttps://e.tb.cn/h.6NJu33PgNRJCO1L?tk=smZjVflr730تستخدم لقطع القصبة الهوائية والأضلاع ؛
ملاقط مجهرية طبيةنانجينغ جي شياوباو للتجارةhttps://e.tb.cn/h.6Nqn2dyJIUjUN6n?tk=MEMaVflGK0bلقرص 6-0 خياطة لربط
مشرط LAD الطبيشركة شاندونغ بورويدا للأدوات التحليليةhttps://e.tb.cn/h.6NJyfb9CWH5Sj32?tk=HW0kVflEyOL .لقطع القلب أثناء تلطيخ EB-TTC
مقص طبيشركة شاندونغ بورويدا للأدوات التحليليةhttps://e.tb.cn/h.6NJCLzckQnXXEPe?tk=CtcTVflFJQw .تستخدم لقطع جلد الفئران وخياطتها.
القماش الجراحي الطبيشركة Henan Meideqi للمعدات الطبيةhttps://e.tb.cn/h.6NqItN9yA0xttr9?tk=cCCIVflzFjr .تستخدم لتوفير منطقة جراحية معقمة   ؛
الشريط الطبيشركة Zhejiang Aotai Medical Technology Co.https://e.tb.cn/h.6N93etxLPPlJ9ZQ?tk=DfblVflAo5dتستخدم لإصلاح الفئران 
ملاقط طبيةشركة جيانغسو فيديوكون للتكنولوجيا الطبيةhttps://e.tb.cn/h.6NreHXQv2YTJkIl?tk=S1imVfO17QVيستخدم للحكم على درجة التخدير في الفئران ، وتثبيت الجلد ، والأضلاع والأنسجة الأخرى ، وتقشير العضلات تحت الجلد والتامور.
عامل اقتران بالموجات فوق الصوتية الطبية   ؛تشينغداو هاينو الهندسة البيولوجية المحدودةhttps://3.cn/2fPpwB-j .تستخدم لتحسين كفاءة النقل بالموجات فوق الصوتية
محلول ملحي عادي شاندونغ Qidu الصيدلانية المحدودةhttps://e.tb.cn/h.6NMCUFJIti2EsiU?tk=FXBBVfOV1iNتستخدم لغسل كريم إزالة الشعر المتبقي   ؛
الموجات فوق الصوتية دوبلر الملونة المحمولةVINNO التكنولوجيا المحدودةVinno 6 تستخدم لتحديد تخطيط صدى القلب في الوضع M في الفئران   ؛
بوفيدون اليودشاندونغ أنجي التكنولوجيا الفائقة التطهير والتكنولوجيا المحدودةhttps://e.tb.cn/h.6NqAb4WsT3xjMb9?tk=mhFxVfO4G1Gللتطهير  
لوحة جراحية للفئرانشركة شاندونغ بورويدا للأدوات التحليليةhttps://e.tb.cn/h.6NQyjjGNGInF3Eu?tk=qgQwVflHilH .تستخدم لإصلاح الفئران 
ثلاجة تبريد تشجيانغ Zhixing درجة حرارة منخفضة للغاية للتكنولوجيا المحدودةDL-78لتجميد القلب
أنابيب هلام السيليكاشاندونغ تشنغوو سانو للمعدات الطبية المحدودةhttps://e.tb.cn/h.6N9L82XWNGlgDDG?tk=pWzCVfOQIgNتستخدم لدعم القصبة الهوائية   ؛
آلة التنفس الاصطناعي للحيوانات الصغيرةAnhui Zhenghua Biological Equipment Co.، Ltd.DW-3000Hيستخدم لمساعدة الفئران على التنفس بعد بضع الصدر 
كرة قطنية معقمة تشينغداو هاينو الهندسة البيولوجية المحدودةhttps://e.tb.cn/h.6NJbKVmD0b7QhTf?tk=wMceVfOTrBX .لغمس الإيثانول وتطهير اليود بوفيدون 
مسحة قطنية معقمةتشينغداو Hainuo الهندسة البيولوجية المحدودةhttps://e.tb.cn/h.6NMAQz1252EJHSM?tk=nyfLVfOUSBi .تستخدم لتنظيف الدم المتبقي في تجويف الصدر   ؛
بطانية العزل الحراريقوانغدونغ تشونغكي علوم الحياة & شركة التكنولوجياhttps://e.tb.cn/h.6N9OyBVWuSXTUDy?tk=d6OqVfOSTlIلعزل الجسم بعد الجراحة في الفئران   ؛
ضام بضع الصدرقوانغدونغ تشونغكي علوم الحياة & شركة التكنولوجياhttps://e.tb.cn/h.6NQra4Z9UG8dnvo?tk=6eFUVfllCFWيستخدم لفضح المجال الجراحي للرؤية ؛
النوع الثاني من جهاز مراقبة مخطط كهربية القلب الرصاصChengdu Taimeng Technology Co.، Ltd.BL-420Nلمراقبة مخطط كهربية القلب   ؛
يوريثانشاندونغ كيوان الكيمياء الحيوية المحدودةU820333تستخدم في الفئران المخدرة ؛
مذبذب درجة حرارة ثابتة للمياهشنغهاي Boxun Medical Biological Instrument Co.، Ltd.SHZ-Bلتلطيخ القلب 

المراجع

  1. Hausenloy, D. J., Yellon, D. M. Myocardial ischemia-reperfusion injury: a neglected therapeutic target. J Clin Invest. 123 (1), 92-100 (2013).
  2. Ibáñez, B., Heusch, G., Ovize, M., Van de Werf, F. Evolving therapies for myocardial ischemia/reperfusion injury. J Am Coll Cardiol. 65 (14), 1454-1471 (2015).
  3. Algoet, M., et al. Myocardial ischemia-reperfusion injury and the influence of inflammation. Trends Cardiovasc Med. 33 (6), 357-366 (2023).
  4. Rahman, A., et al. Large animal models of cardiac ischemia-reperfusion injury: Where are we now. Zool Res. 44 (3), 591-603 (2023).
  5. Luan, F., et al. Cardioprotective effect of cinnamaldehyde pretreatment on ischemia/ reperfusion injury via inhibiting NLRP3 inflammasome activation and gasdermin D mediated cardiomyocyte pyroptosis. Chem Biol Interact. 368, 110245(2022).
  6. Xu, Z., Alloush, J., Beck, E., Weisleder, N. A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury through ligation of the left anterior descending artery. J Vis Exp. (86), e51329(2014).
  7. Xu, Z., McElhanon, K. E., Beck, E. X., Weisleder, N. A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury. Methods Mol Biol. 1717, 145-153 (2018).
  8. Marek-Iannucci, S., Thomas, A., Gottlieb, R. A. Minimal invasive pericardial perfusion model in swine: A translational model for cardiac remodeling after ischemia/reperfusion injury. Front Physiol. 11, 346(2020).
  9. Xiong, Y., et al. Decreased MFN2 activates the cGAS-STING pathway in diabetic myocardial ischaemia-reperfusion by triggering the release of mitochondrial DNA. Cell Commun Signal. 21 (1), 192(2023).
  10. Peng, L., et al. Cardioprotective activity of ethyl acetate extract of Cinnamomi Ramulus against myocardial ischemia/reperfusion injury in rats via inhibiting NLRP3 inflammasome activation and pyroptosis. Phytomedicine. 93, 153798(2021).
  11. Xu, H., et al. Resveratrol pretreatment alleviates myocardial ischemia/reperfusion injury by inhibiting STIM1-mediated intracellular calcium accumulation. J Physiol Biochem. 75 (4), 607-618 (2019).
  12. Cai, W., et al. Alox15/15-HpETE aggravates myocardial ischemia-reperfusion injury by promoting cardiomyocyte ferroptosis. Circulation. 147 (19), 1444-1460 (2023).
  13. Zhao, G., et al. A novel anti-inflammatory strategy for myocardial ischemia-reperfusion in rats with cinnamamide derivative compound 7. Int Immunopharmacol. 136, 112370(2024).
  14. Chen, L. Q., Wang, W. S., Li, S. Q., Liu, J. H. Minocycline relieves myocardial ischemia-reperfusion injury in rats by inhibiting inflammation, oxidative stress and apoptosis. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 26 (8), 3001-3009 (2022).
  15. Liu, Z., et al. Shuangshen ningxin formula attenuates cardiac microvascular ischemia/reperfusion injury through improving mitochondrial function. J Ethnopharmacol. 323, 117690(2024).
  16. J'Undra, N., Pegues, M. M., et al. Disparities in 180-day infection rates following coronary artery bypass grafting and aortic valve replacement. J Thorac Cardiovasc Surg. S0022-5223 (25), 00017-00020 (2025).
  17. Peng, J. -F., et al. Targeted mitochondrial drugs for treatment of myocardial ischaemia-reperfusion injury. J Drug Target. 30 (8), 833-844 (2022).
  18. Sun, Q., et al. A minimally invasive approach to induce myocardial infarction in mice without thoracotomy. J Cell Mol Med. 22 (11), 5208-5219 (2018).
  19. Olatoye, O., Yasir, A. -O., Gregory, D. R. Initial experience of left atrial appendage ligation using penditure in a minimally invasive cardiac surgical approach. Innovations. 20 (1), 19-21 (2025).
  20. Wagenaar, A., Wiegerinck, R. F., Heijnen, V. V. T., Post, M. J. Percutaneous microembolization of the left coronary artery to model ischemic heart disease in rats. Lab Animal. 45 (1), 20-27 (2016).
  21. Kainuma, S., et al. Influence of coronary architecture on the variability in myocardial infarction induced by coronary ligation in rats. PLoS One. 2 (8), e0183323(2017).
  22. Chen, J., Ceholski, D. K., Liang, L., Hajjar, R. Abstract 130: The Diversity of Coronary Artery and Myocardial Infarction in Mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 37 (Suppl_1), A130(2021).
  23. Lysenko, A. V., Salagaev, G. I., Lednev, P. V., Belov, Y. V. The results of coronary artery bypass grafting by using of surgical microscope. Pirogov J Surg. 6, 5-10 (2019).
  24. Guo, Y., et al. Genetic background, gender, age, body temperature, and arterial blood pH have a major impact on myocardial infarct size in the mouse and need to be carefully measured and/or taken into account: results of a comprehensive analysis of determinants of infarct size in 1,074 mice. Basic Res Cardiol. 107 (5), 288(2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

الفيديو قريباً

مقالات ذات صلة