Method Article

بروتوكول قائم على التألق للفحص الأولي لمثبطات تخليق البروتين من مصادر طبيعية

DOI:

10.3791/68481

⸱

January 27th, 2026

 ,  , 
1Louisiana State University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يقدم هذا البروتوكول منهجية فحص فلورومتري محسنة لتحديد مثبطات المنتجات/الجزيئات الصغيرة لتخليق البروتين. عملياته تجعلها مناسبة لكل من التعليم الجامعي في تقنيات اكتشاف الأدوية وتطبيقها في حملات الكيمياء الطبية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمثل المنتجات الطبيعية مصدرا غنيا للمركبات العلاجية التي تمتد لتطبيقات عبر أمراض متعددة، وخاصة السرطان. من خلال الاستفادة من هذه الجزيئات الحيوية كقوالب هيكلية في اكتشاف الأدوية، حقق الباحثون جداول تطوير أسرع وفعالية بيولوجية محسنة مقارنة بالمركبات الصناعية بالكامل. برز مسار تخليق البروتينات كهدف قوي للمنتجات الطبيعية، خاصة بالنظر إلى تورطه في السرطانات التي يصعب علاجها. يجسد مثبط تخليق البروتين القوي سيكلوهكسيمايد، المستمد من Streptomyces griseus، الإمكانات التي تنشأ فيها المركبات الطبيعية في هذا المجال. مع تطوير هذه المشتقات الطبيعية إلى جزيئات شبيهة بالدواء، يبقى تأكيد نشاطها المثبط لتخليق البروتين خطوة تحقق حاسمة. الهدف الأساسي هو توفير بروتوكول صديق لطلاب البكالوريوس لتقييم سريع لنشاط تثبيط المركبات. يستخدم البروتوكول ركيزة فلورية وتقنيات مجهر فلورية متقدمة للكشف وقياس القدرات المثبطة لهذه المنتجات الطبيعية بشكل منهجي. فحصت الدراسة مركبات مشتقة من نوعين من النباتات: صنوبر سيلفستريس وبسوراليا كوريليفوليا. باستخدام السيكلوهكسيميد كمثبط مرجعي، أظهر كلا المنتجين الطبيعيين مستويات متفاوتة من تثبيط تخليق البروتين.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتضمن تخليق البروتينات عمليات منظمة للغاية: النسخ والترجمة. أثناء النسخ، يتم نسخ تسلسلات الحمض النووي للجينات، مما ينتج RNA رسول (mRNA). يعمل إنزيم بوليميراز RNA على فصل اللولب المزدوج للحمض النووي ويستخدم خيطا واحدا كدليل لبناء جزيء mRNA مطابق. بمجرد أن يتكون الرنا بالكامل، ينتقل من النواة إلى السيتوبلازم للترجمة. يحدث الترجمة في الريبوسوم، حيث يستخدم mRNA كقالب لتجميع الأحماض الأمينية في سلسلة بولي ببتيد. عند مغادرة نفق خروج الريبوسوم، يتم طي سلسلة البولي ببتيد إلى بروتين وظيفي. يتم تنظيم النسخ بشكل أساسي بواسطة عوامل النسخ، وتعديلات الكروماتين، والحمض النووي الريبي التنظيمي، بينما يتم تنظيم الترجمة بواسطة عوامل البدء ومسارات الإشارة، وآليات استقرار الحمض النووي الريبي. تسمح هذه الأنظمة التنظيمية للخلايا بالحفاظ على وظائف الخلايا والاستجابة للضغط أو الضرر بشكل فعال1.

الغالبية العظمى من سرطانات البشر — حوالي 85٪ — تظهر على شكل أورام صلبة2. بينما يمكن أن تختلف هذه الأورام بشكل كبير في خصائصها وسلوكياتها الخاصة، إلا أنها تميل إلى مشاركة بعض الصفات والأنماط الفسيولوجية المشتركة، مثل زيادة تصنيع البروتين بغض النظر عن سببها أو موقعها التشريحي3. خلايا السرطان تخلل في تنظيم تخليق البروتين عن طريق اختطاف الآليات الانتقالية لدعم احتياجاتها العالية من الطاقة ونموها غير المنضبط. هذه إعادة البرمجة هي نتيجة لاختلال في معظم مسارات الإشارات المسرطنة الرئيسية، مما يعزز بقاء الخلية وتكاثرها وانتشارها، مع كبح مسارات موت الخلايا4. في الخلايا الورمية، تعمل آلية صنع الريبوسومات بشكل مفرط، مما يمكن من زيادة إنتاج البروتين والانقسام السريع للخلايا. نظرا لأن هذا التخليق المعزز للبروتين ضروري للبقاء على قيد الحياة على السرطان، فإن العلاجات التي تستهدف وتمنع هذه العملية تظهر وعودا كعلاجات محتملة5. لذلك، فإن الأبحاث التي تركز على عوامل الترجمة الخاصة بالسرطان، أو التركيبات الريبوسومية الفريدة، أو مسارات الإشارات المتغيرة التي تنظم تخليق البروتينات قد تؤدي إلى مثبطات أكثر استهدافا مع تحسين نوافذ علاجية.

نظرا لأن المنتجات الطبيعية (NPs) معروفة بنشاطها البيولوجي الواسع، فإن تطوير مثبطات تخليق البروتين الانتقائي لعلاج السرطان باستخدام سقالاتها هو نهج واعد 6,7. يمكن للمواد غير القابلة للبروتينات استهداف مكونات مختلفة من آلية تخليق البروتين، من ارتباط الريبوسوم إلى التداخل مع عوامل البدء أو عمليات الاستطالة، مما يجعلها نقاط انطلاق لا تقدر بثمن في تطوير الأدوية لمثبطات تخليق البروتين في الأورام الصلبة6. تعد القدرة على فحص المركبات بسرعة للنشاط المطلوب نقطة دخول حاسمة لمنصات اكتشاف الأدوية التي تسعى لتحديد نتائج المرض بفعالية. عادة، يستخدم الفحص عالي الإنتاجية للمركبات اختبارات الفلورة لتضييق جزيئات الرصاص المرشحة بسرعة8.

يعتمد العلماء حول العالم على تقنيات الفلورة كأدوات أساسية لتحليل الأنظمة البيولوجية. تستخدم هذه الأساليب على نطاق واسع لدراسة العمليات الخلوية، مما يسمح للباحثين بتتبع التفاعلات الجزيئية الحيويةفي الوقت الحقيقي. عند دمجها مع تفاعلات النقر الكيميائي البيولوجي-المتعامدة، يمكن لهذه الطرق أن تتيح تصورا دقيقا لتخليق البروتين10. اختبار تخليق البروتين الفلوري المعروض هو تقنية غير مشعة لتقييم تخليق البروتين تستخدم O-بروبارجيل-بوروميسين (OPP)، وهو نظير يحتوي على ألكين نافر للخلايا. بعد العلاج الخلوي، يتم دمج OPP عند الطرف C لسلاسل البولي ببتيدات الممتدة، مما يسبب نهاية الترجمة. ثم يتم اكتشاف هذه البروتينات المقطوعة الموسومة بالألكين باستخدام كيمياء النقر المحفزة بالنحاس مع 5 FAM-أزيد.

يعد هذا الاختبار الفلورومتري أداة بحثية قيمة وطريقة سهلة الوصول في علم الأحياء الكيميائي لتدريب طلاب المرحلة الجامعية. من خلال توفير بروتوكول سهل الوصول وفعال مع معالجة بيانات قليلة، يوفر البرنامج للطلاب خبرة عملية في تقنيات اكتشاف الأدوية الحديثة ويسرع عملية اكتشاف الأدوية. مع تزايد الطلب على مثبطات تخليق البروتينات الجديدة، يزود هذا النهج طلاب البكالوريوس بفرص بحثية ذات معنى مع المساهمة في التقدم في علاجات السرطان.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تحضير المواد من المجموعة

ملاحظة: قم بخلط المواد بشكل كاف، وقم بتدوير الأسفل، واحتفظ بجميع المواد المجمدة حتى الاستخدام.

  1. نظم واحصل على مجموعة تثبيط تخليق البروتين، ومخزن PBS، ووسط زراعة الخلايا، وألواح معالجة من زراعة الخلايا، وأنابيب طرد مركزي مخروطية معقمة من البولي بروبيلين بحجم 15 مل، وأنابيب طرد مركزي بحجم 2 مل، وماصات p10، p20، p200، وp1000، والأطراف المناسبة.
  2. جهز حاجز الغسيل.
    1. قم بإذابة حاجز الغسيل 10 مرات عند 37 درجة مئوية عن طريق وضع القارورة في يدك. استخدم حرارة الجسم في اليدين لإذابة الجليد وتحقق باستمرار مما إذا كان الإذابة مكتملة.
    2. قم بتخفيف مخزون مخزن الغسيل 10 مرات بنسبة 1:10 في ماء منزوع الأيونات في أنبوب طرد مركزي. امزج عن طريق العكس أو إعادة التعليق عن طريق التوصيل بأنابيب لأعلى وأسفل. خزن على الثلج حتى الاستخدام.
  3. قم بإذابة المحلول المثبت في درجة حرارة الغرفة. خزن على الثلج حتى الاستخدام.
  4. جهز مخزن النفاذية.
    1. قم بإذابة مخزن نفاذية 10 مرات عند 37 درجة مئوية عن طريق وضع القارورة في يدك. استخدم حرارة الجسم في اليدين لإذابة الجليد وتحقق باستمرار مما إذا كان الإذابة مكتملة.
    2. قم بتخفيف 10x النسبة الأصلية بنسبة 1:10 في ماء منزوع الأيونات في أنبوب طرد مركزي. اخلط المكونات عن طريق العكس أو إعادة التعليق عن طريق التوصيل بأنابيب صعود وهبوط. خزن على الثلج حتى الاستخدام.
  5. قم بإذابة ملصق البروتين 400x، وأزيد فلوري 100x، و100x سيكلوهكسيميد، وصبغة DNA، وعامل الاختزال 20x في درجة حرارة الغرفة. احتفظ به على التجميد في بيئة مظلمة أثناء الاستخدام. غط الأصباغ بورق الألمنيوم أو احتفظ بها في ثلاجة بدرجة حرارة 2 درجة مئوية عندما لا تكون قيد الاستخدام.

2. ضوابط الوسم والخلايا التجريبية

ملاحظة: تم تطوير هذا البروتوكول باستخدام خلايا MDA-MB-231 المستقرة الملتصقة بسرطان الثدي الظهاري. يمكن استخدام أي خطوط خلية ملتصقة. جميع الخطوات المذكورة أدناه تستخدم صفيحة بسعة 96 بئر، وجميع الأحجام والتركيزات تحسب لمركبتي اختبار واثنين من أدوات التحكم بحجم عمل 100 ميكرولتر.

  1. زراعة الخلايا الثديية الملتصقة
    ملاحظة: يجب تمرير الخلايا قبل الوصول إلى التقاء 80-90٪ للحفاظ على نمو صحي وأسي ومنع تثبيط أو تمايز التلامس.
  2. قم بإذابة قارورة من الخلايا المحفوظة بالتجميد إلى درجة حرارة الغرفة، ثم تخفيفها بالوسط المناسب.
  3. قم بالطرد المركزي في نظام التعليق لدفع الخلايا واستنشاق السوبرناتانت. أعد تعليق الحبيبة في وسط جديد وانطلق إلى قارورة جديدة بكثافة خلوية مناسبة.
  4. بمجرد أن تلتقي الخلايا بنسبة 80٪، قم بإزالة الوسط واسحب وسط النمو القديم من القارورة. ثم شطف الخلايا بمتلازمة PBS المعقمة لإزالة المصل المتبقي الذي يثبط التربسين. أضف محلول التربسين-EDTA لتغطية طبقة الخلية وحضنه لمدة 3-5 دقائق أو حتى تنفصل الخلايا عند 37 درجة مئوية.
  5. أضف وسط كامل يحتوي على مصل لتعطيل التربسين، ثم انقل تعليق الخلية إلى أنبوب، وامزج برفق، وعد الخلايا.
  6. تخفف خلايا البذور في ألواح الفحص الخلايا بنسبة تقسيم مناسبة (مثلا 1:3 أو 1:5) إلى قارورة جديدة مع وسط جديد وتحتضن (عادة 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربون2) للحصول على التركيز المطلوب للخلية.
    ملاحظة: في التجربة الموضحة هنا، تم طلاء خط الخلية عند 2 × 104 لكل بئر (صفيحة بئر 96) وحضنته عند 37 درجة مئوية لمدة 12 ساعة.

3. إضافة المركبات

  1. جهز الخليط الرئيسي A.
    1. ضع علامة على أنبوب الطرد المركزي ك "A". بيبت 598.5 ميكرولتر من وسط الزراعة و1.5 ميكرولتر من ملصق البروتين في "A". أعد تعليق الخليط لضمان التجانس عن طريق التوصيل بالماصة للأعلى والأسفل.
  2. جهز الخليط الرئيسي B.
    1. ضع علامة على أنبوب الطرد المركزي ك "B". بيبت 1.5 ميكرولتر من ملصق البروتين، 6.6 ميكرولتر من السيكلوهكسيميد، و591.9 ميكرولتر من وسط الزراعة في "B". أعد تعليق الخليط لضمان التجانس عن طريق التوصيل بالماصة للأعلى والأسفل.
  3. عالج الخلايا بالمركبات المرغوبة (الشكل 1)، والإيجابية، والسلبية من الضبط.
    1. قم بإزالة الخلايا من الحاضنة وإزالة وسط النمو عن طريق الشفط. قم بإمالة اللوح واستنشاق السحب من جانب البئر بدلا من المركز لمنع اضطراب الخلايا.
    2. بيبت 1 ميكرولتر من مركب الاختبار في بئر و1 ميكرولتر من مركب الاختبار (0.1٪ v/v DMSO) في البئر. للدراسات المكررة، أضف كل عينة إلى بئر ثان وكرر هذه العملية. أضف 99 ميكرولتر من خليط الماستر A إلى هذه الآبار. قم بعمل الماصة بلطف بزاوية في جانب البئر لمنع الاضطراب الحركي للخلايا.
      ملاحظة: الحد الأقصى لتركيز DMSO في فحص المركبات يعتمد على نوع الخلية والاختبار، لكن الإرشادات العامة هي: 0.1-0.5٪ DMSO آمن عموما لمعظم الاختبارات الخلوية ذات السمية القليلة، و1٪ DMSO يستخدم عادة وأقصى ومقبول للعديد من أنواع الخلايا في الاختبارات قصيرة الأمد.
    3. مبس 100 ميكرولتر من خليط رئيسي B في بئرين. مقطعا بزاوية في جانب البئر لمنع اضطراب الخلايا.
    4. انقر بلطف على اللوح لتحقيق دمج المكونات المطلوبة مع الخلايا. حضن الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة 0.5-2 ساعة.

4. إنهاء التجربة وغسل الخلايا

  1. أزل وسيط الثقافة عبر الطموح. قم بإمالة اللوح واستنشاق السحب من جانب البئر بدلا من المركز لمنع اضطراب الخلايا.
  2. أضف 100 ميكرولتر من مخزن PBS إلى كل بئر وقم بطرد مركزي على اللوح عند 900 × جرام لمدة 5 دقائق.
  3. إزالة مخزن PBS عبر الشفط.

5. التثبيت والنفاذية

  1. أضف 100 ميكرولتر من المحلول الثابت إلى كل بئر. حضن الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة في بيئة مظلمة.
  2. إزالة المحلول الثابت عبر الشفط. قم بإمالة اللوح واستنشق السحب من جانب البئر بدلا من المركز.
  3. غسل الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول الغسيل وإزالة العزل عن طريق الشفط. كرر هذه الخطوة مرتين.
  4. أضف 100 ميكرولتر من محلول نفاذية إلى كل بئر وحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
  5. أزل مخزن النفاذية عن طريق الشفط. قم بإمالة اللوح واستنشق السحب من جانب البئر بدلا من المركز.

6. تفاعل البروتين والتلوين

  1. حضر خليط الكوكتيل الرئيسي للتفاعل.
    1. أضف 651 ميكرولتر من مخزن PBS، و7.0 ميكرولتر من 100x كاشف نحاس، و7 ميكرولتر من الأزيد الفلوري، وأخيرا 35 ميكرولتر من عامل الاختزال إلى أنبوب الطرد المركزي. أعد تعليق هذا الخليط لضمان التجانس.
      ملاحظة: اتبع هذا الترتيب بالضبط عند إضافة المواد الكيميائية. استخدم خلال 15 دقيقة من التحضير.
  2. أضف 100 ميكرولتر من كوكتيل التفاعل إلى كل بئر. حضن الخلايا لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في بيئة مظلمة لمنع التبييض الضوئي.
  3. خلايا الطرد المركزي عند 900 × جرام لمدة 5 دقائق. وازن جهاز الطرد المركزي بإضافة أطباق فارغة لتوزيع الوزن بشكل متساو. أزل الخليط عن طريق الشفط.
  4. غسل الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول الغسيل وإزالة العزل عن طريق الشفط. كرر هذه الخطوة مرتين.

7. تلوين الحمض النووي

  1. جهز تخفيفا بنسبة 1x من صبغة الحمض النووي الكلي وأضف 100 ميكرولتر لكل بئر. حضن الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة في بيئة مظلمة لمنع التبييض الضوئي.
  2. قم بالطرد المركزي على اللوح بحرارة 900 × جرام لمدة 5 دقائق. وازن جهاز الطرد المركزي بإضافة أطباق فارغة لتوزيع الوزن بشكل متساو. أزل الخليط عن طريق الشفط.
  3. غسل الخلايا باستخدام 100 ميكرولتر من محلول الغسيل وإزالة العزل عن طريق الشفط. كرر هذه الخطوة مرتين.
  4. أعد تعليق الخلايا مع 100 ميكرولتر من مخزن PBS المبرد لتحضيرها للتصوير.

8. التصوير

  1. أدخل اللوحة في قارئ اللوحة.
  2. اضبط التكبير على 20x.
  3. حلل صبغة النواة باستخدام قناة GFP 469/525 نانومتر. استخدم التثبيت التلقائي والتركيز التلقائي لتحسين نتائج التصوير.
  4. تحليل تخليق البروتين النشط باستخدام قناة Texas Red 586/647nm. استخدم التثبيت التلقائي والتركيز التلقائي لتحسين نتائج التصوير.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

استخدم هذا الاختبار التألق لرؤية وقياس قدرة المنتجات الطبيعية المختلفة على تثبيط تخليق البروتينات. السيكلوهكسيمايد (CHX) هو مثبط معروف لتخليق البروتينات، حيث يتضمن طريقة عمله التدخل في عملية النقل أثناء الإطالة11. في هذه الدراسة، تم اكتشاف خلايا حية بصبغة نووية خضراء فلورية. OPP هو مشتق من البيوروميسين يرتبط تساهيميا بالبروتينات الناشئة12. خدم خط خلايا MDA-MB-231 كنموذج مناسب نظرا لسهولة الوصول الواسعة وأدائه التجريبي الموثوق

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوفر هذا البروتوكول منهجية فحص فلورومتري لاختبار المنتجات الطبيعية والجزيئات الصغيرة لتقييم قدرتها على تثبيط تخليق البروتين. بساطة هذا البروتوكول تمكن الباحثين الجامعيين من تطبيقه بشكل صحيح، مما يمكنهم من تقديم مساهمات جوهرية في المعرفة العلمية. يتطلب البروتوكول فهما أساسيا للطرق والتقنيات البيولوجية، مع خطوات تتطلب تنفيذا دقيقا لضمان نتائج دقيقة وموثوقة.

على سبيل المثال، تتطلب الخطوة 2.1 من البروتوكول توزيعا موحدا للخلايا وقياسا دقيقا عبر جميع الآبار لضمان قا...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفون لا يفرضون أي تضارب مصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تم دعم هذا البحث من قبل منحة NIGMS رقم R15GM148983، ومجلس أمناء لويزيانا LEQSF(2021-25)-RD-A-05، وجزء من المؤسسة الوطنية للعلوم الأمريكية بموجب منحة رقم OIA-1946231 إلى F.R.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
قارئ تصوير خلية 1 Agilent Biotek متعدد الأنماطأجيلينت BTCYT1V
المركب 1 (ديهيدروابيتيل أمين، CAS 1446-61-3)إينامينEN300-7409771
المركب 2 (باكوتشيول، CAS 10309-37-2)كيمفيسزCFN99047
هيرايوس ميغافوج 16Rثيرمو ساينتيفيك 75004271
صفيحة Ibidi Gmbh - شريحة 96 بئرإيبيدي80826
خطوط الخلايا MDA-MB-231ATCCATCC HTB-26
درجة حموضة ملحية مخزفة بالفوسفات 7.4ATCCATCC 30-2200
مجموعة اختبار تخليق البروتين (خضراء)أبكامAB239725

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Merrick, W. C. Mechanism and regulation of eukaryotic protein synthesis. Microbiol Rev. 56, 291-315 (1992).
  2. Ng, L., Navarro, A., Law, W. -L. Editorial: evolving roles of piRNAs in solid tumors. Front Oncol. 13, 1178634(2023).
  3. Brown, J. M., Giaccia, A. J. The unique physiology of solid tumors: opportunities (and problems) for cancer therapy. Cancer Res. 58 (7), 1408-1416 (1998).
  4. Kovalski, J. R., Kuzuoglu-Ozturk, D., Ruggero, D. Protein synthesis control in cancer: selectivity and therapeutic targeting. EMBO J. 41 (8), e109823(2022).
  5. Liu, T., et al. Synthetic silvestrol analogues as potent and selective protein synthesis inhibitors. J Med Chem. 55 (20), 8859-8878 (2012).
  6. Liu, L., Li, Z., Wu, W. Harnessing natural inhibitors of protein synthesis for cancer therapy: a comprehensive review. Pharmacol Res. 209, 107449(2024).
  7. Dias, D. A., Urban, S., Roessner, U. A historical overview of natural products in drug discovery. Metabolites. 2 (2), 303-336 (2012).
  8. Broach, J. R., Thorner, J. High-throughput screening for drug discovery. Nature. 384 (6604 Suppl), 14-16 (1996).
  9. Fang, X., Zheng, Y., Duan, Y., Liu, Y., Zhong, W. Recent advances in design of fluorescence-based assays for high-throughput screening. Anal Chem. 91 (1), 482-504 (2019).
  10. McKay, C. S., Finn, M. G. Click chemistry in complex mixtures: bioorthogonal bioconjugation. Chem Biol. 21 (9), 1075-1101 (2014).
  11. Schneider-Poetsch, T., et al. Inhibition of eukaryotic translation elongation by cycloheximide and lactimidomycin. Nat Chem Biol. 6 (3), 209-217 (2010).
  12. Liu, J., Xu, Y., Stoleru, D., Salic, A. Imaging protein synthesis in cells and tissues with an alkyne analog of puromycin. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (2), 413-418 (2012).
  13. Liu, K., et al. Evaluating cell lines as models for metastatic breast cancer through integrative analysis of genomic data. Nat Commun. 10, 2138(2019).
  14. Ma, J., et al. Dehydroabietylamine exerts antitumor effects by affecting nucleotide metabolism in gastric cancer. Carcinogenesis. 45 (10), 759-772 (2024).
  15. Shinde, A., et al. A review of single-cell adhesion force kinetics and applications. Cells. 10 (3), 577(2021).
  16. Vargas-Accarino, E., Herrera-Montávez, C., Ramón y Cajal, s, Aasen, T. Spontaneous cell detachment and reattachment in cancer cell lines: an in vitro model of metastasis and malignancy. Int J Mol Sci. 22 (9), 4929(2021).
  17. Song, L., Hennink, E. J., Young, I. T., Tanke, H. J. Photobleaching kinetics of fluorescein in quantitative fluorescence microscopy. Biophys J. 68 (6), 2588-2600 (1995).
  18. Ling, T., et al. Dehydroabietylamine derivatives target triple-negative breast cancer. Eur J Med Chem. 102, 9-13 (2015).
  19. Gautam, L. N., Ling, T., Lang, W., Rivas, F. Anti-proliferative evaluation of monoterpene derivatives against leukemia. Eur J Med Chem. 113, 75-80 (2016).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Protein Synthesis InhibitorsFluorescence AssayNatural Products ScreeningCycloheximide ReferenceFluorescence MicroscopyCancer TherapeuticsProtein Synthesis PathwayCytotoxicity AssayDose ResponsePhotobleaching Prevention

Related Articles