مقالة منهجية

الإنبات غير المتكافئ والتجديد القائم على النباتات للأوراق للأوركيد الطبية المهددة بالانقراض Hemipilia cucullata من البذور الناضجة

DOI:

10.3791/68541

⸱

سبتمبر 19, 2025

 ,  ,  , 
1Zhejiang Province Key Laboratory of Plant Secondary Metabolism and Regulation, College of Life Sciences and Medicine, Zhejiang Sci-Tech University, 2Laboratory of Systematic & Evolutionary Botany and Biodiversity, College of Life Sciences, Zhejiang University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا ، نقدم بروتوكولا لتحسين إنبات البذور غير المتكافئ ، ونمو الشتلات ، واستطالة البراعم في Hemipilia cucullata. يتيح البروتوكول أيضا تحريض الأجسام الشبيهة بالبروتوكورم من نباتات الأوراق المعقمة ، مما يسهل التكاثر الفعال في المختبر للحفاظ على هذه السحلية الطبية المهددة بالانقراض واستخدامها المستدام.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hemipilia cucullata (Orchidaceae) هي زهرة الأوركيد الأرضية التي تحظى بتقدير كبير لخصائصها الطبية وجاذبيتها للزينة ، ومع ذلك فإن مجموعاتها البرية مهددة بالانقراض بسبب تدهور الموائل ، وانخفاض قابلية البذور للبقاء ، ونجاح التلقيح المحدود. لدعم الحفاظ عليها واستخدامها المستدام ، طورت هذه الدراسة بروتوكولا محسنا للإنبات غير التكافلي للبذور الناضجة ، وتطوير البروتوكورم ، واستطالة البراعم ، وتحريض الجسم الشبيه بالبروتوكورم (PLB) من نباتات الأوراق المعقمة. أظهرت البذور المزروعة في وسط سائل 1/2 MS مكمل ب 0.5 مجم / لتر NAA معدل إنبات 72 ± 6٪ ، أعلى بكثير من الوسط الضابط (46٪) والوسط الصلب (31٪) ، مع بدء الإنبات قبل 21 يوما تقريبا في الزراعة السائلة. تم استزراع الأوليات في وسط B5 يحتوي على 0.5 مجم / لتر BA و 0.2 مجم / لتر NAA و 100 مل / لتر من ماء جوز الهند ، مما أدى إلى التكاثر الفعال. بعد 5-6 أسابيع ، تم نقل النباتات إلى وسط استطالة البراعم (B5 مكمل ب 0.5 مجم / لتر BA و 1 مجم / لتر NAA) ، حيث أظهروا استطالة قوية للبراعم وتكوين أوراق صحي. بالنسبة لتحريض PLB ، تم تحقيق أعلى معدل تحريض (44.3 ± 5.1٪) على وسط MS يحتوي على BA (3 مجم / لتر) و NAA (0.2 مجم / لتر). يمكن أن يكون هذا البروتوكول الشامل والقابل للتكرار منصة فعالة للتكاثر على نطاق واسع والحفاظ على H. cucullata خارج الموقع ، مما يوفر دعما قيما لجهود التعافي من هذه السحلية المهددة بالانقراض.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hemipilia cucullata (L.) Y.Tang و H.Peng & T.Yukawa ، المعروف باسم سحلية cucullate neottianthe orchid ، هو سحلية برية أرضية موطنها أوراسيا المعتدلة ويتم توزيعها على نطاق واسع من بولندا إلى اليابان1. تم تصنيف هذا النوع في البداية في جنس Neottianthe ، وقد أعيد تعيين هذا النوع مؤخرا إلى جنس Hemipilia ، قسم Neottianthe ، بناء على الأدلة الجزيئية2. ينمو النبات من درنات تحت الأرض ويصل ارتفاعه إلى 30 سم ، وينتج أزهارا وردية أو أرجوانية حمراء مرتبة في مسمار من جانب واحد. نظرا للشكل الأنيق والتلوين الجذاب لأزهارها ، فإنها تمتلك قيمة زخرفية كبيرة. بالإضافة إلى ذلك ، يتم التعرف على النبات بأكمله كعشب طبي في العديد من البلدان ، حيث يتم استخدامه على نطاق واسع لأغراض علاجية مختلفة ، بما في ذلك علاج أمراض القلب ، وتعزيز الدورة الدموية ، وتخفيف الكدمات ، وتعزيز التئام الكسور3،4. حددت الدراسات الكيميائية النباتية الحديثة العديد من الأنثوسيانين في هذا النوع ، مثل السيانيدين 3-أوكساليل جلوكوزيد والأقحوان والسيانين ، والتي تمتلك خصائص مضادة للأكسدة وواقية للأوعية وقد تساهم في آثارها الطبية5،6.

حاليا ، تواجه التجمعات البرية من H. cucullata تهديدات من فقدان الموائل والاضطرابات البيئية ، مما يؤدي إلى انخفاض حاد في عدد السكان ، وفي بعض المناطق ، يقترب الأنواع من الانقراض3،7،8. ومع ذلك ، فإن الحفاظ على هذا النوع يمثل تحديا خاصا بسبب الصعوبات في تكاثره الطبيعي. في البرية ، يتكاثر H. cucullata استنساخيا وجنسيا ، لكن كلا الوضعين غير فعالين. التكاثر النسيلي الطبيعي بطيء ونادر الحدوث ، في حين أن التكاثر الجنسي محدود بضعف نجاح التلقيح وانخفاض قابلية البذورللبقاء 9،10. علاوة على ذلك ، كشفت التحقيقات الميدانية عن هيكل عمري غير متوازن بشكل ملحوظ ، مع ندرة الأفراد الأحداث والتجنيد الطبيعي المحدود ، خاصة في ظل ظروف الإجهاد البشري أو الحماري7 ، 8 ، 11. بذور H. cucullata ، مثل العديد من بساتين الفاكهة ، دقيقة ، وتفتقر إلى السويداء ، وتتطلب شركاء فطريين محددين للإنبات ، مما يزيد من تعقيد التجديد الطبيعي. وبالتالي ، على الرغم من توزيعها الجغرافي الواسع ، فإن حجم السكان والبنية العمرية للمجموعات البرية آخذة في الانخفاض ، وتتزايد مخاطر الانقراض المحلي7. لذلك ، فإن إنشاء طريقة فعالة للتكاثر السريع الاصطناعي أمر ضروري للحفاظ على موارد الأصول الوراثية والاستخدام المستدام لهذا النوع من الأوركيد.

من بين تقنيات التكاثر المتاحة ، يمكن للإنبات التكافلي - بالاعتماد على الارتباط بفطريات الفطريات الفطرية الأوركيد - أن يحاكي العمليات الطبيعية عن كثب ولكن غالبا ما يصعب توحيدها بسبب اعتمادها على الشركاء الفطريين المحددينللأنواع 12،13،14. في المقابل ، يوفر الإنبات غير التكافلي بديلا أبسط وأكثر قابلية للتكرار يستخدم على نطاق واسع في أنظمة زراعة أنسجة الأوركيد15. على الرغم من تطوير بروتوكولات الإنبات غير التكافلية والتكاثر السريع للعديد من بساتين الفاكهة الطبية مثل Bletilla و Dendrobium و Cypripedium16،17،18،19 ، إلا أن التحسين الخاص بالأنواع لوسائط الاستزراع وظروف زراعة الأنسجة ل H. cucullata لا يزال مطلوبا.

في هذه الدراسة ، استخدمنا البذور الناضجة من H. cucullata التي تم الحصول عليها من خلال التلقيح المتبادل اليدوي للأفراد البرية (الشكل 1 أ) في جبل تيانمو في شرق الصين (30 ° 20 ′ شمالا ، 119 ° 22 ′ شرقا) لإنشاء وتحسين بروتوكول فعال لإنبات البذور غير المتكافل ، وتطوير الشتلات ، واستطالة البراعم. بالإضافة إلى ذلك ، قمنا بتطوير نظام تجديد من نباتات الأوراق عبر تحريض PLBs ، مما يساهم في الحفاظ على هذه السحلية الطبية المهددة بالانقراض وزراعتها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: قبل بدء التجربة ، ارتد معدات الحماية الشخصية ، بما في ذلك القفازات ومعطف المختبر ونظارات السلامة. قم بتنفيذ جميع الإجراءات تحت غطاء التدفق الرقائقي للعقم. تعامل مع الإيثانول وهيبوكلوريت الصوديوم بحذر والتخلص من النفايات وفقا للوائح سلامة المختبر.

1. تعقيم الكبسولة واستخراج البذور

  1. ضع الكبسولة في كوب. أضف 1-2 قطرات من المنظف واشطفها جيدا بماء الصنبور لإزالة الملوثات السطحية.
  2. اغسل الكبسولة تحت الماء الجاري لمدة 5 دقائق. امتصاص الماء السطحي بورق ماص معقم.
  3. انقل الكبسولة إلى طاولة عمل معقمة لمزيد من التطهير.
  4. اغمر الكبسولة في 75٪ (حجم / حجم) إيثانول لمدة 30 ثانية.
  5. قم بتعقيم الكبسولة عن طريق غمرها في 50 مل من محلول هيبوكلوريت الصوديوم بنسبة 20٪ (حجم/حجم) (مخفف من مبيض تجاري يحتوي على ~ 5٪ كلور متوفر)، مع إضافة قطرتين من منظف غسل الصحون المنزلي غير المخفف لمدة 10-12 دقيقة.
  6. اشطف الكبسولة خمس مرات بالماء المقطر المعقم لإزالة المطهر المتبقي.
  7. باستخدام مشرط معقم ، قم بإزالة ما يقرب من 1 مم من كل من قمة وقاعدة (نهاية عنيق) الكبسولة.
  8. قم بعمل شق صغير في الطرف العلوي من الكبسولة لفضح البذور. ضع الكبسولة في طبق بتري معقم لاستخراج البذور.

2. إعداد وسط الثقافة

  1. قم بإعداد 1/2 وسط سائل MS: استخدم نصف تركيزات المغذيات الكبيرة في وسط MS القياسي ، واحتفظ بجميع المكونات الأخرى كما هو الحال في وسط MS ، وأضف 20 جم / لتر من السكروز وحمض α النفثالين أسيتيك (NAA ، 0.5 مجم / لتر) ، واضبط الرقم الهيدروجيني إلى 5.8.
  2. بعد الغليان ، قم بتوزيع الوسط في زجاجات ثقافة سعة 500 مل على الفور (يمكن تعديل عدد الزجاجات وفقا لمقياس التكاثر المطلوب).
  3. ضع الوسط الموزع في الأوتوكلاف وقم بتعقيمه عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. بعد التعقيم ، قم بإزالة الوسط من الأوتوكلاف واتركه ليبرد إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.

3. إنبات البذور

  1. استخدم ملقطا معقما لتفريق ما يقرب من 500-600 بذرة بالتساوي في كل زجاجة متوسطة (محضرة في الخطوة 2.3). اترك البذور تمتص الماء وتستقر في قاع الوسط السائل.
  2. حافظ على الثقافات عند 25 درجة مئوية مع دورة ضوئية / داكنة لمدة 12 ساعة وشدة ضوء تبلغ 36 ميكرولتر · م -2 · ثانية -1.
  3. راقب إنبات البذور أسبوعيا ، وسجل التغيرات المورفولوجية ، والتقط صورا للتوثيق.
  4. بعد حوالي 12 أسبوعا ، عندما تنبت معظم البذور ، احسب عدد البذور النابتة واحسب معدل الإنبات. استخدم حلقة تلقيح معقمة لجمع حلقة واحدة من الوسط السائل المحتوي على البذور بشكل عشوائي. انقل البذور التي تم أخذ عينات منها إلى طبق بتري أو شريحة زجاجية ولاحظها تحت المجهر المجسم.
  5. احسب عدد البذور التي شكلت البذور الأولية كما نبتت. احسب معدل الإنبات باستخدام الصيغة التالية:
    معدل الإنبات (٪) = (عدد البذور النابتة / إجمالي عدد البذور في العينة) × 100.

4. الاستزراع الفرعي للبروتوكورم وانتشاره

  1. قم بإعداد وسط الانتشار عن طريق استكمال وسط B5 (3.21 جم / لتر) بماء جوز الهند (100 مل / لتر) و 6-بنزيل أمينوبورين (BA ، 0.5 مجم / لتر) و NAA (0.2 مجم / لتر). أضف 20 جم / لتر من السكروز و 7.3 جم / لتر أجار ، واضبط الرقم الهيدروجيني على 5.8.
  2. بعد الغليان ، قم بتوزيع الوسط في زجاجات ثقافة سعة 150 مل على الفور (يمكن تعديل عدد الزجاجات وفقا لمقياس التكاثر المطلوب).
  3. ضع الوسط الموزع في الأوتوكلاف وقم بتعقيمه عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. اترك الوسط ليبرد حتى يصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.
  4. انقل 10-15 بروتوكوما منابتة (بحجم 0.3-1 سم) لكل زجاجة بشكل معقم على وسط الاستزراع المحضر في الخطوة 4.3.
  5. بعد فترة زراعة مدتها 5 أسابيع ، قم بتقييم حالة الانتشار وسجل عدد البروتوكورمز المشكلة حديثا لكل زجاجة.
  6. استمر في زراعة البروتوكورمز المتكاثرة لمدة 4-6 أسابيع إضافية للسماح بالتطور إلى نباتات ذات قمة براعم مرئية وهياكل شبيهة بالجذور قبل نقلها لاستطالة البراعم.
    ملاحظة: حافظ على المزارع عند 25 درجة مئوية ، مع دورة ضوئية / داكنة 12 ساعة وشدة ضوء 36 ميكرولتر · م -2 · ثانية -1.

5. تبادل لاطلاق النار استطالة

  1. قم بإعداد الوسط لاستطالة البراعم عن طريق استكمال وسط B5 (3.21 جم / لتر) مع BA (0.5 مجم / لتر) و NAA (1 مجم / لتر). أضف 20 جم / لتر من السكروز و 7.3 جم / لتر أجار ، واضبط الرقم الهيدروجيني على 5.8.
  2. بعد الغليان ، قم بتوزيع الوسط في زجاجات ثقافة سعة 150 مل (يمكن تعديل عدد الزجاجات وفقا لمقياس التكاثر المطلوب).
  3. اختر نباتات صحية (بحجم 1-2 سم ، دون اسوداد واضح أو اصفرار كامل) لاستطالة البراعة. باستخدام ملقط معقم ومبرد ، انقل 8-12 نبتة معقمة إلى كل زجاجة زراعة سعة 150 مل تحتوي على وسط طازج محضر في الخطوة 5.1. تأكد من توزيع النباتات بالتساوي داخل كل زجاجة.
  4. بعد فترة استطالة التصوير لمدة 5 أسابيع ، اختر نباتات ذات براعم متطورة بالكامل وأوراق صحية لأخذ عينات من مستحضر الأوراق.
    ملاحظة: حافظ على المزارع عند 25 درجة مئوية ، مع دورة ضوئية / داكنة 12 ساعة وشدة ضوء 36 ميكرولتر · م -2 · ثانية -1.

6. تحريض PLBs من مقاصلات الأوراق

  1. قم بإعداد وسط الحث PLBs عن طريق استكمال الوسط القاعدي MS (4.43 جم / لتر) مع BA (3 مجم / لتر) و NAA (0.2 مجم / لتر). أضف 20 جم / لتر من السكروز و 7.3 جم / لتر أجار ، واضبط الرقم الهيدروجيني على 5.8.
  2. بعد الغليان ، قم بتوزيع الوسط في زجاجات ثقافة سعة 150 مل (يمكن تعديل عدد الزجاجات وفقا لمقياس التكاثر المطلوب).
  3. حدد نباتات صحية بعد 5 أسابيع من استطالة البراعم (الخطوة 5.4). قم بإزالة الأوراق المعقمة الموسعة بالكامل ، وإزالة المنطقة القمية والهوامش ، وقطع كل ورقة إلى شرائح بطول 0.5 سم × 0.5 سم تقريبا باستخدام مشرط معقم في ظل ظروف معقمة.
  4. ضع 10 أجزاء من الأوراق على وسط الحث PLB بحيث يكون السطح المحوري متجها لأعلى ، مما يضمن ملامسة قوية مع السطح المتوسط.
  5. بعد 5 أسابيع من الاستزراع ، قم بتقييم عدد PLBs المستحثة بنجاح وحساب معدل الحث (٪). بالإضافة إلى ذلك ، سجل متوسط ارتفاع البرعم (سم) وعدد البراعم المتكونة لكل نبات.
    ملاحظة: حافظ على المزارع عند 25 درجة مئوية ، مع دورة ضوئية / داكنة 12 ساعة وشدة ضوء 36 ميكرولتر · م -2 · ثانية -1.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمثل خطوات البروتوكول المعروضة في هذه الدراسة المنهجية المحسنة التي تم تطويرها من خلال سلسلة من التجارب المقارنة التي تهدف إلى تحسين إنبات البذور غير المتكافل ، وتكاثر البروتوكورم ، واستطالة البراعم ، وتحريض PLB في H. cucullata. على سبيل المثال ، في اختيار PGRs لتعزيز إنبات البذور ، يعزز NAA نمو الأجنة وامتصاص الماء ، بينما يعزز BA تمايز البراعم وانقسام الخلايا. ثبت أن تأثيرها التآزري يحسن معدلات الإنبات ونمو الشتلات المبكر في زراعة بذور الأوركيد17. تم تحسين كل مرحلة من مراحل البروتوكول ب...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تحتوي كبسولات الأوركيد عادة على العديد من البذور ، والتي غالبا ما تتجاوز عشرة آلاف ، لكن إنباتها الطبيعي محدود للغاية بسبب عدم وجود السويداء واعتمادها الكبير على الارتباطات الفطرية التكافلية والإشارات البيئية المحددة20. وبالتالي تم اعتماد بروتوكولات الإنبات غير المتكافئ على نطاق واسع لتجاوز هذه القيود وتمكين التكاثر الفعال للشتلات في ظل ظروف خاضعة للرقابة. على سبيل المثال ، أبلغ Chen et al15 عن معدل إنبات بنسبة 93٪ في Bletilla باست...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1/2 أملاح أساسية مع فيتاميناتكولابرPM1061
6-بنزيلامينوبورينشنغهاي ماكلين التكنولوجيا الكيميائية الحيوية المحدودة1214-39-7
أجار باوربكين Chembase التكنولوجيا المحدودة1400
مقعد نظيفسوتشو تنقية Equipemnt المحدودةSW-CJ-2G
ماء جوز الهندمزارع جيدhttps://e.tb.cn/h.6F8GTrHG7pif7Tj?tk=jFTyVPU3OBs
منظفليبي للعلوم والتكنولوجيا6920174756784
جامبورغ B5 وسطمختبرات التكنولوجيا النباتيةجي 398
زجاجهشركة Morebetter للتكنولوجيا الحيوية المحدودةإم بي تي - BL-240
موراشيج & سكوج أملاح القاعديةمختبرات التكنولوجيا النباتيةإم 519
ماصهإيبندورف3123000268
توازن الدقةMETTLER TOLEDO30834109
SPSSشركة ماكينات الأعمال الدوليةالبرمجيات المستخدمة لاختبار الدلالة الإحصائية
سكروزSinopharm الكاشف الكيميائي المحدودة20210802
ثيديزورونشنغهاي ماكلين التكنولوجيا الكيميائية الحيوية المحدودة51707-55-2
α-حمض النفثالين أسيتيكشنغهاي ماكلين التكنولوجيا الكيميائية الحيوية المحدودة86-87-3

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chen, X., et al. Flora of China. , Science Press and Missouri Botanical Garden Press. Beijing, St. Louis, MO. (2009).
  2. Tang, Y., Yukawa, T., Bateman, M., Jiang, H., Peng, H. Phylogeny and classification of the East Asia Amitostigma alliance (Orchidaceae: Orchideae) based on six DNA markers. BMC Evol Biol. 15 (1), 1-32 (2015).
  3. Minarchenko, M. Threatened medicinal plants of Ukraine: An assessment of the current protection status. J Plant Dev. 24, 117-131 (2017).
  4. Pant, B., Raskoti, B. Medicinal Orchids of Nepal. , Himalayan Map House Pv Ltd. Kathmandu, Nepal. (2013).
  5. Strack, D., Busch, E., Wray, V., Grotjahn, L., Klein, E. Cyanid 3oxalylglucoside in orchids. Naturforsch C. 41 (7-8), 707-711 (1986).
  6. Strack, D., Busch, E., Klein, E. Anthocyanin patterns in European orchids and their taxonomic and phylogenetic relevance. Phytochemistry. 28 (8), 2127-2139 (1989).
  7. Ilyina, N., Kozlovskaya, O. V. Dynamics of the population structure and abundance of the rare species Neottianthe cucullata (L Schlechter under conditions of pyrogenic load in the territory adjacent to the Buzuluksky Bor National Park (Samara region). Samara J Sci. 13 (2), 35-41 (2024).
  8. Khapugin, A., Chugunov, G., Silaeva, T., Kunaeva, E. Neottianthe cucullata (L Schltr. (Orchidacea Juss.), an endangered orchid in central Russia. Wulfenia. 23, 189-202 (2016).
  9. A method for the rapid propagation of Hemipilia cucullata. using its floral bracts as explants. China patent. , CN106993535A (2017).
  10. Johnson, D., Edwards, T. The structure and function of orchid pollinaria. Plant Syst Evol. 222, 243-269 (2000).
  11. Ilyina, V., Senator, S., Mitroshenkova, A., Kozlovskaya, O. Peculiarities of the Neottianthe cucullata population structure under industrial loads (Samara Oblast). AIP Conf Proc. 3184 (1), 8(2024).
  12. Zhang, L., et al. Symbiotic culture of three closely related Dendrobium species reveals a growth bottleneck and differences in mycorrhizal specificity at early developmental stages. Diversity. 14 (12), 1119(2022).
  13. Leng, C., Hou, M., Xing, Y., Chen, J. Perspective and challenges of mycorrhizal symbiosis in orchid medicinal plants. Chin Herb Med. 16, 172-179 (2024).
  14. Zoubi, L. Complexities and innovations in orchid germination: A review of symbiotic and asymbiotic techniques. J Plant Sci. 12 (4), 90-94 (2024).
  15. Chen, J., et al. Symbiotic and asymbiotic germination of Dendrobium officinale (Orchidaceae) respond differently to exogenous gibberellins. Int J Mol Sci. 21 (17), 6104(2020).
  16. JinYing, C., Xuefeng, W., Baocai, L., Yuqing, Z. Efficient germination system in asymbiotic culture of Bletilla striata (Thunb Reichb). f. Fujian J Agric Sci. 33 (2), 131-135 (2018).
  17. Mei, H., JiJun, K., ZhenYong, X., LiMing, Z., Hong, J. Study on seedlings of nonsymbiotic germination of Paphiopedilum wenshanense. J West China For Sci. 49 (3), 56-59 (2020).
  18. Teixeirada Silva, A., Cardoso, J. C., Dobránszki, J., Zeng, S. Dendrobium micropropagation: A review. Plant Cell Rep. 34, 671-704 (2015).
  19. Zeng, S., et al. Seed biology and vitro seed germination of Cypripedium. Crit Rev Biotechnol. 34 (4), 358-371 (2014).
  20. Cozzolino, S., Widmer, A. Orchid diversity: An evolutionary consequence of deception. Trends Ecol Evol. 20 (9), 487-494 (2005).
  21. Miura, C., et al. Autoactivation of mycorrhizal symbiosis signaling through gibberellin deactivation in orchid seed germination. Plant Physiol. 194 (1), 546-563 (2023).
  22. Bustam, B., Dixon, K., Bunn, E. vitro propagation of temperate Australian terrestrial orchids: Revisiting asymbiotic compared with symbiotic germination. Bot J Linn Soc. 176 (4), 556-566 (2014).
  23. Gogoi, K., Kumaria, S., Tandon, P. Ex situ conservation of Cymbidium eburneum Lindl.: a threatened and vulnerable orchid, by asymbiotic seed germination. 3 Biotech. 2, 337-343 (2012).
  24. Robinson, E. J., Kakati, J. P., Sebastinraj, S., Suriya, K. I vitro seed germination of Cymbidium aloifolium L Sw., a potential medicinal orchid from Eastern ghats of Tamil Nadu India. J Plant Biotechnol. 44, 343-348 (2017).
  25. Hossain, M., Sharma, M., Teixeirada Silva, J. A., Pathak, P. Seed germination and tissue culture of Cymbidium giganteum Wall. Lindl. Sci Hortic. 123 (4), 479-487 (2010).
  26. Ibrahim, L., Jenkinson, P. Effect of artificial culture media on germination, growth, virulence and surface properties of the entomopathogenic hyphomycete Metarhizium anisopliae. Mycol Res. 106 (6), 705-715 (2002).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة