Method Article

التشريح المجهري متعدد المستويات والتنميط الوظيفي الهيكلي لفروع الشرايين الكلوية البشرية

DOI:

10.3791/68579

⸱

September 5th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Cardiovascular Sciences, School of Basic Medical Sciences, Peking University Health Science Center; State Key Laboratory of Vascular Homeostasis and Remodeling, Peking University, 2Beijing Key Laboratory of Cardiovascular Receptors Research, 3Department of Cardiology and Institute of Vascular Medicine, Peking University Third Hospital, Peking University, 4Department of Urology, Peking University First Hospital; Institute of Urology, Peking University; Beijing Key Laboratory of Urogenital Diseases (Male) Molecular Diagnosis and Treatment Center, National Urological Cancer Center, 5Institute of Cardiovascular Diseases, First Affiliated Hospital of Dalian Medical University, 6NHC Key Laboratory of Cardiovascular Molecular Biology and Regulatory Peptides, Peking University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقدم هذه المقالة بروتوكولا خطوة بخطوة للعزل والتقييم الوظيفي لفروع الشرايين الكلوية البشرية ، مما يسهل الدراسات قبل السريرية للتطوير الصيدلاني.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يلعب الخلل الوظيفي الوعائي الكلوي دورا مهما في التسبب في الحالات السريرية المتعددة ، بما في ذلك إصابة الكلى الحادة ونقص التروية الكلوي وارتفاع ضغط الدم ، مما يمثل تحديات كبيرة في الإدارة السريرية ويؤثر سلبا على نتائج المرضى. يعد عزل الشرايين الكلوية وتوصيفها الوظيفي أمرا بالغ الأهمية لتوضيح الآليات الكامنة وراء الخلل الوظيفي في الأوعية الدموية الكلوية ، لا سيما فيما يتعلق بإصابة الكلى ، وتوجيه التطوير العلاجي المستهدف. على الرغم من أهميتها السريرية ، إلا أن الأساليب الموحدة لعزل الشرايين الكلوية البشرية وتقييمها وظيفيا عبر مستويات التفرع المختلفة لا تزال متخلفة. يوفر هذا البروتوكول إطارا شاملا للعزل المنهجي والتقييم متعدد الوسائط لفروع الشرايين داخل الكلى ، بما في ذلك التقييمات الوظيفية والهيكلية في ظل كل من الظروف الفسيولوجية والمرضية. تشمل المنهجية ثلاثة مكونات رئيسية: (1) التحديد التشريحي الدقيق والتشريح المجهري للشرايين داخل الكلى من الكلى من المتبرع ، مصحوبا بتلطيخ الهيماتوكسيلين إيوزين (H & E) للتأكيد الهيكلي. (2) إجراءات التطبيع الصارمة في التصوير العضلي السلكي لتعزيز قابلية القياس والموثوقية ؛ و (3) التحليل الكمي للاستجابات الحركية الوعائية باستخدام تقنيات التصوير العضلي الأسلاكي الدقيقة. يعتمد التطبيع على علاقة طول العضلات وتوتر ، حيث يؤدي التمدد التدريجي للأجزاء الشريانية إلى إنشاء توتر مثالي للراحة لزيادة تداخل الأكتين والميوسين ، وبالتالي إثارة استجابات انقباضية ذروة. في تصوير العضل السلكي ، يتم تعليق أجزاء الأوعية المعزولة بين سلكين متوازيين ، مما يسمح بقياس دقيق لتوتر الأوعية الدموية. من خلال تطبيق بروتوكولات التطبيع الصارمة ، تتيح هذه التقنية القياس الكمي القابل للتكرار والموثوق به لتفاعل الأوعية الدموية عبر مختلف الحالات الفيزيولوجية المرضية والتدخلات الدوائية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكلى هي عضو حيوي مسؤول عن الحفاظ على التوازن البشري من خلال إزالة النفايات الأيضية وتوازن الكهارل وتنظيم السوائل - وهي وظائف تتطلب تدفقا عاليا للدم بشكل استثنائي. في ظل الظروف الفسيولوجية ، تتلقى الكلى ما يقرب من 25٪ من إجمالي حجم الدم الذي يضخه القلب كل دقيقة (النتاج القلبي) ، مما يؤكد دورها الكبير في تدفق الدم الجهازي والأهمية الحاسمة للتروية الكلوية في الحفاظ على التوازن الفسيولوجيالعام 1. ينظم الجهاز الشرياني الكلوي بدقة هذا التوصيل الهائل للدم للحفاظ على معدل الترشيح الكبيبي مع التكيف مع التغيرات الديناميكية الدموية الجهازية. وبالتالي ، يمثل ضعف التروية الكلوية آلية مرضية حاسمة تساهم في تقليل معدل الترشيح....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة البروتوكول والأمثلة الموضحة هنا والموافقة عليها من قبل قسم المسالك البولية في المستشفى الأول بجامعة بكين (الموافقة رقم 2023yan500-002) وتم إجراؤها وفقا لإعلان هلسنكي. قدم جميع المشاركين موافقة خطية مستنيرة قبل المشاركة.

1. إعداد الحل

  1. تحضير محلول كريبس رينجر (كريبس) يحتوي على 119.0 ملي كلوريد الصوديوم ، و 4.7 ملي كلوريد كلوريد ، و 2.5 ملي كلوريدالكالسيوم 2 ، و 1.0 ملي ملي كلوريدالملزوم 2 ، و 25.0 ملي هيدروكسيد الصوديوم3 ، و 1.2 ملي كيلو هيدروكسيون2PO4 ، و 11.0 ملي مولار من الجلوكوز عند درجة الحموضة 7.4.
  2. ت....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في الكلى البشرية ، يمتد الشريان بين الفصيصات بين الأهرامات الكلوية بطول الوريد المقابل. يتميز هذا الشريان بجدار وعائي سميك نسبيا وغلاف كبير للأنسجة الدهنية ، ويتطلب تشريحا دقيقا بشكل خاص. يجب إزالة الأنسجة الدهنية المحيطة بدقة لتجنب استخدام القوة المفرطة أثناء إجراء العزل (الشكل 1 ج).

يتم وضع الشريان المقوس تشريحيا عند التقاطع القشري ، ويشكل قوسا نصف دائري مميزا على طول الهامش الخارجي للأهرامات الكلوية. بالمقارنة مع الشريان بين الفصصات ، فإنه يمتلك جدارا وعائيا أر.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعمل استقرار التروية الكلوية كهدف علاجي حاسم ونافذة على الفيزيولوجيا المرضية الديناميكيةالدموية 39،40. نقدم بروتوكولا للعزل الهرمي والتقييم الوظيفي للشرايين الكلوية البشرية من عينات استئصال الكلية الطازجة ، ومعالجة الثغرات الكبيرة في المنهجيات الحالية. على عكس الأساليب الحالية التي تقتصر على عينات الجثث أو النماذج الحيوانية ، تتيح تقنيتنا عزلا موثوقا به للشرايين الكلوية القابلة للحياة (بين الفصيصات إلى الفصيصية) مع الحفاظ على الس.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يود المؤلفون أن يشكروا المتطوعين على مشاركتهم في هذه الدراسة ، ويشكرون أيضا الطاقم الجراحي في قسم المسالك البولية في مستشفى بكين الأول بجامعة بكين على توفير أنسجة الكلى. ودعمت هذا العمل مؤسسة بلدية بيجين للعلوم الطبيعية (F251013 إلى ي. ز. ، 7232096 إلى ي. ل.) المؤسسة الوطنية للعلوم في الصين (82325004 ، 92168114 إلى Y. Z. ، 82170422 إلى Y. L.) ؛ البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2021YFF0501401 ، 2018YFA0800501 إلى YZ ، 2021YFF0501404 إلى YL ، 2023YFC2415500 إلى L.Y.) ؛ مشروع بحثي لمستشفى جامعة بكين الثالث في مختبر الولاية الرئيسي لتوازن الأوعية الدموية وإعادة تشكيلها (جامعة بكين ؛ 2024-VHR-SY-07 إلى YZ) ؛ 2023 لجنة الصحة....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
كلوريد أستيلسيجما ألدريتش ، ميرك ، دارمشتات ، ألمانياط6625
طبق ثقافة أسود القاعتكنولوجيا ميو الدنماركية ، آرهوس ، الدنمارك300412
CaCl2سانغون للتكنولوجيا الحيوية المحدودة ، شنغهاي ، الصينA501330
د جلوكوزسانغون للتكنولوجيا الحيوية المحدودة ، شنغهاي ، الصينA610219
ملقط دومونتكنولوجيا ميو الدنماركية ، آرهوس ، الدنمارك300413
مقص تشريح Geuderتكنولوجيا ميو الدنماركية ، آرهوس ، الدنمارك400431
سلك التوجيهتكنولوجيا ميو الدنماركية ، آرهوس ، الدنمارك400447قطر 40 µ m
KClسانغون للتكنولوجيا الحيوية المحدودة ، شنغهاي ، الصينA100395
KH2PO4سانغون للتكنولوجيا الحيوية المحدودة ، شنغهاي ، الصينA100781
LabChart Professional الإصدار 8.3 ADnstruments ، أستراليا-
MgCl2· 6H2Oسانغون للتكنولوجيا الحيوية المحدودة ، شنغهاي ، الصينA100288
نظام تخطيط عضلة متعددة  تكنولوجيا ميو الدنماركية ، آرهوس ، الدنمارك620 مليون
كلوريد الصوديومسانغون للتكنولوجيا الحيوية المحدودة ، شنغهاي ، الصينA100241
NaHCO3سانغون للتكنولوجيا الحيوية المحدودة ، شنغهاي ، الصينA100865
فينيليفرينسيجما ألدريتش ، ميرك ، دارمشتات ، ألمانياص 6126

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Molema, G., Aird, W. C. Vascular heterogeneity in the kidney. Semin Nephrol. 32 (2), 145-155 (2012).
  2. Jentzer, J. C., et al. Contemporary management of severe acute kidney injury and refractory cardiorenal syndrome: Jacc council perspectives.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Renal Arterial BranchesMicrodissection TechniqueWire MyographyVascular DysfunctionIntrarenal Artery IsolationVasomotor ResponsesMuscle Length TensionHematoxylin Eosin StainingPhenylephrine ContractionArterial Normalization

Related Articles