مقالة بحثية

آثار مرهم الحروق المكشوفة الرطب على إعادة تكوين الأوعية الدموية في الجرح والبلازما الخارجية mir-31-5p في الفئران المصابة بالسكري

623 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/68649

⸱

أغسطس 26, 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Endocrinology, The Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities, 2Department of Cardiology, General Hospital of Central Theater Command, 3Key Laboratory for the Prevention and Treatment of Diabetic Chronic Wounds in Baise City, 4Key Laboratory of Metabolic Diseases in Baise City

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

توضح هذه المقالة كيف يعزز مرهم الحروق المكشوف للرطوبة إصلاح جروح السكري عن طريق تنظيم الأوعية الدموية الجديدة للجروح السكرية ديناميكيا والتعبير عن البلازما الخارجية mir-31-5p.

الملخص

مرهم الحروق المكشوفة للرطوبة (MEBO) هو دواء صيني تقليدي يستخدم لعلاج جروح السكري المزمنة. ومع ذلك ، فإن الآلية الأساسية غير واضحة. تشير الأدلة الحديثة إلى دور الإكسوسومات و miRNAs الوظيفية في إعادة تكوين الأوعية الدموية الجديدة للجروح. هنا ، هدفنا إلى التحقيق في تأثيرات MEBO على الأوعية الدموية الجديدة للجروح وتعبير mir-31-5p الخارجي في البلازما (pExo-mir-31-5p) في الفئران المصابة بالسكري. تم تقسيم ما مجموعه 120 فأرا C57BL / 6 بشكل عشوائي إلى مجموعة تحكم غير مصابة بالسكري (ن = 24) ومجموعة مرضى السكري الناجمة عن الستربتوزوتوسين (ن = 96) ، والتي تم توزيعها بشكل عشوائي إلى مجموعات التحكم في مرضى السكري ، و MEBO ، و beifuxin ، و MHY1485 (ن = 24 لكل منهما). تم إنشاء خمس مجموعات بنماذج استئصال الجلد كاملة السماكة ، والتي تم علاجها بالمحلول الملحي الفسيولوجي ، والمحلول الملحي الفسيولوجي ، و MEBO ، و beifuxin ، و MHY1485 ، على التوالي. في الأيام 1 و 7 و 13 و 18 ، تم تحليل معدل إغلاق الجرح ، وكثافة الأوعية الدقيقة ، ومستويات تعبير pExo-mir-31-5p ، جنبا إلى جنب مع VPS4a و Rab27a mRNA ومستويات البروتين في أنسجة الجرح ، باستخدام ImageJ ، وتلوين الهيماتوكسيلين يوزين (HE) ، وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي (qPCR) واللطخة الغربية (WB) ، على التوالي. علاوة على ذلك ، تم تحليل الارتباطات بين التعبير عن VPS4a و Rab27a protein و pExo-mir-31-5p وكثافة الأوعية الدقيقة. وجدنا أن MEBO عزز إصلاح الجروح في الفئران المصابة بالسكري (ص < 0.050). عزز الأوعية الدموية الجديدة للجروح خلال المراحل المبكرة والمتوسطة من التئام الجروح ولكنه منعها خلال المرحلة اللاحقة (ص < 0.050). قامت MEBO بتنظيم Vps4a و Rab27a mRNA والتعبير عن البروتين في أنسجة الجرح ، بالإضافة إلى pExo-mir-31-5p خلال المراحل المبكرة والمتوسطة من الشفاء ، مع تقليل تنظيمها في المرحلة اللاحقة (ص < 0.050). علاوة على ذلك ، تم ربط VPS4a وبروتين Rab27a وتعبير pExo-mir-31-5p وكثافة الأوعية الدقيقة بشكل إيجابي في الفئران المعالجة ب MEBO (ص < 0.050). في الختام ، ينظم MEBO ديناميكيا إعادة تكوين الأوعية الدموية الجديدة للجروح وتعبير pExo-mir-31-5p في الفئران المصابة بالسكري ، مما يوفر دعما نظريا جديدا لتطبيقه السريري.

المقدمة

انتشار داء السكري لدى المرضى الأكبر سنا مرتفع ويتزايد سنويا. يرتبط المرض بجروح السكري المزمنة (CDWs) ، والتي لها تأثير ضار على صحة المريض ووظيفته ونوعية حياته بشكل عام1. عادة ما يتضمن إغلاق الجرح أربع مراحل متميزة: الإرقاء ، والالتهاب ، والتكاثر ، وإعادةالظهارة 2. من بين هؤلاء ، مرحلة التكاثر هي الأهم. خلال مرحلة التكاثر المبكرة ، تتكاثر الخلايا البطانية الشعرية وتهاجر إلى الجرح ، وتنبت أوعية جديدة ، وتشكل شبكة معقدة3. ومع ذلك ، في المراحل اللاحقة من إصلاح الجروح ، تخضع معظم اللومينا الشعرية للانسداد ، مع انتقال أقلية إلى الشرايين والأوردة الصغيرة. في المرضى الذين يعانون من CDWs ، يؤدي فقدان الأنسجة والنخر والغرغرينا ، ومستويات مختلفة من الالتهاب وارتفاع السكر في الدم ، إلى تعطيل التوازن الديناميكي بين تكوين الأوعية الدموية ومضادات تكوين الأوعية ، مما يؤخر التئام الجروح ، خاصة عندما يكون تكوين الأوعية ضعيفا4،5،6. مرهم الحروق المكشوف للرطوبة (MEBO) هو دواء صيني تقليدي يستخدم لعلاج CDWs ، لكن آليته لا تزال غير واضحة. في الآونة الأخيرة ، أظهرت دراسات متعددة أن miRNAs المشمولة بالإكسوسوم يمكن أن تعزز تكوين الأوعية الدموية وبالتالي تعزز التئام جروح السكري7،8. ومع ذلك ، فقد بحثت دراسات قليلة في الارتباط بين MEBO و miRNAs المحمولة بالإكسوزوم. لذلك ، هناك حاجة للكشف عن الآلية التي يحفز MEBO من خلالها تكوين الأوعية الدموية في CDWs من منظور miRNA الخارجي والوظيفي.

الإكسوسومات عبارة عن حويصلات غشائية كروية تطلقها الخلايا الحية ، ويبلغ حجمها 30-200 نانومتر ، وكثافة 1.1-1.2 جم / مل ، وتحتوي على بروتينات علامة مثل CD81 وقابلية الورم 101 (TSG101) 9. يصنف إنتاج الإكزوسوم وإفرازه إلى مركب الفرز الداخلي المطلوب للمسارات المعتمدة على النقل (ESCRT) وغير المعتمدة على ESCRT. أهم المنظمين في هذه المسارات هم فرز البروتين الفراغي 4 متماثل أ (VPS4a) والبروتين المرتبط ب Rab-27a (Rab27a) 10،11،12. يعمل Vps4a كATPase ، مما يحفز عملية إعادة تشكيل الغشاء المعتمد على ESCRT ، والتي تنظم حجم الإكسوسوم ومعدل تكوين الإكسوسوم13،14. Rab27a هو GTPase صغير أساسي ينظم إرساء الأجسام متعددة الحويصلات بغشاءالبلازما 15. يتم تنظيم إفراز الإكسوسوم سلبا من خلال هدف الثدييات لمركب الرابامايسين 1 (mTORC1) 16 ، والذي يتم تنشيطه عن طريق MHY1485 الارتباط التنافسي بالمجال الهيكلي ATP للرابامايسين17. بشكل عام ، يمكن أن يمنع MHY1485 بشكل غير مباشر تخليق وإفراز الإكسوسوم. يمكن اكتشاف الإكسوسومات في جميع سوائل الجسم تقريبا. تعتبر إكسوسومات البلازما أكثر إنتاجية من الإكسوسومات المشتقة من سوائل الجسم الأخرى18. علاوة على ذلك ، تحمي الإكسوسومات الأحماض النووية التي تحملها من التحلل19.

MiRNAs هي جزيئات RNA صغيرة غير مشفرة تنظم النشاط الخلوي20. تم اكتشاف الإكسوسومات بكثرة في العديد من miRNAs الحاسمة لتعزيز تكوين الأوعية الدموية للجروح ، وتحديدا mir-126 و mir-125a و mir-31-5p. أظهرت دراسة سابقة أن الإكسوسومات المشتقة من الخلايا الجذعية الوسيطة لنخاع العظم mir-126 عززت التكاثر والهجرة وتكوين الأنبوب للخلايا البطانية للوريد السري البشري في المختبر عن طريق نقل mir-12621. أشارت دراسة أخرى إلى أن الإكسوسومات التي تفرزها الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من الدهون البشرية تنقل mir-125a إلى الخلايا البطانية وعززت تكوين الأوعية عن طريق قمع مثبط الأوعية الدموية الشبيه بدلتا 4 في الجروح9. يان وآخرون أفاد أن mir-31-5p المحملة في جسيمات الحليب حسنت وظائف الخلايا البطانية في المختبر ، وعززت تكوين الأوعية الدموية ، وعززت التئام جروح السكري في الجسم الحي22. من بين هذه miRNAs ، كان mir-31-5p هو miRNA الوحيد الذي تم تنظيمه بشكل كبير في جروح الفئران السكرية مقارنة بتلك الموجودة في جروح الفئران الطبيعية22.

MEBO هو مرهم زيتي يمكن استخدامه لعلاج الجروح المقاومة للحرارة مثل CDWs23،24. ومع ذلك ، لم يتم توضيح آلية MEBO التي تعزز التئام الجروح. أظهرت دراسة سابقة أن MEBO يعزز إعادة تكوين الأوعية الدموية الجديدة للجروح عن طريق تنظيم التعبير عن عامل نمو بطانة الأوعية الدموية في الفئران المصابة بالسكري25. ومع ذلك ، فقد عالجت دراسات قليلة فقط هذه المشكلة من منظور miRNAs المحمولة بالإكسوسوم. في هذه الدراسة ، للتحقيق في تأثيرات MEBO على CDWs ، قمنا باستحداث نموذج جرح كامل السماكة في الفئران المصابة بالسكري باستخدام الستربتوزوتوسين (STZ) ونظام غذائي غني بالدهون. أظهرنا أن MEBO يسرع بشكل كبير التئام الجروح في الفئران المصابة بالسكري. علاوة على ذلك ، درسنا تأثيرات MEBO على كثافة الأوعية الدقيقة ، ومستويات التعبير عن pExo-mir-31-5p ، جنبا إلى جنب مع VPS4a و Rab27a mRNA والبروتين في أنسجة الجرح. لذلك ، افترضنا أن MEBO عزز التئام الجروح من خلال تنظيم pExo-mir-31-5p لتنظيم تكوين الأوعية الدموية للجروح في الفئران المصابة بالسكري. يتم تقديم نظرة عامة تخطيطية على تصميم الدراسة في الشكل 1.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع بروتوكولات التجارب الحيوانية من قبل لجنة رعاية واستخدامه في جامعة يوجيانغ الطبية للجنسيات ، بايز ، الصين (2018051501). تم إيواء ذكور C57BL / 6 من الذكور الخالية من مسببات الأمراض (SPF) (7 أسابيع) في مركز مختبر SPF التابع لكلية الطب Youjiang للجنسيات وتم إطعامها نظاما غذائيا عاديا أو غنيا بالدهون والمياه النظيفة. طوال الدراسة ، تم الحفاظ على درجة حرارة غرفة تغذية من 23 درجة مئوية إلى 25 درجة مئوية ، وكانت الرطوبة من 40٪ إلى 60٪ ، وكانت دورة الضوء / الظلام 12 ساعة. تم توفير رعاية وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية الأمريكية للصحة والمعهد الوطني الصيني للصحة (بكين ، الصين). تم إجراء جميع التدخلات الجراحية تحت التخدير باستخدام بنتوباربيتال الصوديوم (0.3٪ ، 50 مجم / كجم) باستخدام بروتوكول موحد تم وضعه في مختبرنا. تم بذل كل الجهود لتقليل عدد المستخدمة وتقليل الانزعاج الحيواني. تلتزم جميع أقسام هذا التقرير بإرشادات ARRIVE للإبلاغ عن البحوث على.

نموذج جرح الفأر وعلاجه
تم تعيين ما مجموعه 120 فأرا بشكل عشوائي إلى مجموعة تحكم غير مصابة بالسكري (NDB-CTR ؛ ن = 24) أو مرضى السكري (ن = 96). لمحاكاة مرض السكري البشري من النوع 2 ، تم تغذية الفئران في مجموعة مرضى السكري بنظام غذائي غني بالدهون والسكر المكرر لمدة 4 أسابيع ثم حقنها داخل الصفاق (ip) مع STZ (100 مجم / كجم) ، مرة واحدة يوميا ، لمدة يومين متتاليين بعد الصيام لمدة 16 ساعة. تم قياس مستويات الجلوكوز في الدم الصائم في اليوم 5 و 6 بعد حقن STZ. الفئران التي تزيد قيم جلوكوز الدم أثناء الصيام عن 16.7 مليمول / لتر في مناسبتين وأعراض مثل كثرة الأكل ، وكثرة الآبال ، والتبول ، وفقدان الوزن اعتبرت نماذج مرض السكريالناجحة 26. بعد 1 أسبوع ، تم حلق الشعر الظهري ، وتم إنشاء جرح جلدي دائري كامل السماكة (القطر = 15 مم) على ظهر كل فأر بعد إعطاء البنتوباربيتال الصوديوم داخل الصفاق (0.3٪ ، 50 مجم / كجم). تم تعيين الفئران في مجموعة مرضى السكري بشكل عشوائي إلى مجموعات MEBO أو BFX (beifuxin) أو DB-CTR (التحكم في مرضى السكري) أو MHY1485 (MHY). عولجت الفئران في مجموعتي MEBO و BFX ب MEBO (0.2 جم / سم2) وجل BFX (0.2 جم / سم2) على الجرح مرة واحدة يوميا ، على التوالي. جل BFX ، واسمه العام هو جل عامل نمو الخلايا الليفية الأساسية البقرية ، هو دواء موضعي يستخدم لعلاج الجروح المزمنة27. عولجت الفئران في مجموعات NDB-CTR و DB-CTR و MHY بالمحلول الملحي الفسيولوجي. عولجت مجموعة MHY أيضا ب MHY1485 (10 مجم / كجم ، ip) لمدة يومين متتاليين. تم حقن الأنسولين للفئران المصابة بالسكري تحت الجلد بجرعة 2-4 وحدة دولية / كجم مرة واحدة يوميا للتحكم في مستوى الجلوكوز في الدم.

جمع العينات
في الأيام 1 و 7 و 13 و 18 ، تم اختيار ستة فئران في كل مجموعة بشكل عشوائي للقتل الرحيم عن طريق خلع عنق الرحم ، وتم أخذ عينات من أنسجة البشرة على شكل حلقة ، بما في ذلك الجرح ، على بعد 0.5 سم من حافة الجرح بمقص مناديل معقمة. ثم تم جمع أنسجة الجرح لتلوين HE وتحليل qPCR وفحوصات WB. تم جمع عينات الدم من الفئران في مجموعات DB-CTR و MEBO باستخدام الطريقة الرجعية الحجاجية تحت التخدير البنتوباربيتال الصوديوم. تم خلط عينات الدم مع الهيبارين في أنابيب مضادة للتخثر وطردها عند 3,000 × غرام لمدة 15 دقيقة لاستعادة طافي البلازما. تم تخزين جميع العينات عند -80 درجة مئوية. لحساب معدل إغلاق الجرح ، تم استخدام كاميرا رقمية لالتقاط صور التئام الجروح في نقطة زمنية محددة وعلى مسافة متساوية بمقياس متدرج على الجانب. تم قياس مساحة الجرح باستخدام برنامج ImageJ. تم حساب معدل إغلاق الجرح على النحو التالي:

معدل إغلاق الجرح (٪) = [W1-Wn] / W1 × 100٪

حيث يشير W1 و Wn إلى مناطق الجرح في اليومين 1 و n ، على التوالي.

الفحص النسيجي المرضي
تم إجراء تلطيخ HE لمراقبة التئام الجروح المرضية ديناميكيا. بعد التثبيت بمحلول بارافورمالدهيد بنسبة 4٪ لمدة 16 ساعة ، تم تجفيف أنسجة الجرح ، وغرسها في البارافين ، ثم تقطيعها إلى أقسام 3 ميكرومتر. تم إجراء تلطيخ HE على شرائح الأنسجة. لاستكشاف كثافة الأوعية الدقيقة لأنسجة الجرح ، تم تصوير شرائح الأنسجة باستخدام مجهر بصري. لتحديد كثافة الأوعية الدقيقة لكل عينة ، اخترنا المنطقة ذات الكثافة الشعرية الأعلى تحت مجهر 10x ، ثم اخترنا وقمنا بتصوير ثلاث مناطق غير متداخلة تحت مجهر 20x. تم حساب كثافة الأوعية الدقيقة وحسابها باستخدام ImageJ.

عزل وتوصيف إكسوسومات البلازما
تم إجراء الطرد المركزي الفائق لعزل الإكسوسومات البلازمية وفقا لبروتوكول منشور مع تعديلات طفيفة28. باختصار ، تم طرد 2 مل من البلازما عند 2,000 × جم عند 4 درجات مئوية لمدة 30 دقيقة. تم طرد المادة الطافية مرة أخرى عند 10,000 × جم عند 4 درجات مئوية لمدة 45 دقيقة لإزالة الحويصلات الأكبر. تم ترشيح المادة الطافية من خلال غشاء مرشح 0.45 ميكرومتر ، وتم جمع المرشح. ثم تم طرد المرشح عند 100,000 × جم عند 4 درجات مئوية لمدة 70 دقيقة. بعد إزالة المادة الطافية ، أعيد تعليق الحبيبات ب 10 مل من 1x PBS المبرد مسبقا وطردها عند 4 درجات مئوية ، 100,000 × جم ، لمدة 70 دقيقة. تمت إزالة المادة الطافية ، وأعيد تعليق الحبيبات ب 150 ميكرولتر من 1x PBS المبرد مسبقا وتخزينها عند -80 درجة مئوية. لتأكيد الإكسوسومات البلازمية التي تم جمعها أعلاه ، استخدمنا المجهر الإلكتروني الناقل (TEM) لتحديد مورفولوجيا الإكسوسومات ، ونظام قياس التدفق الخلوي النانوي لتحليل حجم وتركيز الإكسوسومات ، و WB للكشف عن مستويات التعبير عن علامات الإكسوسوم CD81 و TSG101.

استخراج الحمض النووي الريبي والنسخ العكسي (RT) و qPCR
تم إجراء qPCR لتحديد مستويات تعبير الرنا المرسال ل Vps4a و Rab27a و pExo-mir-31-5p. تم جمع أنسجة الجرح لاستخراج الحمض النووي الريبي الكلي باستخدام كاشف استخراج الحمض النووي الريبي. اعتبر تركيز الحمض النووي الريبي الكلي بين 400-700 نانوغرام / ميكرولتر مقبولا. تم نسخ عينات الحمض النووي الريبي بشكل عكسي إلى (كدنا) باستخدام النسخ العكسي مع dsDNase وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تم إجراء qPCR باستخدام SYBR Green qPCR Mix (بدون ROX). أما بالنسبة إلى mir-31-5p ، فقد تم استخراج الحمض النووي الريبي من إكسوسومات البلازما باستخدام المجموعة المصغرة ، وتم نسخها عكسيا باستخدام First Strand cDNA Synthesis Kit ، وتم تضخيمها باستخدام SYBR Green qPCR Master Mix. تم تحليل تعبيرات mRNAs و miRNAs باستخدام طريقة 2-ΔΔCt بالنسبة إلى β-actin و cel-mir-39 ، على التوالي. يتم عرض البادئات المستخدمة في الجدول 1.

لطخة غربية
تم استخدام مقايسة WB للكشف عن مستويات التعبير عن بروتينات Vps4a و Rab27a ، بالإضافة إلى مستويات علامات الإكسوسوم CD81 و TSG101. تم استخراج مستويات البروتين الإجمالية لأنسجة الجرح وإكسوسومات البلازما بواسطة المخزن المؤقت لتحلل RIPA ، وتم تحديد تركيز البروتين بواسطة مجموعة فحص بروتين حمض البيسنشونينيك. تم فصل ما مجموعه 50 ميكروغرام من البروتين بواسطة دوديسيل كبريتات الصوديوم - بولي أكريلاميد. بعد النشاف على أغشية فلوريد البولي فينيلدين ، تم حظر الأغشية بألبومين مصل الأبقار ، ثم تم تحضينها عند 4 درجات مئوية طوال الليل مع الأجسام المضادة ضد Vps4a (1: 3000) ، Rab27a (1: 1000) ، نازعة هيدروجين الجلسرالديهايد -3 فوسفات (GAPDH) (1: 5000) ، CD81 (1: 3000) ، TSG101 (1: 3000) ، ثم تحضنها بأجسام مضادة ثانوية ، مضاد للأرانب IgG بيروكسيداز مترافق (1: 3000) ، عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة. تم تصور الأغشية باستخدام مجموعة تلألؤ كيميائي محسنة.

التحليل الإحصائي
تم تحليل جميع البيانات المقدمة في هذه الدراسة من حيث الدلالة الإحصائية باستخدام برنامج SPSS. تم تصور جميع النتائج التي تم الحصول عليها في هذه التحليلات باستخدام برنامج GraphPad Prism. تم فحص الاختلافات بين المجموعتين باستخدام اختبار t عينة مستقلة. بالنسبة لمقارنات المجموعات المتعددة ، تم استخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه لبيانات التباين المتجانسة ، بينما تم تطبيق اختبار ويلش على بيانات التباين غير المتجانسة. علاوة على ذلك ، استخدمنا اختبار الاختلاف الأقل دلالة للمقارنة الزوجية لبيانات التباين المتساوي واختبار Tamhane's T2 لبيانات التباين غير المتكافئة. يتم تقديم البيانات الكمية كمتوسط ± انحراف معياري. تم تحليل الارتباطات باستخدام تحليل ارتباط سبيرمان للمتغيرات الموزعة بشكل غير طبيعي وتم وصفها بمعاملات ارتباط وفواصل ثقة 95٪. واعتبرت نسبة < 0.050 قيمة P ذات دلالة إحصائية. تكررت جميع التجارب ثلاث مرات على الأقل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

MEBO يسرع التئام الجروح في الفئران المصابة بالسكري
للتحقق من فعالية MEBO في جروح السكري ، أنشأنا نموذجا لجرح السكري والتقطنا صورا في الأيام 1 و 7 و 13 و 18. تلتئم الجروح في كل مجموعة تدريجيا بمرور الوقت (الشكل 2 أ). التئمت الجروح في مجموعة NDB-CTR تماما بحلول اليوم 18. التئمت الجروح في مجموعة MEBO بسرعة أكبر بين جروح السكري ، وشكلت عددا قليلا من جزيئات التحبيب الوردي في اليوم 7 ، ثم نمت مساحة كبيرة من أنسجة التحبيب الأحمر الفاتح بعد التقشير في اليوم 13 ، وفي النهاية تم إص...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يمكن أن تؤدي CDWs ، وهي من مضاعفات مرض السكري ، إلى وفيات وإعاقة كبيرة ، وغالبا ما ترتبط باضطرابات الأوعية الدموية29. MEBO فعال في علاج CDWs. ومع ذلك ، فإن آليتها الأساسية غير واضحة30. لذلك ، هدفنا إلى فحصها من منظور الإكسوسومات والميرنا الوظيفية. في هذه الدراسة ، وجدنا أن معدل إغلاق الجرح وكثافة الأوعية الدقيقة لمجموعة MEBO كانا الأعلى في جميع النقاط الزمنية في الفئران المصابة بالسكري. أظهرت نتائج qPCR و WB أن مستويات التعبير عن VPS4a و Ra...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم مصالح متنافسة.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين بموجب منحة [رقم 81960875] ، ومؤسسة قوانغشي للعلوم الطبيعية بموجب منحة [رقم 2023GXNSFDA026008] ، ومشروع تطوير وتطبيق التكنولوجيا الطبية والصحية المناسبة في قوانغشي بموجب المنحة [رقم S2022134] ، ولجنة الصحة في منطقة قوانغشي ذاتية الحكم لمشروع البحث الممول ذاتيا في إطار المنحة [رقم 20210234] ، ومكتب قوانغشي للطب الصيني التقليدي الممول ذاتيا مشروع بحثي تحت منحة [رقم GZZC2020255].

مساهمة المؤلف:
Yuanyuan Xu: الكتابة - المسودة الأصلية ، البرمجيات ، المنهجية ، التحقيق ، التحليل الرسمي ، التصور جيانتشانغ شو: الموارد والمنهجية والتحقيق. [أنبنغ] [تشو]: تحقيق ، تحليل رسمية. نيمياو سين: التصور ، لينا هوانغ: الإشراف. Biaoliang Wu: الكتابة والمراجعة والتحرير ، الموارد ، إدارة المشروع ، المنهجية ، الحصول على التمويل ، تنظيم البيانات ، وضع المفاهيم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1&مرات ؛ برنامج تلفزيوني  Solarbio (بكين ، الصين)#P1020محلول مخزن مؤقت
محلول بارافورمالديهايد 4٪Solarbio (بكين ، الصين)#P1110إصلاح الأنسجة
مضاد للأرانب IgG بيروكسيداز مترافق   ؛تقارب#S0001الأجسام المضادة الثانوية
جل بيفوكسينEssexbio (تشوهاي ، الصين)#042404A06مرهم لعلاج الجروح المزمنة
الجسم المضاد CD81الجسم المضاد Signalway#41779الأجسام المضادة الأولية
طقم تلألؤ كيميائي محسن   ؛Epizyme (الصين)#SQ101طقم تلألؤ كيميائي لشريط البروتين
الأجسام المضادة لنازعة هيدروجين الجلسرين -3 فوسفات (GAPDH)تقارب#AF7021الأجسام المضادة الأولية
GraphPad المنشورhttps://www.graphpad.com/prism/التصور
ImageJ https://imagej.net/ij/قياس منطقة الجرح   ؛
طقم فحص البروتين الفوري لحمض البيسينشونيك (BCA)   ؛Epizyme (الصين)#ZJ102تحديد تركيز البروتين
نظام LightCycler96روشمعدات qPCR
MHY1485MedChemExpress (الولايات المتحدة الأمريكية)#326914-06-1منشط لهدف الثدييات لمركب الرابامايسين 1 (mTORC1)   ؛
طقم miRNeasy Mini تيانغن (الصين)#217004استخراج الحمض النووي الريبي (miRNA)
مرهم حروق رطب مكشوفميبو (شانتو ، الصين)#2403103Bمرهم لعلاج الجروح المزمنة
MonAmp SYBR Green qPCR Mix (بدون ROX) موناد (الصين)#MQ10101Sطقم qPCR (mRNA)
مزيج MonScript RTIII All-in-One مع dsDNase موناد (الصين)#MR05101Sطقم النسخ العكسي (mRNA)
نظام قياس التدفق الخلوي النانويN30E (الصين)معدات لتحليل حجم وتركيز الإكسوسومات
المجهر البصريأوليمبوس (طوكيو، اليابان)مراقبة أمراض الأنسجة
محلول ملحي فسيولوجيكيلون (سيتشوان ، الصين)#L24041709محلول ملحي فسيولوجي
أغشية فلورايد البولي فينيلدينميليبور (الولايات المتحدة الأمريكية)#IPVH00010غشاء النشاف الغربي
الاشعالشركة Generay Biotech Co.، Ltd. (شنغهاي ، الصين)
الجسم المضاد Rab27aتقنية إشارات الخلية#69295الأجسام المضادة الأولية
طقم تخليق (كدنا) RevertAid First Strandثيرمو فيشر (الولايات المتحدة الأمريكية)#K1622طقم النسخ العكسي (miRNA)
مخزن تحلل RIPASolarbio (بكين ، الصين)#R0010استخراج البروتين الكلي
كبريتات دوديسيل الصوديوم &ndash ؛ بولي أكريلاميد   ؛Epizyme (الصين)#PG222عازلة الرحلان الكهربائي
بنتوباربيتال الصوديومميرك (شنغهاي ، الصين)#P3761مخدر
فئران محددة خالية من مسببات الأمراض C57BL / 6شركة Guangdong Vital River Laboratory Animal Technology Co. ، Ltd (قوانغدونغ ، الصين)التجارب
SPSShttps://www.ibm.com/spssالتحليل الإحصائي
الستربتوزوتوسينSolarbio (بكين ، الصين)#S8050نموذج الفأر المصاب بالسكري   ؛
SYBR الأخضر qPCR ماستر ميكس  روش (سويسرا)# 4943914001-ريالطقم qPCR (miRNA)
المجهر الإلكتروني الناقلهيتاشي (اليابان)إتش تي-7700معدات لتحديد مورفولوجيا الإكسوسومات
تريزول  Invitrogen (الولايات المتحدة الأمريكية)#15596026CNاستخراج الحمض النووي الريبي (mRNA)
الجسم المضاد TSG101أبكام# AB125011الأجسام المضادة الأولية
الجسم المضاد Vps4aأبكام# AB197896الأجسام المضادة الأولية

المراجع

  1. Zhi, Q., et al. The effectiveness of cell-derived exosome therapy for diabetic wound: A systematic review and meta-analysis. Ageing Res Rev. 85, 101858(2023).
  2. David, S., Vikrant, R., Sarah, M., Kira, C., Devendra, K. A. Impact of resolvin mediators in the immunopathology of diabetes and wound healing. Expert Rev Clin Immunol. 17 (6), 681-690 (2021).
  3. Holly, N. W., Matthew, J. H. Wound healing: cellular mechanisms and pathological outcomes. Open Biol. 10 (9), 200223(2020).
  4. Vikrant, R., Rebecca, M., Devendra, K. A. Stem Cells and Angiogenesis: Implications and Limitations in Enhancing Chronic Diabetic Foot Ulcer Healing. Cells. 11 (15), 2287(2022).
  5. Nour, S., Imani, R., Chaudhry, G. R., Sharifi, A. M. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
  6. Shirin, N., Rana, I., Chaudhry, G. R., Ali, M. S. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
  7. Ruo, L., et al. Exosome-cargoed microRNAs: Potential therapeutic molecules for diabetic wound healing. Drug discovery today. 27 (10), 103323(2022).
  8. Li, Q., et al. MiR146a-loaded engineered exosomes released from silk fibroin patch promote diabetic wound healing by targeting IRAK1. Signal transduction and targeted therapy. 8 (1), 62(2023).
  9. Yang, A., et al. Exosomes from adipose-derived stem cells and application to skin wound healing. Cell Prolif. 54 (3), 119(2021).
  10. Fang, W., Yan, L. The emerging roles of exosome-derived noncoding RNAs in the tumor immune microenvironment and their future applications. Biomed Pharmacother. 156, 113863(2022).
  11. Phyllis, I. H., Anil, C. Multivesicular body morphogenesis. Annu Rev Cell Dev Biol. 28, 337-362 (2012).
  12. Matias, O., et al. Rab27a and Rab27b control different steps of the exosome secretion pathway. Nat Cell Biol. 12 (1), 1-13 (2009).
  13. Christophe, C., Sourav, M., Nolwenn, M., Wouter, H. R., Winfried, W. The role of VPS4 in ESCRT-III polymer remodeling. Biochem Soc Trans. 47 (1), 441-448 (2019).
  14. Hao, L., Rui, Z., Wen, W., Li, L. miR-4454 Promotes Hepatic Carcinoma Progression by Targeting Vps4A and Rab27A. Oxid Med Cell Longev. 2021, 9230435(2021).
  15. Mostafa, J., et al. Identification of the first structurally validated covalent ligands of the small GTPase RAB27A. RSC Med Chem. 13 (2), 150-155 (2022).
  16. Wen, Z., et al. Exosome Release Is Regulated by mTORC1. Adv Sci (Weinh). 6 (3), 1801313(2019).
  17. Ji, Z., et al. Administration of follicle-stimulating hormone induces autophagy via upregulation of HIF-1α in mouse granulosa cells. Cell Death Dis. 8 (8), e3001(2017).
  18. Tânia, S. M., José, C., Ilka, M. R., Odete, A. S. Henriques Ana Gabriela. Exosome isolation from distinct biofluids using precipitation and column-based approaches. PLoS One. 13 (6), e0198820(2018).
  19. Yuan, Z., Yun, L., Hai, L., Wai, T. Exosomes: biogenesis, biologic function and clinical potential. Cell Biosci. 9, 19(2019).
  20. Kehinde, R. MiR equal than others: MicroRNA enhancement for cutaneous wound healing. J Cell Physiol. 236 (12), 8050-8059 (2021).
  21. Lei, Z., et al. Exosomes from microRNA-126 overexpressing mesenchymal stem cells promote angiogenesis by targeting the PIK3R2-mediated PI3K/Akt signalling pathway. J Cell Mol Med. 25 (4), 2148-2162 (2020).
  22. Cheng, Y., et al. Milk exosomes-mediated miR-31-5p delivery accelerates diabetic wound healing through promoting angiogenesis. Drug Deliv. 29 (1), 214-228 (2022).
  23. Yuan, G., Yan, J., Jin, H., Zuo, H., Qian, T. Moist exposed burn ointment accelerates diabetes-related wound healing by promoting re-epithelialization. Front Med (Lausanne). 9, 1042015(2023).
  24. Ming, S., et al. Combined application of moist exposed burn ointment and maggot therapy in wound healing. J Wound Care. 31 (Sup10), S41-S52 (2022).
  25. Qian, T., et al. Moist exposed burn ointment promotes cutaneous excisional wound healing in rats involving VEGF and bFGF. Mol Med Rep. 9 (4), 1277-1282 (2014).
  26. Xiao, Q., et al. Role of Hydrogen Sulfide in the Development of Colonic Hypomotility in a Diabetic Mouse Model Induced by Streptozocin. J Pharmacol Exp Ther. 384 (2), 287-295 (2022).
  27. Jia, Z., et al. Hydrogel plus growth factors treatment after 2940nm erbium:YAG lattice laser improves periorbital wrinkles and wound healing: a case report. J Int Med Re.s. 49 (9), 3000605211042506(2021).
  28. Hina, K., et al. Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma. Proteomics. 13 (22), 3354-3364 (2013).
  29. Yi, H., et al. Exosomes derived from pioglitazone-pretreated MSCs accelerate diabetic wound healing through enhancing angiogenesis. J Nanobiotechnology. 19 (1), 150(2021).
  30. Ai, Z., et al. Effects of Moist Exposed Burn Therapy and Ointment (MEBT/MEBO) on the autophagy mTOR signalling pathway in diabetic ulcer wounds. Pharm Biol. 58 (1), 124-130 (2020).
  31. Nina, D., et al. Updates in Diabetic Wound Healing, Inflammation, and Scarring. Semin Plast Surg. 35 (3), 153-158 (2021).
  32. Dimitrios, B., Ioanna, E., Aristidis, V. Pathogenesis and treatment of impaired wound healing in diabetes mellitus: new insights. Adv Ther. 31 (8), 817-836 (2014).
  33. Heng, G., et al. Metal-polyphenol nanocomposite hybrid hydrogel: A multifunctional platform for treating diabetic foot ulcers through metabolic microenvironment reprogramming. Biomaterials. 322, 123414(2025).
  34. Elof, E., et al. Chronic wounds: Treatment consensus. Wound Repair Regen. 30 (2), 156-171 (2022).
  35. Elena, T., Andreas, B., Hannes, R., Andreas, R., Stefan, R. B. Current aspects in the pathophysiology and treatment of chronic wounds in diabetes mellitus. Biomed Res Int. 2013, 385641(2013).
  36. Jamie, L. B., Wyant, W. A., Beatriz, A. A., Robert, S. K., Ivan, J. Diabetic Wound-Healing Science. Medicina (Kaunas). 57 (10), 1072(2021).
  37. Xin, Z., Yan, G., Kun, Y., Peng, L., Jun, W. The signaling pathways of traditional Chinese medicine in promoting diabetic wound healing. J Ethnopharmacol. 282, 114662(2021).
  38. Vilelmine, J. C., Evangelia, G. T., Georgia, C. S., Fotini, N. A., John, D. I. Comparing oil based ointment versus standard practice for the treatment of moderate burns in Greece: a trial based cost effectiveness evaluation. BMC Complement Altern Med. 11, 122(2011).
  39. Hong, Z., Qing, S., Lei, Y., Jia, C. Clinical Study of MEBO Combined with Jinhuang Powder for Diabetic Foot with Infection. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5531988(2021).
  40. Ya, T., Xiao, L., Lei, J. Simultaneous Determination of 12 Components in Moist Exposed Burn Ointment by HPLC. China Pharm. 31 (16), 73-77 (2022).
  41. Wei, L., Yu, M., Qi, Y., Yu, P., Qing, M. Moist exposed burn ointment for treating pressure ulcers: A multicenter randomized controlled trial. Medicine (Baltimore). 96 (29), e7582(2017).
  42. Qing, H., et al. Vps4A mediates the localization and exosome release of β-catenin to inhibit epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma. Cancer Lett. 457, 47-59 (2019).
  43. Zhi, W., et al. Extracellular vesicles in fatty liver promote a metastatic tumor microenvironment. Cell Metab. 35 (7), 1209-1226 (2023).
  44. Sathish, M., Asawari, B., Rashmi, J., Naveen, J., Madhan, J. Exosomal therapy-a new frontier in regenerative medicine. Stem Cell Investig. 8, 7(2021).
  45. Sonam, G., Dany, P., Loukia, T. o, Julien, B. The exosome journey: from biogenesis to uptake and intracellular signalling. Cell Commun Signal. 19 (1), 47(2021).
  46. Roi, I., Felipe, C. R., Wei, Y., Jerrold, M. O. Exosomes as mediators of intercellular crosstalk in metabolism. Cell Metab. 33 (9), 1744-1762 (2021).
  47. Xiao, Z., et al. The function and clinical application of extracellular vesicles in innate immune regulation. Cell Mol Immunol. 17 (4), 323-334 (2020).
  48. Li, C., Shu, S., Song, W. LncRNA SNHG16 Knockdown Promotes Diabetic Foot Ulcer Wound Healing via Sponging MiR-31-5p. Tohoku J Exp Med. 261 (4), 283-289 (2023).
  49. Ai, S., Ning, S., Xiao, L., Zhen, H. Circ-FBXW12 aggravates the development of diabetic nephropathy by binding to miR-31-5p to induce LIN28B. Diabetol Metab Syndr. 13 (1), 141(2021).
  50. Wei, X., Ya, L., Ying, Z., Zhi, Y. Identification of miRNA-mRNA Regulatory Networks Associated with Diabetic Retinopathy using Bioinformatics Analysis. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets. 23 (13), 1628-1636 (2023).
  51. Fei, W., et al. MicroRNA-31 Can Positively Regulate the Proliferation, Differentiation and Migration of Keratinocytes. Biomed Hub. 5 (2), 93-104 (2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Rab27a
الفيديو قريباً

مقالات ذات صلة