يصف هذا البروتوكول إجراء البقاء على قيد الحياة لاستئصال الغدة اللمفاوية الكلوية الثنائية الثنائية الآمن والمحتمل.
مقالة منهجية
استئصال الوراثة الثنائية الثنائية للشدة الكلوية في الفأر
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الأمراض المناعية الذاتية هي نتيجة استهداف الخلايا المناعية للأنسجة الذاتية بشكل غير مناسب، مما يؤدي إلى أمراض وتلف للأعضاء الحيوية. تعمل الأعضاء اللمفاوية الثانوية كموقع لتنشيط خلايا B وT وتحمل المناعة المحيطية، نتيجة لتصريف المستضد وانتقال الخلايا المقدمة للمستضد (APC) عبر اللمفاوات المحلية. تم وصف دور العقد اللمفاوية الموضعية المصابة كموقع أولي لتنشيط الخلايا اللمفاوية في حالات الأورام والعدوى وأمراض المناعة الذاتية الخاصة بالأعضاء، ولكن ليس في مناعة ذاتية جهازية. الذئبة الحمراء الجهازية، وهو أحد هذه الأمراض، هو مرض مناعي ذاتي واسع الانتشار مع تورط الكلى الشائع الذي يؤدي إلى إصابة الكلى والفشل في النهاية. الفهم الإضافي لدور العقد اللمفاوية الكلوية، التي تعد الموقع الأساسي لتصريف المستضدات وانتقال APC من الكلى، محدود بعدم القدرة على إزعاج هذه النسيج بشكل انتقائي. وصف هنا إجراء بقاء لاستئصال الوغدة الليمفاوية الكلوية الثنائية الآمنة والمحتملة جيدا في الفأر. تتضمن التعليمات التفصيلية، والمساعدات البصرية، ونصائح مفيدة لتحسين النجاح، وحل المشكلات الإجرائية. البقاء على المدى الطويل ممتاز وقد لوحظ لمدة لا تقل عن 4 أشهر بعد العملية. العقد اللمفاوية الكلوية المقطوعة سليمة وجاهزة فورا للمعالجة اللاحقة. هذا الإجراء مناسب بشكل أفضل لدراسات التأثير الموضعي للعقد اللمفاوية الكلوية.
المقدمة
تمتد أمراض المناعة الذاتية على جميع أعضاء الجسم من الأمراض التي تقيد الأعضاء نسبيا مثل التهاب الكبد المناعي الذاتي، والتهاب العنبية، والسكري من النوع الأول إلى أمراض واسعة مثل التصلب الجهازي ومرض شوغرن 1,2,3,4,5. يعد التحمل المناعي مرحلة حاسمة في تطور خلايا B وT لمنع التفاعل الذاتي6. بينما التحمل المركزي عبر الحذف النسيلي في الغدة الزعترية ضروري وفعال، إلا أن هذا وحده يترك فجوات في الدفاع ضد المناعة الذاتية 7,8. تحمل الأطراف هو حاجز ثانوي أمام التفاعل الذاتي عبر طاقة الخلايا البائية والتائية أو حذفها أو إرهاق الخلايا التائية، والذي يحدث في الأعضاء اللمفاوية الثانوية، بما في ذلك العقد اللمفاوية التي تصفي الأنسجة الإقليمية بعد تصريف المستضدات 9,10. ومع ذلك، أصبح من الواضح بشكل متزايد أن الخلايا التفاعلية الذاتية قد تقيم داخل هذه العقد اللمفاوية وتهاجر منها لدى أفراد معرضين للوراثة و/أو البيئة بعد التنشيط غير المناسب11,12.
الذئبة الحمراء الجهازية هي أحد هذه الأمراض المناعية الذاتية، حيث تتورط خلايا B وT الواضحة في عدة أعضاء13. ومن مظاهر ذلك الشائعة والمرضية التهاب الكلى الذئبة وتطورالمرض الكلوي في المرحلة النهائية. القدرة على فهم التأثير المباشر لخلايا B وT المقيمة محليا في أمراض الكلى المدفوعة بالمناعة الذاتية، على عكس الفيزيولوجيا المرضية الجهازية المنتشرة، محدودة حاليا بسبب عدم القدرة على التحريك الانتقائي لهذه العقد. مع وضع هذه الفجوة في الاعتبار، تم تطوير إجراء بقاء لاستئصال الغدة الليmphawardenectoly الثنائية في الفئران ويوصف هنا.
الهدف العام من هذا البروتوكول هو تحقيق استئصال آمن وموثوق للعقد اللمفاوية الثنائية في الفئران ذات معدل بقاء عالي وتحمل بعد العملية. سيكون هذا الإجراء مناسبا بشكل أفضل لدراسات التأثير الموضعي للعقد اللمفاوية الكلوية على تنشيط وتنشيط وتحمل الخلايا المناعية المرتبطة بأمراض الكلى. هذا الإجراء مثالي عند دمجه مع نماذج مناعية ذاتية أو أورامية تؤثر على الكلى.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تجرى جميع الإجراءات وفقا لبروتوكولات لجنة رعاية واستخدام في مؤسسة ييل. لتطوير هذا الإجراء تم استخدام سلالة Balb/c التي تتراوح عمرها بين 8-12 أسبوعا، والفئران المعرضة للذئبة (MRL/MpJ-Faslpr/J/J)، ومجموعة تحكم وهمية مطابقة للعمر/جنس/النمطالجيني 15. بالإضافة إلى ذلك، تم اختبار فئران النوع البري C57BL/6 التي تبلغ من العمر 8-12 أسبوعا، وتم استئصال العقد بأمان. تم تضمين كل من الفئران الذكور والإناث. المواد المستخدمة والمواد المستخدمة مدرجة في جدول المواد.
1. تحضير الأدوات وغرفة العمليات
- قم بتعقيم جميع الأدوات الجراحية. تأكد من تنظيف سطح التشغيل ومخروط أنف المخدر بنسبة 70٪ إيثانول.
- قم بتركيب المجهر الجراحي، لضمان راحة راحة الجراح الجراحي.
- قم بإعداد جهاز تبخير مخدر استنشاق مع مخروط أنف وشفط لإزالة التخدير الزائد. قم بإعداد سطح تشغيل مع وسادة مياه دافئة للحفاظ على درجة حرارة جسم والإمدادات في مكان مناسب ومعقم.
- تحفز التخدير عن طريق إعطاء إيزوفلوران مستنشق بنسبة 2٪-3٪ بمعدل تدفق أكسجين 2 لتر/دقيقة عبر مخروط الأنف من جهاز تبخير مخدر مستنشق (وفقا لبروتوكولات معتمدة مؤسسيا).
- تأكد من مستوى التخدير المناسب من خلال تأكيد معدل تنفس يقارب 30-40 نفسا/دقيقة وعدم الاستجابة لضغط القدم الخلفية. أعد فحص المستوى المناسب من التخدير بشكل دوري وعدل معدل تدفق الأيزوفلوران وفقا لذلك.
ملاحظة: بدلا من ذلك، المخدر القابل للحقن مناسب أيضا.
- تأكد من مستوى التخدير المناسب من خلال تأكيد معدل تنفس يقارب 30-40 نفسا/دقيقة وعدم الاستجابة لضغط القدم الخلفية. أعد فحص المستوى المناسب من التخدير بشكل دوري وعدل معدل تدفق الأيزوفلوران وفقا لذلك.
- اتبع إرشادات المعهد للحصول على المسكنات المناسبة والتخدير الموضعي. على سبيل المثال، يمكن إعطاء مسكن طويل المفعول مثل 3.25 ملغ/كجم بوبرينورفين XR تحت الجلد وإعطاء حتى 0.04 مل/5 جرام من وزن الجسم من محلول ليدوكائين تحت الجلد في مواقع الشقوق المخططة.
- جهز للإجراء بوضع مزلق للعين، ونزع أو قص الفرو من الجانبين، وتعقيم الظهر بمحلول بوفودين/يود، ثم 70٪ إيثانول، ووضع الجانب الأيمن الديكوبيتوس (الجانب الأيمن للأسفل).
- استخدم الشريط اللاصق لتثبيت ذراع اليسرى بشكل أعلى والذيل بشكل سفلي لخلق وضعية مسترخية ولكن ممدودة (الشكل 1A). هذا يؤدي إلى إزاحة الكلى بشكل أسفلي، مما يؤدي إلى تحسين الرؤية والتعرض.
- ارتد قفازات معقمة ووضع ستائر معقمة فوق مع نافذة إلى مجال العملية. حافظ على العقم طوال العملية.
- اختياري: حقن 10-20 ميكرولتر من Evans Blue المعقم والمصفى بنسبة 5٪ في محلول ملحي مخبأ بالفوسفات في وسادات القدم الخلفية الثنائية قبل وضع لتحسين تحديد العقد اللمفاوية الكلوية عبر التصريف على طول المسار اللمفاوي الحرقفي16 (الشكل 1D-G).
ملاحظة: احذر من أن هذه الصبغة قد تتداخل مع الصبغات وتحليلات التدفق الخلوي. بالإضافة إلى ذلك، مع مرور الوقت، سيتسلل إيفانز بلو أيضا إلى الخزان الكهربائي، انظر "استكشاف الأخطاء" للحصول على نصائح (الجدول 1).
- اختياري: حقن 10-20 ميكرولتر من Evans Blue المعقم والمصفى بنسبة 5٪ في محلول ملحي مخبأ بالفوسفات في وسادات القدم الخلفية الثنائية قبل وضع لتحسين تحديد العقد اللمفاوية الكلوية عبر التصريف على طول المسار اللمفاوي الحرقفي16 (الشكل 1D-G).
الشكل 1: تحديد المواقع التشريحية للفأر والأعضاء وحقن إيفانز بلو الاختياري. (أ) تحديد موقع وتأمين للتعرض للكلى اليسرى. (ب) التوجيه التشريحي داخل نوافذ العمليات. يمكن العثور على سلسلة العقد اللمفاوية الكلوية اليسرى بجوار الأوعية الكظرية والأبهر الأورطي، أعلى الأوعية الكلوية. يمكن العثور على العقدة اللمفاوية الكلوية اليمنى أعلى الأوعية الكلوية مباشرة. (ج) تحديد موضع وتأمين للتعرض للكلى اليمنى. (د-جي) تنفيذ حقن إيفانز الأزرق بنسبة 5٪ بسعة 20 ميكرولتر. (د) سلسلة العقد اللمفاوية الكلوية اليسرى (السهم الأبيض) قبل الصبغة. لاحظ الموقع العام للصندوق المتقطع (cisterna chyli)، والذي غالبا ما يكون شفافا و/أو يصعب التعرف عليه إلا إذا كان ممتلئا ومغطى بالجهاز اللمفاوي. (ه) القدم الخلفية اليسرى وسلسلة العقد اللمفاوية الكلوية اليسرى (السهم الأبيض) بعد 5 دقائق من حقن الصبغة. لاحظ الأوعية اللمفاوية الواردة (السهم الأسود). (F) القدم الخلفية اليمنى والعقدة اللمفاوية الكلوية اليمنى (السهم الأبيض) قبل الصبغة. ج) القدم الخلفية اليمنى والعقدة اللمفاوية الكلوية اليمنى (السهم الأبيض) بعد 5 دقائق من حقن الصبغة. لاحظ الأوعية اللمفاوية الواردة (سهام سوداء). أشرطة السلالم: A,C = 1.0 سم; D-G (منظر القدم الخلفية) = 0.5 سم؛ D-G (المشاهد الداخلية) = 0.1 سم. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
2. استئصال الغدة اللمفاوية الكلوية اليسرى
- قم بعمل شق مائل بطول 1 سم عبر الجلد أسفل الطحال (حوالي 1 سم أقل من الضلع النهائي). قم بتشريح الجلد بشكل واضح بعيدا عن جدار البطن/الصدر وتحديد الطحال داخل البطن.
- قم بعمل شق بقطر 1 سم عبر عضلات جدار البطن أسفل الطحال للوصول إلى التجويف الصفاقي (الشكل 2A,B).
ملاحظة: في الفئران ذات الجلد غير المصبوغ، يكون الطحال مرئيا بسهولة من خلال الجلد الجاهز كعضو داكن متحرك يقع جانبيا في البطن وأقل قليلا من الضلع النهائي.
- قم بعمل شق بقطر 1 سم عبر عضلات جدار البطن أسفل الطحال للوصول إلى التجويف الصفاقي (الشكل 2A,B).
- حدد الكلية اليسرى كعضو أملس على طول الجدار الخلفي للبطن وأسفل الطحال. تقع الكلى والعقد اللمفاوية الكلوية المرتبطة بها في الخلف الصفاقي. باستخدام ملقطين مائلين، قم بتشريح الجزء الخلفي من الكلية اليسرى بشكل حاد للوصول إلى الخلفية البريتونية (الشكل 2C).
ملاحظة: تتضمن تقنية التشريح الخشن الصحيح والآمن تطبيق ضغط بسيط باستخدام ملقط مغلق في مستوى النسيج المطلوب والسماح للأداة بالفتح بلطف، مما يؤدي إلى تفرق مستويات الأنسجة. - تعكس الكلية اليسرى من الأمام الوسطية.
- باستخدام المجهر التشريحي، حدد وسادة الدهون التي تغطي العقدة اللمفاوية الكلوية اليسرى، والتي ستكون خلف الكلية اليسرى وأعلى الأوعية الكلوية اليسرى. حدد وتجنب الغدة الكظرية من الأعلى، والشريان الأبهر الخلفي، والشراعي الكهيري في الجهة الأمامية الوسطى (الشكل 1B,D).
- باستخدام ملقط ذو طرف دقيق، قم بتشريح خفيف حول كبسولة العقدة اللمفاوية (فصلها عن الأوعية المحيطة)، مع تطبيق شد معاكس لطيف باستخدام ملقط مائل (الشكل 2E). يمكن أيضا استخدام مقص دقيق لتشريح هذا المستوى بشكل حاد.
- باستخدام ملقط مستقيم ذو أطراف دقيقة، قم بسحب رأس العقدة اللمفاوية اليسرى مع استخدام مقص دقيق لقطع حاد وصلات العقدة اللمفاوية الخلفية. احرص على عدم إزعاج الأوعية الدموية القريبة وقناة الصدر (الشكل 2F).
- راقب المنطقة للكشف عن التواء الدموي (الشكل 2G).
- أعد الكلية إلى موقعها التشريحي وأغلق البطن في طبقتين (جدار البطن والجلد) بخيط بولي بروبيلين أحادي الخيط 6-0 بطريقة متسلسلة. ضع غراء جراحي معقم على الجرح.
الشكل 2: استئصال اللمفاوية الكلوية اليسرى. (أ) الشق المائل الأيسر في أسفل وخلف ظل الطحال. (ب) تحديد الطحال من الأعلى (خط أبيض)، والغدة الكظرية اليسرى خلفيا (سهم أسود)، والكلية اليسرى من الأسفل (خط أسود). (ج) يتم إنشاء مستوى إلى خلف الصفاق عن طريق التشريح القوي مباشرة خلف الكلى (السهم الأسود). (د) العقدة اللمفاوية الكلوية اليسرى (الأسهم البيضاء) مرئية فورا داخل غمد الدهون. (ه) يتم إنشاء مستوى بين السفن القريبة والعقدة (الأسهم البيضاء). (و) يتم سحب العقدة بلطف واستئصالها بشكل حاد على طول المستوى المكون. (G) تم تأكيد النزيف الدموي، ويلاحظ أن الفراغ (الأسهم الباهتة من (D)) حيث كانت العقدة اللمفاوية (السهم الأبيض) عاش سابقا خال من أي عقدة لمفاوية متبقية. (ح) غالبا ما تكون العقدة اللمفاوية اليسرى سلسلة من عدة عقد (سهام بيضاء). الإدخال هو سلسلة من العقد اللمفاوية اليسرى خارج الجسم الحي (1 مم × 3.5 مم). قضبان الميزان: 0.2 سم. العلامة = 1 مم. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
3. استئصال الغدة الليمفاوية للكلوية اليمنى
- أعد وضع في الجانب الأيسر (الجانب الأيسر للأسفل). مرة أخرى، استخدم الشريط اللاصق لتثبيت ذراع اليمنى للأعلى والذيل بشكل سفلي لخلق وضعية مسترخية لكنها ممدودة. وهذا مهم بشكل خاص على اليمين، حيث يمكن للكبد أن يتسبب في تعطيل التعرض (الشكل 1C).
- قم بعمل شق مائل بقطر 1 سم عبر الجلد يكون أقل قليلا من الضلع النهائي (وهو أعلى قليلا من الجانب الأيسر). قم بشق الجلد بشكل غير مباشر بعيدا عن جدار البطن/الصدر وعمل شق بعمق 1 سم عبر عضلات جدار البطن للوصول إلى تجويف الصفاق (الشكل 3A).
- حدد الكلية اليمنى كعضو أملس على طول الجدار الخلفي للبطن وأسفل الكبد. قد يحتاج المرء إلى استخدام مسحة ذات رأس قطني لسحب الرأس الكبدي. باستخدام ملقطين مائلين، قم بتقشير الجزء الخلفي من الكلية اليمنى بشكل حاد للوصول إلى الخلفية البريتونية (الشكل 3B,C).
- تعكس الكلية اليمنى من الأمام الوسطية.
- باستخدام المجهر التشريحي، حدد وسادة الدهون التي تغطي العقدة اللمفاوية الكلوية اليمنى، والتي ستكون خلف الكلية اليمنى وأعلى الأوعية الكلوية اليمنى. حدد الغدة الكظرية وتجنبها بشكل أعلى (الشكل 1B,D).
- باستخدام ملقط رفيع الأطراف أو مقص دقيق، قم بتشريح حول كبسولة العقدة اللمفاوية بشكل غير مباشر (فصلا إياها عن الأوعية المحيطة)، مع تطبيق تشابك معاكس لطيف باستخدام ملقط مائل (الشكل 3E).
- باستخدام ملقط مستقيم ذو طرف دقيق، قم بسحب رأس العقدة اللمفاوية الكلوية اليمنى مع استخدام مقص دقيق لقطع الوصلات الخلفية للعقدة اللمفاوية بشكل حاد (الشكل 3F). احرص على عدم إزعاج الأوعية الدموية الكلوية، التي تقع في أسفل العقدة اللمفاوية.
- راقب المنطقة للكشف عن التواء الدموي (الشكل 3G).
ملاحظة: بشكل عام، يلاحظ أن العقدة اللمفاوية الكلوية اليمنى تحتوي على وعاء دموي أكبر يخرج من الخلف، وهو أكثر عرضة للنزيف عند استرجاع العقدة اللمفاوية بنجاح. يمكن التحكم في النزيف من هذا الوعاء بضغط لطيف باستخدام مسحة ذات رأس قطني حتى يتم التوفيق الدموي. - أعد الكلية إلى موقعها التشريحي وأغلق البطن في طبقتين (جدار البطن والجلد) بخيط بولي بروبيلين أحادي الخيط 6-0 بطريقة متسلسلة. ضع غراء جراحي معقم على الجرح.
الشكل 3: استئصال الوظمة اللمفاوية الكلوية اليمنى. (أ) شق مائل أيمن في الأسفل والخلفي للضلع النهائي. (ب) يتم تحديد حافة الكبد عليا (الخط الأبيض) والكلية اليسرى في الأسفل (الخط الأسود). الغدة الكظرية اليمنى مخفية بحافة الكبد. (ج) يتم إنشاء مستوى إلى خلف الصفاق عن طريق التشريح القوي مباشرة خلف الكلى (السهم الأسود). (د) العقدة اللمفاوية الكلوية اليمنى (الأسهم البيضاء) مرئية فورا داخل غمد من الدهون. (ه) يتم إنشاء مستوى حول العقدة (سهم أبيض). (و) يتم سحب العقدة بلطف واستئصالها بشكل حاد على طول المستوى المكون. (G) تم تأكيد النزيف الدموي، ويلاحظ أن الفراغ (الأسهم الباهتة من (D)) حيث كانت العقدة اللمفاوية (السهم الأبيض) عاش سابقا خال من أي عقدة لمفاوية متبقية. (H) العقدة اللمفاوية اليمنى هي عقدة كروية واحدة (سهم أبيض). الداخل هو عقدة لمفاوية خارج الجسم الحي (2 مم × 1.5 مم). قضبان الميزان: 0.2 سم. العلامة = 1 مم. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
4. الرعاية بعد العملية
- نقل إلى قفص نظيف، وهو نصفه على ونصف خارج منصة مياه دافئة مع إمكانية الوصول إلى الطعام والماء بحكم الرغبة.
- دع يتعافى من التخدير (~10-15 دقيقة) وراقب عن كثب بحثا عن علامات الضيق. إذا لم تتعافى بسرعة من التخدير باستخدام السلوكيات المناسبة (مثل زيادة معدل التنفس، التصحيح الذاتي، التجول، التجميل)، قم بإعدام بشكل إنساني (وفقا لبروتوكولات معتمدة من المؤسسات).
- عندما تتعافى جميع من التخدير، أعد الأقفاص إلى منشأة رعاية مع إمكانية الوصول إلى الماء والطعام والفراش ومواد الإثراء بحكم الاختيار.
- قيم الفئران بعد العملية كل 12 ساعة لمدة 3 أيام بحثا عن علامات الألم أو الضيق (مثل انحناء الوضعية، انخفاض النشاط، انخفاض التفاعل، سوء العناية). قم بقتل الفئران التي تظهر عليها علامات الضيق بشكل إنساني.
- إذا كنت تستخدم خياطة دائمة (مثل 6-0 مونوفلامنت بولي بروبيلين)، افحص الشقوق في اليوم العاشر بعد العملية وقم بإزالة أي مواد خياطة متبقية.
5. التعامل مع العقد اللمفاوية
ملاحظة: العقدة اللمفاوية المستخرجة جاهزة فورا لدخول خطوط الأنابيب لتطبيقات لاحقة.
- عند تعلم هذا الإجراء لأول مرة، تأكد من استئصال العقد اللمفاوية عبر علم الأنسجة أو قياس تدفق الخلايا باستخدام صبغات الأجسام المضادة التي تختارها.
- ضع النسيج في وسط زراعة الخلايا (مثل DMEM، RPMI) أو محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) على الثلج لتقنيات الخلايا الحية أو في التثبيت (مثل الفورمالين المحايد 10٪، والبارافورمالديهايد) لدراسة الأنسجة المخططة.
ملاحظة: طريقة سريعة، لكنها أقل دقة، لتأكيد وجود العقد اللمفاوية هي وضع العينة المستأصلة في PBS. بشكل عام، تغوص عينة من الغدد اللمفاوية في الغالب، بينما عينة من نسيج دهني في الغالب تطفو؛ ومع ذلك، يوصى بإجراء اختبارات تأكيدية إضافية عند تحسين هذا الإجراء لأول مرة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يمكن إجراء هذه العملية في 15-20 دقيقة لكل فأرة. لتأكيد دقة هذا الإجراء، أجريت استئصالات ثنائية الجانب للشدة اللمفاوية الكلوية على خمسة أطفال تتراوح أعمارهم وجنسهم واثنينهم من النمط الجيني. تحملت جميع الفئران الإجراء جيدا مع بقاء كامل خلال فترة ما قبل العملية. تم وضع العينات المستخرجة في PBS على الثلج. غرقت جميع العينات فورا، مؤكدا انخفاض نسبة الدهون. ثم تم سحق العينات المستخرجة (وأربع عناصر تحكم دهنية حشوية منفصلة) عبر مصفاة خلية بحجم 100 ميكرومتر وغسلها باستخدام PBS. تم طرد الأقراص الخل...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وصف هنا إجراء بقاء لاستئصال الوغدة الليمفاوية الكلوية الثنائية الآمنة والمحتملة جيدا في الفأر. القيد الرئيسي لهذا الإجراء هو صغر حجم العقد اللمفاوية الكلوية نسبيا، مما يتطلب استخدام مجهر تشغيلي. بدون مجهر عامل، قد يكون تحقيق الاستئصال الواثق صعبا. بعض نماذج الفئران الجينية لديها عقد لمفاوية متضخمة، مما يسهل التعرف على التعرف وتعلم التقنية17. في الفئران البرية السليمة، قد تكون العقد اللمفاوية صغيرة وصعبة التحديد. أثناء تعلم هذا الإجراء، أو في الفئران التي لديها غدد...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
R.A.F. هو مستشار لشركة غلاكسو سميث كلاين، وشركة بليثيرا، وفينتوس ثيرابيوتكس. جميع المؤلفين الآخرين يعلنون عدم وجود مصالح متنافسة.
شكر وتقدير
نشكر جي. ألدرمان، ب. كادوجان، إي. هيوز-بيكار، وج. هوروكس على المساعدة الإدارية، ولسي. هيوز لإدارة مستعمرات الفئران. H.N.B. زميل في برنامج تدريب علماء الجراح في جامعة ييل، الذي مول ودعم جزئيا هذا المشروع. وقد تم تمويل هذا العمل أيضا من معهد هوارد هيوز الطبي (لسلاح الجو الملكي) وجائزة الكلية الأمريكية للجراحين لأبحاث المقيمين (لجمعية الجراحين البريطانية).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| دائرة التخدير | أي | أو مخدر قابل للحقن | |
| مقياس تدفق BD LSRII (أو ما يعادله) | بكالوريوس العلوم الحيوية | مزود ببرنامج FACS Diva | |
| بوبرينورفين XR | أي | لتخفيف الألم | |
| وسائط زراعة الخلايا | أي | (لتقنيات الخلايا الحية؛ أي. DMEM أو RPMI) | |
| DAPI | الأسطورة الحيوية | 422801 | تركيز العمل: 15 ميكروغرام/مل |
| مصابيح LED مزدوجة أو مزدوجة بمجهر عنق الإوزة | أي | ||
| الإيثانول (70٪ في الماء) | أي | للتنظيف | |
| CD45.2 (104) مضاد الفأر المقترن ب FITC | الأسطورة الحيوية | 109806 | تركيز العمل: 5 ميكروغرام/مل |
| الملقط: ملقط ذو طرف دقيق مائل (x2) | روبوز | RS-5058 | المادة: دوموكسل; النمط #5، زاوية 45 درجة؛ حجم الرأس 0.1 × 0.06 مم |
| الملقط: ملقط ذو طرف ناعم | روبوز | RS-4960 | المادة: دوموستار؛ النمط #1؛ حجم الرأس: 0.20 × 0.12مم |
| الملقط: ملقط ذو طرف ناعم | روبوز | RS-4966 | المادة: دوموستار، نصيحة بيولوجي؛ النمط #3؛ حجم الرأس: 0.08 ×0.04 مم |
| ليدوكائين | أي | لتخفيف الألم | |
| الفئران | جاكس | بالنسبة لسلالة C57BL/6، فئران النوع البري: مختبرات جاكسون #000664 | |
| محركات الإبر | روبوز | RS-6410 | حامل إبر كاستروفييخو؛ ستريت |
| المجهر التشغيلي | لايكا | MZ9.5 | مجهر تشغيل رأس ستيريو Leica Mz9.5 |
| <إم>اختياري: صبغة إيفانز بلو | سيغما | E2129-10G | لتتبع اللمفاو. |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) | أي | ||
| محلول بوفيدون/اليود | أي | لتحضير الجلد/التعقيم | |
| المقص: مقص ذو طرف رفيع جدا | روبوز | RS-5605 | ماكفيرسون-فاناس؛ حافة قطع 3 مم؛ منحنية |
| المقص: مقص متوسط | روبوز | RS-5676 | نويس؛ حافة قطع 13 مم؛ مستقيم |
| الغراء الجراحي | أي | مثلا، لاصق الأنسجة 3M Vetbond | |
| الغرز: 6-0 بلو مونوفيلامينت بولي بروبيلين أزرق | أي | ||
| مثبت الأنسجة | أي | (للنسجة المخططة؛ أي الفورمالين المحايد المخزن 10٪ أو 4٪ بارافورمالديهايد) | |
| وسادة تسخين دائرية بالماء الدافئ | أي | ||
| الفئران | مختبرات جاكسون | بالنسبة لسلالة Balb/c، الفئران المعرضة للذئبة (MRL/MpJ-Fas-lpr/J): #000485 |
المراجع
- Amador-Patarroyo, M. J., Peñaranda, A. C., Bernal, M. T. Autoimmunity. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
- Echeverri, A. F., Tobón, G. J. Systemic autoimmune diseases. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
- García-Carrasco, M., et al. Autoimmune disorders and pathogenesis. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
- Sarmiento-Monroy, J. C., Mantilla, R. D., Rojas-Villarraga, A., Anaya, J. -M., et al. Lupus and immunological profiling. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. In: Anaya, J.-M. (2013).
- Solari, N. F., Cherñavsky, A. C., et al. Rheumatologic autoimmune syndromes. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
- Kamradt, T., Mitchison, N. A. Tolerance and autoimmunity. N Engl J Med. 344 (9), 655-664 (2001).
- Rouiz-Argüelles, A., et al. Hematologic autoimmune conditions. Autoimmunity: From bench to bedside. Anaya, J. -M. , El Rosario University Press. Colombia. (2013).
- Venanzi, E. S., Benoist, C., Mathis, D. Good riddance: Thymocyte clonal deletion prevents autoimmunity. Curr Opin Immunol. 16 (2), 197-202 (2004).
- Meng, X., et al. Immunological mechanisms of tolerance: Central, peripheral and the role of T and B cells. Asia Pac Allergy. 13 (4), 175-186 (2023).
- Swartz, M. A., Hubbell, J. A., Reddy, S. T. Lymphatic drainage function and its immunological implications: From dendritic cell homing to vaccine design. Semin Immunol. 20 (2), 147-156 (2008).
- O'Byrne, A. M., Van Baarsen, L. G. M. Lymph nodes as gatekeepers of autoimmune diseases. RMD Open. 10 (4), e004097(2024).
- Hampton, H. R., Chtanova, T. Lymphatic migration of immune cells. Front Immunol. 10, 1168(2019).
- Fortuna, G., Brennan, M. T. Systemic lupus erythematosus: Epidemiology, pathophysiology, manifestations, and management. Dent Clin North Am. 57 (4), 631-655 (2013).
- Hanly, J. G., et al. The frequency and outcome of lupus nephritis: Results from an international inception cohort study. Rheumatology. 55 (2), 252-262 (2016).
- Andrews, B. S., et al. Spontaneous murine lupus-like syndromes: Clinical and immunopathological. J Exp Med. 148, 1198-1215 (1978).
- Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. Lymph node mapping in the mouse. J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).
- Morse, H. C., et al. Abnormalities induced by the mutant gene, lpr. Patterns of disease and expression of murine leukemia viruses in SJL/J mice homozygous and heterozygous for lpr. J Exp Med. 161 (3), 602-616 (1985).
- Ayalon, G., et al. Antibody semorinemab reduces tau pathology in a transgenic mouse model and engages tau in patients with Alzheimer's disease. Sci Transl Med. 13 (593), eabb2639(2021).
- Dong, X., et al. Antigen presentation by dendritic cells in renal lymph nodes is linked to systemic and local injury to the kidney. Kidney Int. 68 (3), 1096-1108 (2005).
- Lan, H. Y., Nikolic-Paterson, D. J., Atkins, R. C. Trafficking of inflammatory macrophages from the kidney lymph nodes during experimental glomerulonephritis. Clin Exp Immunol. 92, 336-341 (1993).
- Karmali, R. J., Suami, H., Wood, C. G., Karam, J. A. Lymphatic drainage in renal cell carcinoma: Back to the basics. BJU Int. 114 (6), 806-817 (2014).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن