يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

تأثير وآلية حمض التورورسوديوكسيكوليك في صفراء الثعلب الأزرق على إصابة الكبد الحادة المرتبطة بالكحول في الفئران

738 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/68763

⸱

أكتوبر 17, 2025

 ,  , 
1School of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Medicine

في هذه المقالة

ملخص

قيمت هذه الدراسة تأثيرات الحماية الكبدية لصفراء الثعلب الأزرق على إصابة الكبد الناجمة عن الكحول في الفئران. خفضت صفراء الثعلب الأزرق ، التي تحتوي على TUDCA و UDECA و bilirubin و TCDCA ، علامات تلف الكبد وتعمل عبر مسار AGE-RAGE و AKT1 و PPARG ، مما يدل على خصائص مضادة للالتهابات ومضادة للأكسدة.

الملخص

لطالما استخدمت الصفراء الحيوانية ، مثل صفراء الدب ، في الطب التقليدي لفوائدها العلاجية. يعتقد أن صفراء الثعلب الأزرق ، على غرار صفراء الدب ، في بعض الممارسات التقليدية لامتلاك خصائص واقية من الكبد. فحصت هذه الدراسة مكونات وتأثيرات صفراء الثعلب الأزرق على إصابة الكبد المرتبطة بالكحول في الفئران. تم جمع الصفراء من 30 ثعبا أزرق ومعالجتها إلى مسحوق مجفف. تم تحليل التركيب الكيميائي لصفراء الثعلب الأزرق باستخدام كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء وكروماتوغرافيا سائلة فائقة الأداء إلى جانب قياس الطيف الكتلي رباعي الأقطاب لوقت الطيران. تم استخدام علم الأدوية الشبكي لتحديد المركبات النشطة بيولوجيا المحتملة والأهداف والمسارات المرتبطة بإصابة الكبد المرتبطة بالكحول. تم إنشاء نموذج فأر لإصابة الكبد المرتبطة بالكحول باستخدام فئران كونمينغ ، والتي تم إعطاؤها مسحوق الصفراء الثعلب الأزرق بجرعات منخفضة وعالية. تم قياس مستويات ألانين أمينوترانسفيراز في الدم ، وأسبارتات أمينوترانسفيراز ، ومستويات الكوليسترول الكلي. تم تقييم أنسجة الكبد عن طريق تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوزين ومقايسة مالونديالديهايد. تم إجراء الإرساء الجزيئي للتنبؤ بتقارب الارتباط بين المركبات النشطة والأهداف الأساسية. تم العثور على الصفراء الثعلب الأزرق لاحتوائها على حمض tauroursodeoxycholic (TUDCA) ، وحمض ursodeoxycholic ، والبيليروبين ، وحمض taurochenodeoxycholic. كشف التحليل النسيجي المرضي عن عدم وجود تشوهات كبيرة أو تأثيرات سامة في الأعضاء الرئيسية بعد تناوله عن طريق الفم لمسحوق الصفراء الثعلب الأزرق. تضمنت الأهداف الأساسية لصفراء الثعلب الأزرق بروتين AKT1 و PPARG و IGF1 و MMP9 و CASP3. أدى علاج الصفراء بالثعلب الأزرق إلى انخفاض مستويات ALT و AST والكوليسترول و MDA في نماذج الفئران لإصابات الكبد المرتبطة بالكحول. يشير علم الأدوية الشبكي والإرساء الجزيئي إلى أن التأثيرات الوقائية للكبد لصفراء الثعلب الأزرق قد تكون مرتبطة بمستقبل المنتج النهائي المتقدم للجليكيشن لمسار إشارات المنتج النهائي المتقدم. بشكل عام ، تستهدف صفراء الثعلب الأزرق ، بمحتواها من TUDCA المشابه لتلك الموجودة في صفراء الدب ، بروتينات مثل AKT1 و PPARG ، مما يدل على التأثيرات المحتملة المضادة للالتهابات ومضادات الأكسدة في إدارة إصابات الكبد المرتبطة بالكحول.

المقدمة

يشمل مرض الكبد المرتبط بالكحول (ALD) مجموعة من إصابات الكبد تتراوح من التشوهات المختبرية بدون أعراض إلى أمراض الكبد المتقدمة مع تليف الكبد ، وفي أشد أشكاله ، مرض الكبد في المرحلة النهائية الذي يهدد الحياة مصحوبا بفشل متعدد الأعضاء1. يمثل انتشار ALD ، بما في ذلك مرض الكبد الدهني المرتبط بالكحول ، شكلا خفيفا نسبيا ويمكن عكسه من ALD1. يتميز التهاب الكبد المرتبط بالكحول بالالتهاب، مع عروض سريرية تتراوح من التهاب الكبد الدهني بدون أعراض إلى التهاب الكبد الكحولي الحاد، الذي يظهر مع اليرقان الحاد ويمكن أن يتطور إلى فشل الكبد مع ارتفاع معدل الوفيات على المدى القصير1. الكحول ومستقلباته تغيير التمثيل الغذائي للدهون وتعزيز تراكم الدهون (تنكس دهني) من خلال عدة آليات, بما في ذلك تثبيط الأحماض الدهنية β أكسدة الميتوكوندريا وتحفيز تكوين الدهون2. ينظم الإيثانول التعبير عن مستقبلات الترانسفيرين 1 ، وبالتالي زيادة امتصاص الحديد الكبدي2. يمكن أن يصيب كل من الكحول والأسيتالديهيد خلايا الكبد بشكل مباشر ، مما يؤدي إلى زيادة الإجهاد التأكسدي ، وتثبيط تجديد s-adenosylmethionine ، وإطلاق الأنماط الجزيئية المرتبطة بالتلف (DAMPS) ، والتعرض للسموم الداخلية البكتيرية في الدورة الدموية البابية ، وتكوين مقربات البروتين2. لا تزال إدارة ALD صعبة بسبب العديد من المسارات المسببة للأمراض التي ينطوي عليها3. تشمل الاستراتيجيات المستقبلية قيد التحقيق البروبيوتيك التجريبي ، وعوامل النمو ، ومضادات الأكسدة ، والأجسام المضادة وحيدة النسيلة التي تستهدف العوامل المرتبطة بالالتهاب ، والتدخلات السلوكية المعززة بالتكنولوجيا. ومع ذلك، لا يزال يتعين استكشاف استراتيجيات علاجية شاملة إضافية.

تشير الأدلة الناشئة إلى أن الصفراء الحيوانية قد يكون لها إمكانات علاجية في إدارة أمراض الكبد المرتبطة بالكحول (ALD) بسبب خصائصها المضادة للالتهابات ومضادة للأكسدة4،5. تعتبر الصفراء الحيوانية مكونا مهما في الطب الصيني التقليدي (TCM)6. في الطب الصيني التقليدي ، تستخدم الصفراء الحيوانية لتقوية وظائف الكبد والمرارة وتخفيف الألم والحمى والسعال والالتهابات. وقد تم استخدامه في إدارة أمراض الكبد ، بما في ذلك تليف الكبد6. تمتلك الصفراء الحيوانية خصائص مضادة للالتهاباتومضادة للأكسدة 6 ، ويلعب الالتهاب والإجهاد التأكسدي أدوارا مركزية في التسبب في مرض ALD7. كما تم الإبلاغ عن مكملات حمض الصفراء لتحسين التنكس الدهني الكبدي8. حاليا ، تعد صفراء الدب أكثر الأدوية المشتقة من الصفراء استخداما ، حيث يوجد حمض أورسدوكسكوليك (UDCA) وحمض التوروكوليك (TUDCA) كمكونات نشطة رئيسية6،9. والجدير بالذكر أن TUDCA غائبة عن صفراء الأخرى ، مثل الأغنام والأبقار والدجاج والثعابين6. أظهرت TUDCA إمكانات علاجية في علاج إصابات الكبد الحادة10. في الوقت الحاضر ، يتم الحصول على TUDCA من خلال تصريف صفراء الدب (مما يثير مخاوف تتعلق برعاية) ، أو التخليق الكيميائي (وهو أمر مكلف) ، أو التحويل الأحيائي لمسحوق مرارة الدجاج إلى ما يعادل صفراء الدب (والذي يظل غير مكافئ لصفراء الدب الأصلية) 11،12. الثعلب الأزرق (Alopex lagopus) ، المعروف أيضا باسم الثعلب القطبي الشمالي ، يربى في الأسر في المقام الأول لفراءه. الصين هي واحدة من أكبر ثلاثة مصدرين لملابس الفراء على مستوى العالم ، وعادة ما يتم التخلص من الأعضاء الداخلية للثعالب الزرقاء المحصودة13. هذا يمثل فرصة لتثمين المرارة كمورد طبي محتمل. الثعالب الزرقاء والدببة كلاهما من آكلة اللحوم ، وتشتركان في أوجه التشابه في فسيولوجيا الجهاز الهضمي والتمثيل الغذائي والنظام الغذائي ، مما يشير إلى أن تركيبتها الصفراوية وآثارها قد تكون متشابهة أيضا. ومع ذلك ، لم يتم استكشاف هذا الاحتمال بعد.

لذلك ، هدفت هذه الدراسة إلى فحص الإجراءات الدوائية والآليات الكامنة وراء صفراء الثعلب الأزرق في نماذج ALD. قد توفر النتائج طرقا بحثية جديدة لتطوير بدائل الدب الصفراوية ، وتؤسس أساسا علميا لاستخدام المرارة الثعلب الأزرق كمورد طبي ، وتحويل النفايات الصناعية إلى منتجات قيمة ، وإبلاغ التطور العلاجي في المستقبل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت مراجعة بروتوكول الدراسة والموافقة عليه من قبل لجنة أخلاقيات التجارب على بجامعة هيلونغجيانغ للطب الصيني (الموافقة # 2023021101). تم إجراء جميع التجارب على وفقا لإرشادات ARRIVE (البحوث الحيوانية: الإبلاغ عن التجارب في الجسم الحي) والمبادئ التوجيهية الوطنية والمؤسسية ذات الصلة لرعاية واستخدام المختبر. نظرا لأن هذه الدراسة تضمنت تجارب على ، فإن الموافقة المستنيرة لم تكن قابلة للتطبيق. تلتزم جميع إجراءات تربية وحصاد الفراء بشكل صارم باللوائح الفنية الصينية لإدارة تربية البرية. تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة أخلاقيات التجارب على بجامعة هيلونغجيانغ للطب الصيني ، الصين (الموافقة # 2023021101).

تحضير عينة الصفراء الثعلب الأزرق
يتم توفير مورد صفراء الثعلب الأزرق في جدول المواد. تم القتل الرحيم لما مجموعه 30 ثعبا أزرق (Vulpes lagopus) بصدمة كهربائية ، تليها حصاد الفراء وجمع المرارة. المرارة الثعلب الأزرق بيضاوية الشكل ، مع قسم علوي ضيق وقسم سفلي منتفخ. سطحه الخارجي بني غامق مع طيات مرئية ، وغشاء الكبسولة رقيق. تم شفط الصفراء على الفور باستخدام حقنة معقمة يمكن التخلص منها سعة 1 مل وظهرت لونها أسود داكن أو أخضر داكن. ثم تم تجفيف المرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة للحصول على مسحوق صفراء الثعلب الأزرق المجفف (الشكل 1). أظهر مسحوق الصفراء الناتج لونا أصفر-بني مع ملمس لامع وقابل للتفتيت. كان متوسط محصول مسحوق الصفراء المجفف لكل مرارة حوالي 0.82 ± 0.30 جم. لتحضير العينة ، تم إذابة 250 مجم من مسحوق الصفراء المجففة إما من الثعلب الأزرق (كما هو موضح أعلاه) أو الدب (انظر جدول المواد) في 1 مل من 70٪ ميثانول كروماتوغرافيا. تم صوتنة الحل بالموجات فوق الصوتية (40 كيلو هرتز ، 300 واط) ، وتم تصفيته من خلال غشاء 0.22 ميكرومتر ، وتخفيفه إلى حجم نهائي يبلغ 50 مل (أي إلى 5 مجم / مل) ، ويتم تخفيفه إلى تركيز عمل قدره 0.5 مجم / مل للتحليل اللاحق. يتم تلخيص سير العمل التجريبي العام في الشكل التكميلي 1.

في هذه الدراسة ، كان نطاق جرعة مسحوق الصفراء الثعلب الأزرق المستخدم في التجارب على 5-10 جم / كجم بناء على تقييمات السمية السابقة والدراسات الدوائية ، مع عدم ملاحظة أي آثار ضارة كبيرة عند هذه التركيزات14،15. أثناء تحضير مسحوق الصفراء ، تم تجفيف المرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة ؛ ومع ذلك ، قد يختلف وقت التجفيف اعتمادا على الرطوبة المحلية وحجم العينة ، وبالتالي يجب فحص محتوى الرطوبة لضمان الجفاف الكامل. للذوبان ، كان تركيز 5 مجم / مل في الميثانول من الدرجة الكروماتوغرافية هو الأمثل لتحليلات HPLC و UPLC-Q-TOF-MS. قد يؤثر الذوبان غير المكتمل أو بقايا الجسيمات على الدقة التحليلية ، مما يتطلب صوتنة أو ترشيح إضافي. من القيود المعروفة التباين في تكوين الصفراء بسبب الاختلافات الفسيولوجية الموسمية والغذائية والفردية بين الثعالب الزرقاء ، والتي يمكن أن تؤثر على الوفرة النسبية للمركبات النشطة مثل TUDCA و UDCA16. لذلك ، يوصى بالتحقق من صحة الدفعات عن طريق التنميط الكروماتوغرافي قبل الاستخدام الدوائي لضمان ملفات تعريف المكونات المتسقة.

التحليل الدوائي الشبكي
تم تحليل التركيب الكيميائي لصفراء الثعلب الأزرق باستخدام الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (انظر جدول المواد) والكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء إلى جانب قياس الطيف الكتلي رباعي الأقطاب لوقت الطيران (UPLC-Q-TOF-MS). تم إجراء HPLC باستخدام عمود SB-C18 (4.6 مم × 150 مم ، 5 ميكرومتر) مع طور متحرك يتكون من 0.03 M فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديوم (تم تعديل الرقم الهيدروجيني إلى 4.4 باستخدام حمض الفوسفوريك) كمرحلة A والميثانول (انظر جدول المواد) كمرحلة ب (الجدول 1). تم ضبط الطول الموجي للكشف عند 210 نانومتر ، مع معدل تدفق طور متحرك يبلغ 1.0 مل / دقيقة ، وكانت درجة حرارة العمود 40 درجة مئوية. كان حجم الحقن 10 ميكرولتر. تم إجراء تحليل UPLC-Q-TOF / MS باستخدام عمود UPLCTM HSS T3 (انظر جدول المواد). تتكون المرحلة المتحركة من محلول مائي من حمض الفورميك -0.1٪ (B ؛ انظر جدول المواد). كان برنامج شطف التدرج على النحو التالي: 0-25.0 دقيقة ، 98٪ -2٪ A ، و 25.0-28.0 دقيقة ، 2٪ -2٪ A بمعدل تدفق 4 مل / دقيقة. تم الحفاظ على درجة حرارة العمود عند 35 درجة مئوية. تم إجراء قياس الطيف الكتلي باستخدام مصدر تأين الرش الكهربائي (ESI) مع المعلمات التالية: معدل تدفق غاز المذيب 650 لتر / ساعة ، درجة حرارة غاز المذيب 350 درجة مئوية ، معدل تدفق الغاز المخروطي 50 لتر / ساعة ، درجة حرارة مصدر الأيون 120 درجة مئوية ، جهد شعري 2.8 كيلو فولت (وضع الأيون الموجب) و 2.0 كيلو فولت (وضع الأيون السالب) ، جهد مخروطي 25 فولت ، وطاقة تصادم 6 فولت. تم جمع الأطياف كل 0.2 ثانية بفاصل 0.02 ثانية. Leucine-enkephalin (انظر جدول المواد; [M + H] + = 556.2771) كمحلول معايرة مرجعي بتركيز 40 fmol / μL ومعدل تدفق 15 ميكرولتر / دقيقة17.

تحليل التركيب الكيميائي والتنبؤ بالهدف
تم تحديد المكونات النشطة لصفراء الثعلب الأزرق باستخدام HPLC و UPLC-Q-TOF / MS ، مع حمض الأوروكوليك والصوديوم tauroursooxycholate (انظر جدول المواد) كمعايير داخلية18. تم استرداد الصيغ الهيكلية للمركبات المحددة من قاعدة بيانات PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). لاستكشاف الأهداف النشطة بيولوجيا المحتملة ، تم الاستعلام عن المكونات النشطة لصفراء الثعلب الأزرق في قاعدة بيانات PharmMapper (http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/) لتحديد الأهداف الجينية المرتبطة.

باستخدام إصابة الكبد الكحولية وإصابات الكبد الناجمة عن الكحول ككلمات رئيسية ، تم الحصول على الجينات المرتبطة بالأمراض من قواعد بيانات GeneCards (https://www.genecards.org/) و OMIM (https://omim.org/). في قاعدة بيانات GeneCards ، تم فحص الأهداف وفقا لدرجة الملاءمة ، مع تحديد عتبة عند 20 ≥. يضمن هذا القطع التجريبي شائع الاستخدام توازنا بين الحساسية والخصوصية ، والاحتفاظ بمعظم الجينات ذات الصلة المحتملة (استدعاء عالي) أثناء تصفية الجينات ذات الصلة الضعيفة أو الصاخبة (دقة عالية). في المقابل ، لم يتم تطبيق أي تصفية إضافية في قاعدة بيانات OMIM ، لأنها تلتقط الأهداف ذات الأدلة الجينية القوية ، وبالتالي تكمل درجات الملاءمة الحسابية ل GeneCards. تم دمج البيانات المستهدفة التي تم الحصول عليها وتكرارها لتحديد الأهداف المتعلقة ب ALD. تمت مقارنة أهداف العنصر النشط وأهداف المرض باستخدام Venny 2.1.0 (https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html) للتصور. تم تحديد التقاطعات كأهداف محتملة لصفراء الثعلب الأزرق ضد ALD وتم استيرادها إلى قاعدة بيانات STRING (http://version10.string-db.org/). في قاعدة بيانات STRING ، تم إنشاء شبكة التفاعل باستخدام المعلمات الافتراضية (درجة ثقة متوسطة ≥ 0.4) ، وتم إخفاء العقد الحرة لتحسين وضوح التصور. تم إخفاء العقد الحرة لإنشاء مخطط شبكة تفاعل البروتين والبروتين (PPI) ، والذي تم تصوره باستخدام برنامج Cytoscape (الإصدار 3.9.1). تم إجراء التحليل الطوبولوجي لحساب قيم الدرجة ، وتم تحديد الأهداف الستة ذات أعلى قيم الدرجة باستخدام قاعدة بيانات التعليقات التوضيحية والتصور والاكتشاف المتكامل (DAVID ، https://david.ncifcrf.gov/) مع عتبة دلالة تبلغ p < 0.05. تم استخدام قاعدة بيانات موسوعة كيوتو للجينات والجينوم (KEGG) لتحليل إثراء المسار.

الإرساء الجزيئي
تم إجراء الإرساء الجزيئي لتقييم التفاعلات بين البروتينات المستهدفة الأساسية والمكونات النشطة بيولوجيا لصفراء الثعلب الأزرق. تم استرداد الهياكل ثلاثية الأبعاد للبروتينات المستهدفة الأساسية من بنك بيانات البروتين التعاوني للمعلومات الحيوية الهيكلية (RCSB) (https://www.rcsb.org/) ، وتم الحصول على هياكل مكونات الصفراء من قاعدة بيانات PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). تم إجراء محاكاة الإرساء باستخدام برنامج بيئة التشغيل الجزيئية (MOE) (الإصدار 2022.02). بالنسبة إلى AKT1 ، تم تنزيل الهيكل البلوري (معرف PDB: 4EKL) ، وشملت المعالجة المسبقة في وزارة التربية والتعليم إزالة جزيئات الماء والروابط الأصلية ، وإضافة الهيدروجين مع البروتون عند درجة الحموضة الفسيولوجية (7.0) ، وتقليل الطاقة. تم استرداد هياكل الترابط (TUDCA و UDCA و TCDCA و TCA و BILIRUBIN) من PubChem وتقليل الطاقة قبل الالتحام. أثناء عملية الإرساء ، تم إنشاء مطابقات متعددة لليجند ، وتم وضع كل شكل في جيب ربط المستقبل في اتجاهات مكانية مختلفة. تم إجراء الإرساء باستخدام بروتوكول Induced Fit ، مع London dG للموضع الأولي و Affinity dG كوظيفة تسجيل النقاط. تم إنشاء ثلاثين مطابقة لكل رابط ، وتم تحسين الأوضاع النهائية عن طريق تحسين مجال القوة. تم تعيين جميع المعلمات الأخرى على الإعدادات الافتراضية لوزارة التربية والتعليم دون مزيد من الضبط الدقيق. تم تقييم التقارب بين كل شكل ليجند والمستقبل باستخدام وظيفة تسجيل البرنامج. تم تقييم نتائج الإرساء عن طريق ربط الطاقة الحرة ، مع اختيار أكثر أشكال الطاقة السلبية في أكبر مجموعة كوضع ربط تمثيلي. تم اختيار وضع الربط مع أقوى تقارب وتشكل مثالي للتصور. تشير قيم التقارب التي تقل عن -4.25 كيلو كالوري / مول إلى ارتباط هدف الترابط ، وتشير القيم التي تقل عن -5.0 كيلو كالوري / مول إلى ارتباط معتدل ، وتشير القيم التي تقل عن -7.0 كيلو كالوري / مول إلى تقارب ربط قوي 19.

نماذج الماوس من ALD
في هذه الدراسة ، تم شراء 30 فأر كونمينغ محدد خال من مسببات الأمراض (SPF) (18-22 جم ، 6-8 أسابيع ، 15 ذكرا ، 15 أنثى). تم إيواء في ظروف خاضعة للرقابة عند 25 ± 2 درجة مئوية مع رطوبة نسبية تتراوح بين 60٪ ± 10 ٪ ، مع إمكانية الوصول إلى الغذاء والماء. قبل التجربة ، تأقلمت الفئران لمدة أسبوع واحد.

تم إنشاء نموذج ALD على النحو التالي. تم تحضير محلول إيثانول 70٪ من حجم / حجم عن طريق قياس 70.21 مل من الإيثانول اللامائي في قارورة حجمية وإضافة ماء فائق النقاء إلى الحجم النهائي البالغ 100 مل. تم تقليب المحلول باستخدام محرك مغناطيسي لمدة 1 دقيقة وسمح له بالوقوف لمدة 5 دقائق حتى لم يلاحظ أي فصل مرحلي. كانت جرعة التزقيم 2 مل / كغ من وزن الجسم ، تعطى مرة واحدة يوميا لمدة 7 أيام متتالية. في صباح اليوم 7 ، بعد 4 ساعات من التزقيم النهائي ، تم جمع عينات الدم وأنسجة الكبد لمزيد من التحليل. تم تأكيد إنشاء النموذج من خلال تقييم المؤشرات النموذجية لإصابة الكبد. تم قياس مستويات مصل ألانين أمينوترانسفيراز (ALT) وأسبارتات أمينوترانسفيراز (AST) والكوليسترول الكلي (T-CHO) ومالونديالديهايد (MDA). بالإضافة إلى ذلك ، خضعت أنسجة الكبد للفحص النسيجي المرضي باستخدام تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوزين (H & E) لتقييم مورفولوجيا خلايا الكبد ، والفجوة السيتوبلازمية ، والنخر ، وتسلل الخلايا الالتهابية. تم تقسيم الفئران بشكل عشوائي إلى خمس مجموعات (ن = 6 لكل مجموعة): تلقت المجموعة الضابطة الفارغة 2 مل / كجم من الماء المقطر. تلقت المجموعة النموذجية 2 مل / كجم 70٪ إيثانول بدون معالجة ؛ تم إعطاء مجموعة المراقبة الإيجابية أقراص موقية للكبد عند 0.4 جم / كغ (انظر جدول المواد) ؛ تم إعطاء جرعة عالية من مجموعة مسحوق الصفراء الثعلب الأزرق 10 جم / كجم من مسحوق الصفراء الثعلب الأزرق. تم إعطاء جرعة منخفضة من مجموعة مسحوق الصفراء الثعلب الأزرق 5 جم / كغ مسحوق الصفراء الثعلب الأزرق. تم إعطاء جميع المجموعات باستثناء العنصر الشاهد عن طريق الفم 70٪ إيثانول (2 مل / كغ) مرة واحدة يوميا لمدة 7 أيام متتالية للحث على إصابة الكبد الكحولية. في اليوم 7 ، 4 ساعات بعد إعطاء الإيثانول ، تم إعطاء العلاجات ذات الصلة (أقراص كبدية أو مسحوق صفراء الثعلب الأزرق) ، وأجريت التجارب اللاحقة. تلقت المجموعة الضابطة الفارغة الماء المقطر طوال التجربة.

قياس الترانسامينازات المصل (ALT و AST) ومجموعة الكوليسترول الكلي (T-CHO)
تم طرد عينات الدم عند 1,000 × جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية للحصول على المصل. تم تخزين العينات عند -20 درجة مئوية حتى التحليل. تم استخدام المجموعات التجارية لقياس مستويات ALT و AST و T-CHO (انظر جدول المواد) وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.

مراقبة وزن الجسم
بعد 7 أيام متتالية من إعطاء الإيثانول ، تم إعطاء العلاجات في اليوم 7 ، وأجريت التجارب بعد 4 ساعات من الجرعات الصباحية. تم تسجيل وزن الجسم 2x يوميا خلال فترة المراقبة. تم قياس وزن الجسم غير الصائم باستخدام ميزان تحليلي إلكتروني في الأيام 1 و 2 و 3 و 5 و 7 و 10 و 14 بعد الإعطاء.

معالجة عينات الأنسجة
في اليوم 14 بعد الإعطاء ، تم تسجيل وزن الجسم وكمية الطعام المتبقية. ثم صيام في فترة ما بعد الظهر مع حرية الوصول إلى الماء. في اليوم التالي (بعد فترة صيام من 12-16 ساعة) ، تم قياس وزن الجسم الصائم قبل القتل الرحيم عن طريق خلع عنق الرحم. تم إجراء الفحوصات المرضية العيانية لتقييم التغيرات المورفولوجية في الأعضاء الرئيسية ، بما في ذلك على سبيل المثال لا الحصر القلب والكبد والطحال والرئتين والكلى والغدد الكظرية والدماغ والمعدة والأمعاء والخصيتين والبروستاتا والمبيض والرحم. تم جمع عينات الأنسجة من القلب والكبد والطحال والرئتين والكلى والمعدة والأمعاء بشكل عشوائي من مجموعة التحكم الفارغة (CN) ومجموعة الصفراء الثعلب الأزرق ذات الجرعة المنخفضة (LH) ، مثبتة في 4٪ بارافورمالديهايد ، مضمنة في البارافين ، مقسمة ، وملطخة بالهيماتوكسيلين والإيوزين (H & E) للتقييم النسيجي المرضي. تم فحص أقسام الأنسجة وتصويرها تحت المجهر.

تلطيخ H & E
تم تثبيت عينات الكبد بنسبة 4٪ بارافورمالديهايد في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، مضمن في البارافين ، ومقسمة. تم إزالة البارافين من الأقسام في الزيلين الأول والثاني ، وإعادة ترطيبها بتركيزات الإيثانول الهابطة (100٪ ، 95٪ ، 85٪ ، و 75٪) ، وغسلها بالماء ، وتمييزها ، وغسلها مرة أخرى ، وزرقها باستخدام محلول الازرقاء. بعد الشطف ، تم تجفيف الأقسام في 85٪ و 95٪ من الإيثانول لمدة 5 دقائق لكل منهما ، وتلطيخها باليوزين لمدة 5 دقائق ، وتجفيفها في الإيثانول اللامائي الأول والثاني والثالث (5 دقائق لكل منهما). أخيرا ، تم مسح الأقسام في الزيلين الأول والثاني (5 دقائق لكل منهما) وتركيبها بصمغ محايد. تم التقاط الصور باستخدام مجهر ضوئي (100x).

تحديد مالونديالديهايد (MDA) في أنسجة الكبد
تم تجانس عينات الكبد في 9 مجلدات من المحلول الملحي الفسيولوجي باستخدام مطحنة الأنسجة. تم طرد المتجانس عند 700 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. تم إجراء فحص MDA على المادة الطافية باستخدام مجموعة تجارية (انظر جدول المواد) وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.

التحليل الإحصائي
يتم تقديم البيانات كوسيلة ± الانحرافات المعيارية (SDs). تم إجراء مقارنات المجموعة باستخدام تحليل التباين (ANOVA) متبوعا باختبار لاحق للفرق الأقل دلالة (LSD). اعتبرت قيم p على الوجهين <0.05 ذات دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تحديد المركبات النشطة في صفراء الثعلب الأزرق
الثعالب والدببة الزرقاء كلاهما من آكلة اللحوم ، وتشترك في فسيولوجيا الجهاز الهضمي والتمثيل الغذائي20. لذلك ، قد يكون للصفراء تركيبات مماثلة. باستخدام الظروف الكروماتوغرافية الموضحة أعلاه ، تم فصل كل مركب جيدا (الشكل 2). في هذه التجربة ، تم استخدام وقت الاحتفاظ بمعيار TUDCA21 لتحديد TUDCA في صفراء الثعلب الأزرق (الشكل 2). تم تحديد القمم في أوقات الاحتف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وفقا لتقرير الحالة العالمية لعام 2018 الصادر عن منظمة الصحة العالمية (WHO) حول الكحول والصحة ، ارتفع استهلاك الفرد من الكحول في الصين من 4.1 لتر في عام 2005 إلى 7.2 لتر في عام 2016 ، وهو ما يمثل ارتفاعا بنسبة 76٪. لا يزال ALD الناجم عن استهلاك الكحول المزمن مسببا رئيسيا للمراضة والوفيات المرتبطة بالكبد22. Bo et al. أنشأ نموذج إصابة الكبد الناجم عن رابع كلوريد الكربون (CCl4) في الفئران ولاحظوا أن صفراء الثعلب الأزرق قللت بشكل كبير من مستويات AST و ALT و ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية التابعة لمؤسسة علوم الشباب الصينية (رقم 82204562).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.03 م فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديومغير متاحغير متاحHPLC المتنقل المرحلة أ
0.1٪ حمض الفورميك في الماءفيشر العلمية ، الولايات المتحدة الأمريكيةغير متاحالمرحلة المتنقلة ل UPLC
0.22 μ مرشح الغشاء Mغير متاحغير متاحترشيح العينة
4٪ بارافورمالديهايدغير متاحغير متاحتثبيت الأنسجة
أسيتونيتريل ، درجة الكروماتوغرافيافيشر العلمية ، الولايات المتحدة الأمريكيةغير متاحالمرحلة المتنقلة ل UPLC
مجموعات ALT و AST و T-CHOشنغهاي Yuanye التكنولوجيا الحيوية المحدودة ، الصينغير متاحالتحليل الكيميائي الحيوي للمصل
الميزان التحليليغير متاحغير متاحقياس وزن
حمض الأوروكوليكالمعهد الصيني لمراقبة الأغذية والعقاقيرغير متاحالمعيار الداخلي ل HPLC / MS
مسحوق الصفراء الدبالمعهد الصيني لمراقبة الأغذية والدواء ، بكينغير متاحالمواد المرجعية
البيليروبينغير محددغير متاحمركب نشط محدد في الصفراء
الثعلب الأزرقمزرعة Suihua Fox ، هيلونغجيانغ ، الصينغير متاحمصدر الصفراء
مسحوق الصفراء الثعلب الأزرقالتحضير الداخليغير متاحعينة لتحليل المكونات
عمود C18 HPLCأجيلينت تكنولوجيز ، الولايات المتحدة الأمريكيةZORBAX SB-C18 (4.6 &مرات ؛ 150 مم ، 5 &mu ؛ m)فصل HPLC
Cytoscapehttps://cytoscape.org/الإصدار 3.9.1تصور الشبكة والتحليل الطوبولوجي
داوودالمؤسسهhttps://david.ncifcrf.gov/تحليل تخصيب GO / KEGG
بطاقات الجيناتمعهد وايزمانhttps://www.genecards.org/استرجاع الجينات المرتبطة بالأمراض
الهيماتوكسيلين والإيوسين (H& E)غير متاحغير متاحتلطيخ نسيجي
نظام HPLCأجيلينت تكنولوجيز ، الولايات المتحدة الأمريكية1200 إنفينيتيتحليل تكوين الصفراء
فئران كونمينغ (SPF ، 18 – 22 جرام)لياونينغ تشانغشنغ التكنولوجيا الحيوية المحدودةSCXK (لياو) 2020-0010نموذج إصابة الكبد الكحولي
ليوسين إنكيفالينسيجما، الولايات المتحدة الأمريكيةغير متاحمعيار معايرة التصلب العصبي المتعدد (40 fmol/μ L)
طقم الكشف عن MDAشنغهاي Yuanye التكنولوجيا الحيوية المحدودة ، الصينغير متاحقياس الإجهاد التأكسدي للكبد
الميثانول ، درجة الكروماتوغرافيافيشر العلمية ، الولايات المتحدة الأمريكيةغير متاحمذيب لتحضير العينة
مومجموعة الحوسبة الكيميائيةوزارة التربية والتعليم 2022.02تحليل الإرساء الجزيئي
أوميمالمؤسسهhttps://omim.org/استرجاع الجينات المرتبطة بالأمراض
مجهر بصريغير متاحغير متاحالملاحظة النسيجية
فارممابروحدة التحكم الإلكترونيةhttp://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/التنبؤ بالأهداف المركبة النشطة
حمض الفوسفوريكغير متاحغير متاحتعديل الأس الهيدروجيني للطور المتحرك
بب كيمالمعهد الوطني للتأمينhttps://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/استرجاع الهيكل المركب
بنك بيانات البروتين RCSBhttps://www.pdbus.org/غير متاحمصدر هيكل البروتين 3D
جهاز طرد مركزي مبردغير متاحغير متاحفصل المصل والأنسجة
الصوديوم tauroursodeoxycholate (TUDCA)المعهد الصيني لمراقبة الأغذية والعقاقيرغير متاحالمعيار الداخلي ل HPLC / MS
خيطEMBLhttp://version10.string-db.org/تحليل تفاعل البروتين والبروتين
يوني بروتEMBL-EBIhttps://www.uniprot.org/التوحيد القياسي المستهدف
نظام UPLC-Q-TOF-MSووترز ، الولايات المتحدة الأمريكيةUPLC HSS T3 (100 × ؛ 2.1 مم ، 1.8 &mu ؛ m)تحديد المكونات
فينيCSIChttps://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.htmlتصور التقاطع المستهدف

المراجع

  1. Thursz, M., et al. EASL Clinical Practice Guidelines: Management of alcohol-related liver disease. J Hepatol. 69 (1), 154-181 (2018).
  2. Sugimoto, K., Takei, Y. Pathogenesis of alcoholic liver disease. Hepatol Res. 47 (1), 70-79 (2017).
  3. Adekunle, A. D., Adejumo, A., Singal, A. K. Therapeutic targets in alcohol-associated liver disease: progress and challenges. Therap Adv Gastroenterol. 16, 17562848231170946(2023).
  4. Wang, Y., et al. bile powder prevents drunkenness and alcohol-induced liver injury in mice via the gut microbiota and metabolic modulation. Chin Med. 19 (1), 39(2024).
  5. Li, L., Liu, C., Mao, W., Tumen, B., Li, P. Taurochenodeoxycholic Acid Inhibited AP-1 Activation via Stimulating Glucocorticoid Receptor. Molecules. 24 (24), 4513(2019).
  6. Wang, D. Q., Carey, M. C. Therapeutic uses of animal biles in traditional Chinese medicine: an ethnopharmacological, biophysical chemical and medicinal review. World J Gastroenterol. 20 (29), 9952-9975 (2014).
  7. Yang, Y. M., Cho, Y. E., Hwang, S. Crosstalk between Oxidative Stress and Inflammatory Liver Injury in the Pathogenesis of Alcoholic Liver Disease. Int J Mol Sci. 23 (2), 774(2022).
  8. Quintero, P., et al. Bile acid supplementation improves established liver steatosis in obese mice independently of glucagon-like peptide-1 secretion. J Physiol Biochem. 70 (3), 667-674 (2014).
  9. Feng, Y., et al. Bear bile: dilemma of traditional medicinal use and animal protection. J Ethnobiol Ethnomed. 5, 2(2009).
  10. Song, G., et al. Potential therapeutic action of tauroursodeoxycholic acid against cholestatic liver injury via hepatic Fxr/Nrf2 and CHOP-DR5-caspase-8 pathway. Clin Sci (Lond). 137 (7), 561-577 (2023).
  11. Li, J., et al. Pharmacological studies on the comparison between the drainage and certified Fel Ursi. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 16 (12), 749-763 (1991).
  12. Allegri, F. Respect, Inherent Value, Subjects-of-a-Life Some. Reflections on the Key Concepts of Tom Regan's Animal Ethics. Relations Beyond Anthropocentrism. 7, 1-2 (2020).
  13. Underwood, L. S., Reynolds, P. Photoperiod and fur lengths in the arctic fox (Alopex lagopus L). Int J Biometeorol. 24 (1), 39-48 (1980).
  14. Wu, L., et al. Toxicological evaluation of porcine bile powder in Kunming mice and Sprague-Dawley rats. Front Pharmacol. 15, 1424940(2024).
  15. Chen, D. X., et al. Therapeutic Effects of Different Animal Bile Powders on Lipid Metabolism Disorders and Their Composition Analysis. Chin J Integr Med. 28 (10), 918-923 (2022).
  16. Liu, J., et al. Effect of Dietary Supplementation with Calcium, Phosphorus and Vitamin D(3) on Growth Performance, Nutrient Digestibility, and Serum Biochemical Parameters of Growing Blue Foxes. Animals (Basel). 12 (14), 1814(2022).
  17. Desiderio, D. M., Dass, C. The Measurement of Leucine Enkephalin at the Femtomole Level by Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry/Mass Spectrometry Methods. Anal Lett. 19 (19-20), 1963-1971 (1986).
  18. Li, S., et al. Substitutes for Bear Bile for the Treatment of Liver Diseases: Research Progress and Future Perspective. Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 4305074(2016).
  19. Ji, L., et al. Identification of bioactive compounds and potential mechanisms of Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma in the treatment of atherosclerosis by integrating network pharmacology and experimental validation. Biomed Pharmacother. 165, 115210(2023).
  20. Shi, J., Zhou, B., Ding, C. Study on the Chemical Components of Blue Fox Gall Powder. J Trad Chinese Med Herald. 31 (03), 83-88 (2025).
  21. Gómez, C., Stücheli, S., Kratschmar, D. V., Bouitbir, J., Odermatt, A. Development and Validation of a Highly Sensitive LC-MS/MS Method for the Analysis of Bile Acids in Serum, Plasma, and Liver Tissue. Metabolites. 10 (7), 282(2020).
  22. Wu, M., et al. Estimated projection of incidence and mortality of alcohol-related liver disease in China from 2022 to 2040: a modeling study. BMC Med. 21 (1), 277(2023).
  23. Bo, Z., Rui, W., Jingbo, J. Arctic fox bile can alleviate carbon tetrachloride-induced acute liver injury. Intl J Clin Exp Med. 9 (2), 5050-5055 (2016).
  24. Zhou, C. F., Gao, G. J., Liu, Y. Advances in studies on bear bile powder. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 40 (7), 1252-1258 (2015).
  25. Zhou, C. S., Yin, Z. Y., Zhao, W. X. Bear bile affects immunologic feature of hepatic stellate cells. J Hepatol Surg. 20 (3), 204-208 (2012).
  26. Wang, N., et al. A comparative study on the hepatoprotective action of bear bile and Coptidis Rhizoma aqueous extract on experimental liver fibrosis in rats. BMC Complement Altern Med. 12, 239(2012).
  27. Ratziu, V., et al. A randomized controlled trial of high-dose ursodesoxycholic acid for nonalcoholic steatohepatitis. J Hepatol. 54 (5), 1011-1019 (2011).
  28. Moorhouse, T. P., et al. Substitutes for wildlife-origin materials as described in China's "TCM" research literature. Global Ecol Conservation. 34 (April), e02042(2022).
  29. Steyn, W. J., Wand, S. J., Jacobs, G., Rosecrance, R. C., Roberts, S. C. Evidence for a photoprotective function of low-temperature-induced anthocyanin accumulation in apple and pear peel. Physiol Plant. 136 (4), 461-472 (2009).
  30. Intagliata, S., et al. Discovery of a Highly Selective Sigma-2 Receptor Ligand, 1-(4-(6,7-Dimethoxy-3,4-dihydroisoquinolin-2(1H)-yl)butyl)-3-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-one (CM398), with Drug-Like Properties and Antinociceptive Effects In Vivo. AAPS J. 22 (5), 94(2020).
  31. Contreras-Zentella, M. L., Villalobos-Garcia, D., Hernandez-Munoz, R. Ethanol Metabolism in the Liver, the Induction of Oxidant Stress, and the Antioxidant Defense System. Antioxidants (Basel). 11 (7), 1258(2022).
  32. Lala, V., Zubair, M., Minter, D. A. Liver Function Tests. , StatPearls Publishing. Treasure Island, FL. (2023).
  33. Seo, E., Kang, H., Choi, H., Choi, W., Jun, H. S. Reactive oxygen species-induced changes in glucose and lipid metabolism contribute to the accumulation of cholesterol in the liver during aging. Aging Cell. 18 (2), e12895(2019).
  34. Freitas, I. N., et al. Insights by which TUDCA is a potential therapy against adiposity. Front Endocrinol (Lausanne). 14, 1090039(2023).
  35. Lu, W., Xi, R., Huaiwu, H. Ursodeoxycholic acid (UDCA) reduces hepatocyte apoptosis by inhibiting farnesoid X receptor (FXR) in hemorrhagic shock (HS). Curr Mol Med. 23 (6), 550-558 (2022).
  36. Reyes-Gordillo, K., et al. Akt1 and Akt2 Isoforms Play Distinct Roles in Regulating the Development of Inflammation and Fibrosis Associated with Alcoholic Liver Disease. Cells. 8 (11), 1337(2019).
  37. Li, J., Guo, C., Wu, J. The Agonists of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-gamma for Liver Fibrosis. Drug Des Devel Ther. 15, 2619-2628 (2021).
  38. Dichtel, L. E., Cordoba-Chacon, J., Kineman, R. D. Growth Hormone and Insulin-Like Growth Factor 1 Regulation of Nonalcoholic Fatty Liver Disease. J Clin Endocrinol Metab. 107 (7), 1812-1824 (2022).
  39. Takahashi, Y. The Role of Growth Hormone and Insulin-Like Growth Factor-I in the Liver. Int J Mol Sci. 18 (7), 1447(2017).
  40. Feng, M., et al. Kupffer-derived matrix metalloproteinase-9 contributes to liver fibrosis resolution. Int J Biol Sci. 14 (9), 1033-1040 (2018).
  41. Ma, X. Y., et al. Ursolic acid reduces hepatocellular apoptosis and alleviates alcohol-induced liver injury via irreversible inhibition of CASP3 in vivo. Acta Pharmacol. 42 (7), 1101-1110 (2021).
  42. Taguchi, K., Fukami, K. RAGE signaling regulates the progression of diabetic complications. Front Pharmacol. 14, 1128872(2023).
  43. Lino Rodrigues, K., et al. Aerobic Exercise Training Improves Microvascular Function and Oxidative Stress Parameters in Diet-Induced Type 2 Diabetic Mice. Diabetes Metab Syndr Obes. 15, 2991-3005 (2022).
  44. Wilkening, S., Stahl, F., Bader, A. Comparison of primary human hepatocytes and hepatoma cell line Hepg2 with regard to their biotransformation properties. Drug Metab Dispos. 31 (8), 1035-1042 (2003).
  45. Takebe, T., et al. Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant. Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).
  46. Goessling, W., Sadler, K. C. Zebrafish: an important tool for liver disease research. Gastroenterology. 149 (6), 1361-1377 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.