Method Article

الكشف عن الأنواع الفلورية باستخدام PCR لأنواع الأسبيرجيلوس ، والمكورات الكريبتوكوكسية الجديدة، والتهاب الرئة الكيسي جيروفيسي

DOI:

10.3791/68819

⸱

May 8th, 2026

 ,  ,  ,  , 
1Clinical Laboratory, Foshan Sanshui District People's Hospital, 2Organization and Personnel Department and Neurology Department, Foshan Sanshui District People's Hospital

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا، نقدم بروتوكول اختبار سريري يعتمد على طريقة PCR الفلورية للكشف المتزامن عن أنواع الرشاش، وCryptococcus neoformans، وPneumocystis jirovecii.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول إجراء موحد للكشف النوعي عن أنواع الرشاش، وكريبتوكوكوس نيوفورمانس، وPneumocystis jirovecii في عينات البلغم السريرية باستخدام مجموعة كشف الأحماض النووية الفلورية المعتمدة على PCR باستخدام مسبار فلوري. تشمل العملية جمع عينات سريرية، ومعالجة التسييل القلوية، واستخراج الأحماض النووية الآلي، والكشف عن PCR في الوقت الحقيقي عبر المتعدد البلكس. يتم اكتشاف أنواع أسبيرجيلوس، وC. neoformans، وP. jirovecii باستخدام مجسات فلورية محددة للهدف (قنوات FAM، VIC، وCY5 على التوالي)، مع دمج قناة تحكم داخلية (ROX) لضمان الجودة. تعتمد صلاحية الاختبار وتفسير نتائج العينة على قيم القطع المحددة للدورة (Ct). يجب أن يظهر التحكم الموجب منحنيات تضخيم على شكل S مع Ct ≤ 33.7 في جميع القنوات، بينما يجب ألا يظهر التحكم السالب أي تضخيم. بالنسبة للعينات السريرية، تشير قيمة Ct ≤ 33.7 في قناة FAM إلى إيجابية لأنواع الأسبيرجيلوس ، وقيمة Ct ≤ 36 في قناة VIC أو CY5 تشير إلى إيجابية ل C. neoformans أو P. jirovecii على التوالي.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تشكل العدوى الفطرية الغازية، مثل تلك التي تسببها أنواع الشبرجيلوس ، وكريبتوكوكوس نيوفورمانس، وPneumocystis jirovecii، تهديدا كبيرا للمرضى الضعيفين في المناعة، مما يؤدي إلى ارتفاع معدلات المراضة والوفيات. التشخيص الدقيق والسريع أمر بالغ الأهمية لبدء العلاج المضاد للفطريات المناسب وتحسين النتائج السريرية1. طرق التشخيص التقليدية، بما في ذلك الزراعة والمجهر والكشف عن المستضدات، لها قيود ملحوظة. الزراعة تستغرق وقتا طويلا وتظهر حساسية منخفضة، والمجهر يفتقر إلى تحديد مستوى النوع ويعتمد على المشغل، بينما قد تظهر اختبارات المستضدات (مثل جالاكتومانان، β-دي-غلوكان) تفاعلا متبادلا وأداء غير متسق.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على استخدام العينات السريرية من قبل لجنة الأخلاقيات المختصة (رقم الموافقة: ZYS-GCP-2025006). قدم جميع المشاركين موافقة واسعة ومستنيرة لاستخدام بياناتهم وعيناتهم في البحث. جميع المواد الكيميائية والمواد المستخدمة في هذا البروتوكول مدرجة في قائمة المواد (Table of Material).

1. جمع عينات

  1. اجمع 3–5 مل من البلغم أو سائل غسل الشعب الهوائية في حاويات معقمة وتقديمها للاختبار بسرعة.

2. تحضير الكواشف

ملاحظة: تم تنفيذ هذه الخطوات في غرفة تحضير المواد الكيميائية.

  1. أزل مجمو....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تظهر منحنيات التضخيم التمثيلية التي تم الحصول عليها باستخدام اختبار PCR بمسبار فلورسنت متعدد الأبعاد في الشكل 1 والشكل 2. تم تحديد صلاحية الاختبار بناء على معايير ضابط محددة مسبقا. في التشغيل الصالح، أنتج التحكم الموجب منحنيات تضخيم على شكل S مميزة في قنوات FAM وVIC وCY5 وROX، مع قيم عتبة دورة (Ct) ≤ 33.7 في جميع قنوات الكشف (الشكل 1A). أظهر التحكم السلبي عدم وجود منحنيات تضخيم على شكل S في أي قناة،.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوفر بروتوكول PCR اللحظي متعدد القنوات الذي تم وضعه في هذه الدراسة إجراء موحيدا للكشف المتزامن والسريع عن ثلاثة مسببات فطريات غازية رئيسية (Aspergillus spp.، Cryptococcus neoformans، وPneumocystis jirovecii) في عينات بلغم سريرية. تتيح هذه الطريقة الكشف المباشر عن الحمض النووي الممرض من العينات السريرية. على عكس الطرق التشخيصية التقليدية مثل الزراعة أو المجهر أو اختبار المستضدات المصلي، فإن هذه الطريقة الجزيئية لا تخضع للقيود الجوهرية لتلك التقنيات، بما في ذلك طول مدة المعالجة المرتبطة با.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفون لا يفرضون أي تضارب مصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر قسم المختبرات السريرية في مستشفى شعب منطقة شانشوي في فوشان على توفير المعدات والدعم الفني.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
10 μ رؤوس مطرقة ممتدة معقمة برأس فلتر L (معلقة)تقنية شياوروي الحيويةS20221126
1000 μ أطراف ماصنة معقمةشركة جيانغسو شينكانغ للأدوات الطبية المحدودة241101
200 μ رؤوس معصمة معقمة من فلتر Lتقنية شياوروي الحيوية241001
أنابيب التحللشركة بكين ZC للعلوم الحيوية والإنتاج شركة التكنولوجياF1040
مجموعة كشف الأحماض النووية ل Aspergillus spp، Cryptococcus neoformans، و Pneumocystis jiroveciiشركة بكين ZC للعلوم الحيوية والإنتاج شركة تكنولوجي.CT8143-48T
كاشف استخراج الأحماض النوويةشركة بكين ZC للعلوم الحيوية والإنتاج شركة التكنولوجياCN8053-B40T
مخزن تخفيف العينةشركة بكين ZC للعلوم الحيوية والإنتاج شركة التكنولوجياSP7065

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Morrissey, C. O., et al. Aspergillus fumigatus—a systematic review to inform the World Health Organization priority list of fungal pathogens. Med Mycol. 62 (6), 6(2024).
  2. Higuchi, R., Fockler, C., Dollinger, G., Watson, R.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

PCR DetectionFluorescent ProbeAspergillus SppCryptococcus NeoformansPneumocystis JiroveciiMultiplex Real Time PCRNucleic Acid ExtractionClinical Sputum SamplesCycle ThresholdInternal Control

Related Articles