يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تقييم كمي للبلعمة لكريات الدم الحمراء الخيفية والغريبة بواسطة ضامة الفئران في المختبر

775 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68904

⸱

أغسطس 22, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Regenerative Medicine, and Department of Dermatology, Affiliated Hospital of Jiangsu University, Jiangsu University, 2Haihe Laboratory of Cell Ecosystem, Institute of Hematology, Chinese Academy of Medical Sciences, 3Guangdong Provincial Key Laboratory of Large Animal Models for Biomedicine, and South China Institute of Large Animal Models for Biomedicine, School of Pharmacy and Food Engineering, Wuyi University, 4State Key Laboratory of Cell Biology, Shanghai Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, University of Chinese Academy of Sciences, 5Innovation and Transformation Center, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, 6Prometheus RegMed Tech Ltd, 7Department of Medicinal and Life Sciences, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Tokyo University of Science

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا العمل بروتوكولا موحدا في المختبر لتحديد ومقارنة معدلات البلعمة لخلايا الدم الحمراء الغريبة (البشرية) والخيفية (الفئران) بواسطة ضامة الفئران المعزولة.

الملخص

غالبا ما تواجه زراعة الخلايا الغريبة رفضا مناعيا كبيرا ، حتى في النماذج الحيوانية التي تعاني من نقص المناعة. من بين المكونات المناعية المتبقية ، يمكن للبلاعم أن تزرع الخلايا البشرية المزروعة بنشاط ، مما يشكل تحديا للنقش على المدى الطويل. لمعالجة هذا الأمر ، قمنا بتطوير اختبار موحد في المختبر لتحديد كمية البلعمة بوساطة البلاعم لخلايا الدم الحمراء البشرية مقابل خلايا الدم الحمراء للفئران (RBCs). تم عزل البلاعم البريتونية للفئران وزراعتها وتعريضها لكرات الدم الحمراء البشرية أو الفئران. تم تحديد كرات الدم الحمراء البشرية باستخدام CD235a ، بينما تم تصنيف كرات الدم الحمراء للفئران مسبقا باستخدام DeepRed. تم إجراء تحليل قياس التدفق الخلوي باستخدام CD163 لتحديد البلاعم واستبعاد يود البروبيديوم (PI) لبوابة الخلايا الحية. أظهرت النتائج اختلافا كبيرا في نشاط البلعمة: 5.08٪ من البلاعم ابتلعت كرات الدم الحمراء البشرية ، في حين أن 1.59٪ فقط من كرات الدم الحمراء للفئران البلعمة ، مما أدى إلى مؤشر البلعمة النسبي 3.21. يسمح هذا البروتوكول بالتقييم الكمي للتوافق المناعي ويقدم طريقة قابلة للتكرار لتقييم الاستجابات المناعية الفطرية في زرع الأجانب. إنه ينطوي على إمكانية تحسين اختيار المتبرع والمتلقي وتوجيه استراتيجيات مثبطة للمناعة في البحوث الانتقالية.

المقدمة

يعد استخدام زرع الخلايا الغريبة ، وخاصة نقش الخلايا البشرية في نماذج حيوانية ، استراتيجية أساسية في البحوث الطبيةالحيوية 1. يسمح بتقييم بقاء الخلية ، والنقش ، والاستجابات المناعية في بيئة خاضعة للرقابة في الجسم الحي . في حين أن نماذج الفئران قد سيطرت تاريخيا على هذا المجال نظرا لجيناتها المميزة جيدا وسهولة التلاعب بها ، فإن صغر حجمها يمثل قيدا كبيرا في الدراسات التي تتطلب كميات دم كبيرة أو إنتاجية عالية للخلايا. في المقابل ، تقدم الفئران العديد من المزايا ، بما في ذلك كتلة الجسم الأكبر ، وتحسين الأهمية الفسيولوجية للأنظمة البشرية ، وإنتاجية أعلى من العينات البيولوجية مثل الدم أو البلاعم البريتونية2. وبالتالي ، يتم استخدام نماذج الفئران بشكل متزايد في الدراسات التي تنطوي على أبحاث المكونة للدم والجهازالمناعي 3.

أحد التحديات الرئيسية في الزرع الغريب هو الرفض المناعي. حتى في النماذج التي تعاني من نقص المناعة حيث يتم استئصال الخلايا التائية أو الخلايا البائية أو الخلايا القاتلة الطبيعية وراثيا ، تظل الخلايا المناعية الفطرية المتبقية ، وخاصة الضامة ، نشطةوظيفيا 4. تعمل البلاعم كمدافعين عن الخط الأول للجهاز المناعي المضيف ، حيث تتعرف على الخلايا الغريبة وتقضي عليها من خلال البلعمة5. يتم تنظيم هذه العملية جزئيا من خلال التفاعل بين البروتين التنظيمي للإشارة ألفا (SIRPα) على البلاعم و CD47 ، وهي إشارة "لا تأكلني" يتم التعبير عنها في معظم أنواع الخلايا. عندما لا يتم التعرف على CD47 من الخلايا البشرية بواسطة القوارض SIRPα ، يمكن أن يؤدي عدم التطابق هذا إلى تعزيز البلعمة. حتى في هذه التي تعاني من نقص المناعة ، توجد هذه الظاهرة أيضا 6,7.

يعد تحديد البلعمة بوساطة البلاعم في هذا السياق أمرا بالغ الأهمية لتقييم احتمالية بقاء الخلية وتحسين استراتيجيات الزرع8. على الرغم من تطوير طرق مختلفة في الجسم الحي وخارج الجسم الحي لتقييم الرفض المناعي ، إلا أن المقايسات الموحدة في المختبر لبلعمة البلاعم لا تزال محدودة. غالبا ما تكون الطرق التقليدية القائمة على الفحص المجهري كثيفة العمالة وتفتقر إلى الصرامة الكمية. على النقيض من ذلك ، يوفر قياس التدفق الخلوي فحصا قائما على خلية واحدة ومنصة كمية قادرة على التمييز بدقة بين أنواع الخلايا وقياس امتصاص البلعمة من خلال اكتشاف علامات السطح.

في هذه المقالة ، قمنا بتطوير اختبار موحد في المختبر لتقييم البلعمة التفاضلية لكرات الدم الحمراء البشرية والفئران بواسطة الضامة البريتونية للفئران. تعمل كرات الدم الحمراء كنموذج مثالي لمقايسات البلعمة نظرا لهيكلها البسيط وتعبيرها عن CD47 ، والتي تعمل كإشارة "ذاتية" لتثبيط التخليص بوساطة البلاعم9. في هذا البروتوكول ، يتم حصاد البلاعم البريتونية للفئران عن طريق الغسيل البريتوني ، ويتم زراعتها في المختبر ، وتعريضها إما لكرات الدم الحمراء البشرية أو كرات الدم الحمراء الخيفية للفئران المسماة ب DeepRed. بعد الحضانة المشتركة ، يتم استخدام قياس التدفق الخلوي لتقييم استيعاب كرات الدم الحمراء بواسطة الضامة. يتم تحديد البلاعم من خلال تعبير CD163 ، وكرات الدم الحمراء البشرية بواسطة CD235a ، وكرات الدم الحمراء للفئران بواسطة مضان DeepRed. يتم استبعاد الخلايا الميتة عن طريق تلطيخ PI ، مما يضمن تحليل البلاعم القابلة للحياة فقط.

يتيح هذا النهج تقييما دقيقا وكميا لنشاط البلعمة لكرات الدم الحمراء الخيفية والغريبة في المختبر ، مما يوفر نظرة ثاقبة لمدى التصفية المناعية بوساطة البلاعم. في تجاربنا ، أظهرت البلاعم الفئرانية بلعمة أعلى بكثير من كرات الدم الحمراء البشرية (5.08٪) مقارنة بكرات الدم الحمراء للفئران (1.59٪) ، مما أدى إلى مؤشر البلعمة النسبي 3.21. تؤكد هذه النتائج على أهمية آليات المناعة الفطرية في ظروف كراهية الوراثة وتسلط الضوء على قيمة هذا الاختبار في التحقق من صحة النموذج قبل السريري.

في الختام ، يقدم البروتوكول المقدم هنا طريقة قابلة للتكرار وفعالة لقياس البلعمة الضامة في المختبر. إنه مفيد بشكل خاص للباحثين العاملين في مجالات زرع الأعضاء ، وأبحاث الخلايا الجذعية المكونة للدم ، واختبار التوافق المناعي. من خلال توفير إطار عمل موحد لقياس البلعمة ، يمكن أن يساهم هذا الاختبار في تحسين قابلية التكاثر التجريبي وتعزيز فهم الاستجابات المناعية الفطرية في نماذج الزرع عبر الأنواع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت جميع التجارب التي شملت وفقا للسياسات والإجراءات الأخلاقية المعتمدة من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام بجامعة جيانغسو (UJS-IACUC) (رقم الموافقة. UJS-IACUC-2021090102). تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية للمستشفى التابع لجامعة جيانغسو. تم جمع جميع العينات من المرضى الذين قدموا موافقة مستنيرة. يجب وضع المادة الطافية التي تمت إزالتها في خزان مخصص لسائل النفايات وتسليمها إلى قسم الأمراض المعدية بالمستشفى.

1. عزل البلاعم

  1. التحضير: قم بإعداد المواد اللازمة ، بما في ذلك الفئران التجريبية ، وحاويات التخدير ، والأكواب ، والأيزوفلوران كمخدر ، وقم بتبريد جهاز الطرد المركزي مسبقا عند 4 درجات مئوية.
  2. تخدير الفئران والتضحية بها: باتباع إرشادات رعاية المؤسسية ، قتل الفئران رحيما بعد استنشاق تخدير الأيزوفلوران المفرط.
  3. تطهير الكحول: ضع الجرذ المضحى به في دورق وأضف كمية كافية من 75٪ إيثانول لتغطية الفئران بالكامل. نقع لمدة 10 دقائق.
  4. حقن وخلط سائل البطن: تطهير بطن الفئران وحقن 50 مل من PBS المعقم المثلج في تجويف البطن على طول خط الوسط باستخدام حقنة.
    1. هز الجرذ برفق وتدليك جدار البطن بالأصابع لضمان خلط السائل في تجويف البطن بشكل شامل. تدليك لمدة 2-3 دقائق.
  5. جمع سائل البطن: قم بعمل شق صغير في جدار بطن الجرذ ، وإمالة الجسم قليلا ، وشفط سائل البطن بحقنة.
  6. الطرد المركزي: الطرد المركزي السائل الذي تم جمعه عند 500 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية ، وتخلص من المادة الطافية.
  7. تحلل كرات الدم الحمراء: أضف 3-5 أضعاف حجم حبيبات الخلية من المخزن المؤقت لتحلل كرات الدم الحمراء واخلطها برفق لمدة 1-2 دقيقة.
    ملاحظة: على سبيل المثال ، إذا كان حجم حبيبات الخلية 1 مل ، أضف 3-5 مل من المخزن المؤقت للتحلل. يمكن تنفيذ هذه الخطوة في درجة حرارة الغرفة أو عند 4 درجات مئوية ، متبوعة بالطرد المركزي عند 400-500 × جم لمدة 5 دقائق. الطرد المركزي عند 4 درجات مئوية أكثر فعالية. بسبب الضغط الاسموزي ، سوف تتحلل كرات الدم الحمراء ، وسيتحول المحلول إلى اللون الأحمر. بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة المادة الطافية الحمراء.
    1. وصفة تحلل خلايا الدم الحمراء (RBC): قم بإذابة 8.3 جم من NH4Cl ، و 1.0 جم من KHCO3 ، و 1.8 مل من 5٪ EDTA في 800 مل من H2O المقطر ، وقم بتعقيم المرشح من خلال مرشح 0.2 ميكرومتر ، qs إلى 1000 مل مع H2O المقطر ، واضبط الرقم الهيدروجيني 7.2 ~ 7.4. إذا كان الراسب الأحمر لا يزال مرئيا ، كرر هذه الخطوة حتى يصبح المحلول واضحا وشفافا. عادة ، لا تؤثر كمية صغيرة من كرات الدم الحمراء المتبقية على المقايسات اللاحقة (إذا كان هناك عدد قليل من كرات الدم الحمراء في الحبيبات ، فيمكن حذف هذه الخطوة).
  8. غسل الخلايا: اغسل الخلايا مرتين بحوالي 10 مل من وسط RPMI 1640 المبرد مسبقا. جهاز طرد مركزي عند 500 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية في كل مرة وتخلص من المادة الطافية.
  9. إعادة تعليق الخلايا وعدها: أعد تعليق الخلايا في وسط مبرد مسبقا يتكون من RPMI 1640 + 1٪ FBS + 1٪ PS ، وعد الخلايا باستخدام تلطيخ Trypan Blue ، وقم بتقييم صلاحية الخلية.
  10. زراعة الخلايا: إذا كانت الثقافة مطلوبة ، قم بزرع الخلايا بكثافة 1 × 106 / مل في صفيحة استزراع 24 بئرا ، مع 1 مل من RPMI 1640-10٪ FBS-1٪ PS متوسطة لكل بئر. بعد ساعتين من الحضانة ، استبدل الوسط واغسل الآبار 1-2 مرات بوسيط RPMI 1640 لإزالة الخلايا غير الملتصقة.
    ملاحظة: ستشكل الخلايا الملتصقة طبقة أحادية من الضامة. إذا كانت هناك حاجة إلى استخراج الحمض النووي الريبي ، أضف 1 مل من Trizol إلى حبيبات الخلية ، وقم بالماصة عدة مرات لتعطيل الخلايا ، وانقل الخليط إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل لاستخراج الحمض النووي الريبي الفوري أو تخزينه عند -80 درجة مئوية. لتحليل FACS ، اضبط عدد الخلايا إلى 1 × 106 لكل أنبوب ، وأضف 20 ميكرولتر من المخزن المؤقت FACS ، واستمر في تلطيخ FACS. مخزن FACS: DPBS + 2٪ FBS ، تعقيم المرشح من خلال مرشح 0.22 ميكرومتر ، مخزن عند 4 درجات مئوية).

2. مجموعة كرات الدم الحمراء الفئران أو البشرية

  1. طريقة التحضير: شطف مسبق أنابيب الطرد المركزي 15 مل و 10 مل محاقن بالهيبارين.
  2. جمع دم قلب الفئران: بعد تخدير الفئران والتضحية بها ، قم بقطع جزء صغير من ذيل الجرذ بعناية بالمقص وجمع الدم من وريد الذيل.
  3. جمع الدم البشري: جمع الدم البشري باستخدام تقنية بزل الوريد.
  4. خلط عينات الدم: امزج 1 مل من PBS مع 1 مل من الدم الوريدي البشري أو دم الفئران.
  5. فصل تدرج كثافة Ficoll: أضف 1.5 مل من محلول Ficoll بكثافة 1.077 إلى أنبوب طرد مركزي 15 مل للدم المحيطي البشري ؛ أضف 1.5 مل من محلول Ficoll بكثافة 1.084 إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل لدم الفئران.
  6. طبقات عينات الدم: ضع عينات الدم المخففة ببطء على طول جدار أنبوب الطرد المركزي على محلول تدرج الكثافة المقابل.
  7. الطرد المركزي: جهاز طرد مركزي عند 400 × جم لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 18-20 درجة مئوية.
  8. إزالة طبقات البلازما والخلايا الليمفاوية: قم بإزالة طبقة البلازما العليا وطبقة الخلايا الليمفاوية وطبقة محلول فيكول ، مع ترك طبقة خلايا الدم الحمراء السفلية فقط.
  9. غسل خلايا الدم الحمراء: اغسل كرات الدم الحمراء مرة واحدة باستخدام 10 مل من PBS.
  10. الطرد المركزي وإزالة المادة الطافية: جهاز الطرد المركزي عند 400 × جم لمدة 5 دقائق والتخلص من المادة الطافية.
  11. إعادة تعليق الخلايا وعدها: أضف 1 مل من متوسط RPMI 1640 إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل ، واخلطه مع كمية مناسبة من حبيبات خلايا الدم الحمراء ، وقم بإجراء عد الخلايا.

3. فحص البلعمة في المختبر

  1. عزل البلاعم والاستزراع: عزل البلاعم وبذرها بكثافة 1 × 106 خلايا / بئر في صفيحة استزراع 12 بئر. احتضان عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 لمدة ساعتين للسماح للخلايا بالالتصاق.
  2. إزالة الخلايا غير الملتصقة: بعد ساعتين من الحضانة ، قم بإزالة الخلايا غير الملتصقة بعناية واغسلها برفق باستخدام وسيط RPMI 1640.
  3. الثقافة المستمرة: استمر في استزراع البلاعم الملتصقة لمدة تصل إلى ساعتين لضمان الالتصاق الكامل بالجزء السفلي من لوحة الاستزراع.
  4. علاج الجوع: بعد ساعتين ، استبدل الوسط ب RPMI 1640 الخالي من المصل واحتضنه في ظروف الجوع لمدة ساعتين لتعزيز نشاط البلعمة البلاعمية.
  5. إضافة الخلايا البشرية: أضف الخلايا البشرية الملطخة مسبقا ب DeepRed إلى لوحة الثقافة واحتضانها عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 لمدة ساعتين للسماح للبلاعم بالخلايا البشرية.
  6. الاستنتاج والتحليل: بعد فحص البلعمة ، راقب نشاط البلعمة تحت المجهر أو حدد الكمية باستخدام قياس التدفق الخلوي (FACS).

4. قياس التدفق الخلوي

  1. تحضير الخلية: هضم الخلايا بنسبة 0.05٪ Trypsin-EDTA وأوقف الهضم باستخدام وسط RPMI 1640 الذي يحتوي على 10٪ FBS. الطرد المركزي للخلايا ، والتخلص من المادة الطافية ، وإعادة تعليق الخلايا في المخزن المؤقت FACS ، وحسابها. تحضير 1 × 106 خلايا لكل أنبوب في أنبوبين. بالإضافة إلى ذلك ، قم بإعداد أنبوب واحد من كرات الدم الحمراء البشرية وأنبوب واحد من كرات الدم الحمراء للفئران.
  2. تحضير أنبوب وصمة عار واحدة: أضف الجسم المضاد CD163 المضاد للفأر إلى أنبوب عينة واحد ، والجسم المضاد للفأر CD235a المضاد للإنسان إلى أنبوب خلايا الدم الحمراء البشرية ، و DeepRed إلى أنبوب خلايا الدم الحمراء للفئران.
    1. احتضان هذه الأنابيب على الجليد ، محمية من الضوء ، لمدة 30 دقيقة ، مع الخلط كل 10 دقائق. أضف 1 مل من المخزن المؤقت FACS لغسل أي أجسام مضادة غير مرتبطة ، وأجهزة الطرد المركزي ، والتخلص من المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت FACS.
  3. تحضير العينة: أضف CD163 المضاد للفأر ، والأجسام المضادة للفأر CD235a المضادة للإنسان ، و DeepRed إلى أنابيب العينة. احتضن الثلج ، المحمي من الضوء ، لمدة 30 دقيقة ، مع الخلط كل 10 دقائق. أضف 1 مل من المخزن المؤقت FACS إلى كل أنبوب عينة لغسل أي أجسام مضادة غير مرتبطة ، وأجهزة الطرد المركزي ، وإزالة المادة الطافية. أعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت FACS.
  4. التحليل: استبعاد التصاق الخلية عن طريق البوابات على FSC-H مقابل FSC-A. استخدم الأنابيب أحادية البقعة لضبط إعدادات الجهد والتعويض المناسبة قبل تحليل العينات (الشكل 1). تحليل البيانات باستخدام برنامج FlowJo v10.8.1.
    ملاحظة: تم استخدام أدوات التحكم أحادية اللون CD163-FITC و PI لضبط التعويض.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

من خلال تحليل قياس التدفق الخلوي ، يمكننا استنتاج معدل البلعمة في البلاعم للفئران نحو كرات الدم الحمراء البشرية وكرات الدم الحمراء للفئران. يتم استبعاد الخلايا الميتة أولا باستخدام PI. تشير البلاعم الإيجابية CD163 التي تعبر عن CD235a إيجابية إلى البلعمة في كرات الدم الحمراء البشرية. يتم تعريف نسبة البلاعم التي تحتوي على كرات الدم الحمراء البلعمة على أنها معدل البلعمة للبلاعم للفئران تجاه كرات الدم الحمراء البشرية. تم حساب نسبة البلعمة لكرات الدم الحمراء للفئران بالمثل. تمثل الخلايا الإيج...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

أنشأت هذه الدراسة اختبارا قويا وقابلا للتكرار في المختبر لتقييم البلعمة بوساطة البلاعم لكل من كرات الدم الحمراء الغريبة والخيفية. في هذه الدراسة ، تم تصنيف كرات الدم الحمراء البشرية ب CD235a-BV421 ، بينما تم تلطيخ كرات الدم الحمراء للفئران بصبغة DeepRed. عندما تقوم البلاعم بلعمة كرات الدم الحمراء المسماة ، يتم استيعاب الأجسام المضادة المترافقة (CD235a-BV421) أو الصبغة (DeepRed) معا. نتيجة لذلك ، تظهر البلاعم نفسها مضان مقابل. في ظل هذه الظروف ، يمكن اكتشاف البلاعم البلعمية بسهول...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

JYG هو مستشار علمي لشركة Prometheus RegMed Tech Ltd. يعلن المؤلفون اليساريون عدم وجود تضارب محتمل في المصالح.

شكر وتقدير

ونود أن نشكر السيدة مي فانغ، والسيدة مين ما، والسيدة يو تونغ منغ، والسيد كوان - كاي لي على مساهماتهم الأولية. تم تمويل هذا البحث جزئيا من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82270697) ، ومشروع تخطيط العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة قوانغدونغ الصينية (2021B1212040016) ، ومؤسسة قوانغدونغ للبحوث الأساسية والتطبيقية (2023A1515012574) ، ووحدة زراعة الانضباط الطبي الرئيسي في مقاطعة جيانغسو (JSDW202229) ومختبر هايهي لصندوق ابتكار النظام البيئي الخلوي (HH24KYZX0008) ، والمؤسسة الصينية لريادة الأعمال والتوظيف للشباب - Incaier Public Welfare الصندوق (HH25KYHX0003).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.05٪ تريبسين-إيدتاثيرموفيشر25300062
متتبع الخلايا الحمراء العميقةثيرموفيشر  C34565البودرة (15 سنة ومو؛ g) تم حله في DMSO (20 & mu; L)
كبريتات ثنائي الميثيل (DMSO)سيغماD2650
محلول دولبيكو الملحي الفوسفات المخزن (DPBS)ثيرموفيشرC10010500BT
فيكول-باك بلسسيتيفا17144002
فيكول-باك بريميومسيتيفا17544602
الجسم المضاد للبشر CD235a BV421بكالوريوس العلوم الحيوية562938
الجسم المضاد FITC لمضاد الفأر CD163بيو-رادMCA342F
بروتين KسيغماP2308
RPMI 1640ثيرموفيشر11875093

المراجع

  1. Ito, M., et al. NOD/SCID/GAMMAC(null) mouse: An excellent recipient mouse model for engraftment of human cells. Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).
  2. Szpirer, C. Rat models of human diseases and related phenotypes: A novel inventory of causative genes. Mamm Genome. 33 (1), 88-90 (2022).
  3. Zhang, L., et al. Survival-assured liver injury preconditioning (SALIC) enables robust expansion of human hepatocytes in Fah Rag2(-/-) IL2rg(-/-) rats. Adv Sci (Weinh). 8 (19), e2101188(2021).
  4. Rongvaux, A., et al. Corrigendum: Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model. Nat Biotechnol. 35 (12), 1211(2017).
  5. Furuya, K., et al. The evidence of a macrophage barrier in the xenotransplantation of human hematopoietic stem cells to severely immunodeficient rats. Xenotransplantation. 28 (4), e12702(2021).
  6. Barclay, A. N., Van den Berg, T. K. The interaction between signal regulatory protein alpha (SIRPα) and CD47: Structure, function, and therapeutic target. Annu Rev Immunol. 32, 25-50 (2014).
  7. Ide, K., et al. Role for CD47-SIRPalpha signaling in xenograft rejection by macrophages. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (12), 5062-5066 (2007).
  8. Matlung, H. L., et al. The CD47-SIRPα signaling axis as an innate immune checkpoint in cancer. Immunol Rev. 276 (1), 145-164 (2017).
  9. Oldenborg, P. A., et al. Role of CD47 as a marker of self on red blood cells. Science. 288 (5473), 2051-2054 (2000).
  10. Gu, B. J., et al. A quantitative method for measuring innate phagocytosis by human monocytes using real-time flow cytometry. Cytometry A. 85 (4), 313-321 (2014).
  11. Joffe, A. M., Bakalar, M. H., Fletcher, D. A. Macrophage phagocytosis assay with reconstituted target particles. Nat Protoc. 15 (7), 2230-2246 (2020).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

CD163 CD235a
تقييم كمي للبلعمة لكريات الدم الحمراء الخيفية والغريبة بواسطة ضامة الفئران في المختبر
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.