نقدم بروتوكولا جديدا للحرمان الانتقائي من نوم حركة العين السريعة (REM) لدى القوارض.
Method Article
نقدم بروتوكولا جديدا للحرمان الانتقائي من نوم حركة العين السريعة (REM) لدى القوارض.
يصنف النوم بشكل عام إلى مراحل حركة العين السريعة (REM) ومراحل غير حركة العين السريعة، وقد تم تطوير تقنيات حرمان من النوم المختلفة لدراسة وظائفها. الطرق التقليدية — مثل التحفيز الميكانيكي أو إسقاط الحيوان أثناء نوم حركة العين السريعة — غالبا ما تؤدي إلى التعود السريع وتأثيرات ضغوط غير مقصودة، مما يجعل التفسير صعبا. هنا، نقدم طريقة جديدة ولطيفة ولطيفة لحرمان النوم بسبب حركة العين السريعة لدى القوارض: SNiFFer. من المعروف أن القوارض حساسة جدا للمحفزات الأنفية. في هذه الطريقة، تداعب فرشاة طلاء ناعمة أنف الحيوان بلطف أثناء نوم حركة العين السريعة، مما يثير الإثارة بشكل موثوق. لتطبيق هذه التقنية بشكل انتقائي أثناء نوم حركة العين السريعة، استخدمنا نظام تصنيف مراحل النوم الكهربائي الدماغي اللحظي المعتمد على الذكاء الاصطناعي. تم تفعيل التدخل فقط خلال نوبات حركة العين السريعة (REM)، وشملت مجموعة ضابطة مرتبطة بالقمامة، حيث تلقت نفس نمط التحفيز بغض النظر عن حالة النوم. طبقنا أيضا SNiFFer في نموذج تكييف الخوف لاختبار ما إذا كان حرمان من نوم حركة العين السريعة خلال 6 ساعات بعد التعلم يتداخل مع ترسيخ الذاكرة. مقارنة بالمجموعة المعتمدة على اليوك، أظهرت الحيوانات التي تم علاجها ب SNiFFer انخفاضا كبيرا في إجمالي نوبات حركة العين السريعة ومدة نوبات العين السريعة (REM)، مما يدل على خصوصية وفعالية الطريقة. في الختام، تقدم تقنية SNiFFer نهجا انتقائيا للغاية وطفيفا التوغل للحرب من نوم حركة العين السريعة في الفئران. يتيح التحكم الدقيق في الظروف التجريبية ويفتح آفاقا جديدة لدراسة دور نوم حركة العين السريعة في الذاكرة والإدراك—مع لمسة حساسة.
يلعب نوم حركة العين السريعة (REM) دورا محوريا في العمليات الإدراكية مثل ترسيخ الذاكرة 1,2. لدراسة الأهمية الوظيفية لنوم حركة العين السريعة في الدماغ، يستخدم حرمان من نوم حركة العين السريعة عادة كنهج تجريبي. حاليا، تستخدم أربع طرق رئيسية على نطاق واسع لتحفيز حرمان نوم حركة العين السريعة لدى القوارض: طريقة القرص الدوار1، طريقة الأصص3، طريقة نفخ الهواء4، وتقنيات التحفيز الجسدي5،6. بينما تعتبر طرق القرص الدوار وأصص الزهور فعالة جدا في القضاء على نوم حركة العين السريعة، إلا أنها غالبا ما تسبب ضغطا كبيرا على الحيوان، مثل التعرض للماء أو التعبالجسدي، مما قد يربك تفسير النتائج السلوكية والفسيولوجية. وبالمثل، تميل طرق النفخ الهوائي والتحفيز الجسدي التقليدية إلى نقل محفزات واسعة وغير محددة للجسم، مما يؤدي إلى تباين في شدة المنبه واختيار محدود لمجموعات الضابط4،8.
أجرينا مقارنة شاملة للأدبيات تغطي أكثر من ستة عقود من أبحاث حرمان نوم حركة العين السريعة (REM) ومرفوعة في الملف التكميلي 1 والجدول التكميلي 1. قمنا بدمج دراسات تأسيسية تاريخية، ميكانيكية، كيميائية عصبية، هرمونية، وسلوكية من خطوط البحث الرئيسية، بما في ذلك جوفيه، ريشتشافن، بيرغمان، توفيك، أندرسن، وبوربلي. الجدول التكميلي 1 ينظم الأوراق الرئيسية ترتيبا زمنيا. يتتبع التطور المنهجي لتقنيات حرمان النوم في حركة العين السريعة ويلخص نتائجها البيولوجية، والكيميائية العصبية، والهرمونية، والمناعية، وتنظيم الحرارة، والسلوك الرئيسي. نظرا لأن المخطوطة الحالية منظمة كمقال طرق وليس مراجعة تاريخية شاملة، فقد أضيفت كمعلومات إضافية.
ولمعالجة هذه القيود، طورنا طريقة جديدة تقدم انتقائية عالية لعلاج حرمان نوم حركة العين السريعة. تم تصميم هذه التقنية لحرمان القوارض من نوم حركة العين السريعة بشكل انتقائي بطريقة محكمة السيطرة بدقة. في هذا النهج، نحدد المحفز في أنف الحيوان—وهي من أكثر المناطق حساسية فيالقوارض. بالإضافة إلى ذلك، نستخدم نظام تصنيف مراحل النوم في الوقت الحقيقي بواسطة الذكاء الاصطناعي لاكتشاف وقطع نوبات نوم حركة العين السريعة ذات الخصوصية الزمنية10. يشير هذا النظام الذكائي إلى إشارة EEG في آخر 4 ثوان من قناة واحدة ويقيم مراحل نوم الفأرة الحالية. يتيح هذا الإعداد أيضا تنفيذ مجموعات التحكم المرتبطة باليوك، مما يسمح بتدخل متطابق زمنيا. على الرغم من تصنيفها كتقنية حرمان من نوم حركة العين السريعة القائمة على التحفيز الجسدي، إلا أن بروتوكولنا يختلف عن الطرق التقليدية. أولا، طبقنا تحليل مراحل النوم في الوقت الحقيقي باستخدام الذكاء الاصطناعي لتدخل دقيق ومتسق لحركة العين السريعة الخاصة. ثانيا، يحد منطقة التحفيز على أعلى الأنف فقط، وهو من أكثر المناطق حساسية في الفئران6، مما يؤدي إلى تباين طفيف في مدة وقوة التحفيز. وأخيرا، أنشأنا مجموعة ضابطة مقيدة تلقت نفس مقدار التحفيز للعوامل المسببة للتحكم في العوامل المعقدة. يقترح هذا البروتوكول طريقة للتحقيق في الوظائف الخاصة بنوم حركة العين السريعة.
لتقييم فائدة هذه الطريقة، طبقناها لدراسة دور نوم حركة العين السريعة في ترسيخ ذاكرة الخوف الأثري. أفادت دراسات سابقة أن حرمان نوم حركة العين السريعة يعيق ترسيخ ذاكرة الخوف المعتمدة على الحصين، بما في ذلك ذكريات الخوف المتأخرة11,12. ومع ذلك، هناك أدلة متضاربة حول تأثير حرمان نوم حركة العين السريعة على عمليات الذاكرة التي تنشط دوائر دماغية موزعة ومعقدة 5,13. يتطلب ترسيخ ذاكرة الخوف الأثري ارتباط صدمة قدم (محفز غير مشروط)، إشارة سمعية (محفز مشروط)، والمسافة الزمنية بينهما—وهي عملية معروفة بتجنيد عدة مناطق دماغية، بما في ذلك الحصين، والقشرة الجبهية الوسطى، واللوزة الدماغية14. لذلك، حرمنا الفئران من نوم حركة العين السريعة لمدة 6 ساعات مباشرة بعد تكييف الخوف15، وهي نافذة زمنية معروفة بأنها حاسمة لترسيخ الذاكرة16. باستخدام هذا البروتوكول، قمنا بتقييم تأثير حرمان نوم حركة العين السريعة على ترسيخ آثار الذاكرة التي تعتمد على النشاط المنسق للأنظمة العصبية الموزعة. تقدم هذه المقالة طريقة جديدة تصف بروتوكولا تجريبيا مفصلة يختبر التأثيرات.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
تمت الموافقة على جميع تجارب الحيوانات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية بجامعة تسوكوبا. تم استخدام ذكور وإناث فئران C57BL/6J (عمرها 11–13 أسبوعا، وزنها 20–35 جرام) في هذه الدراسة. القائمة الكاملة للمواد والأدوات المستخدمة في هذه الدراسة موفرة في جدول المواد.
1. زرع أقطاب EEG جراحية17
2. التعامل والتعود
3. تسجيل تخطيط الدماغ الأساسي
4. تكييف الخوف 18,19
5. حرمان من نوم حركة العين السريعة
6. اختبارات استرجاع الذاكرة
7. تحليل البيانات
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
زرع أقطاب تخطيط الدماغ الكهربائي الكهربائية جراحيا
يجب تخدير الفئران بالكامل أثناء الجراحة. إذا أظهرت علامات فشل في التخدير، مثل المعاناة، يجب إزالتها من البروتوكول. وبالمثل، إذا استمر النزيف لأكثر من 10 ثوان، فقد يسبب ضررا شديدا لدماغ الفأر، وينصح بإزالته من التجارب. بعد الجراحة، تستيقظ معظم الفئران عادة خلال ساعة واحدة. يجب أن تعود مشية وحركة العين إلى طبيعتها، مشابهة للحالات قبل الجراحة.
التعامل والاعتياد
إذا أظهر الف...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
يتيح هذا البروتوكول حرمان انتقائي من نوم حركة العين السريعة في الفئران التي لديها فئران تحكم مقيدة. على عكس الطرق التقليدية مثل تقنيات الوعاء الزهري والقرص الدوار، يسمح هذا النظام بتنفيذ مجموعات تحكم متطابقة بدقة، حيث تتلقى الحيوانات نفس التحفيز في نفس الوقت اليومي. علاوة على ذلك، يقلل هذا النهج من التفاوت في موقع التحفيز، وهو قيد شائع في الطرق التقليدية للتعامل اللطيف ونفخ الهواء. وبالتالي، قد تسمح هذه التقنية بعزل أكثر دقة لوظيفة نوم حركة العين السريعة.
خطوة...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح متنافسة.
نشكر ي. ناكاتا على تصنيف مرحلة النوم. نشكر جميع أعضاء IIIS. يدعم هذا العمل منح من AMED JP21zf0127005، JP21km0908001، JP23wm0525003، الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (JSPS) (26H02428، 24H00894، 23H02784، 22H00469، 16H06280 إلى M.S.، 23K19393 و24K18212 إلى I.K.، 25KJ0664 إلى C.K.، 24H00893 إلى T.N.)، ومؤسسة تاكيدا للعلوم.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| 5٪ جلوكوز | أوتسوكبا | 35061410 | |
| رأس 6 دبابيس | هيروسي | 172-0989 | |
| المادة اللاصقة | كونيشي | 16351 | |
| جهاز التخدير | شينانو سيساكوشو | SN-487-0T | |
| سكن التجعيد | هيروسي | 688-9095 | |
| مقبس التجعيد | هيروسي | 688-8982 | |
| Freezeflame4 | شركة ميد أسوشيتس | RRID:SCR_014429 | الإصدار 4.104 |
| منشور جراف باد | جراف باد | RRID:SCR_002798 | الإصدار 10.5.0 |
| الإيبوبروفين | طوكيو للصناعة الكيميائية | I0415 | |
| إيزوفلوران | فياتريس | 901036504 | |
| Loctite454 | هينكل | UFI: MAK2-7WRP-G202-F235 | |
| فأر (C57BL/6J) | مختبر جاكسون | RRID: IMSR_JAX:000664 | 11.0 - 13.0 أسبوعا في جلسة تكييف الخوف |
| فرشاة الطلاء | ناموراتايسيدو | 4943668000448 | إس دي فلات رقم 8، طول الرأس: 8.2 مم؛ العرض: 18.8 مم |
| سائل بروفينيس | شوفو | 21400BZZ00451000 | 250 مل |
| مسحوق بروفينيس | شوفو | 21400BZZ00451000 | 250 جرام |
| سليبساين ريكوردر | كيسي كومتك | RRID:SCR_018200 | الإصدار 1.2.10 |
| برغي من الفولاذ المقاوم للصدأ | يامازاكي | لا يوجد | φ 1.0 × 2.0 |
| الآلات الستيريوتاكسيكية القياسية | ALA ساينتيفك | 68038 | |
| زيت عباد الشمس | سيغما-ألدرتش | S5007-250ML | |
| البترولاتوم الأبيض | تايو للأدوية | K09-TS |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission