يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تغريدات CD8+CD103+ تخفف من مرض جفاف العين من خلال كبح الالتهاب الذي تسويته خلايا التائية CD4+ وحماية سلامة سطح العين لدى الفئران

316 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/69110

⸱

نوفمبر 21, 2025

 , 
1Department of Ophthalmology, Jinan Second People's Hospital

في هذه المقالة

ملخص

هنا، نقدم بروتوكولا يوضح نقل الخلايا التائية التنظيمية CD8+CD103+ كتدخل مناعي علاجي لتحسين مرض جفاف العين الناتج عن التوتر من خلال التعديل الشامل لاستجابات خلايا T الممرضة CD4+.

الملخص

تمثل خلايا T التنظيمية CD8+CD103+ مجموعة متخصصة في مثبط المناعة مع إثبات إمكانات علاجية في اضطرابات المناعة الذاتية؛ ومع ذلك، لا يزال دورها في التهاب سطح العين غير مستكشف. يصف هذا البروتوكول نهجا منهجيا لعزل خلايا CD8+CD103+ التائية من الفئران المعرضة لإجهاد الجفاف وتقييم فعاليتها العلاجية من خلال النقل التبني في أمراض جفاف العين التجريبية. تشمل المنهجية فرز الخلايا المنشطة مغناطيسيا لتنقية خلايا T CD8+CD103+، وتحفيز إجهاد الجفاف الموحد، وتقييمات وظيفية شاملة، بما في ذلك قياس إنتاج الدموع، واختبار نفاذية حاجز القرنية، والتحليل الجزيئي للوسطاء الالتهابيين. تظهر النتائج الممثلة أن علاج الخلايا التائية CD8+CD103+ أعاد إنتاج الدموع بشكل كبير، وحافظ على مجموعات خلايا الكأس الملتحمتة، وحافظ على سلامة حاجز الظهارة في القرنية. حقق العلاج قمعا كبيرا لتعبير إنزيم الميتالوبروتيناز المصفوف، وقلل من موت الخلايا الماستماتية، وعدل ملفات السيتوكينات من أنماط مضادة للالتهابات إلى أنماط حماية الأنسجة. قلل البروتوكول بشكل فعال من تسرب خلايا T CD4+ إلى أنسجة العين، مع تثبيط إنتاج IL-17A وIFN-γ الممرضين وتعزيز مستويات IL-13 الواقية. يوفر هذا النهج إطارا تجريبيا قويا للتحقيق في تعديل المناعة الذي تسويته خلايا T في CD8+CD103+ في اضطرابات سطح العين، ويؤسس منهجية أساسية لتطوير علاجات خلاوية جديدة لإدارة أمراض جفاف العين.

المقدمة

يمثل مرض جفاف العين (DED) اضطرابا شائعا ومعيقا في سطح العين، وقد أصبح مصدر قلق صحي عالمي كبير، حيث يؤثر على 10-30٪ من سكان العالم ويؤثر بشكل كبير على جودة حياة المرضى وإنتاجيتهم في العمل والصحة النفسية 1,2,3. تتضمن الفيزيولوجيا المرضية لمرض DED تداخلا معقدا بين عدم استقرار أغشية الدموع، والتهاب سطح العين، والاضطرابات الحسية العصبية، والتي تكرر معا دورة مفرغة من تلف الأنسجة وضعف وظيفي. على المستوى الجزيئي، تعمل فرط التنازل الناتج عن التمزق كآلية ممرضة مركزية، حيث تحفز أحداثا التهابية متتالية تنشط مسارات الاستجابة للإجهاد، وتحفز إفراز وسيط التهابي، وفي النهاية تضعف التوازن التجانسي الدقيق لبيئة سطح العين الدقيقة 5,6,7.

تهيمن الاستجابات المناعية التكيفية على المشهد المناعي لمرض DED، حيث تلعب المناعة التي توسطها خلايا T في CD4+ دورا محوريا في تنظيم تدهور سطح العين واستمرار الالتهاب المزمن8. تشكل خلايا T CD8+ مكونا أساسيا في مجموعة الخلايا المناعية الداميوستاتيكية الطبيعية داخل أنسجة العين، مع الحفاظ على المراقبة المناعية وسلامة الأنسجة تحت الظروف الفسيولوجية9. أظهرت التحقيقات الأساسية أن الإجهاد الجاف (DS) ينشط الخلايا التي تقدم المستضدات وبالتالي يجهز خلايا CD4+ التائية نحو الأنماط الممرضة، والتي يمكن أن تحفز تلقائيا التهاب الدمع القرني الملتحمة (KCS) عند نقلها بشكل تبني إلى فئران عارية تفتقر إلى خلايا T، مما يعيد تلخيص السمات الرئيسية ل DEDالبشرية 10,11.

نظرا للدور المركزي لاستجابات خلايا التائية غير المنظمة CD4+ في مسببات مرض DED، ظهرت استراتيجيات علاجية تستهدف تعديل مناعة الخلايا التائية الممرضة كطرق واعدة لإدارة هذا المرض. في هذا السياق، حظيت خلايا T التنظيمية CD8+ (Tregs)، وخاصة المجموعة الفرعية CD8+CD103+، باهتمام كبير بسبب قدراتها القوية على تثبيط المناعة ووظائفها الحامية للأنسجة عبر حالات مناعية ذاتية والتهابية متنوعة. تقوم هذه المجموعات التنظيمية المتخصصة بتعديل الاستجابات المناعية من خلال آليات متعددة، بما في ذلك القمع بواسطة السيتوكين، والتثبيط المباشر للاتصال بين الخلية، والتنظيم الأيضي لوظيفة الخلايا اللمفاوية الفعالة 12,13,14. يعمل إنتجين αEβ7 (CD103) كمستقبل توجيه حيوي يسهل تموضع الخلايا اللمفاوية داخل الظهارة عبر الأنسجة المخاطية، مما يمكن CD8+CD103+ Tregs من ممارسة تأثيرات تنظيمية مناعية موضعية في مواقع الالتهاب15.

هناك أدلة متزايدة على أن تريغس CD8+CD103+ لديها إمكانات علاجية كبيرة للتخفيف من التفاعلات المناعية الضارة في مجموعة من الحالات المخاطية المناعية الذاتية16،17،18. تظهر هذه الخلايا أنماط حركة فريدة تسمح بتراكمها التفضيلي في مواقع الغشاء المخاطي، حيث يمكنها بفعالية مواجهة الاستجابات المناعية المدمرة للأنسجة مع تعزيز الشفاء والتوازن الداخلي. بدأت الدراسات الحديثة في توضيح دور خلايا T CD8+CD103+ في مناعة سطح العين، مما يدل على توسعها العددي في العقد اللمفاوية العنقية بعد التعرض لل DS وقدرتها على الهجرة إلى أنسجة الملتحمة19، 20، 21، 22. ومع ذلك، وعلى الرغم من هذه الملاحظات المثيرة، لا تزال المساهمات الوظيفية المحددة لخلايا CD8+CD103+ في مسببات العين الجافة، وإمكاناتها العلاجية في تعديل تلف سطح العين الناتج عن خلايا CD4+ T غير مفهومة بشكل كامل.

يمثل النقل التبني ل CD8+CD103+ Tregs تقدما واضحا مقارنة بالطرق العلاجية التقليدية ل DED، بما في ذلك الدموع الصناعية، والعوامل المضادة للالتهابات، والأدوية المثبطة للمناعة، من خلال استهداف الآليات المناعية الممرضة الأساسية بدلا منمعالجة الأعراض فقط. على عكس العلاجات المثبطة للمناعة الجهازية التي تثبط وظيفة المناعة بشكل عام، يوفر التدخل القائم على CD8+CD103+ Treg تعديلا مستهدفا لاستجابات خلايا T الممرضة ل CD4+ مع الحفاظ على المناعة الوقائية24. يكمل هذا النهج العلاجات القائمة على الخلايا القائمة، مثل تطبيقات الخلايا الجذعية الميزنكيمية ونقل تريغ CD4+CD25+، من خلال توفير خصوصية محسنة للأنسجة المخاطية من خلال آليات التوجيه التي توسطها CD10325.

تشكل الفجوة المعرفية الحرجة المتعلقة بالآليات التنظيمية التي قد تؤثر بها خلايا CD8+CD103+ التائية على مسببات جفاف العين حاجزا كبيرا أمام تطوير تدخلات مناعية مستهدفة لهذه الحالة المعيقة. علاوة على ذلك، يتطلب التفاعل المعقد بين مجموعات الخلايا التائية التنظيمية والفعالة في التهاب سطح العين تحقيقا منهجيا لتحديد أهداف علاجية جديدة وتحسين استراتيجيات العلاج. تهدف هذه الدراسة إلى توصيف شامل لتنظيم الخلايا التائية CD8+CD103+ للعمليات الممرضة المدفوعة بخلايا T CD4+ في نموذج فأر راسخ لمرض جفاف العين. تتمثل الابتكار المنهجي الأساسي في العزل التسلسلي لخلايا CD8+CD103+ التنظيمية، يليه نقل تبني وتقييم شامل للقراءات الوظيفية والنسيجية والجزيئية لتحديد الفعالية العلاجية وتوضيح الآليات الأساسية. كان الهدف النهائي هو تعزيز فهمنا للاستجابات المناعية على سطح العين واكتشاف استراتيجيات علاجية محتملة لإدارة DED لدى البشر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم إجراء جميع الإجراءات التجريبية التي شملت وفقا لبيان ARVO لاستخدام في أبحاث العيون والرؤية، وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات التجريبية في مستشفى جينان الثاني للشعب. تم بذل كل الجهود لتقليل معاناة وتقليل عدد المستخدمة وفقا لمبدأ 3Rs (الاستبدال، التقليل، والتنقيح).

1. تحضير وتصميمه التجريبي

  1. احصل على إناث C57BL/6 فئران تتراوح أعمارها بين 6-8 أسابيع من منشأة مختبرية معتمدة (رمز السلالة: 027) بحالة صحية خالية من مسببات الأمراض محددة.
  2. المنزلية في بيئة مضبوطة، مع الحفاظ على دورات ضوئية وظلامية مدتها 12 ساعة (أضواء من 06:00 إلى 18:00)، ودرجة حرارة بين 22 ± 2 درجة مئوية، ورطوبة نسبية بين 50-60٪ باستخدام أنظمة المراقبة البيئية.
  3. اسمح للحيوانات بالتأقلم لمدة أسبوع قبل الإجراءات التجريبية مع توفير الطعام القياسي في المختبر والماء حسب الطلب.
  4. قم بتقسيم 32 فأرا عشوائيا إلى أربع مجموعات تجريبية (n = 8 لكل مجموعة) باستخدام العشوائية المولدة بالحاسوب: الضوابط غير المجهدة (NS)، إجهاد الجفاف وحده (DS)، إجهاد الجفاف باستخدام التحكم في المركبات (DS + VC)، وإجهاد الجفاف باستخدام علاج الخلايا التائية CD8+CD103+ (DS + CD8+CD103+).
    ملاحظة: راقب يوميا بحثا عن علامات الضيق، مثل انخفاض النشاط أو فقدان الوزن الذي يتجاوز 10٪.

2. استحث الإجهاد الجاف

  1. تحضير محلول سكوبولامين هيدروبروميد عن طريق إذابة 0.5 ملغ في 0.2 مل من محلول ملحي معقم مخزن بالفوسفات (PBS) قبل الاستخدام مباشرة، محققا تركيزا نهائيا قدره 2.5 ملغ/مل.
  2. أعط السكوبولامين تحت الجلد بجرعة 0.5 ملغ/كجم من وزن الجسم (حوالي 0.04 مل لكل 20 جرام فأر) أربع مرات يوميا في الساعة 8:00، 12:00، 15:00، و18:00 لمدة خمسة أيام متتالية باستخدام إبر 27-G.
  3. وضع مراوح ذات سرعة متغيرة لتوليد سحب هواء مستمر بسرعة موحدة تبلغ 15 م/ث تقاس عند مستوى القفص باستخدام معايرة رقمية لمقياس الهواء.
  4. حافظ على رطوبة البيئة تحت 40٪ باستخدام غرف التجفيف التي تحتوي على جل السيليكا المنشط (الدرجة 40، شبكة 6-12) مع مراقبة الظروف البيئية باستمرار باستخدام مقياسات الرطوبة الرقمية (دقة ±2٪ رطوبة نسبية).
  5. حافظ على درجة الحرارة عند 22 ± 1 درجة مئوية طوال فترة التعرض باستخدام أنظمة تحكم بيئي دقيقة مع مراقبة مستمرة.
  6. راقب مرتين يوميا بحثا عن علامات الجفاف أو فقدان الوزن (>15٪ تستحق الاستبعاد)، أو سلوكيات الضيق، بما في ذلك الإفراط في العناية أو تقليل النشاط.

3. CD8+CD103+ عزل وتنقية الخلايا التائية

  1. تضحي بفئران متبرعة تعرضت سابقا لإجهاد الجفاف باستخدام اختناق CO₂، تلاه خلع عنقي، وفقا لبروتوكولات القتل الرحيم المعتمدة.
  2. احصاد الطحال والعقد اللمفاوية السطحية العنقية تحت ظروف معقمة باستخدام أدوات معقمة في خزانة أمان بيولوجية، ووضع الأنسجة في وسط RPMI-1640 البارد جدا مع تغذية مصل أبقار جنيني بنسبة 10٪.
  3. تحضير معلقات خلية واحدة عن طريق تعطيل الأنسجة ميكانيكيا عبر مصفاة خلايا بحجم 70 ميكرومتر باستخدام مكابس معقمة، وغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS يحتوي على 2٪ FBS و1 ملليمولاوات إيثيلين ديامين رباعي أسيتيك حمض (EDTA).
  4. عزل خلايا CD8+ T باستخدام فرز الخلايا المنشطة مغناطيسيا باستخدام حبيبات مغناطيسية مضادة للأجسام المضادة لمادة CD8 الدقيقة المتوافقة مع الأجسام المضادة وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  5. تقييم بقاء الخلايا باستخدام اختبار استبعاد تريبان بلو (محلول 0.4٪)، مع عد الخلايا القابلة للحياة وغير القابلة للحياة باستخدام عداد الخلايا الآلي، مع الاستمرار فقط مع التحضيرات التي تتجاوز صلاحيتها 95٪.
  6. قم بإثراء التعبير عن CD103+ من خلال الحضانة المتسلسلة باستخدام الأجسام المضادة المضادة ل CD103-APC عند تخفيف 1:100 لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية في الظلام.
  7. إجراء فصل مغناطيسي ثانوي باستخدام حبيبات مضادة للألوفيكوكيانين (مضادة لحساسية APC) مع أعمدة LS للحصول على خلايا CD8+CD103+ مزدوجة الإيجابية وفقا لبروتوكولات الشركة المصنعة.
  8. تحقق من نقاء الخلية باستخدام قياس تدفق الخلايا عن طريق صبغ الأليكوات بأجسام مضادة مضادة ل CD8-FITC ومضادة ل CD103-APC، لضمان وجود >90٪ من الخلايا CD8+CD103+ مزدوجة الإيجابية قبل المتابعة.

4. بروتوكول النقل التبني

  1. تحضير تعليق خلايا T CD8+CD103+ بتركيز 5 × 106 خلايا/مل في محلول ملحي معقم مخزن بالفوسفات عن طريق الطرد المركزي للخلايا بقوة 300 × جرام لمدة 5 دقائق وإعادة تعليقها بحجم مناسب.
  2. حقن 1 ×10 6 خلايا في 200 ميكرولتر من PBS المعقمة داخل الصفاق في الأيام -2 و0 و+2 بالنسبة لبدء إجهاد الجفاف، مع ضمان الخلط اللطيف قبل كل حقن.
  3. إعطاء كميات مماثلة من PBS المعقمة لمجموعات التحكم باستخدام جدول وتقنية حقن متطابقة للحفاظ على اتساق التجارب.
  4. حافظ على تحضيرات الخلايا على الثلج وإكمال عمليات النقل خلال ساعتين من العزل للحفاظ على أفضل فعالية ووظيفة.
  5. تدوير مواقع الحقن بين أسفل البطن الأيسر والأيمن لتقليل الالتهاب الموضعي ومراقبة لمدة 24 ساعة بعد الحقن بحثا عن التفاعلات السلبية.

5. إجراء التقييم الوظيفي

  1. قياس إنتاج الدموع
    1. قم بالقياسات باستمرار في الساعة 8:00 مساء لمراعاة التغيرات اليومية في إنتاج الدموع.
    2. قيد الفأر بلطف باستخدام أجهزة تقييد مناسبة دون تخدير لتجنب التداخل مع آليات إنتاج الدموع الطبيعية.
    3. ضع خيط قطني مشبع بالفينول الأحمر في الجزء السفلي من الملتحمة لمدة 15 ثانية باستخدام ملقط دقيق الرأس.
    4. قس طول الخيط المبلل فورا باستخدام الكاليبر الرقمية الدقيقة (الدقة ± 0.01 مم) تحت ظروف إضاءة فلورية موحدة.
  2. تقييم وظيفة حاجز القرنية26
    1. قم بتخدير الفأر لفترة وجيزة باستنشاق 2٪ من الأيزوفلوران أثناء تطبيق جهاز التتبع لضمان غرس دقيق.
    2. قم بزرع 0.5 ميكرولتر من محلول أوريغون الأخضر-ديكستران بقوة 50 ملغ/مل على السطح المركزي للقرنية باستخدام ميكروبيبت دقيقة ذات رؤوس إزاحة إيجابية.
    3. اشطف القرنيات جيدا بمحلول ملحي معقم خمس مرات بعد دقيقة حضانة واحدة لإزالة الفائض من المواد، مما يضمن إزالة فلورة السطح بالكامل.
    4. صور القرنيات فورا باستخدام المجهر الفلوري مع مجموعة مرشح فلوريسين إيزوثيوسيانات (FITC) (الإثارة 490 نانومتر، الانبعاث 525 نانومتر) ومعايير التعريض الموحدة.
    5. قم بقياس شدة الفلورة باستخدام برنامج ImageJ مع بروتوكولات اختيار منطقة الاهتمام وطرح الخلفية المتسقة.
      1. حول الصور إلى تدرجات رمادية 8-بت، وحدد منطقة دائرية موحدة (ROI) تغطي قطر القرنية المركزي البالغ 3 مم.
      2. قس القيمة الرمادية المتوسطة، وطرح التألق الخلفي المقاس من منطقة غير قرنية مجاورة، والتعبير عن النتائج كفلورة كلية مصححة (CTF) المحسوبة كالتالي: CTF = الكثافة المتكاملة - (مساحة عائد الاستثمار × متوسط التألق الخلفي)22.

6. المعالجة والتحليل النسيجي

  1. قم بإزالة العيون والهياكل المحيطة بها فور القتل الرحيم، ثم تثبيتها في 4٪ بارافورمالديهايد لمدة 24 ساعة أو غرس في مركب درجة حرارة القطع المثلى (OCT) للأقسام المجمدة، لضمان التوجيه الصحيح لتقسيم الأجزاء السهمي.
  2. تحضير مقاطع سهمية متسلسلة (6 ميكرومتر للمجمد، 5 ميكرومتر للبارافين) باستخدام معالم تشريحية موحدة (العصب البصري كنقطة مرجعية) لمستويات تقسيم متسقة عبر جميع العينات.
  3. إجراء تلوين حمضي-شيف الدوري (PAS) لقياس خلايا الكأس باستخدام بروتوكولات موحدة مع ضوابط إيجابية وسالبة مناسبة.
  4. نفذ صبغة الفلورة المناعية باستخدام الأجسام المضادة الأساسية: مضاد MMP-3 (1:200)، مضاد MMP-9 (1:100)، كاسباز-3 مضاد للتنشيط (1:300)، كاسباز-8 مضاد للتنشيط (1:200)، ومضاد CD4 (1:100) مع الحضانة الليلية عند 4 درجات مئوية.
  5. قم بقياس خلايا الكأس لكل مليمتر من طول الملتحمة باستخدام طرق أخذ عينات منهجية، وعد الخلايا في خمسة حقول عالية القدرة غير متداخلة لكل مقطع ومتوسط النتائج.

7. التحليل الجزيئي

  1. استخلاص الحمض النووي الريبي الكلي من أنسجة الملتحمة والقرنية المجمعة باستخدام بروتوكولات استخراج موثقة27.
  2. تخليق cDNA وPCR الكمي في الوقت الحقيقي28
    1. تحضير خلطات تفاعل النسخ العكسي تحتوي على 1 ميكروغرام من إجمالي RNA، وبادئات أوليغو-dT (50 ميكرومولار)، وبادئات سداسية عشوائية (100 ميكرومولار)، وإنزيم النسخ العكسي، ومخزن تفاعل، وماء خال من النوكلياز في حجم نهائي يبلغ 20 ميكرولتر.
    2. حضن خلطات التفاعل في جهاز دورة حراري عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة للسماح بتخليق cDNA في السلسلة الأولى.
    3. يعطل إنزيم النسخ العكسي عن طريق التسخين عند 85 درجة مئوية لمدة 5 ثوان، ثم يبرد إلى 4 درجات مئوية ويخزن cDNA عند -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.
    4. تم تخفيف تصنيع cDNA بنسبة 1:10 مع ماء خال من النوكلياز لاستخدامه كقالب في تفاعلات PCR اللاحقة.
    5. تحضير خلطات تفاعل PCR في الوقت الحقيقي (حجم نهائي 20 ميكرولتر) تحتوي على 1 ميكرولتر من قالب cDNA مخفف، وبادئات أمامية وعكسية (تركيز نهائي 0.2 ميكرومولار لكل منهما)، وخليط SYBR Green الرئيسي، وماء خال من النوكلياز.
    6. تحميل عينات في ثلاث نسخ إلى ألواح تفاعل بصرية بسعة 96 بئرا، بما في ذلك ضوابط بدون قالب لكل زوج من البرايمر.
    7. برمج جهاز الدورة الحرارية بالشروط التالية: إزالة الطبيعة الأولية عند 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق، تليها 40 دورة من إزالة الطبيعة (95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية)، والتلدين (60 درجة مئوية لمدة 30 ثانية)، والتمديد (72 درجة مئوية لمدة 30 ثانية).
    8. أضف مرحلة منحنى التفكك مباشرة بعد التضخيم: 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية، 60 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة، ثم زيادة تدريجية في درجة الحرارة إلى 95 درجة مئوية بمعدل 0.3 درجة مئوية/ثانية للتحقق من تضخيم المنتج الواحد.
    9. تحليل منحنيات التضخيم وقيم عتبة الدورة (Ct) باستخدام برامج الأجهزة، لضمان كفاءة التضخيم بين 90-110٪ لجميع أزواج البرايمر.
    10. تطبيع التعبير الجيني المستهدف (IL-17A، IFN-γ، IL-13، MMP-3، وMMP-9) لجين التدبير المنزلي GAPDH باستخدام طريقة 2-ΔΔCt .
    11. استخدم تسلسلات البرايمر كما هو محدد في الجدول 1 لجميع الجينات المستهدفة والمرجعية.
  3. قم بقياس مستويات بروتين السيتوكين في مستخلصات الأنسجة باستخدام مجموعات ELISA التجارية المتوفرة مع منحنيات معيارية مناسبة وضوابط جودة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يؤدي التنفيذ الناجح لهذا البروتوكول إلى تحسين شامل لأمراض سطح العين الناتجة عن الإجهاد الجاف من خلال تعديل المناعة بواسطة خلايا T CD8+CD103+. تظهر النتائج الإيجابية استعادة كبيرة لإنتاج الدموع، حيث تحقق عادة ما 60-80٪ من التعافي مقارنة بالحيوانات غير المجهدة، بينما تظهر المعالجة بالمركبات عجزا مستمرا في الدموع (الشكل 1A).

يحافظ العلاج الناجح على مجموعات خلايا الكأس ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تؤسس هذه الدراسة أن خلايا T التنظيمية CD8+CD103+ هي عوامل علاجية قوية تجف أمراض جفاف العين الناتجة عن الإجهاد من خلال التعديل الشامل للاستجابات المرضية التي تسببها خلايا T في CD4+. تكشف النتائج أن النقل التبني لخلايا CD8+CD103+ يحقق حماية متعددة الجوانب لسلامة سطح العين، بما في ذلك استعادة إنتاج الدموع الوظيفية، والحفاظ على بنية الغشاء المخاطي، والحفاظ على وظيفة الحاجز الطلائي، وقمع تلف الأنسجة الالتهابية.

تظهر هذه الأبحاث أن Tregs CD8+CD103+ تلعب دورا قمعيا ف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه لا توجد مصالح متنافسة، مالية أو غير ذلك، قد تؤثر بشكل غير مناسب على العمل الموصوف في هذه المخطوطة.

شكر وتقدير

نشكر الدعم الفني الذي قدمه طاقم المختبر في مستشفى جينان الثاني الشعبي وموظفي منشأة رعاية الذين حافظوا على ظروف السكن المثالية طوال فترة التجارب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الأجسام المضادة المضادة لمادة CD103-APCالأسطورة الحيويةنسخة 2E7قياس تدفق الخلايا وفرز الخلايا
الحبيبات الدقيقة المغناطيسية المضادة ل CD8ميلتيني بيوتيك-فصل الخلايا المغناطيسية
القرنية، أوريغون أخضر-يمين-يمين.إنفيتروجينD7172الوزن الجزيئي 70,000
مجموعة ELISA IFN-& Gamma;العلوم الحيوية الإلكترونيةBMS606قياس السيتوكين
مجموعة إليسا IL-13العلوم الحيوية الإلكترونيةBMS6015قياس السيتوكين
مجموعة إليسا IL-17Aالعلوم الحيوية الإلكترونيةBMS6001قياس السيتوكين
ImageJالمعاهد الوطنية للصحةالإصدار 1.53k
خيوط قطن الفينول الأحمرزون-كويك، يوكوتا-قياس إنتاج الدموع
هيدروبروميد سكوبولامينميلونفارماMB5860الخصم المسكاريني

المراجع

  1. Tang, Q., et al. Selective decrease of donor-reactive T(regs) after liver transplantation limits T(reg) therapy for promoting allograft tolerance in humans. Sci Transl Med. 14 (669), eabo2628(2022).
  2. Harrell, C. R., Feulner, L., Djonov, V., Pavlovic, D., Volarevic, V. The molecular mechanisms responsible for tear hyperosmolarity-induced pathological changes in the eyes of dry eye disease patients. Cells. 12 (23), 2755(2023).
  3. Britten-Jones, A. C., et al. Epidemiology and risk factors of dry eye disease: considerations for clinical management. Medicina (Kaunas). 60 (9), 1458(2024).
  4. Bhujbal, S., Rupenthal, I. D., Steven, P., Agarwal, P. Inflammation in dry eye disease-pathogenesis, preclinical animal models, and treatments. J Ocul Pharmacol Ther. 40 (10), 638-658 (2024).
  5. Nieto-Aristizabal, I., Mera, J. J., Giraldo, J. D., Lopez-Arevalo, H., Tobon, G. J. From ocular immune privilege to primary autoimmune diseases of the eye. Autoimmun Rev. 21 (8), 103122(2022).
  6. Sheppard, J., Shen Lee, B., Periman, L. M. Dry eye disease: identification and therapeutic strategies for primary care clinicians and clinical specialists. Ann Med. 55 (1), 241-252 (2023).
  7. Rolando, M., Merayo-Lloves, J. Management strategies for evaporative dry eye disease and future perspective. Curr Eye Res. 47 (6), 813-823 (2022).
  8. Vereertbrugghen, A., et al. CD4+ T cells drive corneal nerve damage but not epitheliopathy in an acute aqueous-deficient dry eye model. Proc Natl Acad Sci U S A. 121 (48), e2407648121(2024).
  9. Yaman, E., et al. Mouse corneal immune cell heterogeneity revealed by single-cell RNA sequencing. Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (12), 29(2024).
  10. Niederkorn, J. Y., et al. Desiccating stress induces T cell-mediated Sjogren's syndrome-like lacrimal keratoconjunctivitis. J Immunol. 176 (7), 3950-3957 (2006).
  11. Ogawa, Y., Takeuchi, T., Tsubota, K. Autoimmune epithelitis and chronic inflammation in Sjogren's syndrome-related dry eye disease. Int J Mol Sci. 22 (21), 11820(2021).
  12. Flippe, L., Bezie, S., Anegon, I., Guillonneau, C. Future prospects for CD8+ regulatory T cells in immune tolerance. Immunol Rev. 292 (1), 209-224 (2019).
  13. Olson, K. E., Mosley, R. L., Gendelman, H. E. The potential for Treg-enhancing therapies in nervous system pathologies. Clin Exp Immunol. 211 (2), 108-121 (2023).
  14. Boonpiyathad, T., Sozener, Z. C., Akdis, M., Akdis, C. A. The role of Treg cell subsets in allergic disease. Asian Pac J Allergy Immunol. 38 (3), 139-149 (2020).
  15. Xu, W., Bergsbaken, T., Edelblum, K. L. The multifunctional nature of CD103 (αEβ7 integrin) signaling in tissue-resident lymphocytes. Am J Physiol Cell Physiol. 323 (4), C1161-C1167 (2022).
  16. Zhang, X., et al. CD8+CD103+ iTregs inhibit chronic graft-versus-host disease with lupus nephritis by the increased expression of CD39. Mol Ther. 27 (11), 1963-1973 (2019).
  17. Liu, Y., et al. Phenotypic and functional characteristic of a newly identified CD8+ Foxp3- CD103+ regulatory T cells. J Mol Cell Biol. 6 (1), 81-92 (2014).
  18. Chen, Q., et al. CD8+ CD103+ iTregs protect against ischemia-reperfusion-induced acute kidney injury by inhibiting pyroptosis. Apoptosis. 29 (9-10), 1709-1722 (2024).
  19. Kaneko, N., et al. Cytotoxic CD8+ T cells may be drivers of tissue destruction in Sjogren's syndrome. Sci Rep. 12 (1), 15427(2022).
  20. Kudryavtsev, I., et al. Circulating CD8+ T cell subsets in primary Sjogren's syndrome. Biomedicines. 11 (10), 2778(2023).
  21. Heidari, M., Noorizadeh, F., Wu, K., Inomata, T., Mashaghi, A. Dry eye disease: emerging approaches to disease analysis and therapy. J Clin Med. 8 (9), 1439(2019).
  22. Ibiayo, A. G., Varinthra, P., Nagarajan, M., Liu, I. Y. Coniferaldehyde reverses 3-nitropropionic acid-induced Huntington's disease pathologies via PKM2 restoration and JAK2/STAT3 inhibition. Mol Med. 31 (1), 271(2025).
  23. Loi, J. K., et al. Corneal tissue-resident memory T cells form a unique immune compartment at the ocular surface. Cell Rep. 39 (8), 110852(2022).
  24. Kennedy-Batalla, R., et al. Treg in inborn errors of immunity: gaps, knowns and future perspectives. Front Immunol. 14, 1278759(2023).
  25. Suffia, I., Reckling, S. K., Salay, G., Belkaid, Y. A role for CD103 in the retention of CD4+CD25+ Treg and control of Leishmania major infection. J Immunol. 174 (9), 5444-5455 (2005).
  26. De Paiva, C. S., et al. IL-17 disrupts corneal barrier following desiccating stress. Mucosal Immunol. 2 (3), 243-253 (2009).
  27. Rio, D. C., Ares, M. Jr, Hannon, G. J., Nilsen, T. W. Purification of RNA using TRIzol (TRI reagent). Cold Spring Harb Protoc. 2010 (6), (2010).
  28. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(−ΔΔC(T)) method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  29. Zareh, H., et al. Doxycycline versus curcumin for inhibition of matrix metalloproteinase expression and activity following chemically induced inflammation in corneal cells. J Ophthalmic Vis Res. 19 (3), 273-283 (2024).
  30. Yang, X., et al. IFN-gamma facilitates corneal epithelial cell pyroptosis through the JAK2/STAT1 pathway in dry eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 64 (3), 34(2023).
  31. Lollett, I. V., Galor, A. Dry eye syndrome: developments and lifitegrast in perspective. Clin Ophthalmol. 2018, 125-139 (2018).
  32. Zhang, X., et al. CD8+ cells regulate the T helper-17 response in an experimental murine model of Sjogren syndrome. Mucosal Immunol. 7 (2), 417-427 (2014).
  33. Zhou, H., Yang, J., Tian, J., Wang, S. CD8+ T lymphocytes: crucial players in Sjogren's syndrome. Front Immunol. 11, 602823(2020).
  34. Lu, Z., et al. Rapid and quantitative detection of tear MMP-9 for dry eye patients using a novel silicon nanowire-based biosensor. Biosens Bioelectron. 214, 114498(2022).
  35. Burgalassi, S., et al. Functionalized hyaluronic acid for "in situ" matrix metalloproteinase inhibition: a bioactive material to treat the dry eye syndrome. ACS Macro Lett. 11 (10), 1190-1194 (2022).
  36. Chen, X., et al. Tc17/IL-17A up-regulated the expression of MMP-9 via NF-kappaB pathway in nasal epithelial cells of patients with chronic rhinosinusitis. Front Immunol. 9, 2121(2018).
  37. Alam, J., et al. IL-17 producing lymphocytes cause dry eye and corneal disease with aging in RXRalpha mutant mouse. Front Med (Lausanne). 9, 849990(2022).
  38. Flores-Pliego, A., et al. Matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) is an endogenous activator of the MMP-9 secreted by placental leukocytes: implication in human labor. PLoS One. 10 (12), e0145366(2015).
  39. You, Y., et al. Investigation of conjunctival goblet cell and tear MUC5AC protein in patients with Graves' ophthalmopathy. Transl Vis Sci Technol. 12 (10), 19(2023).
  40. Tukler Henriksson, J., Coursey, T. G., Corry, D. B., De Paiva, C. S., Pflugfelder, S. C. IL-13 stimulates proliferation and expression of mucin and immunomodulatory genes in cultured conjunctival goblet cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (8), 4186-4197 (2015).
  41. Fang, Z., et al. Clinical ocular surface characteristics and expression of MUC5AC in diabetics: a population-based study. Eye (Lond). 38 (16), 3145-3152 (2024).
  42. Garcia-Posadas, L., et al. Interaction of IFN-gamma with cholinergic agonists to modulate rat and human goblet cell function. Mucosal Immunol. 9 (1), 206-217 (2016).
  43. Volpe, E. A., et al. Interferon-gamma deficiency protects against aging-related goblet cell loss. Oncotarget. 7 (40), 64605-64614 (2016).
  44. Gustafsson, J. K., Hansson, G. C. Immune regulation of goblet cell and mucus functions in health and disease. Annu Rev Immunol. 43 (1), 169-189 (2025).
  45. Lin, N., et al. Ectoine enhances mucin production via restoring IL-13/IFN-gamma balance in a murine dry eye model. Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (6), 39(2024).
  46. Ogawa, Y., Shimizu, E., Tsubota, K. Interferons and dry eye in Sjogren's syndrome. Int J Mol Sci. 19 (11), 3548(2018).
  47. Zhang, X., et al. Interferon-gamma exacerbates dry eye-induced apoptosis in conjunctiva through dual apoptotic pathways. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (9), 6279-6285 (2011).
  48. Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624(2025).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

CD4
الفيديو قريباً
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.