هنا ، نقدم بروتوكولا لفحص كيفية تنظيم lncPVT1 لاستقرار HIF-1α والتعبير الجيني المحلل للسكر في خلايا سرطان الغدة الدرقية ، مما يتيح دراسة تنظيم التمثيل الغذائي والأهداف العلاجية المحتملة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
هنا ، نقدم بروتوكولا لفحص كيفية تنظيم lncPVT1 لاستقرار HIF-1α والتعبير الجيني المحلل للسكر في خلايا سرطان الغدة الدرقية ، مما يتيح دراسة تنظيم التمثيل الغذائي والأهداف العلاجية المحتملة.
باعتباره سرطان الغدد الصماء الأول ، يظهر سرطان الغدة الدرقية اتجاها وبائيا متسارعا بين السكان. على الرغم من التقدم في طرائق العلاج ، لا يزال التكرار والورم الخبيث يمثلان تحديات. ظهر الحمض النووي الريبي الطويل غير المشفر PVT1 (lncPVT1) كمنظم مسرطن محفوظ في أنواع متعددة من السرطان ، ومع ذلك فإن وظيفته المحددة في TC تتطلب مزيدا من الاستكشاف. ركز بحثنا على فحص كيفية تأثير lncPVT1 على تحلل السكر في ظل كل من ظروف نورموكسيك ونقص الأكسجين باستخدام خطوط خلايا TC TPC-1 و K1. أدى الإفراط في التعبير عن lncPVT1 إلى تعزيز استهلاك الجلوكوز وإنتاج اللاكتات بشكل كبير تحت نقص الأكسجة ، مما يؤكد قدرته على زيادة تحلل السكر. علاوة على ذلك ، قام lncPVT1 بتنظيم جينات تحلل السكر الرئيسية مثل GLUT1 و HK1 و HK2 و PGK1 ، وسهل تكاثر خلايا TC. ميكانيكيا ، استقر lncPVT1 العامل المحفز لنقص الأكسجة 1α (HIF-1α) عن طريق إعاقة تحللها وتؤدي إلى تراكمها. ثم يرتبط هذا HIF-1α المتراكم بتسلسلات تنظيمية محددة تتحكم في التعبير عن الجينات المشاركة في تحلل السكر ، مما يؤدي في النهاية إلى تنشيط هذه الجينات وتعزيز نشاط تحلل السكر. توضح النتائج التي توصلنا إليها أن lncPVT1 ينظم استقرار HIF-1α والتعبير الجيني المحلل للسكر ، مما يعزز فهمنا لعملية التمثيل الغذائي TC ويحتمل أن يكشف عن أهداف علاجية جديدة.
شهد سرطان الغدة الدرقية (TC) ، وهو ورم خبيث شديد الانتشار في الغدد الصماء ، زيادة سريعة في معدلات الإصابة1. على الرغم من التقدم في الاستراتيجيات العلاجية ، بما في ذلك الإجراءات الجراحية والعلاج الإشعاعي والعلاج الهرموني للغدة الدرقية ، لا تزال نسبة كبيرة من مرضى TC يواجهون خطر تكرار الورم والورم الخبيث ، مما يؤكد الحاجة إلى فهم أعمق للتسبب الجزيئي2،3. يرتبط تطوير TC بالعديد من عوامل الخطر الراسخة ، بما في ذلك التعرض للإشعاع المؤين ، والتلامس مع المواد الكيميائية المسرطنة ، وتعاطي التبغ ، والسمنة. ومع ذلك ، فإن الآليات الأساسية المعقدة لا تزال بعيدة المن....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
زراعة الخلايا والتعداء
تمت زراعة خطوط خلايا سرطان الغدة الدرقية البشري (TC) TPC-1 و K1 في وسط النسر المعدل (DMEM) من Dulbecco الذي يحتوي على 4.5 جم / لتر من الجلوكوز ، مكملا ب 10٪ مصل أبقار الجنين و 100 ميكروغرام / مل البنسلين الستربتومايسين. تم الحفاظ على الخلايا عند 37 درجة مئوية في حاضنة مرطبة تحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربون2. لعلاج نقص الأكسجة ، تم نقل 1 × 105 خلايا إلى غرفة محكمة الغلق لنقص الأكسجين متوازنة مع 1٪ O2 و 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 و 94٪ N2 عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة ، ما لم ينص على خلاف ذلك. تم إنشاء الإفراط في التعبي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تحلل السكر المعزز في خطوط خلايا TC بوساطة lncPVT1
أنشأنا في البداية lncPVT1 OE و NC في خلايا TPC-1 و K1 باستخدام نظام تعبير الفيروسات العدسية. تم تأكيد الإفراط في التعبير الناجح عن lncPVT1 بواسطة qRT-PCR (الشكل 1A-B). لتقييم التأثير على تحلل السكر ، تمت زراعة الخلايا تحت نورموكسيا ونقص الأكسجة لمدة 24 ساعة. أشارت النتائج التي توصلنا إليها إلى أن نقص الأكسجة عزز بشكل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
باعتباره أكثر الأورام الخبيثة في الغدد الصماء شيوعا ، يشكل TC تحديات كبيرة من حيث تكراره ورم خبيث22. لا يزال المشهد الميكانيكي لتكوين الغدة الدرقية غير محدد بشكل كامل ، لا سيما فيما يتعلق بالتنظيم بوساطة lncRNA لإعادة البرمجة الأيضية المسرطنة والسلوكيات الخلوية الأساسية23 . في هذه الدراسة ، ركزنا على lncPVT1 المسرطم وتأثيره على تحلل السكر واستقرار HIF-1α في خلايا TC.
يمثل تأثير واربورغ توقيعا أيضيا أساسيا في الأو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ويؤكد المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح، سواء كان ماليا أو غير مالي.
تم توفير تمويل البحث من خلال مشروع خطة فوجيان للعلوم والتكنولوجيا (2022J01784).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مجموعة فحص بروتين BCA | ميلونبيو | MA0082-2 | مقايسة القياس الكمي للبروتين WB |
| خزانة السلامة الحيوية | ليشين | HFsafe-1200LC | مرور الخلية وتوسعها |
| الطرد المركزي | بايانج | ب 320 أ | خلايا الطرد المركزي |
| نظام التصوير الكيميائي | بيو راد (الولايات المتحدة الأمريكية) | ChemiDoc تاتش | البنك الدولي للتطوير |
| حاضنة ثاني أكسيد الكربون < الفرعية > 2 < / > | ثيرمو (الولايات المتحدة الأمريكية) | 311 | ثقافة الخلية |
| طقم الكشف عن التلألؤ الكيميائي ECL | ميلونبيو | م 0186-1 | البنك الدولي للتطوير |
| مقياس التدفق الخلوي | دينار بحريني | فاكس كالبر | فحص موت الخلايا المبرمج لقياس التدفق الخلوي |
| مجهر مضان مقلوب | نيكون (اليابان) | TS2-FL | مراقبة الخلية |
| أداة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي الفلوري | ABI (الولايات المتحدة الأمريكية) | 7300 | تجربة تفاعل البوليميراز المتسلسل |
| جابد دي | بروتين تك | 60004-1-آي جي | الأجسام المضادة المرجعية الداخلية WB |
| طقم فحص الجلوكوز | جيانتشنغ | أ 154-1-1 | الفحص الكيميائي الحيوي |
| HIF1A | بوستر | أ 00013 | الأجسام المضادة WB |
| HRP المقترن Affinipure الماعز المضاد للفأر IgG (H + L) | بروتين تك | SA00001-1 | تجربة الكيمياء المناعية (IHC) |
| HRP المقترن Affinipure الماعز المضاد للأرانب IgG (H + L) | بروتين تك | SA00001-2 | تجربة الكيمياء المناعية (IHC) |
| خط خلية K1 | بنك الخلية التابع للأكاديمية الصينية للعلوم (شنغهاي ، الصين) | NA | خط خلايا سرطان الغدة الدرقية الحليمي البشري |
| طقم فحص حمض اللاكتيك | جيانتشنغ | أ019-2-1 | الفحص الكيميائي الحيوي |
| قارئ الصفيحة الصغيرة | ثيرمو (الولايات المتحدة الأمريكية) | ك 3 | كشف ELISA |
| طقم تحضير جل فائق السرعة من بيج (15٪) | ميلونبيو | إم0384 | الرحلان الكهربائي WB |
| أداة PCR | بيو راد (الولايات المتحدة الأمريكية) | بي تي سي 100 | تجربة تفاعل البوليميراز المتسلسل |
| علامة بروتين قوس قزح ملطخة مسبقا | ميلونبيو | م إيه 0342 | الرحلان الكهربائي WB |
| نظام الرحلان الكهربائي العمودي للبروتين | بيو راد (الولايات المتحدة الأمريكية) | باور باك 200 | الرحلان الكهربائي WB |
| المخزن المؤقت لتحميل البروتين SDS-PAGE (5X) | بيوتايم | P0015L | الرحلان الكهربائي WB |
| كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) | سيغما | 151-21-3 | الرحلان الكهربائي WB |
| خط خلية TPC-1 | بنك الخلية التابع للأكاديمية الصينية للعلوم (شنغهاي ، الصين) | NA | خط خلايا سرطان الغدة الدرقية البشري |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.