Method Article

إجراء أخذ عينات الفينول المعتمد على الخيط الأحمر لعلاج الدهون غير المستهدفة لسائل الدموع في اكتشاف المؤشرات الحيوية

DOI:

10.3791/69474

⸱

December 12th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Centre for Myopia Research, School of Optometry, The Hong Kong Polytechnic University, 2Centre for Eye and Vision Research (CEVR), 3Department of Food Science and Nutrition, The Hong Kong Polytechnic University, 4Research Centre for SHARP Vision (RCSV), The Hong Kong Polytechnic University, 5Department of Applied Biology and Chemical Technology, The Hong Kong Polytechnic University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول بروتوكولا سريريا فريدا لجمع عينات من سائل الدموع البشرية باستخدام خيوط الفينول الحمراء وسير عمل قائم على الكروماتوغرافيا السائلة - مطيافية الكتلة المزدوجة (LC-MS/MS) لاكتشاف ملف الدهون التمزقي. تمكن طريقة الفصل ثنائي الطور بين ميثيل ترت-بيوتيل إيثر (MTBE)/الميثانول البسيط استخلاص دهون التمزق بسرعة مع استعادة عالية لاكتشاف علامات التمزق الحيوية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الدهون الناتجة عن الدموع ضرورية لاستقرار طبقة الدموع وصحة سطح العين. قد ترتبط التغيرات في تركيب الدموع بأمراض العين والجهازية مثل خلل الغدة الميبومية وخلل شحمية الدم. قد يساعد تحليل الديناد الدموعية في اكتشاف المؤشرات الحيوية لتشخيص المرض وإدارته. ومع ذلك، فإن طرق أخذ عينات الدموع الشائعة تقدم حدودا واضحة: غالبا ما تسبب شرائط شيرمر تهيج وعدم راحة في العين بسبب مساحة تلامسها الكبيرة مع سطح العين، بينما قد يؤدي جمع الأنابيب الدقيقة إلى انخفاض قابلية التكرار بسبب تباين المشغل، خاصة عند القيام به من قبل أشخاص مختلفين. قد تؤثر هذه القيود على دقة واتساق بيانات الدهون. تقدم هذه الدراسة طريقة أخذ عينات قليلة التوغل تعتمد على خيط الفينول الأحمر (PRT) ومحسنة لعلاج دهون الدموع. الهيكل الرقيق لجهاز PRT يقلل من خطر تهيج العين ويسمح بجمع الدموع بسرعة وهدوء. هذه الطريقة سهلة الاستخدام وسهلة التنفيذ مناسبة للأشخاص الذين يعانون من انخفاض حجم التمزق أو تحمل أقل لإحساس الأجسام الغريبة، كما أنها تتيح جمع عينات أكثر قابلية للتكرار من خلال تقليل التغير المعتمد على المشغل. تم استخراج الدهون المدمعة التي جمعها PRT باستخدام بروتوكول فصل طور محسن من الميثانول/ميثيل تيرت-بيوتيل إيثر (MTBE) وتم تحليلها بواسطة LC-Orbitrap-IQX MS/MS عالي الدقة باستخدام برنامج LipidSearch. حدد سير العمل أكثر من 700 نوع فريد من دهون الدموع، كل منها يتميز بأيونات منتجية مشتقة من الأحماض الدهنية. تشير هذه النتائج إلى أن أخذ العينات المعتمد على PRT يوفر استعادات دهنية قوية لتحليل الدهون الدموعية. يوفر هذا النهج طفيف التوغل والقابل للتكرار منصة عملية للأبحاث السريرية والتجريبية لدهون الدموع. في النهاية، قد يسهل ذلك أيضا اكتشاف المؤشرات الحيوية ومراقبة الأمراض.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

طبقة الدموع هي الحاجز الخارجي الذي يحمي سطح العين من مسببات الأمراض ويحافظ على توازن العين 1,2، بينما طبقة الدهون في طبقة الدموع هي المكون الأساسي لمنع تبخر الدموع والحفاظ على استقرار فيلم الدموع 3,4. تم ربط خلل تنظيم تركيبة دهون الدموع بأمراض عيون مختلفة، بما في ذلك مرض جفاف العين (DED)، وخلل الغدة الميبومية (MGD)، والتهاب الملتحمة التحسسي 5,6,7,8. نتيجة لذلك، أصبح التوصيف الدقيق لدهن الدموع اتجاها بحثيا حاسما ورائجا لفهم أكثر شمولا للأمراض الجزيئية الكامنة وراءهذه الحالات البصرية.

بينما يحمل نهج علاج الدهون بالدموع أهمية سريرية كبيرة، فإن التحدي الحاسم في طب الدهون الدموعية هو إنشاء سير عمل موحد وقابل للتكرار لجمع وتحليل. طرق أخذ عينات الدموع الحالية، شرائط شيرمر وأنابيب الشعيرات الدموية الدقيقة، كل منها يقدم حدودا مميزة. شرائط شيرمر لها منطقة تلامس كبيرة مع سطح العين، مما يسبب غالبا تهيج العين وتمزق انعكاسي9،10. بالمقارنة، يعتمد جمع الأنابيب الدقيقة بشكل كبير على تقنية المشغل وقد ينتج عنه نتائج غير متسقة عند القيام به من قبل أشخاصمختلفين. بالإضافة إلى ذلك، قد يحمل الاستخدام غير الصحيح لهذه الأدوات خطر إصابة سطح العين. قد تؤثر هذه القيود على دقة وقابلية تكرار البيانات في المراحل النهائية12,13. علاوة على ذلك، قد تحد طرق جمع الدموع التي تتطلب إجراءات معالجة معقدة من سهولة وصولها وتوحيدها عبر المختبرات والبيئات السريرية المختلفة. لذلك، هناك حاجة ملحة لإنشاء سير عمل لجمع ومعالجة الدموع غير جراحي، قوي، وقابل للتكرار يحافظ على ملف الدهون الأصلية للدموع.

سلطت الدراسات الحديثة الضوء على فائدة الخيط الأحمر الفينولي (PRT) في تحليلات سير عمل LC-MS/MS لاحقا في التطبيقات البروتيومية والاستقلابية14,15. يقدم PRT مزايا جوهرية كأداة لجمع الدموع. هيكلها الرقيق، طبيعته طفيفة التوغل، وإجراءات أخذ العينة المباشرة يمكن أن تقلل من التعقيد التقني وتقلل من التغير المعتمد على المشغل، بينما كانت تتحمله معظم المشاركين بشكل جيد14,16. ومع ذلك، لم يتم بعد إنشاء سير عمل موحد مخصص لتحليل الدهون الدموعية المعتمد على PRT.

يقدم هذا البروتوكول سير عمل متكامل لتحليل الدهون القابلة لإعادة إنتاج الدموع: طريقة جمع دموع سهلة الاستخدام تعتمد على PRT وتم تعديلها لتحليل الدهون، وبروتوكول استخراج دهون ميثيل ترت-بيوتيل (MTBE)/الميثانول المحسنة مع نسب محددة من المذيب إلى العينة وضوابط تخزين17،18، وطريقة معدلة لتحديد الدهون باستخدام LC-MS/MS عالية الدقة. يتيح هذا النهج الموحد من التنميط الدهني للدموع بشكل متسق لاكتشاف العلامات الحيوية في المراحل النهائية وتوصيف الأمراض. كما أنه مناسب بشكل خاص للأشخاص الذين لديهم حجم تمزق منخفض أو تحمل منخفض للإحساس بالأجسام الغريبة (الشكل 1).

figure-introduction-1
الشكل 1: نظرة عامة تخطيطية لسير العمل القائم على الخيط الأحمر الفينولي (PRT) لعلاج دموع الدموع البشرية. يتم جمع سائل الدموع من المشاركين الذين يستخدمون نهج PRT، الذي يتيح جمع عينات بشكل منتظم مع أقل قدر من الانزعاج. تشمل معالجة العينات استخلاصا متسلسلا ثنائي المراحل من MTBE/الميثانول، وتركيز بوساطة SpeedVac، وإعادة تشكيل مستخلصات الدهون المدمعة للكروماتوغرافيا السائلة - مطيافية الكتلة المزدوجة (LC-MS/MS). يتم الحصول على ملفات تعريف ليبيدوميك لاحقا عبر LC-MS/MS وتخضع للتعليق والتعريف باستخدام برنامج LipidSearch. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على الدراسة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية (IRB) في جامعة هونغ كونغ بوليتكنيك. قدم المشاركون موافقة مكتوبة مستنيرة قبل المشاركة في الدراسة. المواد المستخدمة والمواد المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. جمع سائل الدموع البشري المعتمد على الخيط الأحمر الفينولي (PRT)

  1. ارتد قفازات وقم بتعقيم محطة العمل لمنع تلوث العينات.
  2. تأكد من أن طرد PRT مختوم ولم ينته صلاحيته قبل فتحه.
  3. امسك الخيط من الطرف المقابل للخطاف المنحني. تجنب دائما لمس النصف المنحني من الخطاف المنحني من PRT.
  4. اطلب من الشخص أن ينظر إلى اتجاه الأنف العلوي.
  5. اسحب الجفن السفلي للشخص بلطف وأدخل جهاز PRT مع الخطاف المثني الموضوع في الملتحمة الصدغية السفلية بالقرب من الكانتوس الخارجي للعين (الشكل 2).

figure-protocol-1
الشكل 2: موقع الخيط الأحمر الفينولي أثناء جمع التمزق. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

  1. اطلب من الشخص أن يغلق عينيه بلطف ويميل رأسه قليلا إلى الأمام لمنع ال PRT من لمس بشرة وجهه.
    ملاحظة: التمزق الممتص يؤدي تدريجيا إلى ظهور جبهة صبغة حمراء، مما يشير إلى المنطقة المأخوذة من PRT بسبب الفينول الأحمر الحساس للرقم الهيدروجيني. لضمان كمية كافية من سائل الدموع لتحليل الدهون، يفضل جمع حجم الدموع الذي يعادل 50 مم من PRT، وعادة ما يتم خلال دقيقتين.
  2. اسحب جفن الشخص السفلي بلطف وأخرج جهاز PRT المأخوذ. تجنب لمس المنطقة المأخوذة.
  3. تسجيل طول المنطقة المأخوذة من جهاز PRT ونقل ال PRT إلى أنبوب عينة جديد بمساعدة ملقط معقم.
    ملاحظة: إذا كان طول PRT المأخوذ <50 مم، يرجى طلب من الموضوع أن يستريح لمدة 1-3 دقائق ويكرر الجمع بنفس العين. انقل كل PRT تم أخذ عينات إلى أنبوب عينة منفصل.
  4. ضع ملصقات وغطى أنابيب العينات بشكل صحيح.
  5. نظف القفازات والملاقط جيدا بالميثانول ونظف مناديل ورقية لإزالة أي آثار تمزق أو ملوثات، ثم اتركها تجف.
  6. كرر الخطوات 1.2-1.10 للعين الأخرى.
  7. أغلق أنابيب العينة بطبقة بارا فيلم وأخزن العينة فورا عند -20°C للتخزين المؤقت أو -80°C للتخزين طويل الأمد. تجنب دورات التجميد والذوبان غير الضرورية وحماية جهاز PRT المأخوذ من الضوء.

2. معالجة PRT المأخوذة من عينات

  1. غسل المقص الدقيق بالميثانول مسبقا قبل معالجة PRTs.
  2. تخلص من نهاية الخطاف المنحني (أي أول 3 مم) من أجهزة PRT (الشكل 3).

figure-protocol-2
الشكل 3: المظهر المادي للخيط الأحمر الفينولي (PRT). (أ) PRT غير مستخدم مع نهاية خطاف منحني. (ب) استخدم PRT مع قطع المقطع المحدد وجمعه لاستخراج الدهون. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

  1. اقطع المنطقة المأخوذة من جهاز PRT (أي المنطقة فوق مقدمة صبغة الفينول الحمراء) إلى قطع بحجم 2 مم وانقل هذه القطع إلى أنبوب طرد مركزي دقيق نظيف بسعة 1.5 مل يتحمل المذيبات العضوية.

3. الفصل ثنائي الطور بين MTBE/الميثانول لاستخراج الدهون من PRT المأخوذ من عينات

تحذير: MTBE والميثانول قابلان للاشتعال ومتطايرين. استخدمها في منطقة جيدة التهوية أو غطاء أبخرة. تجنب اللهب المفتوح والشرر. ارتد قفازات ومعطف مختبر. اغسل يديك بعد التعامل.

  1. ضع العينات على الثلج.
  2. أضف 232 ميكرولتر من الميثانول البارد (درجة MS) إلى كل عينة ودوامة لمدة 15 ثانية.
  3. قم بعمل العينات في منظف فوق صوتي مبرد مسبقا لمدة 15 دقيقة.
  4. أضف 774 ميكرولتر من MTBE (درجة HPLC) و194 ميكرولتر من الماء منزوع الأيونات إلى كل عينة ودوامة لمدة 15 ثانية. يجب أن تكون نسبة الحجم الناتجة ل MTBE:الميثانول:الماء في العينة 4:1.2:1 (v/v/v).
  5. قم بعمل صوت العينات مرة أخرى في منظف فوق صوتي مبرد مسبقا لمدة 15 دقيقة.
  6. حضن العينة في الخلاط الحراري لمدة 8 ساعات عند 4 درجات مئوية، مع هز عند 1200 دورة في الدقيقة.
  7. اترك الخليط في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
  8. قم بطرد المركزي بالخليطات الناتجة عند 10,000 × جرام لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية.
  9. بعد الطرد المركزي، يتم فصل الخلطات إلى مرحلتين (الشكل 4).
    ملاحظة: عند الانتهاء من فصل الطور، افحص العينة بحثا عن طبقتين مميزتين: يجب أن يبدو الطور العضوي العلوي (الغني ب MTBE) شفافا مع عتامة حليبية طفيفة، بينما يظهر الطور المائي السفلي لونا أصفر ناتجا عن وجود مؤشر الفينول الأحمر. تابع فقط إذا تم ملاحظة هذه الخصائص الطورية، كما هو موضح في الشكل 4.

figure-protocol-3
الشكل 4: فصل طور استخراج الدهون باستخدام MTBE-ميثانول-ماء: الطور العضوي العلوي والطور المائي السفلي. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

  1. اجمع 700 ميكرولتر من الجزء العضوي العلوي الذي يحتوي على الدهون بعناية وانقل إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد مبرد مسبقا بسعة 1.5 مل.
  2. تخلص من الطور المائي السفلي الذي يحتوي على بقايا MTBE والميثانول كنفايات كيميائية خطرة. جمع النفايات في حاويات معنونة ومحكمة الإغلاق والتخلص منها وفقا لبروتوكولات النفايات الخطرة المؤسسية واللوائح المحلية. لا تصب المذيبات في المصرف.
  3. جفف مستخلصات الدهون باستخدام مكثف SpeedVac المبرد لمدة 4 ساعات عند 4 درجات مئوية.
    ملاحظة: لضمان الجفاف الكامل، افحص جفاف العينة بشكل دوري بدءا من ساعتين. قم بتمديد وقت التجفيف حسب الحاجة حتى تجف العينات بالكامل.
  4. خزن مستخلصات الدهون المجففة عند -20 درجة مئوية للتخزين قصير الأمد أو -80 درجة مئوية للتخزين طويل الأمد.

4. إعادة تشكيل دهون الدموع المستخرجة لتحليل ال MC-MS/MS

  1. إعادة تشكيل مستخلصات الدهون المجففة باستخدام 50 ميكرولتر من مزيج الميثانول البارد (درجة MS)/الكلوروفورم (درجة HPLC) (1:1، v/v) كمذيب (1 ميكرولتر من المذيب لكل 1 مم من PRT المستخدم) ثم تتبعه بالصوتية في منظف فوق صوتي مبرد مسبقا لمدة 15 دقيقة.
  2. يقوم الطرد المركزي بإعادة تكوين مستخلصات الدهون عند 14,000 × جرام و4 درجات مئوية لمدة 10 دقائق.
  3. انقل بحذر 40 ميكرولتر من المادة الفائقة إلى قارورة زجاجية ذات عينات تلقائية مزودة بإدخال زجاجي.
  4. أغلق القارورة بإحكام بغطاء علوي مفتوح غير شق في الحاجز الأنفي وجاهز لتحليل LC-MS/MS.

5. جمع العينات بواسطة LC-MS/MS

  1. في الكروماتوغرافيا السائلة، اضبط درجة حرارة غرفة العمود وجهاز العينة عند 50 °م و4 °م على التوالي.
  2. لكل حقن، يتم تحميل 5 ميكرولتر من العينة على عمود LC عكسي الطور (C18؛ 1.7 ميكرومتر، 100 مم × 2.1 مم) وتقسيم الدهون بمعدل تدفق 0.3 مل/دقيقة في تدرج فصل 24 دقيقة.
    1. استخدم الطور المتحرك A الذي يتكون من خليط من 60:40 أسيتونيتريل (درجة MS):ماء (v/v) مع فورمات أمونيوم 5 ملليمولار (درجة MS) وحمض الفورميك 0.1٪ (v/v) (درجة MS) وطور متحرك B يحتوي على 90:10 إيزوبروبانول (درجة MS):أسيتونيتريل (v/v) مع فورمات أمونيوم 5 ملليمولين وحمض الفورميك 0.1٪ (v/v).
    2. استخدم التدرج التالي: 0-2 دقيقة: 40٪ B؛ 2-2.5 دقيقة: 40٪ B; 2.5-3 دقائق: 58٪ B; 3-18 دقيقة: 99٪ B; 18-20 دقيقة: 99٪ B; 20-20.1 دقيقة: 40٪ B; 20.1-24 دقيقة: 40٪ B.
  3. بالنسبة لمطياف الكتلة Orbitrap، اضبط جهد الرش على +3.5 كيلو فولت للوضع الموجب أو -2.5 كيلو فولت للوضع السالب.
  4. اضبط معدل تدفق غاز الغلاف إلى 45 أرب ومعدل تدفق الغاز المساعد إلى 10 أرب.
  5. اضبط معدل تدفق غاز المسح على 2 Arb.
  6. اضبط درجة حرارة أنبوب نقل الأيونات إلى 300 درجة مئوية ودرجة حرارة جهاز التبخير على 320 درجة مئوية.
  7. استخدم وضع اكتساب البيانات المعتمد (DDA).
  8. بالنسبة ل MS1، اضبط الدقة إلى 120,000، ونطاق المسح إلى 100-2000 م/ز، وهدف AGC القياسي، ووقت الحقن التلقائي، والاستبعاد الديناميكي إلى 6 ثوان، وعتبة الشدة عند 5.0e4.
  9. بالنسبة ل MS2، اضبط الدقة إلى 15,000، ومدى المسح التلقائي، وهدف AGC القياسي، ووقت الحقن الديناميكي، ونافذة العزل عند 1.6 م/ز، ونوع طاقة التصادم كتفكك تصادم عالي الطاقة (HCD)، وطاقة التصادم الموحدة (NCE) إلى قيم متدرجة 15، 30، و40.
  10. حلل البيانات الخام باستخدام برنامج LipidSearch أو منصات متوافقة أخرى.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم جمع عينات دمعة مركبة من 16 متطوعا صحيا في ثلاث زيارات مستقلة بفاصل أسبوعين (R1، أقدم دفعة؛ جمعت R2 وR3 بشكل متتابع بعد أسبوعين من كل منها). باستخدام LipidSearch مع معايير صارمة (مثل نسبة الإشارة إلى الضوضاء ≥100، درجة C أو أعلى، وشدة الأيونات ≥30,000)، حددنا 773، 890، و1,025 نوعا فريدا من الدهون في R1-R3 على التوالي (الشكل 5A). حدد وضع الأيونات الإيجابية 1,302 نوع من الدهون ذات الدرجة A بنسبة 26.0٪ (أي تم تحديد كل من فئة الدهون وجميع سلاسل الأحماض الدهنية...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مزايا أخذ عينات الدموع المعتمدة على PRT واستخراج الدهون
يوفر سير عمل علاج الدهون الدموعية المعتمد على PRT المعروض هنا طريقة أخذ عينات عملية وبسيطة التوغل لتحليل دقيق لدهون الدموع. مقارنة بشرائط شيرمر التي تتطلب تلامسا مطولا وحجم عينات أكبر، فإن أخذ عينات PRT سريع، ويمكن إكماله خلال دقيقتين، ويتحمله جيدا من قبل مجموعات متنوعة، بما في ذلك تلك التي لديها حجم دموع منخفض أو حساسية عينية مرتفعة، وتنتج عينات دمعة متوافقة مع لبيدوميكس LC-MS عالية الدقة...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفون لا يفرضون أي تضارب مصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد دعم هذا العمل مبادرة InnoHK وحكومة المنطقة الإدارية الخاصة في هونغ كونغ ومركز أبحاث SHARP Vision في جامعة هونغ كونغ البوليتكنيكية. كما يشكر المؤلفون بكل امتنان الدعم الفني من منشأة الأبحاث الجامعية في التحليل الكيميائي والبيئي (UCEA) ومنشأة أبحاث الجامعة في علوم الحياة (ULS) التابعة لجامعة هونغ كونغ بوليتكنيك.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
الأسيتونيتريل (ACN)، درجة LC-MSمختبر RCILM1005
عمود ACQUITY UPLC CSH C18شركة ووترز186005297130Å, 1.7 &ميكرو; m، 2.1 مم × 100 مم
تنسيق الأمونيوم، درجة LC-MSسيغما-ألدرتش55674
قارورة زجاجية أوتوسامبلرويل ريتش ساينتيفك2ML-9-V1002زجاج شفاف 2 مل 12*32 مم قاعدة مسطحة 9-425 مع ملصق (مع وسادة كتابة)
غطاء لولبي مفتوح الأعلى 9-425 الأزرق ويل ريتش ساينتيفك9-SP1003بمقاس 9 مم، أبيض، PTFE/سيليكون أحمر بمقاس 1 مم
الكلوروفورم، درجة HPLCكواشف دوكسان1271
أنابيب القفل الآمن من إيبندورف، 1.5 ملإبندورف30120086
حمض الفورميك (FA)،  درجة LC-MSثيرموفيشر ساينتيفيكA117-50
إدخال دقيق زجاجيويل ريتش ساينتيفك2ML-N2002250 وميكرو؛ إدخال L، زجاج شفاف، قاعدة مخروطية مع بولي نابض، الحجم: 5.8*28.5مم
إيزوبروبانول، درجة LC-MSمختبر RCILM1162
برنامج ليبيد سيرتشثيرموفيشر ساينتيفيكأوبتون-30879الإصدار 5
الميثانول،   درجة LC-MSمختبر RCILM1115
فينول ريد تريد  (PRT)شركة تيانجين جينغمينغ لتطوير التكنولوجيا الجديدة المحدودة20192160086
الطرد المركزي المبردثيرموفيشر ساينتيفيك75007200
مكثف الطرد المركزي المبرد ومصائد التبريد CentriVapلابكونكو16108335
أنابيب ميكرو ذات غطاء لولبيثيرموفيشر ساينتيفيك3488
إيثر تيرت-بيوتيل ميثيل (MTBE)، درجة HPLCكواشف دوكسان1070
ثيرمو ساينتفيك ديونيكس ألتي ميت 3000 HPLCثيرموفيشر ساينتيفيكULTIM3000RSLCNANO
ثيرمو ساينتفيك أوربيراب IQ-X تريبريد MSثيرموفيشر ساينتيفيكFSN05-10001
ثيرموميكسر Cإبندورف5382000015
المغسلة بالموجات فوق الصوتيةكريست ألتراسونيكP500D-45
خلط الدوامةالمعيارBV1003

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Esam, S., Singh, S., Konda, N., Gandhi, R., Vemuganti, G. K. Tear film lipid layer thickness: Measurement techniques, normative values and alteration in ocular surface diseases. Curr Eye Res. , (2025).
  2. Ambaw, Y. A., et al. Profile of tear lipid mediator as a biomarker of inflammation for meibomian gland dysfunction and ocular surface diseases: Standard operating procedures. Ocul Surf. 26, 318-327 (2022).
  3. Sheppard, J. D., Nichols, K. K. Dry eye disease associated with meibomian gland dysfunction: Focus on tear film characteristics and the therapeutic landscape. Ophthalmol Ther. 12 (3), 1397-1418 (2023).
  4. Lam, S. M., et al. Lipidomic analysis of human tear fluid reveals structure-specific lipid alterations in dry eye syndrome. J Lipid Res. 55 (2), 299-306 (2014).
  5. Borchman, D., Ramakrishnan, V., Henry, C., Ramasubramanian, A. Differences in meibum and tear lipid composition and conformation. Cornea. 39 (1), 122-128 (2020).
  6. Miyamoto, M., Sassa, T., Sawai, M., Kihara, A. Lipid polarity gradient formed by ω-hydroxy lipids in tear film prevents dry eye disease. eLife. 9, 53582(2020).
  7. Zhao, H., et al. Lipidomics profiles revealed alterations in patients with meibomian gland dysfunction after exposure to intense pulsed light. Front Neurol. 13, 827544(2022).
  8. Bland, H. C., Moilanen, J. A., Ekholm, F. S., Paananen, R. O. Investigating the role of specific tear film lipids connected to dry eye syndrome: A study on o-acyl-ω-hydroxy fatty acids and diesters. Langmuir. 35 (9), 3545-3552 (2019).
  9. Khanna, R. K., et al. Metabolomics and lipidomics approaches in human tears: A systematic review. Surv Ophthalmol. 67 (4), 1229-1243 (2022).
  10. Winiarczyk, M., Biela, K., Michalak, K., Winiarczyk, D., Mackiewicz, J. Changes in tear proteomic profile in ocular diseases. Int J Environ Res Public Health. 19 (20), 13341(2022).
  11. Bertram, M., et al. Influence of Schirmer strip wetness on volume absorbed, volume recovered, and total protein content in canine tears. Vet Ophthalmol. 24 (4), 425-428 (2021).
  12. Zhan, X., Li, J., Guo, Y., Golubnitschaja, O. Mass spectrometry analysis of human tear fluid biomarkers specific for ocular and systemic diseases in the context of 3p medicine. EPMA J. 12 (4), 449-475 (2021).
  13. Gijs, M., et al. Pre-analytical sample handling effects on tear fluid protein levels. Sci Rep. 13 (1), 1317(2023).
  14. Kecskeméti, G., Tóth-Molnár, E., Janáky, T., Szabó, Z. An extensive study of phenol red thread as a novel non-invasive tear sampling technique for proteomics studies: Comparison with two commonly used methods. Int J Mol Sci. 23 (15), 8647(2022).
  15. Barmada, A., Shippy, S. A. Quantifying sample collection and processing impacts on fiber-based tear fluid chemical analysis. Transl Vis Sci Technol. 9 (10), 23(2020).
  16. Hao, Y., et al. Validation of the phenol red thread test in a Chinese population. BMC Ophthalmol. 23 (1), 498(2023).
  17. Matyash, V., Liebisch, G., Kurzchalia, T. V., Shevchenko, A., Schwudke, D. Lipid extraction by methyl-tert-butyl ether for high-throughput lipidomics. J Lipid Res. 49 (5), 1137-1146 (2008).
  18. Ulmer, C. Z., Jones, C. M., Yost, R. A., Garrett, T. J., Bowden, J. A. Optimization of Folch, Bligh-Dyer, and Matyash sample-to-extraction solvent ratios for human plasma-based lipidomics studies. Anal Chim Acta. 1037, 351-357 (2018).
  19. Lam, S. M., et al. Extensive characterization of human tear fluid collected using different techniques unravels the presence of novel lipid amphiphiles. J Lipid Res. 55 (2), 289-298 (2014).
  20. Quah, J. H., Tong, L., Barbier, S. Patient acceptability of tear collection in the primary healthcare setting. Optom Vis Sci. 91 (4), 452-458 (2014).
  21. Saini, R. K., Prasad, P., Shang, X., Keum, Y. S. Advances in lipid extraction methods-a review. Int J Mol Sci. 22 (24), 13643(2021).
  22. Chen, J., Nichols, K. K., Wilson, L., Barnes, S., Nichols, J. J. Untargeted lipidomic analysis of human tears: A new approach for quantification of o-acyl-omega hydroxy fatty acids. Ocul Surf. 17 (2), 347-355 (2019).
  23. Köfeler, H. C., et al. Recommendations for good practice in MS-based lipidomics. J Lipid Res. 62, 100138(2021).
  24. Ulmer, C. Z., et al. A review of efforts to improve lipid stability during sample preparation and standardization efforts to ensure accuracy in the reporting of lipid measurements. Lipids. 56 (1), 3-16 (2021).
  25. Sens, A., et al. Pre-analytical sample handling standardization for reliable measurement of metabolites and lipids in LC-MS-based clinical research. J Mass Spectrom Adv Clin Lab. 28, 35-46 (2023).
  26. Salem, M., Bernach, M., Bajdzienko, K., Giavalisco, P. A simple fractionated extraction method for the comprehensive analysis of metabolites, lipids, and proteins from a single sample. J Vis Exp. (124), e55802(2017).
  27. Fong, P. Y., et al. Role of tear film biomarkers in the diagnosis and management of dry eye disease. Taiwan J Ophthalmol. 9 (3), 150-159 (2019).
  28. Sanroque-Muñoz, M., et al. Tear-derived extracellular vesicles as diagnostic biomarkers for ocular and neurodegenerative diseases: Opportunities and challenges. Extracell Vesicles Circ Nucl Acids. 6 (3), 609-625 (2025).
  29. Vera-Montecinos, A., et al. High throughput tear proteomics with data independent acquisition enables biomarker discovery in allergic conditions. Sci Rep. 15 (1), 31181(2025).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Tear LipidomicsPhenol Red ThreadTear Fluid SamplingLipid BiomarkersOcular Surface HealthMethanol MTBE ExtractionLC MS Lipid AnalysisTear Film StabilityMinimally Invasive SamplingLipid Species Identification

Related Articles