Method Article

تطوير والتحقق من صحة منهجية لإنشاء نماذج الفئران البدينة مع البنكرياس الدهني النموذجي

DOI:

10.3791/69553

⸱

November 11th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Acupuncture and Medicine Research of Ministry of Education, Nanjing University of Chinese Medicine, 2Department of Acupuncture and Moxibustion, Yangzhou TCM Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, 3Department of Specialty Medicine, Ohio University, 4Research Department, Swiss University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقدم هذه الدراسة طريقة قابلة للتكرار وموحدة من أجل إنشاء نماذج الفئران البدينة التي تظهر السمنة البسيطة ، والتي تتميز عادة بالبنكرياس الدهني. ويتضمن أيضا بروتوكولات مفصلة لأخذ عينات من أنسجة البنكرياس والكيمياء المناعية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

برزت السمنة كوباء صحي عالمي سائد ، حيث يصنف ما يقرب من نصف سكان العالم الآن على أنهم يعانون من زيادة الوزن أو السمنة. السمة المرضية الرئيسية لدى الأفراد الذين يعانون من السمنة المفرطة هي ترسب الدهون خارج الرحم في الأنسجة غير الدهنية ، بما في ذلك البنكرياس - وهي حالة تسمى التنكس الدهني في البنكرياس أو البنكرياس الدهني. في النظام الغذائي عالي الدهون (HFD) نماذج القوارض التي يسببها ، يسبق التنكس الدهني البنكرياس باستمرار التنكس الدهني الكبدي ، مما يؤكد قابلية البنكرياس الخاصة لتراكم الدهون. هذه المشاركة المبكرة تضع البنكرياس كعضو مهم لفهم عدم انتظام التمثيل الغذائي في السمنة. على الرغم من أن الفئران السمنة الناجمة عن النظام الغذائي (DIO) تلخص الجوانب الأساسية لتطور المرض البشري ، إلا أن النماذج الحيوانية المميزة جيدا التي تظهر بشكل موثوق هذا النمط الظاهري للبنكرياس لا تزال نادرة في الأدبيات.

أحد الاعتبارات المنهجية المهمة في نمذجة السمنة البشرية هو توقيت إدخال HFD. تبدأ العديد من النماذج الحالية HFD خلال فترة الفطام ، مما قد يؤدي إلى تأثيرات برمجة التمثيل الغذائي التنموية المربكة التي لا تعكس بشكل كامل السمنة البشرية ، والتي تتطور بشكل أساسي بعد النمو. في المقابل ، تضع الدراسة الحالية بروتوكولا موحدا يتم فيه إدخال HFD بعد الفطام. يحاكي هذا النهج بشكل أكثر دقة المسار البشري المشترك لظهور السمنة في مرحلة البلوغ ، ويتجنب التكيفات الأيضية في وقت مبكر من الحياة ، وينتج عنه تقدم أكثر صلة من الناحية الفسيولوجية نحو التنكس الدهني في البنكرياس.

يوفر هذا البحث إطارا مفصلا وقابلا للتكرار لإنشاء نموذج فئران للسمنة يتميز بأمراض البنكرياس الدهنية البارزة. تتضمن المنهجية مرحلة التأقلم لمدة أسبوع واحد ، وفترة تحريض HFD لمدة 14 أسبوعا تبدأ بعد الفطام ، وحصاد الأنسجة المنتظم. تم وصف مسارين لمعالجة الأنسجة: التجميد المفاجئ للتحليلات الجزيئية (على سبيل المثال ، النشاف الغربي) وتثبيت التروية بارافورمالديهايد للتقييمات المورفولوجية (على سبيل المثال ، IHC ، H & E). يوفر هذا النموذج منصة قوية للتحقيقات الميكانيكية في الخلل الأيضي للبنكرياس المرتبط بالسمنة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعرف السمنة البسيطة بأنها السمنة التي توجد بشكل مستقل دون أمراض مصاحبة أخرى ، وتعزى في المقام الأول إلى اختلال توازن الطاقة الناتج عن أنماط الحياة غير الصحية ، مثل الأنماط الغذائية غير السليمة وعدم كفاية النشاط البدني1. تساهم السمنة بشكل كبير في زيادة معدل الإصابة بالأمراض غير المعدية بين السكان الأصغر سنا ، والتي تتميز بمعدلات انتشار عالية ، وبداية مبكرة ، ومضاعفات متعددة الأنظمة ، مما يضعها كتحد عالمي بالغ الأهمية للصحة العمومية2. البنكرياس الدهني هو حالة تتميز بترسب الدهون خارج الرحم في هذا العضو غير الدهني أثناء خلل التمثيل الغذائي. يعكس البنكرياس الدهني تفاعلا حاسما بين الأنسجة الدهنية والفيزيولوجيا المرضية للبنكرياس. يؤدي تراكم الدهون المفرطة في البنكرياس إلى إزاحة الأنسجة الطبيعية والأنسجة الجزرية ، مما يؤدي إلى ضعف وظيفي مزدوج في كل من قدرات الإفراجات والغدد الصماء3،4. تعطل هذه العملية المرضية نسب α / β الخلايا ، وتعزز عدم تمايز الخلايا β مع الفقدان اللاحق لوظيفة إفراز الأنسولين5 ، وتتوسط الضرر المباشر السام للدهون لخلايا β6. في الوقت نفسه ، يؤدي تكاثر الخلايا α وإفراز الأنسولين غير المنظم إلى تفاقم عدم استقرار نسبة السكر في الدم ، مما يسرع من التقدم إلى داء السكري من النوع 2 (T2DM) والمضاعفات المرتبطة به7.

يكشف التحقيق في التسبب في البنكرياس الدهني عن آليات جديدة وراء تطور مرض التمثيل الغذائي8. بينما أكدت أبحاث السمنة السابقة على التنكس الدهني الكبدي ، فإن الأدلة الناشئة تحدد ترسب دهون البنكرياس كحدث سابق في خلل التمثيل الغذائي9. يتيح هذا التحول النموذجي بناء نموذج أمراض ثنائي العضو للسمنة البسيطة ، ودمج التنكس الدهني البنكرياس والكبدي10. قد توضح دراسة الحديث المتبادل المسارات الحرجة عبر طيف المرض الذي يمتد عبر اضطراب التمثيل الغذائي للدهون والسمنة ومقاومة الأنسولين ومرض السكري ، مما يوفر رؤى جديدة حول آليات المرض11. في العملية المرضية للبنكرياس ، يكون المظهر الأولي هو ترسب كبير لدهون البنكرياس ، مصحوبا بتوسع كبير في الخلايا الشحمية في البنكرياس. لوحظ هذا في الغالب في الجانب البطني لمناطق رأس البنكرياس والرقبة والجسم ، ويقع بشكل أساسي داخل المناطق الخلالية بين خلايا الأسينار والجزير. في الوقت نفسه ، يوجد التهاب مزمن منخفض الدرجة في البنكرياس ، بينما تظل وظائف الغدد الصماء والإفرازات سليمة إلى حد كبير في هذه المرحلة12،13. يؤدي التسلل الدهني المكثف إلى إضعاف وظيفة خلايا β في البنكرياس من خلال السمية الدهنية ويثبط نشاط الأنسولين. خلال هذه المرحلة ، يتم استبدال الخلايا الأسينارية تدريجيا بالخلايا الشحمية ، مما يساهم في تطوير T2DM14،15. على الرغم من أن داء السكري ليس عامل خطر مستقل لسرطان البنكرياس ، إلا أن المرضى الذين لديهم تاريخ من التهاب البنكرياس الحاد والسكري يظهرون خطرا مرتفعا بشكل كبير للإصابة بسرطان البنكرياس16.

تحدد التحليلات التشريحية العيانية شدة التنكس الدهني في البنكرياس وأنماط التسلل ، بينما تميز تقييمات IHC على المستوى المجهري مورفولوجيا الخلايا الأسينارية ، وتحديد المواقع النووية ، وتكرار التفريغ ، وديناميكيات السكان الخلوية17. يتيح هذا النهج متعدد الوسائط ، الذي يمتد عبر الملاحظة التشريحية الإجمالية إلى IHC الخلوي الدقة ، التدريج الشامل لأمراض البنكرياس عبر تطور المرض. توضح الدراسة الحالية بالتفصيل بروتوكولا موحدا يشمل التأقلم لمدة أسبوع واحد ، وتحريض السمنة لمدة 14 أسبوعا في الفئران البالغة ، ومعالجة أنسجة البنكرياس المحسنة للتحليل المورفولوجي ، مما يؤسس إطارا قويا للتحقيق في الاضطرابات الأيضية المرتبطة بالتنكس الدهني.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على إجراء علاج من قبل لجنة أخلاقيات بجامعة نانجينغ للطب الصيني التقليدي (202006A016) وامتثل لإرشادات ARRIVE (أبحاث: الإبلاغ عن التجارب في الجسم الحي) ، والمبادئ التوجيهية الأخلاقية ، والإرشادات المتعلقة بتشغيل قانون (الإجراءات العلمية) لعام 1986 والمبادئ التوجيهية المرتبطة به ، وتوجيه الاتحاد الأوروبي 2010/63 لحماية المستخدمة للأغراض العلمية. تم تخدير جميع التجارب وفقا لإجراءات تخدير القوارض المعتمدة قبل التشريح. تم تنظيم الإجراء في ثلاثة مكونات متميزة.

1. إنشاء نموذج الفئران السمنة

  1. ومجموعات التجارب
    1. حدد ذكور فئران Sprague-Dawley (SD) التي تتراوح أعمارها بين 4 أسابيع (80-120 جم) من سلالة حساسة لنظام غذائي عالي الدهون (HFD).
    2. تأقلم جميع الفئران على نظام غذائي صيانة لمدة أسبوع واحد ، ثم قسمها عشوائيا إلى مجموعتين: المجموعة الضابطة والمجموعة النموذجية.
    3. استبدل النظام الغذائي الصيانة ب HFD للمجموعة النموذجية بعد أسبوع واحد ، مع الحفاظ على المجموعة الضابطة على النظام الغذائي الأصلي. حافظ على كلتا المجموعتين على وجبهما الغذائي لمدة 14 أسبوعا. يتم تفصيل تركيبة HFD في الجدول 1 ، وتركيبة تغذية الصيانة القياسية موجودة في الجدول 2.
  2. ظروف التغذية والمعلمات التجريبية
    1. المعلمات البيئية: درجة الحرارة 22 ± 2 درجة مئوية ، الرطوبة 50 ± 10٪ ، دورة الضوء / الظلام 12 ساعة ، والوصول المجاني إلى الماء والغذاء.
  3. مؤشرات الرصد
    1. سجل وزن الجسم وتناول الطعام أسبوعيا في وقت محدد.
      ملاحظة: يمكن أن يؤدي القيام بذلك في المساء إلى تقليل التوتر والتوافق مع أنماط النشاط النهاري / الليلي18.
    2. ارسم منحنى نمو وزن الجسم باستخدام البيانات المسجلة.
    3. حدد نمذجة السمنة الناجحة على أنها عندما يتجاوز وزن الجسم 20٪ من المجموعة الضابطة المتطابقة مع العمر.
العنصرالمحتوى (جم / كجم)العناصر الغذائية الرئيسية المقدمة
علف مسحوق عادي365الإمدادات الغذائية الأساسية من الكربوهيدرات والبروتينات النباتية والدهون ومجمعات الفيتامينات والمعادن وما إلى ذلك
شحم الخنزير310الأحماض الدهنية المشبعة والأحماض الدهنية غير المشبعة
الكازين250الأحماض الأمينية الأساسية
كولسترول10كولسترول
خليط السليلوز والمعادن60الألياف والكالسيوم والفوسفور والصوديوم ، إلخ
DL-الميثيونين الميثيونين / الأحماض الأمينية الميثيونين3الأحماض الأمينية الأساسية
خميرة1فيتامينات ب ، β جلوكان ، إلخ
كلوريد الصوديوم1كلوريد الصوديوم

الجدول 1: تركيبة خاصة HFD لإنشاء DIO في نماذج الفئران. يوضح الجدول بالتفصيل التركيب المحدد ل HFD المستخدم في هذه الدراسة للمجموعة النموذجية ، والتي تم إعطاؤها من نهاية فترة التأقلم حتى جمع الأنسجة.

العنصرمحتوىوحدة
الرطوبه12.196%
البروتين الخام (CP٪)18.272%
الطاقة القابلة للهضم (DE)3.186مكالوري/كجم
الطاقة القابلة للتمثيل الغذائي (ME)2.939مكالوري/كجم
صافي الطاقة (NE)2.228مكالوري/كجم
مستخلص الأثير (EE٪)4.417%
الألياف الخام (CF٪)3.677%
الكالسيوم (الكالسيوم٪)0.991%
إجمالي الفوسفور0.681%
(إجمالي P٪)
الفوسفور غير النباتي0.19%
ملح0.407%
ليسين1.118%
يسين قابل للهضم0.813%
الميثيونين0.53%
ثريونين0.779%
تريبتوفان0.221%
النحاس (النحاس)22.06ملغ / كجم
الحديد (Fe)173.69ملغ / كجم
المنغنيز (مينيسوتا)102.1176ملغ / كجم
الزنك (Zn)60.3687ملغ / كجم

الجدول 2: صيغة تغذية الصيانة القياسية في الفئران. يعرض الجدول صياغة تغذية الصيانة القياسية ، والتي تم توفيرها لجميع الفئران خلال مرحلة التأقلم وللمجموعة الضابطة طوال فترة الدراسة بأكملها.

2. حصاد الأنسجة

  1. التحضير قبل الجراحة
    1. علاج الصيام: 12 ساعة تقييد الطعام قبل القتل الرحيم لتقليل تداخل المحتوى المعوي مع التحليلات الكيميائية الحيوية.
    2. التخدير: يتم تطبيق الأيزوفلوران عن طريق الاستنشاق للتخدير العميق (تركيز الحث 4٪، تركيز الصيانة 1.5-2٪). تم تجهيز آلة التخدير بجهاز تبخير للأيزوفلوران ، وتم الحفاظ على تركيز التخدير عند 1.5-2. كمرجع للتحضير ، كان الاستهلاك المادي للأيزوفلوران السائل حوالي 0.5 مل -0.8 مل لكل فأر للإجراء بأكمله.
    3. مراقبة عمق التخدير: تتبع باستمرار معدل التنفس وردود أفعال القرنية. الحفاظ على حالة تخدير مستمرة طوال العملية لمنع التحلل الذاتي للبنكرياس بعد الوفاة.
    4. إدارة التخدير غير الكافي: في حال عدم كفاية عمق التخدير أو تكرار الوعي، يتم تطبيق 20٪ يوريثان داخل الصفاق على الفور للتخدير التكميلي (50 ملغ/كغ) وإعادة فحص العلامات الحيوية قبل المتابعة. قم بإعداد محلول يوريثان بنسبة 20٪ عن طريق إذابة مسحوق اليوريثان في محلول ملحي.
      ملاحظة: التخدير الأيزوفلوران هو الطريقة المتوافقة مع المتطلبات الأخلاقية لمركز التجارب بجامعة نانجينغ للطب الصيني. في هذا الإجراء النهائي ، يمكن استخدام الحقن داخل الصفاق بنسبة 20٪ من اليوريثان كبديل مقبول. ومع ذلك ، تشير الأدلة الحالية إلى أن الأيزوفلوران قد يوفر مظهرا أمانا أعلى من الكيتامين في القوارض19.
  2. حصاد الأنسجة الطازجة
    1. تطهير الجلد: رش 75٪ الإيثانول بسرعة على الجسم بالكامل (1-2 ثانية) لمنع تلوث الشعر لأعضاء البطن.
    2. تثبيت الموقف: ضع الفئران مستلقية على طاولة التشريح وثبت جميع الأطراف الأربعة بإحكام باستخدام دبابيس رأس كبيرة.
    3. أمسك جلد البطن بملقط في يدك اليسرى وشق الجلد على طول خط الوسط (من الخنجري إلى العانة) باستخدام مقص في يدك اليمنى. قم بتشريح اللفافة تحت الجلد بصراحة لفصل النسيج الضام وقطع عضلة البطن المستقيمة والصفاق على طول نفس خط الوسط.
    4. تحديد البنكرياس: قم بإزاحة الأمعاء برفق إلى اليسار لتصور المعدة والطحال والاثني عشر. يرتبط الطحال بذيل البنكرياس ، والمعدة قريبة من البنكرياس.
    5. التشريح السريع: ارفع الطحال برفق باستخدام الملقط وعزل البنكرياس عن طريق قطع مرفقاته تدريجيا بالطحال والمعدة والمساريق الاثني عشر. نظرا لقوامه الهش ، تجنب التثبيت المباشر لحمة البنكرياس والحفاظ على قنوات البنكرياس / الأوعية الدموية لمنع تمزق الأنسجة.
    6. الحفاظ على الأنسجة: اشطف البنكرياس المقلح بسرعة باستخدام PBS المثلج (1× محلول ملحي بالفوسفات ، PH 7.4) أو محلول ملحي لإزالة الدم المتبقي. انقل البنكرياس على الفور إلى أنبوب تجميد سعة 2 مل ، واغمره في النيتروجين السائل في غضون 30 ثانية ، وقم بتخزينه على المدى الطويل عند -80 درجة مئوية.
    7. القتل الرحيم والتخلص من الذبيحة بعد جمع الأنسجة ، قم بالقتل الرحيم لجميع الفئران التجريبية عن طريق خلع عنق الرحم. وفقا للوائح مركز التجارب بجامعة نانجينغ للطب الصيني ، تصنف جثث على أنها نفايات طبية حيوية مرضية (رمز النفايات: 831-003-01). أغلق جميع جثث في أكياس محكمة الإغلاق وفقا للوائح ، وقم بتخزينها بشكل موحد في مجمدات مخصصة. ستقوم الجامعة بالتخلص المركزي والسليم بيئيا. لا ينبغي تحت أي ظرف من الظروف التخلص من الجثث بشكل تعسفي.
      ملاحظة: تجنب التعرض لدرجة حرارة الغرفة لمنع التحلل الأنزيمي للجزيئات الحيوية20،21.
  3. حصاد أنسجة التروية (الخطوات المتبقية هي نفسها)
    1. كشف القلب: ارفع أنسجة جلد الفئران بيدك اليسرى وافتح التجويف الصدري بيدك اليمنى لكشف القلب بالكامل.
    2. تحضير البطين الأيسر للتروية: قم بعمل شق صغير في البطين الأيسر (الحجم المطابق لقطر إبرة التروية) وشق الأذن اليمنى للسماح بتدفق الدم.
    3. محلول ملحي بيرفيوز: أدخل إبرة التروية برفق في البطين الأيسر وقم بإدخال 100 مل من المحلول الملحي ببطء بمعدل تدفق 10 مل / دقيقة حتى يصبح تدفق الأذين الأيمن واضحا.
    4. مثبت Perfuse: قم بالتبديل إلى 200 مل من مثبت بارافورمالديهايد 4٪ ، معدل التدفق: 5 مل / دقيقة. قم بتغذية كل فأر ب 100 مل من المحلول الملحي ، متبوعا ب 200 مل من 4٪ بارافورمالديهايد. استخدمت هذه الدراسة محلول PFA معد تجاريا. نظرا لعدم استقرار PFA في المحلول ، مع إمكانية التباين الكبيرة اعتمادا على التحضير والنضارة ، يجب حماية المحلول السائل من الضوء وتخزينه عند 4 درجات مئوية. استخدم الاقتباس المفتوح على الفور لضمان الفعالية. إذا تم تحضيره من المسحوق ، فيجب أن يكون المحلول طازجا قبل الاستخدام مباشرة.
      ملاحظة: ارتد القفازات والنظارات الواقية ومعطف المختبر. أداء في غطاء الدخان لأن بارافورمالديهايد سام. وفقا للوائح مركز التجارب بجامعة نانجينغ للطب الصيني ، تصنف نفايات بارافورمالديهايد على أنها نفايات طبية حيوية كيميائية (رمز النفايات: 831-004-01). بعد الاستخدام ، يجب تخزينه في حاوية نفايات مخصصة تحمل رمز الخطر البيولوجي. يتم التخلص المركزي من قبل الجامعة. لا يجوز تحت أي ظرف من الظروف التخلص منها بشكل غير صحيح.
    5. تأكيد نجاح التروية: تحقق من صلابة الأطراف التي تشير إلى التثبيت الفعال.
    6. ضع البنكرياس في أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل يحتوي على 30 مل من محلول بارافورمالديهايد 4٪. إصلاح الأنسجة عن طريق تخزين الأنبوب ثابت في الظلام لمدة 2-4 ساعات.
    7. انقل البنكرياس إلى أنبوب طرد مركزي جديد سعة 50 مل يحتوي على 30 مل من محلول الإيثانول بنسبة 70٪. حافظ على الأنبوب ثابتا ومحميا من الضوء لمدة 20-24 ساعة تقريبا22.
    8. تضمين البارافين: قم بتضمين الأنسجة في شمع البارافين. قم بتخزين المناديل المدمجة عند 4 درجات مئوية أو -20 درجة مئوية.
      ملاحظة: استخدمت هذه الدراسة أقسام البارافين. تعتبر الأقسام المجمدة بديلا صالحا ، ولكن يجب التحقق من أداء الأجسام المضادة لنوع القسم المحدد مسبقا لضمان أفضل النتائج.

3. تلطيخ الكيمياء المناعية (IHC) للبنكرياس

  1. بروتوكول التقسيم والتركيب
    1. أقسام البارافين: قطع أقسام الأنسجة بسمك 6 ميكرومتر باستخدام ميكروتوم وتركيبها على شرائح زجاجية.
    2. طريقة الطفو: قم بتعويم الأقسام على حمام تعويم الأنسجة بدرجة حرارة 40 درجة مئوية لتنعيم التجاعيد.
    3. جمع المناديل: قم بتركيب الأقسام على شرائح مغلفة بمادة لاصقة (2-3 لكل شريحة) وجففها على جهاز تسخين منزلق 80 درجة مئوية.
    4. التجفيف المنزلق: انقل الشرائح ذات الأقسام المثبتة إلى فرن 60 درجة مئوية طوال الليل بعد التقسيم.
  2. بروتوكول إزالة البارافين وإعادة الجفاف
    1. ضع الشرائح في رف منزلق واغمرها بالتتابع على النحو التالي: الزيلين الأول ، 7 دقائق ؛ الزيلين الثاني ، 7 دقائق ؛ الإيثانول اللامائي ، 5 دقائق ؛ 90٪ إيثانول ، 5 دقائق ؛ 85٪ إيثانول ، 5 دقائق ؛ 75٪ إيثانول ، 5 دقائق ؛ ماء مقطر ، 5 دقائق ؛ برنامج تلفزيوني ، 5 دقائق (ثلاث مرات).
      ملاحظة: قم بتنفيذ خطوات الزيلين في غطاء الدخان مع القفازات والنظارات الواقية. التخلص من نفايات الزيلين باتباع البروتوكول المماثل المحدد للبارافورمالديهايد كخطوة 2.3.4.
  3. بروتوكول استرجاع المستضد
    1. تحضير محلول سترات الصوديوم: تحضير عازلة سترات الصوديوم (درجة الحموضة 6.0). استخدمنا محلول عازلة سترات الصوديوم معدا ذاتيا عن طريق إذابة عبوة واحدة من المسحوق في 1 لتر من الماء.
    2. الميكروويف بالتتابع: ضع الشرائح في وعاء تلطيخ زجاجي مملوء بمحلول سترات الصوديوم لتغطية الشرائح ، ثم ضع البرطمان في الميكروويف. تم إخضاع العينات للمعالجة بالميكروويف وفقا للتسلسل التالي: حرارة متوسطة (600 واط) لمدة 8 دقائق ، تليها الوقوف بدون تسخين لمدة 8 دقائق ، وأخيرا حرارة منخفضة (300 واط) لمدة 7 دقائق.
    3. تبرد بشكل طبيعي إلى درجة حرارة الغرفة: اترك الحاوية تبرد بشكل طبيعي إلى درجة حرارة الغرفة.
    4. PBS: اشطف الشرائح في PBS لمدة 5 دقائق لمرتين.
  4. حضانة الفرن
    1. H2O2: ضع 3٪ H2O2 على أقسام الأنسجة لمدة 10 دقائق لمنع نشاط البيروكسيديز الذاتي. ضع ما يقرب من 50 - 80 ميكرولتر من H2O2 على كل شريحة.
    2. برنامج تلفزيوني: اغسل الشرائح في PBS لمدة 5 دقائق ثلاث مرات.
    3. مركب ستريبت أفيدين بيوتين بيروكسيداز (SABC): ضعي SABC بالتنقيط على الأنسجة وصخله لمدة 30 دقيقة في حاضنة 37 درجة مئوية. ضع ما يقرب من 50 - 80 ميكرولتر من SABC على كل شريحة.
    4. برنامج تلفزيوني: اغسل الشرائح في PBS لمدة 5 دقائق ثلاث مرات.
  5. تجسيد اللون
    1. 3،3'-ديامينوبنزيدين (DAB): ضع محلول الكروموجين DAB على أقسام الأنسجة وراقب حتى يتطور اللون الأصفر البني. وصمة عار الأقسام لمدة 1-5 دقائق تقريبا. اضبط مدة التلوين بناء على خصوصية الأنسجة ودرجة الحرارة المحيطة. بالنسبة لأنسجة البنكرياس ، يوصى بوقت تلطيخ مدته دقيقتان عند 22 درجة مئوية.
    2. شطف: اشطف الشرائح على الفور تحت تيار لطيف من الماء المقطر لإيقاف التفاعل.
    3. اغمر: اغمر الشرائح في الماء المقطر لمدة 5 دقائق لإزالة الكواشف المتبقية.
  6. تلطيخ الهيماتوكسيلين
    1. الهيماتوكسيلين: اغمر الشرائح في الهيماتوكسيلين لمدة 1 دقيقة. يتم تحضير محلول الهيماتوكسيلين باستخدام الماء النقي بنسبة 56 مجم / مل.
    2. شطف: اشطف الشرائح مرتين في الماء المقطر (5 ثوان لكل شطف).
    3. تمايز حمض الهيدروكلوريك والكحول: قم بتمييز الشرائح في محلول تمايز حمض الهيدروكلوريك والكحول لمدة 1 ثانية.
    4. الانغماس: اغمر الشرائح في ماء الصنبور لمدة 10 دقائق لتطوير تلطيخ نووي أزرق مستقر.
  7. الجفاف: قم بتجفيف الشرائح بالتتابع من خلال المحاليل التالية: 70٪ إيثانول ، 80٪ إيثانول ، 90٪ إيثانول ، إيثانول لا مائي ، زيلين الأول ، وزيلين II ، لمدة 3 دقائق في كل محلول ، على التوالي.
    ملاحظة: قم بتنفيذ خطوات الزيلين في غطاء الدخان مع القفازات والنظارات الواقية.
  8. ختم
    1. قم بتركيب الأقسام بالبلسم المحايد: ضع بلسم محايد على الشريحة باستخدام قطارة لمبة مطاطية. غطيها بغطاء. تجنب ضغط المصباح بقوة لمنع تكون الفقاعات. ضع ما يقرب من 50 ميكرولتر من البلسم المحايد على كل شريحة.
    2. يجف بالهواء: ضع الشرائح في غطاء دخان طوال الليل للسماح للراتنج المحايد بالجفاف تماما.

4. تحليل النشاف الغربي (WB)

  1. تحلل الأنسجة
    1. خذ 200 مجم من أنسجة بنكرياس الفئران ، ضعها في أنبوب طحن 2 مل يحتوي على 1 مل من المخزن المؤقت للتحلل و 3 كرات فولاذية صغيرة. يتكون المخزن المؤقت للتحلل من كوكتيل مثبط البروتياز الكامل ومخزن تحلل RIPA. نسبة الخلط هي 1 قرص من مثبطات البروتياز : 50 مل من محلول تحلل RIPA.
    2. تم إجراء الطحن باستخدام مطحنة كروية مع المعلمات التالية: التردد: 30 / ثانية ؛ الوقت: 30 ثانية ؛ 10-15 مرة. حتى لا تظهر جزيئات بيضاء بالعين المجردة.
    3. انقل مادة الطافية للبروتين العلوي إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل ، ولا تأخذ أي رغوة. قم بالطرد المركزي مع 16900 × جم 30 دقيقة ، 4 درجات مئوية.
      ملاحظة: تم تحضير المتجانسات لتحليل النشاف الغربي من البنكرياس بأكمله.
  2. القياس الكمي للبروتين: حدد تركيز البروتين باستخدام مجموعة اختبار البروتين Pierce BCA وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. نسبة الخلط لحل عمل BCA هي الحل أ: الحل ب = 50: 1.
  3. الرحلان الكهربائي للبروتين:
    1. أضف عينات بروتين البنكرياس المحضرة (تم تحميل حجم 6 ميكرولتر في كل حارة) إلى جل دوديسيل الصوديوم - بولي أكريلاميد - يونغ بيج ، بيس تيرز ، 10 × 8 ، للرحلان الكهربائي.
    2. قم بالتشغيل بجهد 70 فولت لمدة 0.5 ساعة ، ثم قم بالتشغيل بجهد 110 فولت لمدة ساعة واحدة باستخدام نظام Mini-PROTEAN Tetra. قم بتخفيف الرحلان الكهربائي MOPS سائل 20× بالماء النقي إلى تركيز 1×.
  4. نقل الغشاء
    1. قم بتخفيف تركيز نقل eBlot L2 5× إلى 1× تركيز العمل باستخدام الماء النقي. يمكن إعادة استخدام المخزن المؤقت للنقل 1× حتى 3 مرات. قم بتخفيف تركيز التوازن eBlot L2 5× إلى 1× تركيز العمل باستخدام الماء النقي.
    2. قم بقص غشاء PVDF (غشاء نقل Immobilon-P) إلى الحجم المناسب (على سبيل المثال ، 7.5 سم × 5.5 سم). حجم المسام 0.45 ميكرومتر.
    3. صب ما يقرب من 30 مل من الميثانول في صندوق حضانة يحتوي على 90 × 60 × 32 مم. اغمر غشاء PVDF في الميثانول لمدة 5 ثوان لتنشيطه.
    4. صب ما يقرب من 30 مل من محلول التوازن المحضر 1x في صندوق حضانة نظيف آخر. قم بإزالة الجل بعناية من ألواح الرحلان الكهربائي وضعه في محلول التوازن.
    5. انقل غشاء PVDF المنشط من الميثانول وضعه أيضا في صندوق الحضانة الذي يحتوي على محلول التوازن. تأكد من وضع الغشاء أسفل الجل للتلامس المناسب. اسمح لكليهما بالتوازن.
    6. باتباع تعليمات الشركة المصنعة لجهاز النشاف ، ضع "شطيرة" النقل بهذا الترتيب من أعلى إلى أسفل: الإسفنج ، الجل ، غشاء PVDF ، الإسفنج. تأكد من عدم احتجاز فقاعات الهواء بين الطبقات. ضع كومة النقل المجمعة بشكل صحيح في غرفة جهاز النشاف. قم بتوصيل مصدر الطاقة وقم بتشغيل النقل في الوضع القياسي لمدة 15 دقيقة.
  5. حجز
    1. قم بإعداد صندوقي حضانة ، أحدهما يحتوي على حوالي 15 مل من TBST (Tris-buffered salt-Tween20) ، والآخر يحتوي على حوالي 15 مل من محلول حجب BSA بنسبة 5٪.
    2. تحضير محلول TBST: قم بإذابة كيس واحد من مسحوق المحلول الملحي من تريس في 2 لتر من الماء النقي ، ثم أضف 2 مل من توين 20.
    3. ضع غشاء PVDF في محلول TBST ، مع التأكد من أن الجانب الذي كان ملامسا للجل متجها لأعلى.
    4. اغسل غشاء PVDF على شاكر بسرعة 40 دورة في الدقيقة في درجة حرارة الغرفة لمدة 3-5 دقائق.
    5. انقل غشاء PVDF إلى المخزن المؤقت للحظر. قم بحظره على شاكر عند 20 دورة في الدقيقة ، في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة.
  6. حضانة الأجسام المضادة الأولية
    1. اغسل غشاء PVDF في صندوق حضانة يحتوي على TBST ، واغسل الغشاء ثلاث مرات لمدة 5 دقائق لكل منها على شاكر عند 40 دورة في الدقيقة في درجة حرارة الغرفة.
    2. احتضان بجسم مضاد أولي طوال الليل (14-18 ساعة) عند 4 درجات مئوية (1: 40000 ، جسم مضاد فينكولين متعدد النسيل) في صندوق حضانة آخر للأجسام المضادة على شاكر عند 20 دورة في الدقيقة.
    3. تأكد من تخفيف الجسم المضاد بمحلول مانع BSA بنسبة 5٪ ، محضر وفقا للنسبة المحددة في القسم.
  7. حضانة الأجسام المضادة الثانوية
    1. ضع غشاء PVDF في صندوق حضانة يحتوي على 15 مل من محلول TBST. اغسل الغشاء ثلاث مرات لمدة 5 دقائق على شاكر في درجة حرارة الغرفة ، مع التحريك عند 40 دورة في الدقيقة.
    2. قم بإعداد الجسم المضاد الثانوي عن طريق تخفيف الجسم المضاد للأرانب IgG ، وهو جسم مضاد مرتبط ب HRP عند 1: 2000 في 5٪ من المخزن المؤقت لحجب BSA.
    3. احتضان لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة على شاكر عند 20 دورة في الدقيقة23.
    4. اغسل غشاء PVDF ثلاث مرات بمحلول TBST لمدة 5 دقائق لكل منهما ، باتباع الطريقة الموضحة أعلاه.
  8. الكشف
    1. قم بإعداد محلول ركيزة العمل عن طريق خلط AccuWest ECL Plus و Raegent A و AccuWest ECL Plus و Raegent B بنسبة حجم 1: 1 مباشرة في صندوق الحضانة. قم بتنفيذ جميع الخطوات اللاحقة المحمية من الضوء.
    2. احتضان غشاء PVDF في المحلول لمدة 5-10 ثوان ، ثم اكتشف على الفور النطاقات المناعية باستخدام كواشف التلألؤ الكيميائي المعزز (ECL) - Vilber Fusion FX6 MINI. يتراوح وقت التعرض النموذجي من 5 إلى 10 ثوان.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نصف بروتوكولا قابلا للتكرار لإنشاء نموذج بسيط للسمنة يظهر البنكرياس الدهني بشكل موثوق (الشكل 1). يتم تلخيص العملية برمتها ، من تغذية وجمع الأنسجة إلى التحقق الجزيئي اللاحق ، بشكل تخطيطي في الشكل 1. تم تسجيل التغيرات الأسبوعية في الوزن لمجموعة النموذج (ن = 5) والمجموعة الضابطة (ن = 5) ، ولم يكن هناك فرق معنوي في وزن المجموعتين قبل الرضاعة ب HFD. في حين أن وزن المجموعة النموذجية كان أعلى بكثير من وزن المجموعة الضابطة خلال نفس الفت...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باعتبارها المحرك الأساسي لمتلازمة التمثيل الغذائي ، تمثل السمنة غير المعقدة المظهر الأولي لخلل التمثيل الغذائي للدهون الجهازية. بدون تدخل ، قد يتطور إلى T2DM ومضاعفات السكري الشديدة ، مما يؤكد ضرورة التصحيح الأيضي المبكر30. التنكس الدهني في البنكرياس (البنكرياس الدهني) ، وهو علامة مبكرة لترسب الدهون خارج الرحم في السمنة ، يعيد تعريف البنكرياس على أنه عضو دهني غير كلاسيكي ، مما يتحدى نموذج المحور الدهني الكبدي التقليدي. يوفر هذا التحول رؤى مهمة حول الحديث المتبادل ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين تضارب في المصالح للإفصاح عنها.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل من قبل مشروع الورثة والمدربين من أجل وراثة الخبرة الأكاديمية للدفعة السابعة من خبراء الطب الصيني التقليدي الوطنيين المشهورين. المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين ، مشروع صندوق العلماء الشباب [المنحة رقم 82305376] ؛ مشروع دعم المواهب الشابة في مجال العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة جيانغسو في عام 2024 [رقم المنحة JSTJ-2024-380].

تم إنتاج المخططات الانسيابية باستخدام FigDraw و Biorender.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<قوي>مادي
أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 ملشركة بايوشارب للهندسة الحيوية المحدودةBS-15-MWB
أنبوب تجميد بحجم 2 ملLABSELECTCV-002-200-EXWB
أنبوب طحن 2 ملشركة ووهان سيرفسبيو تكنولوجي المحدودةHT-200-MWB
3٪ H2O2شركة بوستر إلكترونيكس تكنولوجي المحدودة20A23CIHC
4٪ بارافورمالديهيدشركة بايوشارب للهندسة الحيوية المحدودةBL539Aعملية تشريح البنكرياس بالتروية
حل BSA بنسبة 5٪بيوفروكس4240GR100IHC
أنبوب طرد مركزي بسعة 50 مل  شركة بايوشارب للهندسة الحيوية المحدودةBS-500-Mحفظ الأنسجة
أكيويست ECL بلس، ريجنت أشركة نانجينغ جين إيزي للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.Q201220WB
أكيويست ECL بلس، ريجنت Bشركة نانجينغ جين إيزي للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.Q201220WB
الإيثانول اللامائيشركة شنغهاي SCR-Biotech المحدودة.10009257IHC
IgG المضاد للأرانب، الأجسام المضادة المرتبطة ب HRPCell Signaling Technology.Inc,7074WB
كوكتيل مثبط بروتياز كومبليتهوفمان-لا روش المحدودة 82256300WB
غطاء الغطاءشركة سيتوتست لابروير للتصنيع المحدودة10212450CIHC
محلول DAB الكروموجينيشركة بوستر إلكترونيكس تكنولوجي المحدودةAR2017-1IHC
الملقطشركة شنتشن للعلوم الحياتية ذات الدفع الرسمي، المحدودة.SP0007-Mتشريح فأر SD
الشرائح الزجاجية  شركة سيتوتست لابروير للتصنيع المحدودة188105IHC
جرة تلوين زجاجيةشركة شنغهاي بيوتايم للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.FG010IHC
الهيماتوكسيلينشركة شنغهاي بيوتايم للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.ST2067-20gIHC
النظام الغذائي عالي الدهونمختبر سوتشو شوانغشي لتقنية أعلاف الحيوانات المحدودة.الجدول 1يتغذى على الحيوانات التجريبية
كحول حمض الهيدروكلوريكشركة شنغهاي بيوتايم للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.C0163MIHC
إيزوفلورانشركة شنتشن للعلوم الحياتية ذات الدفع الرسمي، المحدودة.R510-22-10الفئران المخدرة
الميثانول  بيوفروكس67-56-1WB
MOPS تشغيل المخزن السائل 20 مرة؛شركة نانجينغ جينسكريبت للتكنولوجيا الحيوية المحدودة؛C36842504WB
بلسم محايدبكين سولاربيو للعلوم والطاقة الشمسية شركة تكنولوجي المحدودةG8590IHC
راتنج محايدشركة شنغهاي SCR-Biotech المحدودة.G8590IHC
حل PBSشركة جيانغسو كيجن للتكنولوجيا الحيوية المحدودةKGL2206-500حفظ الأنسجة
مجموعة اختبار بروتين بيرس BCA  شركة ثيرمو فيشر العلمية، والتام، الولايات المتحدة الأمريكية.ZB382867
مجموعة اختبار بروتين بيرس BCA  هيرمو فيشر للعلوم العلمية، والتام، الولايات المتحدة الأمريكيةZB382867WB
كوكتيل مثبط البروتيازاتهوفمان-لا روش المحدودة 82256300
غشاء PVDF (غشاء النقل من إيموبيلون-P، ميليبور، 0000380346) ميرك ميليبور0000380346WB
مخزن تحليل RIPAشركة بايوشارب للهندسة الحيوية المحدودةBL504A، 70096436WB
SABCشركة بوستر إلكترونيكس تكنولوجي المحدودة20C03AIHC
المحلول الملحيشركة شانشي شينغاو للأدوية الحيوانية المحدودة.270071460حفظ الأنسجة
ذكر SD Ratsشركة جيانغسو جيم فارماتيك المحدودة؛D000017الفئران
سترات الصوديومميرك لايف ساينسS1804IHC
تغذية الصيانة القياسيةمختبر سوتشو شوانغشي لتقنية أعلاف الحيوانات المحدودة.الجدول 2يتغذى على الحيوانات التجريبية
تركيز التوازن على eBlot L2 5&x;شركة نانجينغ جينسكريبت للتكنولوجيا الحيوية المحدودة؛C97212410 WB
مركز النقل eBlot L2 5&0;شركة نانجينغ جينسكريبت للتكنولوجيا الحيوية المحدودة؛C97211504WB
محلول ملحي مخزن تريس، بودرة شركة بايوشارب للهندسة الحيوية المحدودةBL602AWB
20 سنةبيوفروكسEZ681A3EA8WB
اليوريثانشركة سيغما-ألدريتش المحدودة.U2500-100Gالفئران المخدرة
الأجسام المضادة متعددة النسيلات فينكولينمجموعة بروتين تيك، إنك،26520-1-APWB
إكسيلينشركة نانجينغ للواشفC0430530223IHC
يونغ بيج، بيس-تيرز، 10&تايمز؛ 8شركة نانجينغ جينسكريبت للتكنولوجيا الحيوية المحدودة؛C33152505WB
<قوي>معدات
جهاز التخديرشركة شنتشن للعلوم الحياتية ذات الدفع الرسمي، المحدودة.الطراز R5805الفئران المخدرة
بول ميل شركة ريتش تكنولوجي GmbH - ميكروتراكMM400WB
الطرد المركزيإبندورف جنوب شرق5418RWB
مجفف الأنسجة البيولوجي المحوسبشركة تشجيانغ جينهوا كيدي للآلات الموسيقية.SC2013-G-KitIHC
كاشفات التلألؤ الكيميائي المعزز (ECL) تصوير فيلبر الحيوي00170961WB
ميكروتوم  شركة ثيرمو فيشر العلمية، والتام، الولايات المتحدة الأمريكية.HM325IHC
الميكروويفشركة شنغهاي بوكسون الصناعية المحدودة 97000IHC
نظام تيترا ميني-بروتيانمختبرات بيو-راد، إنك.1658004WB
الفرنشركة شنغهاي جينغهونغ العلمية المحدودةDNP-9082IHC
ماء نقيشركة سيتشوان UPT ألترا-بيور تكنولوجي المحدودة.أولوب-تيزIHC

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, G., et al. Comparative effectiveness of massage combined with lifestyle intervention and lifestyle intervention alone for simple obesity: a systematic review and meta-analysis. Medicine. 104 (2), e41074(2025).
  2. World Obesity Federation. World Obesity Atlas 2024. , World Obesity Federation. London. (2024).
  3. Kromrey, M. L., et al. Pancreatic steatosis is associated with impaired exocrine pancreatic function. Invest Radiol. 54 (7), 403(2019).
  4. Miyake, H., et al. Association of fatty pancreas with pancreatic endocrine and exocrine function. PLoS One. 13 (12), e0209448(2018).
  5. López-Bermudo, L., et al. Contribution of liver and pancreatic islet crosstalk to β-cell function/dysfunction in the presence of fatty liver. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 892672(2022).
  6. Vilas-Boas, E. A., Almeida, D. C., Roma, L. P., Ortis, F., Carpinelli, A. R. Lipotoxicity and β-cell failure in type 2 diabetes: oxidative stress linked to NADPH oxidase and ER stress. Cells. 10 (12), 3328(2021).
  7. Martínez, M. S., et al. The role of the α cell in the pathogenesis of diabetes: a world beyond the mirror. Int J Mol Sci. 22 (17), 9504(2021).
  8. Catanzaro, R., Cuffari, B., Italia, A., Marotta, F. Exploring the metabolic syndrome: nonalcoholic fatty pancreas disease. World J Gastroenterol. 22 (34), 7660-7675 (2016).
  9. Pinnick, K. E., et al. Pancreatic ectopic fat is characterized by adipocyte infiltration and altered lipid composition. Obesity. 16 (3), 522-530 (2008).
  10. Wang, Y. D., et al. New insight of obesity-associated NAFLD: dysregulated "crosstalk" between multi-organ and the liver. Genes Dis. 10 (3), 799-812 (2023).
  11. Savage, D. B., Petersen, K. F., Shulman, G. I. Disordered lipid metabolism and the pathogenesis of insulin resistance. Physiol Rev. 87 (2), 507-520 (2007).
  12. Shah, N., Rocha, J. P., Bhutiani, N., Omer, E. Nonalcoholic fatty pancreas disease. Nutr Clin Pract. 34 (S1), S49-S56 (2019).
  13. Chang, M. L. Fatty pancreas-centered metabolic basis of pancreatic adenocarcinoma: from obesity, diabetes and pancreatitis to oncogenesis. Biomedicines. 10 (3), 692(2022).
  14. Ou, H. Y., Wang, C. Y., Yang, Y. C., Chen, M. F., Chang, C. J. The association between nonalcoholic fatty pancreas disease and diabetes. PLoS One. 8 (5), e62561(2013).
  15. Yu, T. Y., Wang, C. Y. Impact of non-alcoholic fatty pancreas disease on glucose metabolism. J Diabetes Investig. 8 (6), 735-747 (2017).
  16. Petrov, M. S. Post-pancreatitis diabetes mellitus and excess intra-pancreatic fat deposition as harbingers of pancreatic cancer. World J Gastroenterol. 27 (17), 1936-1942 (2021).
  17. Mihoc, T., et al. Pancreatic morphology, immunology, and the pathogenesis of acute pancreatitis. Biomedicines. 12 (11), 2627(2024).
  18. Robinson-Junker, A. L., O'Hara, B. F., Gaskill, B. N. Out like a light? the effects of a diurnal husbandry schedule on mouse sleep and behavior. J Am Assoc Lab Anim Sci. 57 (2), 124-133 (2018).
  19. Virgilio, T., et al. Impact of prolonged isoflurane or ketamine-xylazine anesthesia with or without buprenorphine and oxygen on mouse vitals and immune responses. Lab Anim. 54, 1-8 (2025).
  20. Oh, S., Ahn, B., Lee, B. J., Nam, S. Y. Effect of humidity on postmortem changes in rats. J Vet Sci. 25 (3), e24(2024).
  21. Wu, C. T., et al. SARS-CoV-2 infects human pancreatic β cells and elicits β cell impairment. Cell Metab. 33 (8), 1565-1576.e5 (2021).
  22. Tremblay, C., Moullé, V., Zarrouki, B., Ghislain, J., Poitout, V. Immunofluorescent staining of pancreatic sections. protocols.io. , (2022).
  23. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  24. Lu, M., et al. Electroacupuncture stimulation regulates adipose lipolysis via catecholamine signaling mediated by NLRP3 suppression in obese rats. Front Endocrinol. 12, 773127(2022).
  25. Lu, M., et al. Remodelling the inguinal adipose sensory system to switch on the furnace: electroacupuncture stimulation induces brown adipose thermogenesis. Diabetes Obes Metab. 26 (4), 1430-1442 (2024).
  26. Otsuka, N., Shimizu, K., Taniai, M., Tokushige, K. Risk factors for fatty pancreas and effects of fatty infiltration on pancreatic cancer. Front Physiol. 14, 1243983(2023).
  27. Zhang, X., Cui, Y., Fang, L., Li, F. Chronic high-fat diets induce oxide injuries and fibrogenesis of pancreatic cells in rats. Pancreas. 37 (3), e31(2008).
  28. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  29. Liu, Y., et al. Neurophysiological mechanisms of electroacupuncture in regulating pancreatic function and adipose tissue expansion. World J Diabetes. 16 (5), 101354(2025).
  30. Jirawat, N., Srisuk, A. Obesity, metabolic syndrome, and cardiovascular disease: pathophysiological connections. Sci Acad J. 7 (1), 1-12 (2024).
  31. Fan, Y. H., et al. Inter-organ metabolic interaction networks in non-alcoholic fatty liver disease. Front Endocrinol. 15, 1494560(2025).
  32. Wang, Y. D., et al. New insight of obesity-associated NAFLD: dysregulated "crosstalk" between multi-organ and the liver. Genes Dis. 10 (3), 799-812 (2023).
  33. Zhang, X., Ji, X., Wang, Q., Li, J. Z. New insight into inter-organ crosstalk contributing to the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Protein Cell. 9 (2), 164-177 (2018).
  34. Zhang, C. L., Wang, J. J., Li, J. N., Yang, Y. Nonalcoholic fatty pancreas disease: an emerging clinical challenge. World J Clin Cases. 9 (23), 6624-6638 (2021).
  35. Corte, C. D., et al. Nonalcoholic fatty pancreas disease and nonalcoholic fatty liver disease: more than ectopic fat. Clin Endocrinol. 83 (5), 656-662 (2015).
  36. Saloman, J. L., et al. Animal models: challenges and opportunities to determine optimal experimental models of pancreatitis and pancreatic cancer. Pancreas. 48 (6), 759(2019).
  37. Hariri, N., Thibault, L. High-fat diet-induced obesity in animal models. Nutr Res Rev. 23 (2), 270-299 (2010).
  38. Lee, H. -Y., Min, K. -J. Dietary restriction and lipid metabolism: unveiling pathways to extended healthspan. Nutrients. 16 (24), 4424(2024).
  39. Rosini, T. C., Ramos da Silva, A. S., de Moraes, C. Diet-induced obesity: rodent model for the study of obesity-related disorders. Rev Assoc Med Bras (Engl Ed). 58 (3), 383-387 (2012).
  40. Uc, A., et al. Chronic pancreatitis in the 21st century - research challenges and opportunities: summary of a national institute of diabetes and digestive and kidney diseases workshop. Pancreas. 45 (10), 1365(2016).
  41. Fisher, W. E., et al. Standard operating procedures for biospecimen collection, processing, and storage: from the consortium for the study of chronic pancreatitis, diabetes, and pancreatic cancer. Pancreas. 47 (10), 1213(2018).
  42. Alexander, J., Chang, G. Q., Dourmashkin, J. T., Leibowitz, S. F. Distinct phenotypes of obesity-prone AKR/J, DBA2J and C57BL/6J mice compared to control strains. Int J Obes (Lond). 30 (1), 50-59 (2006).
  43. Nishikawa, S., Yasoshima, A., Doi, K., Nakayama, H., Uetsuka, K. Involvement of sex, strain and age factors in high-fat diet-induced obesity in C57BL/6J and BALB/cA mice. Exp Anim. 56 (4), 263-272 (2007).
  44. Levin, B. E., Dunn-Meynell, A. A., Balkan, B., Keesey, R. E. Selective breeding for diet-induced obesity and resistance in Sprague-Dawley rats. Am J Physiol. 273 (2 Pt 2), R725-R730 (1997).
  45. Kautzky-Willer, A., Harreiter, J., Pacini, G. Sex and gender differences in risk, pathophysiology and complications of type 2 diabetes mellitus. Endocr Rev. 37 (3), 278-316 (2016).
  46. Lee, M. J., Wu, Y., Fried, S. K. Adipose tissue heterogeneity: implication of depot differences in adipose tissue for obesity complications. Mol Aspects Med. 34 (1), 1-11 (2013).
  47. Geer, E. B., Shen, W. Gender differences in insulin resistance, body composition, and energy balance. Gender Med. 6 Suppl 1 (Suppl 1), 60-75 (2009).
  48. Nadal-Casellas, A., Proenza, A. M., Lladó, I., Gianotti, M. Sex-dependent differences in rat hepatic lipid accumulation and insulin sensitivity in response to diet-induced obesity. Biochem Cell Biol. 90 (2), 164-172 (2012).
  49. Stubbins, R. E., Holcomb, V. B., Hong, J., Núñez, N. P. Estrogen modulates abdominal adiposity and protects female mice from obesity and impaired glucose tolerance. Eur J Nutr. 51 (7), 861-870 (2012).
  50. Liu, Y., et al. Neuromechanical dimorphism of hypoglycemic effect of electroacupuncture. Neuroendocrinology. 113 (7), 679-691 (2023).
  51. Xu, T. C., Liu, Y., Yu, Z., Xu, B. Gut-targeted therapies for type 2 diabetes mellitus: a review. World J Clin Cases. 12 (1), 1-8 (2024).
  52. Xu, T., et al. Hypoglycemic effect of electroacupuncture at ST25 through neural regulation of the pancreatic intrinsic nervous system. Mol Neurobiol. 59 (1), 703-716 (2022).
  53. Feng, X., et al. Ferroptosis enhanced diabetic renal tubular injury via HIF-1α/HO-1 pathway in db/db mice. Front Endocrinol (Lausanne). 12, 626390(2021).
  54. Fang, X., et al. Beinaglutide shows significantly beneficial effects in diabetes/obesity-induced nonalcoholic steatohepatitis in ob/ob mouse model. Life Sci. 270, 118966(2021).
  55. Mao, T., et al. Semaglutide alters gut microbiota and improves NAFLD in db/db mice. Biochem Biophys Res Commun. 710, 149882(2024).
  56. Zeng, Z., et al. Bacillus amyloliquefaciens SC06 alleviates the obesity of ob/ob mice and improves their intestinal microbiota and bile acid metabolism. Food Funct. 13 (9), 5381-5395 (2022).
  57. Suriano, F., et al. Novel insights into the genetically obese (ob/ob) and diabetic (db/db) mice: two sides of the same coin. Microbiome. 9 (1), 147(2021).
  58. Owada, Y., et al. Novel non-alcoholic steatohepatitis model with histopathological and insulin-resistant features. Pathol Int. 68 (1), 12-22 (2018).
  59. Flessa, C. M., et al. Genetic and diet-induced animal models for non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) research. Int J Mol Sci. 23 (24), 15791(2022).
  60. Liu, Y., et al. Electroacupuncture at ST25 mediated glial cells pruning of pancreatic TRPV1 neural synapse responds to neuropathy-associated beta cell dysfunction. Chin Med. 20 (1), 65(2025).
  61. Xu, T., et al. Hypoglycemic effect of electroacupuncture at ST25 through neural regulation of the pancreatic intrinsic nervous system. Mol Neurobiol. 59 (1), 703-716 (2022).
  62. Vimaleswaran, K. S., et al. Causal relationship between obesity and vitamin D status: bi-directional Mendelian randomization analysis of multiple cohorts. PLoS Med. 10 (2), e1001383(2013).
  63. Alvheim, A. R., et al. Dietary linoleic acid elevates endogenous 2-AG and anandamide and induces obesity. Obesity (Silver Spring). 20 (10), 1984-1994 (2012).
  64. Hintze, K. J., Benninghoff, A. D., Cho, C. E., Ward, R. E. Modeling the Western diet for preclinical investigations. Adv Nutr. 9 (3), 263-271 (2018).
  65. D, L. Obesity due to a high-fat diet in the rat and mouse. Nutr Dieta Eur Rev Nutr Diet. 9 (1), 27-42 (1967).
  66. Lemonnier, D., Tremolieres, J. Experimental obesity induced by high-fat diets. Probl Actuels Endocrinol Nutr. 7, 77-85 (1963).
  67. Samuel, V. T., et al. Mechanism of hepatic insulin resistance in non-alcoholic fatty liver disease. J Biol Chem. 279 (31), 32345-32353 (2004).
  68. Hu, S., et al. Dietary fat, but not protein or carbohydrate, regulates energy intake and causes adiposity in mice. Cell Metab. 28 (3), 415-431.e4 (2018).
  69. Goh, S. K., et al. Perfusion-decellularized pancreas as a natural 3D scaffold for pancreatic tissue and whole organ engineering. Biomaterials. 34 (28), 6760-6772 (2013).
  70. Levin, B. E. Factors promoting and ameliorating the development of obesity. Physiol Behav. 86 (5), 633-639 (2005).
  71. Yuan, C. X., et al. Electroacupuncture alleviates diabetic peripheral neuropathy through modulating mitochondrial biogenesis and suppressing oxidative stress. World J Diabetes. 16 (2), 93130(2025).
  72. Liu, Y., et al. Neuromechanical dimorphism of hypoglycemic effect of electroacupuncture. Neuroendocrinology. 113 (7), 679-691 (2023).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Obese Rat ModelsFatty PancreasPancreatic SteatosisHigh Fat DietDiet Induced ObesityLipid DepositionTissue HarvestingWestern BlottingParaformaldehyde FixationMetabolic Dysfunction

Related Articles